血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其初步分子机制。方法 MTT法检测血根碱对肺腺癌细胞活性的影响；利用划痕和Transwell小室实验分析血根碱对细胞迁移、侵袭的影响；RT-qPCR和免疫印迹法检测不同浓度血根碱对Wnt/β-catenin通路相关基因和核心蛋白的影响。结果 与空白对照组比，血根碱（1~10 μmol/L）呈浓度-时间依赖性地抑制人肺腺癌细胞的活力（P<0.05）；低浓度1 μmol/L作用48 h后，A549和H1975细胞的迁移和侵袭能力明显减弱（P<0.01）；血根碱（1、2.5、5 μmol/L）可显著下调Wnt/β-catenin通路中核心分子β-catenin及上游磷酸化GSK3β、DVL2蛋白表达，进而抑制下游靶基因TCF/LEF，CyclinD1的mRNA水平（P<0.05），并呈一定的浓度依赖性。结论 血根碱可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路起到抑制人肺腺癌细胞迁移、侵袭的作用。     

miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:体外培养人胶质瘤细胞U251,将miR-1471模拟物或阴性对照分别转染至细胞中,记为miR-1471组和阴性对照（NC组）,同时设置对照组。qRT-PCR检测转染效果。CCK8检测各组细胞增殖能力。Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。划痕实验检测各组细胞迁移能力。qRT-PCR和Western blot检测转移黏附基因（metadherin, MTDH）及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组和NC组比较,miR-1471组细胞增殖活性均显著降低（P＜0.05）,侵袭细胞数均显著减少（P＜0.05）,划痕间距明显较大,细胞中MTDH、Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。结论:miR-1471能抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MTDH表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

柠檬酸合成酶对卵巢癌SKOV3细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨柠檬酸合成酶（citrate synthase,CS）对上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞SKOV3上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）及生物学行为的影响。方法:利用Lipofectamine 2000体外瞬时转染化学法合成的CS siRNA,通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot检测转染效率;Transwell实验检测转染前后SKOV3细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot检测转染前后上皮标记分子E-cadherin、间质标记分子Vimentin蛋白水平和Wnt通路关键分子β-catenin蛋白水平,实时荧光定量PCR检测转染前后EMT相关转录因子Slug、Snail和Twist的mRNA水平。结果:siRNA干扰序列显著降低SKOV3细胞中CS表达;CS低表达显著抑制SKOV3细胞的侵袭和迁移能力,促进上皮标记分子E-cadherin表达,抑制间质标记分子Vimentin表达,降低Wnt通路关键分子β-catenin表达;EMT相关转录因子Snail和Twist表达显著降低(P＜0.001,P＜0.01),Slug表达下降不显著(P＞0.05)。结论:CS低表达显著抑制卵巢癌SKOV3细胞EMT,其机制可能是通过降低Snail和Twist转录因子实现的,为卵巢癌的转移治疗提供初步的实验及理论基础。     

小分子干扰RNA抑制TNC基因的表达并逆转卵巢癌紫杉醇耐药

目的 研究小分子干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰(RNAi)对卵巢癌紫杉醇耐药细胞TNC基因表达的影响,探讨TNC基因在紫杉醇耐药中的功能.方法 用脂质体转染剂LipofectamineTM2000将针对TNC基因特异性合成的siRNA转染SKOV3/TAX30细胞,分别在转染后24、48、72 h收集细胞,检测各组细胞TNC mRNA和TNC蛋白的表达水平.siRNA转染SKOV3/TAX30细胞后,采用MTT法检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50).Western Blot检测SKOV3/TAX30及SKOV3/TAX300两种耐药细胞Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin及下游Cyclin D、E-cadherin蛋白的表达.结果 siRNA转染SKOV3/TAX30细胞24、48、72 h后,TNC mRNA和TNC蛋白表达水平均下降,SKOV3/TAX30细胞对紫杉醇药物的IC50下降.TNC表达升高的耐药细胞中,Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin及下游Cyclin D蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调.结论 针对TNC基因特异性合成的siRNA可激发RNAi介导的TNC沉默,并且逆转了紫杉醇化疗耐药,TNC表达上调与紫杉醇耐药相关,TNC可能通过Wnt信号通路的激活参与了化疗耐药.     

lncRNA PVT1沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及STAT3通路的影响

目的:研究沉默变异性浆细胞瘤异位1（plasmacytoma heterotopic 1,PVT1）基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、信号转导及转录活化因子（STATs）3通路的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计PVT1 siRNA序列,转染细胞,分为siRNA组、阴性对照组（NC）、空白对照组（BC）,利用qRT-PCR检测各组细胞PVT1相对表达量,利用MTT法检测细胞增殖情况,利用划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell实验检测细胞侵袭能力,利用WB法检测STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:转染后,siRNA3组细胞中PVT1表达水平较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）;转染后,与BC组与NC组比较,siRNA3组细胞增殖率较BC组与NC组显著降低（P＜0.05）,迁移、侵袭细胞数显著降低（P＜0.05）,p-STAT3蛋白,MMP2、MMP9、CD44、PCNA蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默PVT1可能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭,其具体机制可能与STAT3信号通路有关。     

miR-613通过下调Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的增殖与侵袭

目的:研究miR-613在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-613是否通过下调Wnt信号通路活性抑制前列腺癌细胞系细胞的增殖和侵袭能力。方法:收集临床前列腺癌组织及配对癌旁组织20例,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组组织中miR-613的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-613 mimic和miR-NC至离体培养的PC-3、DU-145细胞中,随后,采用MTT法、平板克隆实验检测细胞增殖和Matrigel侵袭实验测定前列腺癌细胞的侵袭情况,采用荧光素酶分析方法评估Wnt信号通路活性变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因的转录(包括Cyclin D1和c-Myc),WB法检测细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达量。结果:相比配对癌旁组织,miR-613在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.01);在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-613 mimic后,PC-3、DU-145细胞增殖能力下降(P<0.05),PC-3、DU-145细胞的迁移侵袭能力下降(P<0.01);miR-613的过表达显著降低Wnt信号通路活性、β-catenin蛋白表达及Wnt信号下游靶基因Cyclin D1和c-Myc的转录及蛋白表达。结论:miR-613通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来影响前列腺癌细胞的增殖与侵袭,为前列腺癌的潜在治疗靶点之一。     

LncRNA MALAT1通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭北大核心

目的:观察LncRNA MALAT1对Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:干扰LncRNA MALAT1在Saos-2细胞中的表达水平,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞技术检测细胞凋亡及周期情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭改变,透射电镜观察自噬小体,Western Blot、RT-PCR检测自噬相关因子Beclin1、LC3、p62表达差异及LncRNA MALAT1对Wnt/β-catenin通路的影响。结果:干扰LncRNA MALAT1后,Saos-2细胞自噬水平明显升高,Beclin1、LC3表达水平明显升高(P<0.05),而p62的表达水平显著下降(P<0.05);细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05),Wnt/β-catenin通路相关因子Wnt3a、β-catenin的表达水平显著下降(P<0.05)。结论:LncRNA MALAT1可以通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移和侵袭。     

HK2通过Wnt/β-catenin信号通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移CSCD

目的研究己糖激酶2(HK2)对宫颈癌细胞HeLa增殖和迁移的影响及其作用机制。方法G418压力筛选获取HK2稳定表达的HeLa细胞系;细胞计数法、MTT法、流式细胞仪检测HK2对HeLa细胞增殖、细胞活力及细胞周期的影响;细胞划痕和Transwell小室检测HK2对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin、Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白的表达;TOP/FOP实验检测HK2对Wnt/β-catenin信号转导通路活性的影响;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939观察在HK2过表达HeLa细胞中抑制Wnt/β-catenin信号通路活性后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建HK2稳定表达的HeLa细胞系;过表达HK2可以促进HeLa细胞的增殖和细胞活力、促进细胞周期从G_0/G_1期向S期转换、增强细胞迁移和侵袭能力、增强Wnt/β-catenin信号转导通路活性,上调Cyclin D1、MMP7和Slug的表达;XAV-939抑制Wnt/β-catenin信号通路在HK2过表达HeLa细胞中的活性后,可以抑制HK2对细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论HK2通过Wnt/β-catenin信号转导通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白表达促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。     

miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测卵巢癌组织、癌旁正常上皮结缔组织和HO-8910细胞、正常卵巢上皮细胞的miRNA-27a和SPRY2表达水平;MTT法检测转染细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;荧光素酶分析验证miRNA-27a对SPRY2的靶向调控能力;免疫荧光染色检测miRNA-27a与SPRY2对Wnt/β-catenin信号通路的调控能力.结果 卵巢癌组织、HO-8910细胞中miRNA-27a的表达水平分别高于癌旁正常上皮结缔组织、卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05),而SPRY2的mRNA和蛋白表达水平均低于癌旁正常组织及卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05).与B组相比,C组和E组HO-8910细胞增殖及侵袭能力均下调(P﹤0.05).F组的荧光素酶活性明显高于G组(P﹤0.01).C组的HO-8910细胞中,β-catenin表达上升,且进入细胞核.结论 miR-NA-27a通过靶向抑制SPRY2激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进人卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力.     

TRIM21 通过Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌细胞增殖及耐药

目的：探讨TRIM21 通过激活Wnt/β-catenin 信号通路调控卵巢癌细胞增殖以及PARP抑制剂耐药的相关机制。方法：收集2018 年1 月至2019 年1 月于延安市人民医院手术切除的8 例卵巢癌组织及宫颈上皮组织标本,并根据患者是否对PARP抑制剂尼拉帕尼耐药分为耐药组和非耐药组（4 例/组）;卵巢癌细胞系CAOV3、SKOV3、OVCAR3、ES-2、HO8910、A2780 和OV2008。用qPCR 法和Western blotting（WB）分别检测卵巢癌组织和细胞系中TRIM21 和β-catenin 表达水平。构建TRIM21 过表达及敲减细胞系,用CCK-8 法检测各组细胞的增殖活力,用TOP/FOP 双荧光素酶实验检测TRIM21 对Wnt信号通路激活的影响,qPCR法和WB检测TRIM21 对β-catenin mRNA和蛋白水平的影响,并通过Wnt通路抑制剂XAV-939 作进一步验证。结果：TRIM21 在卵巢癌组织中的表达水平显著高于宫颈上皮组织（P<0.01）,且在耐药组织中表达水平较高（P<0.01）;TRIM21 在卵巢癌ES-2 细胞中表达水平相对最高,而在CAOV3 和A2780 中表达水平相对较低（均P<0.01）。敲减TRIM21 后,ES-2 细胞中TRIM21 的表达水平显著降低（P<0.01）,细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）;过表达TRIM21 后,CAOV3 细胞的增殖能力显著增强（P<0.01）,并可抑制尼拉帕尼的抗肿瘤增殖活性,其可调控Wnt/catenin 通路的激活,而敲减β-catenin 或使用Wnt/β-catenin 抑制剂XAV-939 后,TRIM21 在卵巢癌中的作用被显著逆转。结论：TRIM21 可通过调控Wnt/β-catenin 信号通路增强卵巢癌细胞的增殖能力并在PARP抑制剂尼拉帕尼耐药过程中发挥一定的作用。     

长链非编码RNA CARMN对乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨长链非编码RNA心脏中胚层增强子相关非编码RNA(CARMN)在乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭过程中的作用及其对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法 通过UALCAN分析CARMN在乳腺癌组织的表达，实时荧光定量PCR(qPCR)检测CARMN在正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)和乳腺癌细胞(MCF-7)的表达。将MCF-7细胞分为NC组(无转染处理)、OE-CARMN组(转染pcDNA3.1-CARMN以过表达CARMN)和si-CARMN组(转染si-CARMN以干扰CARMN表达)。利用CCK-8法、细胞集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell小室实验检测MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭情况；qPCR和Western blot检测无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)、β-catenin和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达。结果 CARMN在乳腺癌组织和MCF-10A细胞中均表达下调(P<0.05)。OE-CARMN组MCF-7细胞活力、细胞集落数、划痕愈合率和侵袭细胞数量均低于NC组(P<0.05),而si-CARMN组MC...     

白藜芦醇对卵巢癌细胞增殖活力、增殖基因mRNA表达及Wnt信号通路的影响

目的研究白藜芦醇对卵巢癌细胞增殖活力、增殖基因mRNA表达及Wnt信号通路的影响。方法培养卵巢癌SKOV3细胞株,并随机分为四组,对照组用不含药物的DMEM处理,白藜芦醇组用含有不同剂量(20、40、80μmol/L)的白藜芦醇处理。处理24 h后,使用酶标仪检测表示细胞增殖活力的光密度(OD_(490))值,荧光定量PCR检测细胞周期基因c-myc、细胞周期蛋白A(cyclin A)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21及上皮间质转化基因N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA表达水平,Western blotting法检测Wnt信号通路分子糖原合成激酶-3β(GSK-3β)和β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白表达水平。结果 20、40、80μmol/L白藜芦醇组SKOV3细胞的OD_(490)值、细胞中c-myc、cyclin A、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin的mRNA表达水平及β-catenin的蛋白表达水平均明显低于对照组,细胞中p21、E-cadherin的mRNA表达水平及GSK-3β的蛋白表达水平均明显高于对照组,且随着白藜芦醇剂量的升高,SKOV3细胞的OD_(490)值、细胞中c-myc、cyclin A、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin的mRNA表达水平及β-catenin的蛋白表达水平逐渐下降,细胞中p21、E-cadherin的mRNA表达水平及GSK-3β的蛋白表达水平逐渐升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论白藜芦醇能够以剂量依赖性的方式降低卵巢癌细胞的增殖活力、调节增殖基因的表达,且这一作用与Wnt信号通路激活的受抑制有关。     

二甲双胍对卵巢癌细胞的抗肿瘤作用

目的 探讨二甲双胍对卵巢癌细胞增殖、周期、凋亡和迁移的影响及其作用机制。方法 选取卵巢癌A2780、CAOV3、SKOV3细胞为研究对象,MTT和克隆形成实验检测二甲双胍对细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell实验检测二甲双胍对细胞迁移能力的影响,流式细胞术检测二甲双胍对细胞周期和凋亡的影响,Western blot法检测二甲双胍对细胞AMPK磷酸化、mTOR磷酸化、CXCR4和Wnt/β-catenin蛋白表达的影响。结果 随着二甲双胍浓度增加和作用时间延长,卵巢癌细胞存活率明显下降。A2780、CAOV3及SKOV3细胞48 h的IC50分别为16.36、36.65和43.44 mmol/L。与对照组相比,二甲双胍处理后,细胞克隆形成能力和迁移能力被明显抑制,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率增加。随着二甲双胍浓度增加,磷酸化AMPK蛋白表达逐渐增加,磷酸化mTOR、CXCR4、Dvl3、β-catenin、CyclinD1、CDK1蛋白表达逐渐降低。结论 二甲双胍对卵巢癌细胞具有抗肿瘤作用,其机制可能与激活AMPK抑制CXCR4介导的Wnt/β-catenin信号通路有...     

人滋养层细胞表面抗原2的表达在卵巢癌侵袭转移中的作用及其机制

目的探讨人滋养层细胞表面抗原2(Trop2)在卵巢癌侵袭和转移中的作用及其分子机制。方法通过对Cancer Cell Line Encyclopedia(CCLE)和The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库进行数据挖掘,分析Trop2表达的临床意义。采用Western blot法检测卵巢癌细胞系A3O、A1780和SKOV3中Trop2蛋白的表达。采用Trop2-shRNA构建SKOV3-shRNA细胞模型,以定量逆转录聚合酶链反应检测SKOV3-shRNA和SKOV3-NC组细胞中SKOV3 mRNA的表达,以细胞计数盒8法检测SKOV3-shRNA组和SKOV3-NC组细胞的增殖,以流式细胞仪检测SKOV3-shRNA和SKOV3-NC组细胞的细胞周期和凋亡,以Transwell实验检测SKOV3-shRNA和SKOV3-NC组细胞的侵袭和迁移,以Western blot法检测SKOV3-shRNA和SKOV3-NC组细胞中AKT、p-AKT、β-catenin、caspase3、bcl-2、E-cadherin和vimentin蛋白的表达。结果 Trop2 mRNA在卵巢癌中高表达,其表达高低与肿瘤分期有关,也与患者预后有关。与A3O细胞比较,A1780和SKOV3细胞高表达Trop2蛋白(P<0.05)。SKOV3-NC组和SKOV3-shRNA组中Trop2 mRNA的相对表达量分别为1.18±0.24和0.42±0.08,差异有统计学意义(P<0.05)。SKOV3-NC组细胞的活力明显高于SKOV3-shRNA组(P<0.05)。SKOV3-NC和SKOV3-shRNA组G₀/G₁期细胞的比例分别为(38.67±4.22)%和(60.24±8.17)%,SKOV3-shRNA组细胞阻滞于G₀/G₁期(P<0.05)。SKOV3-shRNA组细胞的凋亡率为(26.32±1.81)%,明显高于SKOV3-NC组[(6.54±1.32)%,P<0.05]。SKOV3-shRNA组和SKOV3-NC组SKOV3细胞的迁移细胞数分别为(1 255.83±108.44)个/视野和(1 679.71±213.92)个/视野,侵袭细胞数分别为(242.49±52.09)个/视野和(473.54±73.11)个/视野,与SKOV3-NC组比较,SKOV3-shRNA组的迁移和侵袭细胞数均明显减少(均P<0.05)。SKOV3-shRNA细胞中p-AKT、bcl-2、vimentin、β-catenin表达下调,caspase3、E-cadherin表达上调,总AKT没有明显变化。结论 Trop2的表达与卵巢癌分期和预后有关,Trop2可通过激活AKT/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞增殖和转移,沉默Trop2的表达可以抑制卵巢癌进展。     

角鲨烯环氧化酶对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其机制探讨

目的:观察角鲨烯环氧化酶（squalene epoxidase,SQLE）对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,并从上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)方向探究其可能的机制。方法:通过搜索GEPIA和Western blotting、qRT-PCR确定SQLE是否存在差异表达;Kaplan-Meier Plotter在线网站评估SQLE与卵巢癌预后的关系;构建稳定敲减SQLE的A2780细胞株和稳定过表达SQLE的ES-2细胞株,Western blotting、qRT-PCR检测敲减和过表达效率;MTT和集落克隆实验、划痕实验及Transwell小室分别用于检测细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化;流式细胞术检测凋亡变化;Western blotting检测Ki67、EMT、凋亡、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果:SQLE在卵巢癌组织和细胞中表达水平明显高于正常卵巢组织和细胞(P＜0.05);SQLE表达水平与卵巢癌预后明显相关(P＜0.05);敲减SQLE后细胞增殖、迁移及侵袭能力减弱(P＜0.05)、细胞凋亡增加(P＜0.05),并导致Ki67、EMT、凋亡以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的变化(P＜0.05),过表达SQLE时趋势则相反;XAV-939可逆转过表达SQLE的ES-2细胞中相关蛋白表达水平的变化。结论:SQLE可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路增强卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,抑制其凋亡,并促进上皮间质转化。     

肝癌细胞系中Oct4与Wnt/β-catenin 和TGF-β信号通路的相互影响

 目的 探讨干细胞相关基因Oct4与Wnt/β-catenin 及TGF-β信号通路在肝癌细胞系中的相互作用。方法 应用RT PCR法检测Oct4、Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路相关基因β-catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中的表达;使用siRNA 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4和TCF3的表达,实时荧光定量RT PCR法检测Wnt10b、β-catenin、 TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4等基因的表达变化。结果 Oct4和β catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中同时表达; siRNA-Oct4 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4后,Oct4表达明显下调,β-catenin、Wnt10b随之下调达40%~50%左右,而TCF3表达升高到3倍左右;同时ELF、Smad3和 Smad4均下降到原来的1%以下;而siRNA-TCF3 沉默TCF3后,Oct4的表达也升高2~3倍;ELF升高亦达2~3倍,Smad3和 Smad4也略有升高。结论 Oct4和β-catenin、Wnt10b、TCF3及 ELF、Smad3和 Smad4在肝癌组织及细胞系中同时表达提示彼此之间有相互作用。RNAi实验证明Oct4对Wnt/β-catenin及TGF-β信号通路的成员有调控作用;Oct4 与TCF3之间的负反馈作用值得深入研究。     

溶酶体组织蛋白酶L对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭的作用

目的 探讨溶酶体组织蛋白酶L（Cathepsin L）是否通过上皮-间充质转化（EMT）影响卵巢癌细胞的侵袭及迁移能力。方法 荧光定量PCR法检测人卵巢癌细胞ES-2、SKOV3、OV1以及OV2中CathepsinL的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达最高的卵巢癌细胞SKOV3以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,Western blot和定量PCR法验证shRNA的干扰效率;划痕实验及Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、p-AKT的变化。结果 四株卵巢癌细胞中,SKOV3的Cathepsin L表达水平最高（以此为参照）,而ES-2、OV1以及OV2细胞的表达水平分别为0.72±0.04、0.34±0.03和0.55±0.05。Cathepsin L-shRNA转染SKOV3细胞后,SKOV3/shRNA中的Cathepsin L的表达水平较空白组和对照组显著下降;划痕12 h和24 h后, SKOV3/shRNA组的细胞迁移能力明显受到抑制;SKOV3、SKOV3/Con和SKOV3/shRNA组的穿膜细胞数分别为（93.67±8.62）、（90.33±12.22）、（35.67±4.73）,与对照组相比,SKOV3/shRNA组细胞侵袭能力受到显著抑制（P<0.01）;Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、p-AKT表达较对照组显著下降。结论 Cathepsin L可以促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭;其机制可能与调节EMT的上游信号分子Snail、p-AKT有关。提示Cathepsin L在卵巢癌的发生发展中起重要作用。     

miR-581调控FOXO1对卵巢癌SKOV3细胞自噬的影响

目的 探讨miR-581对卵巢癌SKOV3细胞自噬的影响及作用机制。方法 将miR-581 mimics和miR-581 NC转染到卵巢癌SKOV3细胞中,实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测转染效率;转染成功后,Western blot检测转染后卵巢癌SKOV3细胞中自噬相关蛋白的表达水平;TargetScanHuman数据库预测miR-581靶基因,Western blot验证miR-581与靶基因的作用。结果 过表达miR-581后可显著抑制自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达（P<0.01）;miR-581可负向调控FOXO1的表达（P<0.01）;FOXO1促进卵巢癌SKOV3细胞自噬（P<0.05）。结论 miR-581通过调控FOXO1的表达影响卵巢癌SKOV3细胞自噬。     

Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌细胞VEGF表达的调控作用

背景与目的:血管新生是导致大肠癌向其他脏器组织侵袭、转移的重要原因。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的促血管生成因子之一,但其过表达机制尚不清楚。Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌发生中存在过度激活,故与大肠癌的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌VEGF表达的调控作用,揭示大肠癌血管新生的部分机制。方法:分别采用GSK-3β抑制剂SB-216763激活人肠癌HCT-116细胞Wnt/β-catenin信号通路和β-catenin/tcf抑制剂FH-535抑制Wnt/β-catenin信号通路,蛋白质印迹法(Western blot)法检测β-catenin蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF表达。结果:GSK-3β抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞后,β-catenin在细胞总蛋白、细胞质蛋白和核蛋白中的表达均明显升高,12 h达到最大值,分别是对照组的4.3、3.6和3.7倍(P<0.01);同时,激活Wnt/β-catenin信号通路能够上调人肠癌HCT-116细胞VEGF表达水平,并在24 h时差异最显著,是对照组的1.85倍(P<0.01);而抑制Wnt/β-catenin信号通路能够显著下调VEGF表达,是对照组的0.68倍(P<0.01)。结论:Wnt/β-catenin信号通路能够调控人肠癌细胞VEGF表达。