雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖及胞浆内游离Ca2+浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(Tri)对牛晶状体上皮细胞(1ens epithelial cell,LECs)增殖的影响及可能的机制.方法:取体外培养的第4代牛LECs,分5组培养.空白对照组:以DMEM培养;增殖对照组:以DMEM 50μg/L rhEGF培养;Tri高、中、低剂量组分别以含50μg/L rhEGF和40μg//L、20μg/L、10μg/L Tri的DMEM培养.分组培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用MTT比色法及流式细胞仪检测细胞增殖抑制率和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达率;用荧光指示剂Fura-2/AM测定空白对照组、增殖对照组、Tri中剂量组分组培养48 h后胞内游离Ca2 浓度.结果:随着作用时间的延长和浓度的增加,Tri对rhEGF诱导的LECs增殖的抑制率逐渐增大;Tri各剂量组PCNA阳性表达率低于增殖对照组;Tri中剂量组胞内Ca2 浓度高于增殖对照组和空白对照组.结论:Tri对LECs的增殖有明显的抑制作用,该作用可能通过影响胞内Ca2 浓度来完成.     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖的抑制及其胞浆内cGMP浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide, Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine lens epithelial cell, BLECs)增殖及其细胞内cGMP浓度变化的机制.方法:取第4代BLECs,分3组培养.空白对照组:以DMEM培养;增殖对照组:以DMEM 50 μg/L rhEGF培养;雷公藤内酯醇组:增殖对照组 20 μg/L雷公藤内酯醇.用MTT比色法检测增殖抑制率来测定Tri 20 μg/L对细胞增殖的影响,用放射免疫法测定BLECs内cGMP浓度.结果:浓度为20 μg/L的Tri、作用在处于增殖状态的BLECs时间分别为6,12,24,48,72 h,均出现明显的增殖抑制作用, 其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性.而雷公藤内酯醇组细胞内cGMP含量比增殖对照组明显降低.结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,而该作用可能通过降低细胞内cGMP浓度来完成.     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞内Ca~(2+)浓度的影响及在细胞增殖中的意义

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine Lens epithelial cell,BLECs)增殖及其机制。方法:取第4代BLECs,用MTT比色法检测增殖抑制率,观察Tri浓度为20μg/L,不同时间(6,12,24,48,72h)对细胞增殖的影响,用荧光指示剂Fura-2/AM测定Tri对胞浆内游离Ca2+的影响。结果:同一浓度的Tri,于不同时间作用在处于增殖状态LECs,均出现明显的增殖抑制作用,其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性。而增殖抑制组细胞内Ca2+浓度明显升高。结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,它影响细胞增殖的作用机理之一可能是通过胞浆内游离Ca2+。     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖及胞浆内cAMP浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide, Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine lens epithelial cell, BLECs)增殖及其机制.方法:取第4代BLECs,用MTT比色法检测增殖抑制率来测定Tri 20 μg/L对细胞增殖的影响,用放射免疫法测定BLECs内cAMP浓度.结果:Tri 20 μg/L,时间6,12,24,48,72 h作用在处于增殖状态BLECs,出现明显的增殖抑制作用, 其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性.而增殖抑制组细胞内cAMP含量明显增加.结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,而该作用可能通过影响细胞内cAMP等第二信使物质浓度来完成.     

MTT法检测雷公藤内酯醇对晶状体上皮细胞增殖的影晌

目的:研究雷公藤内酯醇对体外培养的牛晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法:取第4代对数生长期的牛晶状体上皮细胞培养24h后,加入重组人表皮生长因子(终浓度50μg/L)和不同浓度的雷公藤内酯醇(40,20,10μg/L),分别作用6,12,24,48,72h后,采用MTT法观察雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖的影响。结果:不同浓度的雷公藤内酯醇,于不同时间作用在处于增殖状态的LECs,其增殖抑制率升高呈现明显的时间及剂量依赖性。结论:雷公藤内酯醇对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用在防止后囊混浊方面有广阔的前景。     

停跳或不停跳心脏手术对血清 S-100B蛋白表达的影响

【目的】研究心脏手术围术期血清S-100B蛋白表达及其与停跳或不停跳心肺转流方式和时间的关系。【方法】体外循环心脏手术患者23例,测转流前、转流10min、转流末、转流后24h的血清S-100B蛋白表达水平。【结果】①血清S-100B蛋白质量浓度在体外循环前后动态变化:转流前(M)为0.27μg/L,转流10min后升至0.57μg/L(P<0.01),转流末达峰值1.80μg/L(P<0.01),转流后24h降为0.22μg/L(P>0.05)。转流末的血清S-100B蛋白质量浓度与转流时间呈正相关(r=0.488,P<0.05)。②停跳组(n=6)转流前、转流10min、转流末、转流后24h平均血清S-100B蛋白质量浓度分别为(0.17±0.09)μg/L、(0.48±0.13)μg/L、(1.65±0.52)μg/L和(0.19±0.04)μg/L,不停跳组(n=6)分别为(0.26±0.14)μg/L、(0.71±0.41)μg/L、(1.59±0.84)μg/L和(0.23±0.11)μg/L,两组差别无统计学意义(P>0.05)。【结论】体外循环可导致血清S-100B蛋白表达增高,其表达水平与心肺转流时间呈正相关,但与停跳或不停跳转流方式无关。     

氧化低密度脂蛋白对大鼠主动脉平滑肌细胞尾加压素Ⅱ受体表达的影响

目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的相互作用及ox-LDL对UⅡ受体表达的影响。方法应用MTT法测定不同浓度的ox-LDL(0.01、0.1、1、10、50μg/ml)和UⅡ(10、50nmol/L)对大鼠VSMC增殖的作用;应用竞争RT-PCR和放射性配体受体结合试验分别从mRNA和受体功能水平分析不同浓度ox-LDL孵育下VSMC表达GPR14的变化。并设生理盐水对照组。结果ox-LDL0.01μg/ml与UⅡ10nmol/L可协同促进VSMC增殖,使MTT值增至对照的162%±29%(0.528±0.036vs0.308±0.026,P<0.01);而在0.1μg/ml时MTT值减弱为对照的153%±22%(0.461±0.017vs0.308±0.026,P<0.05);至1μg/ml时二者协同作用消失,MTT值降为对照的123%±13%(0.400±0.015vs0.308±0.026,P>0.05)。在浓度为50μg/ml时ox-LDL则表现为细胞毒性,抑制细胞增殖,MTT值下降至对照的59%(0.195±0.017vs0.308±0.026,P<0.01),而UⅡ则可部分拮抗其细胞毒性,使MTT值增至对照的68%。竞争PCR显示ox-LDL0.1μg/ml可使VSMC GPR14mRNA表达上调25%(P<0.01)。而1~50μg/ml可浓度依赖性下调GPR14mRNA表达,最大效应于50μg/ml时可使GPR14mRNA下调73%(P<0.01),此效应具有时间依赖性,于12h达最大效应,并持续至24h。ox-LDL0.1μg/ml孵育12h可使大鼠125I-UⅡ与VSMC最大结合力(Bmax)升高18%(P<0.01),而ox-LDL50μg/ml可使Bmax下降低69%(P<0.01)。结论UⅡ和ox-LDL可在一定浓度范围内协同促进VSMC增殖;低浓度ox-LDL可使VSMC表达GPR14水平上调,而高浓度则可使该受体下调。     

U0126对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响

目的:探讨U0126对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响。方法:用不同浓度(0、5、10、20μmol/L)的U0126处理HL-60细胞24、48、72 h,MTT法检测细胞活力,Hoechst染色检测细胞形态,EdU染色检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、生存素(Survivin)、p21和p27表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)磷酸化水平。结果:5、10、20μmol/L的U0126处理HL-60细胞24、48、72 h,能显著提高细胞增殖抑制率(P0.01),具有时间与剂量依赖性(r=0.421、0.478)。与0μmol/L比较,5、10、20μmol/L的U0126能使细胞核发白,致密浓染,细胞增殖率降低(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),PCNA、Survivin及p-ERK1/2表达均下调(P0.01),p21与p27表达均上调(P0.01)。结论:U0126能显著抑制白血病细胞HL-60增殖,诱导细胞凋亡。     

C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的:观察C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)凋亡的影响及半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性的变化.方法:取第二代牛LECs,经不同浓度(25 μmol/L,50 μmoL/L,100 μmol/L)C2-神经酰胺作用12 h,行TUNEL染色,荧光显微镜下计数凋亡细胞,计算凋亡率;Caspase-3活性检测试剂盒检测牛LECs中Caspase-3活性的变化.结果:随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LECs凋亡率也随之升高(P<0.05),呈剂量依赖关系.随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LEC中Caspase-3活性的表达也随之增强(P<0.05).结论:C2-神经酰胺可以诱导牛LECs发生凋亡;在此过程中,存在Caspase-3活性表达.     

粉防己碱对人翼状胬肉成纤维细胞体外增殖及增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察粉防己碱(Tet)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的影响.方法:用20、40、80和160μmol/L的Tet作用于体外培养的HPF,24、48及72 h后采用MTT法检测细胞生长抑制率,免疫细胞化学法检测HPF增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果:Tet在20、40、80和160 μmol/L浓度下作用24、48及72 h,能够抑制HPF增殖(F时间＝235.632、342.039、586.788和584.667,P均＜0.001;F组间=372.672、474.734和389.467,P均<0.001).Tet干预后PCNA蛋白表达下降(F=185.623,P=0.009).结论:Tet可抑制翼状胬肉HPF细胞增殖.     

EGF对人牙周膜细胞增生与ALP活性表达的影响

探讨表皮生长因子 (EGF)对人牙周膜细胞的增生与碱性磷酸酶 (ALP)活性表达的影响 ,为EGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据。采用MTT和ALP活性检测法 ,观察不同质量浓度 ( 0 .1～ 1 0 μg/L)EGF第 2 4、4 8和 72h对体外培养的第 3代人牙周膜细胞 (PDLCs)的作用。与对照组比较 ,在 2 4～ 72h ,0 .1～ 5 μg/L的EGF可显著抑制PDLCs的增生 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ;1 0 μg/LEGF培养 4 8h对PDLCs有促进增生的作用 (P <0 .0 5 ) ,培养 72h有稳定增生的作用 (P >0 .0 5 )。 0 .1、0 .5 μg/LEGF可显著抑制PDLCs的ALP活性 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ;1～ 1 0 μg/LEGF在 2 4h可显著增强PDLCs的ALP活性 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ,在培养 4 8和 72h有稳定ALP活性的作用 (P >0 .0 5 )。提示在一定的作用时间内 ,1 0 μg/LEGF对人PDLCs的生长和分化可同时具有促进作用。     

他克莫司缓释剂治疗儿童原发性肾病综合征的药代动力学特点

目的 他克莫司是一种新型钙调磷酸酶抑制剂,目前被广泛应用于成人肝或肾移植术后,也被逐渐广泛应用于肾病综合征患儿。他克莫司缓释胶囊是每日单次口服的缓释剂型,本研究目的是初步探讨他克莫司缓释剂治疗儿童原发性肾病综合征的药代动力学特征。方法 8例受试者系北京大学第一医院2011年6—8月原发性肾病综合征患儿。晨起单次口服不同剂量他克莫司缓释胶囊,给药剂量分别为0.02 mg/kg(n=2)、0.05 mg/kg(n=2)、0.10 mg/kg(n=4),在服药前及服药后1、2、4、6、8、10、12 h分别取静脉血1~2 mL,受试者不用影响他克莫司浓度的其他药物、食物及饮料。采用酶放大免疫分析法,测定他克莫司血药浓度,以Phoenix计算其药代动力学参数。结果 药代动力学数据采用非房室模型分析。3个剂量组(0.02 mg/kg,0.05 mg/kg和0.10 mg/kg)药代动力学参数如下:血药峰浓度分别为(1.7±1.0) μg/L,(3.1±1.9) μg/L,(8.0±3.5) μg/L;药物浓度-时间曲线下面积分别为(47.2±47.1) h·μg/L,(84.0±13.1) h·μg/L,(175.6±107.1) h·μg/L;表观清除率分别为(0.8±0.9) L/(h·kg),(0.4±0.1) L/(h·kg),(1.9±1.3) L/(h·kg);经剂量归一化的表观分布容积分别为(7.0±3.4) L/kg,(12.4±8.4) L/kg,(73.6±68.6) L/kg。0.05 mg/kg剂量组经剂量归一化的血药峰浓度和经剂量归一化的药物浓度-时间曲线下面积的平均值均高于0.02 mg/kg及0.10 mg/kg剂量组。3个剂量组的药物浓度-时间曲线均呈现2次高峰,第一次高峰出现在服药后约2 h,服药后约12 h出现次级高峰;0.10 mg/kg剂量组药物浓度出现两次峰值的现象较0.02 mg/kg及0.05 mg/kg剂量组更显著。结论 他克莫司缓释剂治疗原发性肾病综合征患儿的药代动力学存在个体间差异,本研究初步探讨了他克莫司缓释剂治疗儿童原发性肾病综合征的药代动力学特征,为后续大样本的研究提供了参考依据。     

脂质体介导10-23脱氧核酶对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :研究针对增殖细胞核抗原 (PCNA)基因特异性的 10 - 2 3脱氧核酶 (DNAzyme)对人血管平滑肌细胞(VSMC)PCNA的表达和细胞增殖的影响。方法 :应用脂质体转染法将不同寡聚核苷酸转入体外培养的人脐动脉VSMC。采用3 H -TdR掺入法观察空白对照组、脂质体组和等摩尔浓度 (1.0 μmol/L)的DNAzyme、反义寡核苷酸 (A SODN)、mDNAzyme在干预 2d后VSMC的DNA合成速率 ;免疫组化检测 1.0 μmol/L的DNAzyme和ASODN转染 2d后对PCNA表达的影响 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法分析不同剂量的DNAzyme(0 .12 5、0 .2 5、0 .5、1.0、2 .0 μmol/L)转染5d后VSMC增殖活性。结果 :1.0 μmol/LDNAzyme和ASODN转染 2d后 ,VSMC的3 H -TdR掺入量均较对照组显著减低 (P <0 .0 5 ) ,DNAzyme较ASODN更显著减低 (P <0 .0 5 ) ;1.0 μmol/LDNAzyme作用 2d后细胞增殖抑制率为 6 4 .5 % ,高于ASODN组 (37.7% )、mDNAzyme组 (11.9% )和脂质体组 (3.3% )。DNAzyme和ASODN处理细胞 2d后 ,PCNA的表达水平 (平均光密度值 )分别为 0 .2 95 6± 0 .0 2 5 1和 0 .3880± 0 .0 92 5 ,明显低于空白对照组 0 .7342± 0 .2 136 (P <0 .0 1)。转染 5d后 ,DNAzyme的作用呈剂量依赖性 ,0 .12 5 μmol/LDNAzyme处理后VSMC的增殖较对照组低 (P <0 .0 5 )。     

Effects of Lutein on the Growth and Migration of Bovine Lens Epithelial Cells In Vitro

The effects of lutein on the growth and migration of bovine lens epithelial cells （BLECs） in vitro were observed in an attempt to find a drug that can prevent after-cataract. BLECs were cultured in vitro and different concentrations of lutein were added to the BLECs cultures of the second and third generations. The effects of lutein on the proliferation of BLECs in vitro were examined by the MTT method, and the migration of BLECs was evaluated by a scratch wound assay. The results showed that： （1） Lutein at concentrations of 1 to 16 μmol/L could inhibit the proliferation of BLECs in a dose-and time-dependent manner （P〈0.01）; （2） The migration of BLECs was evaluated by wound healing rate. As compared with the control group, the wound healing rate in the experimental groups was decreased from 0.672±0.164 to -0.234±0.144 and -0.597±0.063 （P〈0.01） at 1 and 2 μmol/L lutein, respectively. It was concluded that lutein at concentration of 〉1 μmol/L inhibited the proliferation and migration of BLECs in vitro, Lutein may become an effective drug to prevent after-cataract.     

褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法:分别将不同浓度褪黑素(100、300、500、7001、000μmol/L)及顺铂(2.55、、10μg/mL)联合与肺腺癌A549细胞共培养48 h,MTT法检测细胞抑制率。结果:不同浓度顺铂(2.5、5、10μg/mL)与500μmol/L的褪黑素联合使用对肺腺癌细胞生长抑制率([71.25±5.01)%(、86.37±7.10)%(、97.63±8.65)%)]明显高于单独使用顺铂(P<0.05)。结论:褪黑素和顺铂均可抑制肺腺癌A549细胞增殖,二者联合可协同抑制肿瘤细胞增殖。     

雷公藤甲素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨雷公藤甲素对人急性髓系白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤甲素作用于两种细胞,对其生长增殖、凋亡、细胞周期及形态等方面的影响。结果:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半数细胞抑制剂量(IC50)分别为(42.50±9.38)nmol/L和(60.91±9.77)nmol/L。能以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G1期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。结论:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。     

Shenmai Injection (参麦注射液) inhibiting the extracellular signal regulated kinase-induced human airway smooth muscle proliferation in asthma

Objective： To investigate the relationship between the proliferation of sensitized human airway smooth muscle cells （HASMCs） and the expression of extracellular signal regulated kinase （ERK） and the effect of Shenmai Injection （参麦注射液, SMI） on HASMCs. Methods： The HASMCs cultured in vitro were divided into three groups： （1） control group; （2） sensitized group： containing 10% asthmatic serum; （3） SMI group： further divided into three different concentration subgroups interferred with 10 μL/mL, 50 μL/mL, and 100 μL/mL SMI, respectively. The proliferation of HASMCs was detected using MTT method, the expression of proliferating cell nucleus antigen （PCNA） in HASMCs was detected using immunocytochemical staining, and the expression of phosphoration-ERK1/2 （p-ERK1/2） protein was detected using Western-blot. Results： After passive sensitization, the optical density value （A49o value） of HASMCs was significantly increased from 0.366± 0.086 to 0.839 ± 0.168 （P〈0.05）. In addition, the expression of PCNA was significantly increased from 28.7% ± 5.9% in the control group to 69.8% ±7.5% in the sensitized group （P〈0.05）. At the same time, the expression of p-ERK1/2 in passively sensitized HASMCs was significantly increased compared with the control group （all P〈0.05）. Affer application of 10 μL/mL, 50 μL/mL, and 100 μL/mL SMI to the cultured media of passively sensitized group, the A570 value was significantly decreased from 0.839 ±0.168 to 0.612 ±0.100, 0.412 ± 0.092, and 0.339 ± 0.077, respectively （P〈0.05）. Moreover, the expression of PCNA was significantly decreased from 69.8% ±7.5% to 57.8% ± 6.2%, 40.7%±5.4%, and 26.1% ± 5.2%, respectively. At the same time, the expression of p-ERK1/2 in each SMI group was significantly decreased compared with the sensitized group （all ,P〈0.05）. Conclusion： ERK signal transduction pathway may be involved in the airway remodeling in asthma. The expression of ERK can be inhibited by SMI in a dose-dependent manner, thus preventing the proliferation of HASMCs.     

地方性甲状腺肿组织中细胞凋亡与PCNA表达

目的 :检测地方性甲状腺肿病变中PCNA的表达及细胞凋亡的发生 ,探讨其意义。方法 :采用免疫组化SP法和TUNEL法对 2 5例地方性甲状腺肿、43例甲状腺癌、1 5例甲状腺腺瘤进行PCNA和原位细胞凋亡的检测。结果 :地方性甲状腺肿组织的PCNA阳性表达率 (1 7.9± 8.83) %和细胞凋亡率 (9.81± 4 .36) %均明显低于甲状腺癌 [(35 .53± 1 0 .92 ) % ,(1 7.73± 6 .62 ) % ] (P <0 .0 1 )和甲状腺腺瘤 [(2 3 .81± 6 .83) % ,(1 2 .43± 3 .69) % ] (P <0 .0 5)。结论 :细胞的增殖与凋亡在地方性甲状腺肿病变的发生发展过程中起着重要作用