苦参碱和氧化苦参碱对胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性的作用

目的研究苦参碱和氧化苦参碱对人胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性的作用。方法以SGC7901/VCR为研究对象,用SRB法测定苦参碱和氧化苦参碱对SGC7901/VCR耐药细胞的增殖抑制率,计算IC50和IC10,并进一步计算其耐药倍数和逆转倍数。流式细胞术检测罗丹明123的荧光强度变化。结果苦参碱和氧化苦参碱对SGC7901/VCR均存在抑制作用,且呈剂量依赖。VCR耐药倍数为33.4倍;0.78 mg/ml苦参碱逆转倍数为1.92倍;0.71 mg/ml氧化苦参碱逆转倍数为3.39倍;细胞内罗丹明123浓度较明显增加(P<0.01)。结论低毒浓度的苦参碱和氧化苦参碱对人胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR具有一定的耐药逆转作用,且氧化苦参碱优于苦参碱。     

三氧化二砷对胃癌细胞SGC7901多药耐药的逆转作用及其机制

研究三氧化二砷(arsenic trioxide，As₂O₃)对胃癌细胞多药耐药的逆转作用及其机制。逐渐递增长春新碱(VCR)的浓度诱导胃癌细胞株SGC7901产生多药耐药性(SGC7901/VCR)。MTT法测定药物对肿瘤细胞的杀伤作用；Western blotting检测肿瘤细胞内P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶(GST-s)表达。结果表明，胃癌SGC7901/VCR细胞对长春新碱(VCR)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)及表阿霉素的耐药倍数分别为16.56倍、2.69倍及13.05倍。经As₂O₃预处理24 h后，长春新碱、5-氟尿嘧啶及表阿霉素对SGC7901/VCR的耐药倍数显著下降(P<0.05)。SGC7901/VCR在静息时细胞内P-gp、GST-s蛋白表达显著高于SGC7901。而As₂O₃可使SGC7901/VCR细胞内P-gp、GST-s蛋白表达显著下降，但是对SGC7901无明显作用。从而证实As₂O₃部分逆转SGC7901/VCR的耐药性，其机制可能与P-gp、GST-s蛋白表达降低有关。     

尼美舒利对人胃癌SGC7901 VCR细胞耐药逆转作用

目的 研究尼美舒利对人胃癌敏感细胞株SGC7901及多药耐药细胞株SGC7901VCR的影响,初步探讨其逆转人胃癌耐药的机制。方法 MTT法测定细胞生长抑制率、流式细胞仪检测细胞内Rh123浓度和P-170、GST-π表达水平变化。结果 尼美舒利对SGC7901及SGC7901VCR细胞的生长抑制呈明显时间剂量依赖关系。但尼美舒利对SGC7901VCR细胞效应强度明显弱于SGC7901细胞。尼美舒利能提高SGC7901VCR细胞内Rh123荧光强度,下调P-170和GST-π的水平(P＜0.05)。结论 尼美舒利对人胃癌SGC7901VCR耐药有一定逆转作用,作用机制可能与下调P-170和GST-π的水平有关。     

新型光敏剂光动力治疗耐药胃癌的实验研究

目的研究新型光敏剂DTP介导的光动力学治疗(PDT)对人长春新碱(vincristine,VCR)耐药胃癌细胞SGC7901/VCR的治疗作用,并揭示DTP-PDT与P-gp之间的关系及相关机制。方法 MTT法评价DTP-PDT对SGC7901/VCR细胞的杀伤作用及联合治疗作用;建立耐药细胞裸鼠模型,计算瘤体积,观察治疗效果;流式细胞术检测细胞凋亡及坏死情况;检测DTP-PDT后,细胞内单线态氧(~1O_2)产率;流式细胞术和qPCR技术分别检测MDR1 mRNA和P-gp表达。结果 DTP-PDT对SGC7901/VCR细胞及其裸鼠移植瘤均有明显杀伤作用,细胞死亡方式为凋亡;DTP-PDT后,细胞内~1O_2水平增加;DTP-PDT能够抑制耐药细胞MDR1 mRNA转录和P-gp表达,生育酚(α-tocopherol)可以减弱这种抑制;DTP-PDT与VCR合用对耐药细胞有协同治疗作用,生育酚可以减弱这种协同。结论 DTP-PDT产生的~1O_2可以抑制SGC7901/VCR生长,诱发细胞凋亡,而且能够抑制细胞表面P-gp的过表达,减少化疗药物外排,使DTP-PDT与VCR有协同治疗作用。     

胃癌多药耐药细胞中FOXC1的表达及其意义

目的探讨FOXC1在胃癌耐药细胞中的表达情况及对胃癌细胞药物敏感性的影响。方法采用q RT-PCR、Western Blot法检测胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR、SGC7901/VCR及亲本细胞SGC7901中FOXC1的表达;应用si RNA下调胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR、SGC7901/VCR中FOXC1的表达后以MTT法检测上述细胞IC50值的变化。结果 FOXC1在胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR、SGC7901/VCR表达显著高于亲本细胞SGC7901,当下调其表达后,SGC7901/ADR、SGC7901/VCR对多种化疗药物的敏感性显著升高。结论 FOXC1参与胃癌多药耐药过程,但其相关分子机制有待进一步深入研究。     

抑制PI3K/PKB信号通路提高胃癌细胞化疗敏感性的研究

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002提高胃癌耐药细胞SGC7901/VCR和亲代细胞SGC7901对化疗药物敏感性的作用及其机制。方法MTT法分别检测胃癌细胞SGC7901和SGC7901/VCR对化疗药长春新碱(VCR)的敏感性;RT-PCR法和免疫细胞化学法检测LY294002处理前后多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein-1,MDR1)和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP)基因和蛋白水平;Westernblot法检测LY294002处理前后细胞PKB总蛋白水平和磷酸化水平;并用流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果2×10-5mol·L-1 LY294002能明显增加SGC7901和SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性(P<0.01),其IC50分别由(0.20±0.03)和(8.09±0.60)mg·L-1降至(0.05±0.006)和(1.70±0.20)mg·L-1;降低细胞MDR1和XIAP的基因和蛋白水平;降低磷酸化PKB水平,而对其总蛋白水平无影响;LY294002联合VCR用药后细胞凋亡率明显高于单独VCR处理(P<0.01)。结论LY294002通过降低耐药基因MDR1和抗凋亡基因XIAP的表达,提高耐药和非耐药胃癌细胞对化疗药物的敏感性,此过程与抑制PI3K/PKB通路密切相关。     

姜黄素逆转人结肠癌细胞株HCT-8/VCR多药耐药的研究

目的探讨姜黄素对人结肠癌耐药细胞株HCT-8/VCR多药耐药性的逆转作用及可能机制。方法运用MTT法进行药敏试验,流式细胞仪检测细胞内罗丹明123(Rh123)的表达,RT-PCR法检测多药耐药基因mdr1 mR-NA水平的变化,Western blot法检测mdr1基因蛋白产物P糖蛋白(P-gp)表达水平的变化。结果经25μmol/L姜黄素处理后,增强了HCT-8/VCR细胞对VCR的敏感性,其逆转倍数为4.58倍,增加了细胞内Rh123的蓄积(P<0.05),明显抑制了多药耐药基因mdr1 mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论本研究结果提示姜黄素能抑制耐药基因的表达及功能,提高细胞对化疗药物的敏感性,从而逆转结肠癌细胞的多药耐药性。     

不同温度热疗逆转人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP耐药性的研究

目的探讨不同温度的热疗对人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP耐药逆转作用及可能机制。方法采用体外细胞培养技术,培养人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP。设计不同温度(41、42、43、44℃)热疗联合化疗处理SGC7901/DDP细胞,检测其凋亡率及细胞周期的改变,流式细胞仪、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测热疗、热化疗处理前后细胞中Survivin蛋白及mRNA的表达。结果不同温度热疗后SGC7901/DDP细胞凋亡率均有所升高,43℃时最高;热疗、热化疗处理后细胞周期发生改变,G0/G1细胞逐渐增多,S期逐渐减少,G2/M期相对增多,热化疗后更为明显;热疗后尤其是热化疗后SGC7901/DDP细胞中Survivin表达明显下降(P<0.01)。结论热疗能部分逆转人胃癌细胞SGC7901/DDP的耐药效应,其机制可能与改变细胞周期及抑制Sur-vivin表达有关。     

三氧化二砷对胃癌细胞SGC7901/ADR GST-π和TopoⅡ表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用和对GSTπ和TopoⅡ表达的影响。方法用MTT法检测As2O3的非细胞毒性浓度和SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及用免疫组织化学法检测细胞GSTπ和TopoⅡ的表达。结果与结论0.4~0.8μmol.L-1As2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P<0.01),As2O3可下调GSTπ表达,提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,部分逆转SGC7901/ADR细胞对ADM的耐药性。     

圣和散对胃癌SGC7901/VCR耐药细胞P-糖蛋白表达的影响

胃癌多药耐药(multidrug resistance,MDR)是胃癌化疗失败的主要原因之一[1],P-糖蛋白(P-glucoprotein,P-gp)是与胃癌MDR相关的主要分子,其表达水平与细胞膜通透性、细胞内药物浓度以及细胞耐药程度密切相关[2,3]。本实验主要观察中药圣和散逆转胃癌SGC7901/VCR耐药细胞MDR的作用。1材料与方法1·1材料耐长春新碱(VCR)人胃癌细胞株(SGC7901/VCR)(引自第四军医大学西京医院);RPMI1640细胞培养基(美国Gibco公司);噻唑蓝(MTT)、曲拉通(Triton X-100)(美国Sigma公司);抗P-gp单抗(美国Immunotech公司);流式细胞仪(美国BD公司);5-…     

Effect of curcumin on multidrug resistance in resistant human gastric carcinoma cell line SGC7901/VCR

AIM: To investigate the reversal effects of curcumin on multidrug resistance (MDR) in a resistant human gastric carcinoma cell line. METHODS: The cytotoxic effect of vincristine (VCR) was evaluated by MTT assay. The cell apoptosis induced by VCR was determined by propidium iodide (PI)-stained flow cytometry (FCM) and a morphological assay using acridine orange (AO)/ethidium bromide (EB) dual staining. P-glycoprotein (P-gp) function was demonstrated by the accumulation and efflux of rhodamine123 (Rh123) using FCM. The expression of P-gp and the activation of caspase-3 were measured by FCM using fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated anti-P-gp and anti-cleaved caspase-3 antibodies, respectively. RESULTS: Curcumin, at concentrations of 5 micromol/L, 10 micromol/L, or 20 micromol/L, had no cytotoxic effect on a parent human gastric carcinoma cell line (SGC7901) or its VCR-resistant variant cell line (SGC7901/VCR). The VCR-IC50 value of the SGC7901/VCR cells was 45 times more than that of the SGC7901cells and the SGC7901/VCR cells showed apoptotic resistance to VCR. SGC7901/VCR cells treated with 5 micromol/L, 10 micromol/L, or 20 micromol/L curcumin decreased the IC50 value of VCR and promoted VCR-mediated apoptosis in a dose-dependent manner. Curcumin (10 micromol/L) increased Rh123 accumulation and inhibited the efflux of Rh123 in SGC7901/VCR cells, but did not change the accumulation and efflux of Rh123 in SGC7901 cells. P-gp was overexpressed in SGC7901/VCR cells, whereas it was downregulated after a 24-h treatment with curcumin (10 micromol/L). Resistant cells treated with 1 mumol/L VCR alone showed 77% lower levels of caspase-3 activation relative to SGC7901 cells, but the activation of caspase-3 in the resistant cell line increased by 44% when cells were treated with VCR in combination with curcumin. CONCLUSION: Curcumin can reverse the MDR of the human gastric carcinoma SGC7901/VCR cell line. This might be associated with decreased P-gp function and expression, and the promotion of caspase-3 activation in MDR cells.     

Cationic submicron emulsions overcome multidrug resistance in SGC7901/VCR cells

The over-expression of P-glycoprotein (P-gp) is associated with the development of multi-drug resistance (MDR) in cancer cells. In this study, we examined whether cationic submicron emulsions (CSEs) can efficiently deliver hydroxycamptothecin (HCPT) into MDR cells (SGC7901/VCR cells) via electrostatic-mediated endocytosis, thus overcoming MDR. We prepared HCPT-CSEs and rhodamine-123-CSEs (RH-123-CSEs), and examined the in vitro cytotoxic activity of HCPT-CSEs and the intracellular accumulation of HCPT and RH-123 in SGC7901/VCR cells. The HCPT-CSEs significantly increased the intracellular accumulation of HCPT (8.2-fold higher than HCPT-injection) and enhanced cytotoxic activity of HCPT (2.7-fold higher than HCPT-injection with verapamil). The fluorescence microscopic and flow cytometric detection on RH-123 supported the intracellular accumulation effect of CSEs. These results indicate CSEs may enhance drug-CSEs internalization followed by releasing their contents into the cytoplasm (near nuclear), thus lowering P-gp-mediated drug efflux. Furthermore, these in vitro results suggest that CSEs are a potentially useful drug delivery system to circumvent P-gp-mediated MDR of tumor cells.     

GP与抗癌药物合用对肿瘤多药耐药的逆转作用

目的研究GP与抗癌药物合用对肿瘤多药耐药的逆转。方法MTT法测定GP与抗癌药物合用对K562/DOX和A549/DOX细胞的细胞毒作用;流式细胞术测定GP对K562/DOX细胞内阿霉素累积的影响。结果GP与阿霉素合用,能够明显逆转K562/DOX细胞对阿霉素的耐药性,并且能够浓度依赖性增加K562/DOX细胞内阿霉素的剂量;GP与阿霉素、顺铂、长春新碱合用时,对A549/DOX耐药性逆转作用相对较弱。结论GP能促进抗癌药物在MDR细胞内的累积,增强抗癌药物对MDR细胞的细胞毒作用,逆转肿瘤多药耐药。     

胃癌耐药研究中二维电泳凝胶显色方法的分析

目的分析利用蛋白质组学方法研究胃癌耐药相关蛋白质中双向电泳凝胶的染色显示。方法培养胃癌细胞SGC7901和长春新碱诱导的耐药胃癌细胞SGC7901/VCR,用双向凝胶电泳技术分离总蛋白,银染及胶体考马斯亮蓝染色,Image Scanner扫描仪扫描凝胶。结果获得了背景清晰、重复性好的双向凝胶电泳图谱,两种染色凝胶相比,硝酸银染色在样品少时显示更佳,过量则影响图像质量,而胶体考马斯亮蓝染色在上样量增加时的凝胶蛋白质点数目及丰度均增加,并无明显拖尾。结论两种显色方法受样品量影响较大,恰当选用有利于通过蛋白质组学研究胃癌耐药机制工作的进一步开展。     

人胃癌顺铂耐药细胞系的建立及其生物学特征

目的:国内外普遍应用体外建立的耐药细胞系作为研究模型。为探讨胃癌对顺铂耐药的机理,本研究首次建立人胃癌顺铂耐药细胞系并且研究其生物学特性。方法:采用逐步递增顺铂浓度,间歇作用体外诱导法建立人胃癌顺铂耐药细胞系SGC 7901/DDP;M TT法测定药物敏感性;光镜、电镜、M TT法活细胞计数、流式细胞仪及其相关P-糖蛋白的表达等方法观察其生物学特征的改变。结果:历时5个月建成人胃癌顺铂耐药细胞系SGC 7901/DDP,其对顺铂的耐药指数为14.68,并且与5-氟尿嘧啶、丝裂霉素等多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性;SGC 7901/DDP的细胞形态及其P-糖蛋白的表达;体外群体倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期分析发现其S期与G2/M期细胞减少、G0/G1期细胞增多。结论:SGC 7901/DDP细胞具有耐药特征,耐药性能稳定,与P-糖蛋白的表达有关。