人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人结肠癌SW480细胞移植瘤模型,研究其形态学及生物学特性。方法将处于对数生长期的人结肠癌SW480细胞接种于10只裸鼠右侧背部皮下,待瘤体生长至直径1～2 cm时处死裸鼠,取出肿瘤组织,将其磨碎并与培养基混合、过滤,滤液与基质胶混合,再将基质胶细胞悬液接种于30只裸鼠右侧背部皮下7,d后处死裸鼠,观察肿瘤大体特征,光镜及电镜下观察肿瘤病理学特征。结果接种SW480细胞的裸鼠于接种后4周有3只成瘤。接种基质胶细胞悬液的裸鼠在接种后7 d有28只成瘤,瘤体形状规则,肿瘤组织呈现典型癌变特征。结论本实验成功建立了人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,该模型成瘤率高,瘤体形状规则,病理学改变与临床非常相似,为研究人结肠癌干预措施提供了较为理想的动物模型。     

姜黄素类似物对人结肠癌HT-29细胞增殖与自噬的影响

目的 初步探究姜黄素类似物——WH-8对人结肠癌HT-29细胞增殖和自噬的影响。方法 选用不同浓度WH-8作用于人结肠癌HT-29细胞,应用四甲基偶氮唑盐还原法观察药物对细胞的生长抑制作用;通过荧光染色技术和细胞成像技术观察WH-8作用下细胞自噬囊泡的变化;四甲基偶氮唑盐还原法检测经自噬特异性抑制剂3-MA预处理后WH-8对细胞生长抑制率的影响;蛋白质印迹法观察WH-8作用下细胞自噬特征性蛋白酵母自噬相关基因1(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达情况。结果 WH-8呈时间-剂量依赖性抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,48 h平均半数抑制浓度为(12.5±1.3)μmol/L;一定浓度下WH-8可诱导细胞的自噬囊泡增多;3-MA可逆转WH-8对人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);WH-8可诱导Beclin-1表达上调,且在一定时间内促进LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化。结论 WH-8可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导细胞自噬。     

奥曲肽与氟尿嘧啶联合对人结肠癌细胞SW480增殖抑制作用的研究

目的:研究奥曲肽单用及其与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合对人结肠癌细胞SW480的增殖抑制作用。方法:采用MTT比色法测定不同浓度(10-7～10-10mol.L-1)奥曲肽单用及其与5-FU(12.5、25、50μg.mL-1)联合作用SW480后的吸光度值后计算抑制率。结果:奥曲肽各浓度中,以10-10mol.L-1抑制率最高,10-12mol.L-1以下对细胞增殖无抑制作用;奥曲肽与5-FU联合使用对细胞增殖的抑制率明显高于单用组(P<0.01)。结论:奥曲肽能抑制人结肠癌细胞SW480的增殖,并与5-FU有协同作用。     

银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及ROS/XIAP信号通路的影响

目的 探讨银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及活性氧（ROS）/X连锁凋亡蛋白抑制剂（XIAP）信号通路的影响。方法 实验分为模型组（培养基+SW480细胞）、紫杉醇组（5 mg/L+培养基+SW480细胞）,以及银杏内酯B低、高剂量组（50,100μmol/L+培养基+SW480细胞）。采用四唑盐（MTT）法测定细胞增殖水平并计算存活率,流式细胞术测定细胞凋亡情况并计算凋亡率,Transwell法测定细胞迁移侵袭水平,荧光探针法检测活性氧（ROS）水平,反转录聚合酶链反应法及Western blot法测定细胞XIAP mRNA及蛋白表达水平。结果 与模型组比较,紫杉醇组及银杏内酯B低、高剂量组细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭水平显著降低,细胞ROS水平及XIAP mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P <0.05）。结论 银杏内酯B可有效抑制SW480细胞的迁移和侵袭并诱导其凋亡,其机制可能与抑制ROS/XIAP信号通路的激活有关。     

结肠癌SW480细胞冻存与复苏方法的改进

目的：探索一种程序简洁、易于操作的细胞株冻存与复苏的方法。方法采用常规方法体外培养肠癌细胞株SW480,胰酶消化后,收集细胞悬液,A组细胞采用传统冻存与复苏方法,B组采用改良的冻存与复苏方法,分别于2周、3个月、6个月后立即复苏冻存细胞进行培养,观察细胞的存活情况,并于1周内不同时间点用MTT法检测细胞增殖情况并进行比较。结果采用改良方法冻存与复苏的SW480细胞存活率及生长曲线与传统方法比较无显著差异,细胞贴壁率、形态学特点及增殖能力无明显变化。结论改良的细胞冻存体系以及快速复苏法是细胞株冻存与复苏的一种可行方法,且更加方便快捷。     

靶向DcR3的siRNA抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的以脂质体为载体,探讨靶向诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)的siRNA对人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法裸鼠背部皮下种植结肠癌SW480细胞,建立结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型。针对靶标DcR3基因,利用Dharmacon公司软件设计并合成siRNA序列,通过瘤体局部多点注射脂质体与DcR3 siRNA混合物,将DcR3 siRNA转染到裸鼠背部皮下移植瘤内。同时设立阴性对照组和空白对照组。观察肿瘤治疗前后体积变化,评价DcR3 siRNA对肿瘤的抑制作用;比较肿瘤治疗前后的细胞形态学改变;免疫组织化学及RT-PCR检测DcR3基因表达;原位细胞凋亡检测肿瘤的凋亡情况。结果治疗组肿瘤体积明显小于对照组,肿瘤组织内坏死面积增大,细胞凋亡率显著增高,DcR3蛋白表达水平降低。治疗过程中裸鼠生长良好,无明显毒性反应。结论脂质体介导的DcR3 siRNA对裸鼠皮下结肠癌SW480细胞移植瘤有明显抑制、杀伤作用,细胞凋亡是DcR3 siRNA所致肿瘤细胞死亡的重要形式。     

二烯丙基二硫下调LIMK1抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人结肠癌SW480细胞LIMK1表达及迁移、侵袭能力的影响,阐明其抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的分子机制。方法 RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学检测DADS对SW480细胞LIMK1表达的作用;划痕愈合和侵袭实验检测DADS对SW480细胞迁移、侵袭能力的影响。结果 RT-PCR结果显示,与对照组相比,DADS处理SW480细胞后其LIMK1 mR-NA表达明显下调。免疫细胞化学检测发现LIMK1蛋白在人结肠癌SW480细胞中高表达,DADS作用后LIMK1蛋白表达明显下调。Western blot检测显示,DADS呈时间浓度依赖性下调SW480细胞LIMK1蛋白表达。划痕愈合实验结果显示,随着DADS浓度增高,细胞划痕距离增宽,表明DADS呈浓度依赖性抑制SW480细胞迁移能力。Transwell侵袭实验结果表明,随着DADS浓度增高,细胞穿膜数逐渐减少,表明DADS呈浓度依赖性抑制SW480细胞侵袭能力。结论 DADS下调LIMK1表达可抑制人结肠癌SW480细胞迁移、侵袭,DADS抑制人结肠癌SW480细胞迁移、侵袭的分子机制可能与降低LIMK1蛋白表达水平有关。     

3-溴丙酮酸对人结肠癌SWⅢ-C细胞增值和凋亡的影响

目的研究3-溴丙酮酸对SWⅢ-C细胞增殖和凋亡的影响。方法利用透射电镜、MTT法、流式细胞术、免疫组化等方法检测3-溴丙酮酸作用于SWⅢ-C细胞后,其细胞形态、超微结构的改变;细胞增殖、细胞周期分布和细胞凋亡率的变化以及Bcl-2、c-myc和mtp53蛋白表达的变化。结果 3-溴丙酮酸可抑制SWⅢ-C细胞的增殖,浓度为25μg·mL-1时抑制作用最明显;3-溴丙酮酸可有效诱导SWⅢ-C细胞凋亡,浓度为25μg·mL-1效果最明显;3-溴丙酮酸可下调SWⅢ-C细胞Bcl-2、c-myc和mtp53蛋白的表达。结论 3-溴丙酮酸可抑制SWⅢ-C细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2、c-myc和mtp53的表达有关。     

白头翁皂苷A3通过M2型巨噬细胞提高人结肠癌SW480细胞对5-FU的化疗敏感性

目的:观察白头翁皂苷A3(A3)通过干预巨噬细胞极化增强人结肠癌SW480细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗的敏感性,并探讨其作用机制。方法:采用CCK8法检测A3对人单核THP-1细胞存活率的影响,确定A3的安全作用浓度;采用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞,将M0型巨噬细胞分为M0对照组,M2模型组,A3低、中、高剂量干预组。其中M2模型组给予20 μg·L^-1IL-4与20 μg·L^-1IL-13进行造模,A3干预组在造模的同时给予低、中、高剂量(50,75,100 mg·L^-1)A3进行干预。采用流式细胞术检测M2型巨噬细胞表面抗原CD206的表达;采用RT-PCR法检测M2型巨噬细胞极化因子CD206、IL-10、CCL22、CCL18 mRNA的表达;采用Western blot法检测细胞内p-STAT6、CD206、IL-10、CCL22蛋白的表达。A3干预巨噬细胞M2型极化后的细胞上清液作为条件培养基用于考察SW480细胞对5-FU的化疗敏感性,采用CCK8法检测SW480细胞的存活率;采用Annexin-FITC/PI双染法及Western blot法检测SW480细胞凋亡水平,以及Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果:A3在50,75,100 mg·L^-1浓度时对THP-1细胞存活率没有显著影响。A3呈剂量依赖性减少CD206阳性细胞表达比例,下调p-STAT6、CD206、IL-10、CCL22、CCL18基因与蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。A3干预巨噬细胞M2型极化后的条件培养基显著提高了SW480细胞对5-FU的敏感性,表现为SW480细胞的存活率下降、凋亡率升高,以及促凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:A3能够减弱M2型巨噬细胞对SW480细胞凋亡的抑制作用从而提高SW480细胞对5-FU的化疗敏感性,作用机制可能与A3调控STAT6信号通路抑制巨噬细胞M2型极化有关。     

姜黄素联合伊立替康对结肠癌SW620细胞的体外抑制作用

目的研究姜黄素增强伊立替康对结肠癌SW620细胞的体外抑制作用,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞凋亡的影响,比较细胞凋亡率;采用蛋白质印记法检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞内拓扑异构酶I蛋白表达水平的影响。结果伊立替康和姜黄素单用均对SW620细胞增殖具有抑制作用,呈浓度和时间相关性。5、50μg/mL伊立替康分别与0~30μg/mL姜黄素联合处理SW620细胞12、24、48 h均具有协同抑制细胞活性的作用,且呈浓度和时间相关性。高质量浓度比低质量浓度的伊立替康与姜黄素联合用药抑制效果显著(P0.01)。0、20μg/mL姜黄素分别与0、5、50μg/mL伊立替康联合处理SW620细胞12、24、48 h,姜黄素可以增强伊立替康诱导的SW620细胞凋亡率。20μg/mL姜黄素联合5、50μg/mL伊立替康显著上调了SW620细胞内拓扑异构酶-Ⅰ蛋白的表达,协同诱导了SW620细胞内拓扑异构酶-Ⅰ蛋白的表达。结论伊立替康联合姜黄素可以协同增强对SW620细胞活性的抑制作用,协同诱导SW620细胞凋亡,其作用机制可能与伊立替康、姜黄素上调拓扑异构酶-Ⅰ表达有关。     

姜黄素对喉癌细胞增殖的作用以及对细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响分析

目的 探讨姜黄素治疗喉癌对细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响.方法 在姜黄素培养基中进行Hep-2细胞的培养,依据不同的培养时间,分别设为两组(24h、48h).对细胞的增殖采用MTT法进行检测,对Bcl-2、Bax基因的表达采用RT-PCR法进行检测.结果 48 h培养组与24 h培养组在不同的姜黄素浓度下相比,差异均具有显著统计学意义(P＜0.05).不同的培养时间下,三组Bcl-2以及Bax浓度具有显著差异,组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对Hep-2细胞增殖有显著的时间-剂量依赖性抑制作用,其浓度越高,Bcl-2浓度越低,Bax浓度越高,可起到有效的抗癌作用.     

携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用

目的探讨携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌SW620细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用。方法以不同浓度梯度的腺病毒作用于体外培养的结肠癌SW620细胞,通过MTT法检测腺病毒对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,透射电镜观察细胞凋亡时的超微形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 MTT实验显示携带Lipocalin2基因的腺病毒可抑制SW620细胞的生长,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,透射电镜下观察发现细胞体积缩小,细胞核固缩,核内染色质凝集,并附于一侧核膜的边缘,内质网扩张,空泡形成增多,出现明显的凋亡现象。流式细胞仪可检测到SW620细胞凋亡率明显增加,呈时间及浓度依赖性。结论携带Lipocalin2基因的腺病毒能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制SW620细胞的生长。     

姜黄素对人肝癌细胞SMMC7721侵袭转移的影响

目的 研究姜黄素在体外对人肝癌细胞株SMMC7721细胞黏附、迁移及侵袭的抑制作用.方法 分别以不同浓度姜黄素在体外处理SMMC7721细胞48 h,通过细胞黏附、迁移和侵袭实验观察姜黄素对SMMC7721细胞黏附力、运动力和侵袭力的影响.结果 姜黄素20.0、40.0、60.0μmol/L处理SMMC7721细胞48 h,对细胞侵袭能力的抑制率分别为(17.31±1.78)%、(60.30±4.54)%、(100.00±0.00)%(P<0.01).SMMC7721细胞迁移能力抑制率分别为(15.70±1.33)%、(41.90±3.34)%、(100.00±0.00)%(P<0.01).姜黄素20.0、40.0、60.0μmol/L均能有效抑制SMMC7721细胞与Matrigel胶的黏附力.结论 姜黄素具有抑制人肝癌细胞体外侵袭和转移的作用.     

姜黄素对人胃癌MGC823细胞凋亡的影响

目的：探讨姜黄素对人胃癌MGC823细胞体外增殖及凋亡的影响。方法：选用人胃癌MGC823细胞进行体外培养,采用MTT法测定不同浓度的姜黄素对MGC823细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪监测凋亡;荧光显微镜技术和电镜技术,观察姜黄素对细胞诱发凋亡及细胞周期的变化。结果：姜黄素可明显抑制细胞的生长,其抑制率与药物浓度成剂量依赖关系。流式细胞分析仪结果表明,姜黄素能使MGC823细胞在加药后48h出现凋亡峰。电镜观察可见姜黄素能使细胞发生凋亡,出现核边集及染色质浓缩成块状。结论：姜黄素可抑制Ec-9706细胞的生长,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

姜黄素对肿瘤细胞增殖的影响

目的观察姜黄素在体外对多种常见肿瘤细胞增殖的影响。方法分别用0、1、2、5、10、20、50、100μmol·L^-1姜黄素处理人乳腺癌细胞（MCF-7）、人子宫颈癌细胞（Hela）、人肺癌细胞（A549）、人肝癌细胞（HepG-2）24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,并计算72 h时的半数抑制浓度（50%concentration of inhibition,IC50）。结果姜黄素在体外对上述4种细胞增殖均有抑制作用,且呈浓度、时间依赖性。结论姜黄素具有抑制多种肿瘤细胞增殖的作用。     

姜黄素对人食管癌细胞BAG-1表达的影响

目的观察姜黄素对人食管癌细胞抗凋亡基因BAG-1表达的影响,并探讨姜黄素抗癌分子机制。方法应用浓度为40～80μmol/L姜黄素处理人食管癌EC-9706细胞株12h后,Western blot检测BAG-1的表达。结果经不同浓度的姜黄素干预后,BAG-1表达随着姜黄素浓度的增加有逐渐减弱的趋势。结论姜黄素能够有效抑制抗凋亡基因BAG-1的高表达。     

姜黄素对裸鼠人胃癌细胞 MMP-2和 CD44 v6在 mRNA水平表达的影响

目的：观察姜黄素对胃癌组织中MMP-2和CD44v6在mRNA水平表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞转移的作用机制。方法以SGC-7901胃癌细胞株建立胃癌裸鼠原位移植瘤模型,将裸鼠随机分为对照组及姜黄素组,每组12只。观察裸小鼠胃癌种植后肿瘤生长及转移灶情况,用原位杂交方法检测肿瘤组织中MMP-2 mRNA和CD44 v6 mRNA表达的变化。结果所有荷瘤鼠胃壁均有肿瘤生长,荷瘤率100％,姜黄素组肝、腹腔和淋巴结的转移比对照组明显减少（ P ＜0ú．05）;姜黄素治疗组瘤体中MMP-2 mRNA和CD44v6 mRNA的表达明显下调（ P ＜0．05）。结论姜黄素具有抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤转移的作用,其作用机制可能与下调MMP-2 mRNA和CD44 v6 mRNA的表达有关。     

姜黄素对人鼻咽癌株CNE-2Z细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨姜黄素(CU)对人鼻咽癌株CNE-2Z细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养CNE-2Z细胞在梯度浓度CU(0、20、40、80μmol/L)干预48 h后,采用MTT法检测其对CNE-2Z抑制增殖的作用,ELISA法检测8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,Hoechst33342染色检测细胞形态学的变化,Western blotting法检测PI3K和Akt磷酸化水平。结果与空白对照组(0μmol/L)比较,CU干预后明显抑制CNE-2Z的细胞增殖(P<0.01),同时减少内源性的8-OHdG生成(P<0.01)。此外,CU干预可有效促进癌细胞凋亡,下调p-PI3K和p-Akt的表达。结论姜黄素具有良好的抗肿瘤作用,其机制与抑制癌细胞增殖、诱导细胞凋亡及抑制PI3K/Akt通路有关。