5-氨基乙酰丙酸介导的光动力对人脑胶质瘤细胞的治疗作用

目的探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)介导的光动力学对人脑胶质瘤U251细胞的治疗作用方法使用荧光显微镜及共聚焦显微镜检测5-ALA所产生的光敏剂原卟啉(PpIX)在U251细胞中的定位。将5-ALA加入U251细胞中,随之以635nm的激光辐射,使用MTT法测定细胞生存率结果5-ALA与U251细胞共培养可以产生光敏剂原卟啉。原卟啉弥散地分布在U251细胞的胞浆中,胞核区未见分布。5-ALA介导的光动力对人脑胶质瘤U251细胞的杀伤作用随着5-ALA与U251细胞孵育时间的延长及5-ALA浓度的增加而增加,但在孵育6h、5-ALA浓度为2mmol/L时达饱和。而单用5-ALA或单纯激光辐射,对U251细胞无明显的杀伤作用。结论5-ALA介导的光动力治疗是很有前途的人脑胶质瘤治疗方法,5-ALA与U251细胞孵育的最佳时间为6h,最佳5-ALA药物浓度为2mmol/L     

盐酸氨基酮戊酸介导的光动力疗法增高U251细胞蛋白酶体的表达

目的探讨盐酸氨基酮戊酸(5-ALA)做为光敏剂的光动力疗法(PDT)对人胶质瘤细胞株U251细胞的杀伤效应及其对U251细胞蛋白酶体亚基低分子量多肽(LMP)2、7表达的影响。方法培养U251细胞,利用细胞计数药盒确定的5-ALA-PDT对U251细胞半抑制剂量为试验条件。分别收集5-ALA-PDT处理后3、6、9、12、15、18、21和24 h及对照组U251细胞LMP2和LMP7,RNA与蛋白质,分别行实时PCR、Western Blot分析。结果强度为20 mw/cm2激光照1、2、3和4 min后U251细胞抑制率分别为11.18%、19.6%、48.62%、66.21%。以强度为20 mw/cm2照射3 min为条件,照射后3、6、9、12、15、18、21和24 h,U251细胞蛋白酶体亚基LMP2、LMP7蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01)。结论以5-ALA为光敏剂的PDT能有效抑制体外培养U251细胞生长,并促进蛋白酶体的表达。     

5-ALA介导的光动力治疗鼠C6胶质瘤的实验研究

目的研究以5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）作为光敏剂的光动力治疗（PDT）对大鼠C6胶质瘤移植瘤的效果。方法通过皮下接种C6胶质瘤细胞建立大鼠移植胶质瘤模型。将24只荷瘤大鼠平均随机分成3组：A组按剂量20mg／kg在瘤内注射5-ALA，2h后在肿瘤局部行激光照射；B组行单纯激光照射，不予任何光敏剂；C组为荷瘤空白对照组，不给任何治疗。PDT后不同时间，测量肿瘤体积并观察其组织学变化。结果治疗后第4、8和14天A组肿瘤体积与B、C组相比明显缩小（P〈0．05），组织学上可见大量肿瘤细胞坏死。结论5-ALA作为光敏剂介导的PDT能使大鼠C6胶质瘤移植瘤组织坏死，生长速度明显减慢，有望成为胶质瘤治疗的新途径。     

5-氨基酮戊酸荧光判定恶性胶质瘤边界的实验研究

目的建立5-氨基酮戊酸(5-ALA)荧光判定恶性胶质瘤边界的实验模型。方法采集存活率为99%的U87Δ胶质瘤细胞,采用立体定向仪将U87Δ胶质瘤细胞移植到裸鼠脑部。饲养观察3周,在荷瘤鼠腹腔内注射5-ALA4h后开颅,分别在白光及荧光系统下观察肿瘤与正常脑组织,在肿瘤最大冠状面不同荧光强度处取活检行苏木精-伊红染色。结果实验鼠成瘤率为100%。白光下肿瘤呈淡黄色,荧光系统下肿瘤整体边界呈现荧光。肿瘤冠状面边界亦显示荧光,正常脑组织无荧光。染色结果显示:新生物为恶性胶质瘤,而荧光处为胶质瘤边界。结论 5-ALA荧光引导下的胶质瘤模型能可靠区分恶性胶质瘤与正常脑组织边界,为此类研究提供较理想的实验基础。     

5-ALA的光动力学治疗在脑胶质瘤中的应用进展

人脑胶质瘤是一种侵袭性的恶性肿瘤,其边界不清,手术难以全切,术后的放、化疗效果差,不尽人意。5-氨基乙酰丙酸（5-aminolevulimic acid,5-ALA）是人体合成卟啉和血红素的前体。外源性的5-ALA诱导产生的血红素合成前体原卟啉IX,能够选择性地聚集于人脑胶质瘤细胞内,在一定波长的光辐射下,发生荧光反应和光促氧化反应。利用这种荧光反应可以进行术中定位脑胶质瘤边界,辅助切除肿瘤残留组织并保护正常脑组织;并且进一步通过光促氧化反应产生活性氧物质杀伤肿瘤组织。近来大量临床研究表明,光动力学定位（Photodynamic diagnosis,PDD）及治疗（Photodynamic therapy,PDT）能够明显减少肿瘤复发的机会并延长患者生存时间。因此我们将就5-ALA在脑胶质瘤中的应用作一综述。     

5-氨基乙酰丙酸荧光引导显微手术切除人脑胶质瘤

目的探讨临床应用荧光物质引导的显微手术切除人脑胶质瘤的要点,评估该技术的安全性及疗效。方法2006年4月至2006年10月术前经CT或MRI证实胶质瘤的11例病人接受了荧光引导胶质瘤手术。男5例,女6例。年龄35～66岁,平均48．5岁。术前应用5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）,术中根据所提供的荧光影像判定肿瘤边界并切除肿瘤。根据不同荧光强度取材进行HE染色以检测手术切除情况。术后行MRI检查以确定肿瘤的切除情况。结果胶质瘤在荧光光源的照射下被激发出红色荧光,而正常脑组织不发光。荧光强度高的肿瘤组织HE染色显示含有大量的肿瘤细胞,并可见血管内皮细胞增生,荧光强度较弱或者没有荧光的区域仅有少量的肿瘤细胞和血管内皮细胞增生。病人术后的MRI检查证实肿瘤切除比较完全。结论该方法能够有效的切除胶质瘤,并为手术者提供客观的肿瘤边界,提高了手术切除率。对该方法的确切评估尚需对手术病人进行长期随访。     

5-氨基乙酰丙酸荧光导航技术在恶性胶质瘤手术治疗中的应用

由于胶质瘤浸润性生长,术中很难识别瘤腔边缘残留的肿瘤组织,故全切困难,预后不佳。探索新的、有效和安全的治疗方法一直是人们关注的焦点。5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)是体内血红素生物合成途径的代谢产物。近来发现5-ALA可以被恶性胶质瘤细胞摄取并转化成发强荧光的卟啉,这种荧光可以用来辅助切除残留肿瘤组织,具有较大的实用价值。由于5-ALA荧光引导具有较好的有效性和安全性,在国外已被用于成人恶性胶质瘤(WHOⅢ和Ⅳ级)的手术治疗。为了达到最佳效果,需要对5-ALA荧光引导技术的原理、实施方法、设备要求、注意事项、可能遇到的困难和风险以及相应防范措施有一全面的了解。     

自噬在ALA-PDT诱导C6胶质瘤细胞死亡中的作用机制

目的 探讨自噬在光敏剂5-氨基乙酰丙酸(aminolaevulinic acid,ALA)介导的光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)C6胶质瘤细胞死亡中作用机制.方法 ALA-PDT处理后不同时间,用自噬特异染料MDC和免疫荧光法观察自噬水平变化,Western blotting检测自噬相关蛋白cathepsin B的表达水平.结果 MDC染色和免疫荧光观察可见ALA-PDT后C6胶质瘤细胞内有大量含点状荧光颗粒的自噬泡和自噬体标志物LC3绿色荧光蛋白,Western-blot示自噬相关蛋白cathepsin B表达水平明显升高,其白噬水平随AIA-PDT后时间而逐渐增强.结论 ALA-PDT可诱导C6胶质瘤细胞发生自噬,其诱导胶质瘤细胞发生自噬的机制可能与溶酶体酶cathepsin B大量释放有关.     

兴奋性氨基酸受体拮抗剂D-α-氨基磷酸基戊酸对周围神经再生作用的研究

目的　研究兴奋性氨基酸受体拮抗剂D α 氨基磷酸基戊酸 (D AP5)对促进周围神经损伤再生的作用。方法　切断大鼠左侧坐骨神经约 6mm ,形成缺损 ,用硅胶管套接神经断端 ,建立坐骨神经损伤再生室模型。再生室内注入无菌生理盐水 10 μl。给各组大鼠分别蛛网膜下腔注射浓度为 2 μmol/L(小剂量组 )、2 0μmol/L(中剂量组 )、2 0 0 μmol/L(大剂量组 )的D PA5 10 μl,对照组为无菌生理盐水 10 μl。 12周后取再生神经行电生理、光镜、电镜及图像分析检测。结果　大剂量组大鼠的神经传导速度显著增快 ,再生神经纤维直径较大 ,神经纤维数明显增多 ;与中、小剂量组及对照组比较差异均有极显著性 (均P <0 0 1)。结论　兴奋性氨基酸受体拮抗剂D AP5可以促进损伤神经再生 ,但其作用与浓度和剂量有关。     

不同条件下光动力治疗对C6胶质瘤细胞的作用

目的 分析不同条件下应用血卟啉衍生物(HpD)的光动力学疗法(PDT)对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用.方法 MIT法检测PDT后C6细胞的生存率:(1)不同HpD浓度组(0、2、5、10、20、30及40 mg/L)C6细胞PDT(628 nm、20 mW/cm2、照光5 min)后的生存率;(2)C6细胞分别与不同浓度HpD(0、5、10、20、30及40 mg/L)孵育不同时间(0.5、1、3、6、12及24 h)行PDT(628nm,20 mW/cm2)后的生存率;(3)不同照光强度下(10、20及30 mW/cm2)PDT后C6细胞的生存率.结果 不同条件下PDT治疗对C6细胞的作用不同:(1)当HpD浓度低(2mg/L)、HpD与细胞孵育时间短(<3 h)时不能对细胞产生抑制或杀伤效应;(2)PDT后C6细胞的生存率随着HpD浓度的升高而降低,随着细胞与HpD孵育时间的延长而降低(>12 h后各组间差异无统计学意义),随着照光强度的增强而下降(20与30 mW/cm2之间差异无统计学意义).结论 HpD介导的PDT对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的作用与HpD浓度、HpD与细胞孵育时间及照光强度等有关,在不同条件下可表现为促进肿瘤细胞生长或杀伤肿瘤细胞的作用.     

光动力疗法与免疫疗法在肿瘤治疗中的联合应用

近年来．光动力疗法（photodynamic therapy．PDT）在胶质瘤治疗中日渐得到重视．并且随着对中枢神经系统和胶质瘤免疫学特性研究的深入．发现中枢神经系统并非以前认为的“免疫特赦器官”．免疫疗法大有可为。在研究PDT中人们发现，PDT治疗肿瘤时所引发的免疫反应对于控制肿瘤的复发起着至关重要的作用．而这种免疫反应机制复杂，几乎涉及免疫系统的各个方面。因此每一个方面都可能成为一个切人点．可以设计用相应的免疫疗法针对性地与PDT相结合．从而增强PDT激发的抗肿瘤免疫作用．减弱或抑制其引起的免疫抑制反应。     

ARK5和MMP-2在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨腺苷酸活化蛋白激酶5(ARK5)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在人脑胶质瘤中的表达,并探讨两者的相关性及其临床意义.方法 收集具有明确病理分级的67例新鲜人脑胶质瘤标本(实验组,A组),其中低级别级胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ级)28例(A1组,n=28),高级别胶质瘤(Ⅲ～Ⅳ级)39例(A2,n=39),并收集32例脑外伤行内减压去除的脑组织标本作为对照组(B,n=32).分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot测定标本中ARK5和MMP-2的mRNA及蛋白表达水平,研究ARK5和MMP-2在胶质瘤中的表达水平及与病理分级的关系.结果 (1)胶质瘤组ARK5和MMP-2 mRNA及蛋白表达水平较对照组显著上调(P＜0.05).(2)A2组ARK5和MMP-2 mRNA及蛋白表达水平较A1组显著上调(P＜0.05).(3)MMP-2在胶质瘤中的表达与ARK5呈显著正相关(r=0.782,P＜0.01).结论 ARK5和MMP-2在人脑胶质瘤中呈高表达,且它们的表达与胶质瘤的病理分级相关,可能与人脑胶质瘤的增殖及侵袭有关.     

电压-门控钠离子通道亚型nNav1.5在人脑胶质瘤中的表达

目的 研究电压-门控钠离子通道（VGSCs）亚型nNav1.5在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤级别的关系.方法 用免疫荧光技术检测nNav1.5蛋白在胶质瘤U251细胞株中的表达定位;按2007年WHO胶质瘤分级,将胶质瘤标本分为低级别组（WHO Ⅰ-Ⅱ级,29例）和高级别组（WHOⅢ-Ⅳ级,37例）,另外13例对照组织标本来自颅脑损伤内减压手术中切除的脑挫裂伤组织.采用RT-PCR法、免疫组化法和Western Blot法分别检测nNav1.5 mRNA和蛋白在胶质瘤组和对照组的表达情况.结果 nNav1.5主要在胶质瘤细胞核内表达,nNav1.5 mRNA和蛋白在胶质瘤组织和对照组织中均有表达,但其在胶质瘤中表达水平均显著升高（P＜0.05）,在高级别胶质瘤组的表达量亦高于低级别胶质瘤组,各组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 nNav1.5在人脑胶质瘤中表达上调并与肿瘤的恶性程度呈正相关,nNav1.5有可能是胶质瘤恶性增殖的一个调控因子,有望成为胶质瘤的一个新标记物和治疗的新靶点.     

miR-1224-5p在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖的影响

目的探讨miR-1224-5p在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞增殖的影响。方法分析中国脑胶质瘤基因组计划(CGGA)数据库中miR-1224-5p在不同级别的胶质瘤组织中的表达数据,并采用原位杂交技术进行组织验证,运用CGGA数据分析miR-1224-5p的表达水平与胶质母细胞瘤患者临床预后的相关性。采用miR-1229-5p寡聚核苷酸转染胶质瘤U251及U87细胞,通过CCK8实验观察上调miR-1224-5p表达后对胶质瘤细胞增殖的影响。结果 miR-1224-5p在人脑胶质瘤组织中的表达随着病理分级的升高而降低。胶质母细胞瘤患者中低表达miR-1224-5p提示预后不良。上调miR-1224-5p表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖。结论 miR-1224-5p与胶质瘤的级别和临床预后相关,miR-1224-5p可以抑制胶质瘤细胞的增殖能力。     

生酮饮食疗法在脑胶质瘤治疗中的研究现状

脑胶质瘤是最常见的颅内肿瘤,约占颅内恶性脑肿瘤的80％,恶性程度高、侵袭性强,其中以胶质母细胞瘤（ glioblastoma multiform, GBM）的恶性程度最高。近年来,尽管手术治疗、放射治疗、化学治疗及靶向治疗等均在不断进展,治疗方案采取综合和个体化治疗措施,但治疗效果和预后仍不佳,     

血清外泌体miRNA-30a-5p在人脑胶质瘤诊断及预后评价中的作用

目的探讨胶质瘤病人血清外泌体miRNA-30a-5p的表达水平,及其在胶质瘤诊断及预后评估中的价值。方法选取2014年1月至2015年12月收治的胶质瘤60例为研究对象,另选取健康体检者40例为对照。RT-PCR检测血清外泌体miRNA-30a-5p表达水平。用受试者工作特性(ROC)曲线分析miRNA-30a-5p诊断胶质瘤的价值。用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用log-rank检验;多因素Cox比例风险回归模型分析预后危险因素。结果胶质瘤病人血清外泌体miRNA-30a-5p表达水平明显高于健康人(P<0.001)。ROC曲线分析显示,血清外泌体miRNA-30a-5p诊断胶质瘤的曲线下面积为0.901(95%CI0.812~0.986),最佳截断值为0.601,此时miRNA-30a-5p诊断胶质瘤的灵敏度和特异度分别为78.05%和93.55%。术后60例均得到有效随访,随访时间平均(28.39±3.25)个月。Kaplan-Meier分析结果显示,血清外泌体miRNA-30a-5p低表达病人总体生存时间高于高表达病人(P<0.001)。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示血清外泌体miRNA-30a-5p高表达是胶质瘤病人不良预后的独立影响因素(P<0.05)。结论血清外泌体miRNA-30a-5p对胶质瘤的诊断和预后评价均有一定价值。     

AMPA受体及其拮抗剂在癫痫持续状态中的作用

癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)通常定义为长时间持续的癫痫发作或反复发作且发作间期未完全恢复。SE是一种急症,通常与严重的残疾、较高的发病率和死亡率相关。尽管受临床的影响,但从自限性癫痫发作过渡到持续的、难治性的癫痫发作的潜在机制仍尚不完全明确。在SE中,约40%的患者对抗癫痫药物(AEDs)(一线治疗)无效;因此,需要更有效的药物。在这篇综述中,我们着重于目前对于α-氨基-3-羟基-5-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid,AMPA)受体在SE中作用的了解,以及其拮抗剂的临床前功效和当前发表的涉及具有这种作用机制的药物的临床研究。我们对关于AMPA受体、AMPA受体拮抗剂和SE的实验性和临床研究文章进行了全面的文献检索。近年来,AMPA受体在SE发作期间和发作后的作用变得逐渐清晰,现在已被广泛接受的是其早期变化发生在初始阶段,这可能有导致SE的维持及其对治疗的抵抗性。AMPA受体拮抗剂已在几种SE动物模型中被证实可终止发作,这些研究支持着抑制AMPA受体的治疗潜力。迄今为止,人体研究的相关数据很有限,但前景广阔,它们支持在SE患者中使用AMPA受体拮抗剂。当二线药物首次尝试失败后,AMPA受体拮抗剂可能成为确定的SE患者的新治疗选择,特别是在苯二氮卓作为二线治疗失败后,甚至效果可能更好。     

5-羟甲基胞嘧啶在神经发育和神经退行性疾病中的作用

DNA 甲基化是表观遗传学主要的修饰模式之一。5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）作为一种DNA 去甲基化产物,已成为新的表观遗传标志。由于5hmC 在中枢神经系统中分布较高并且在神经发育过 程中不断变化,因此,5hmC 对于正常神经发育和神经功能至关重要。近年来的研究发现,老化或环境 应激导致的5hmC 失调在神经退行性疾病发生、发展中起重要作用。现就近年来5hmC 在神经发育以及 神经退行性疾病发生、发展中的作用进行综述。     

PELI3、miR-744-5p在不同病理分级脑胶质瘤中的表达水平及临床意义

目的 探讨不同病理分级脑胶质瘤中Pellino E3泛素蛋白连接酶家族成员3(PELI3)、微小RNA-744-5p(miR-744-5p)表达水平及意义。方法 收集2016年10月至2019年10月确诊的100例脑胶质瘤患者(脑胶质瘤组)的组织标本及其临床病理资料,根据不同病理分级将脑胶质瘤组分为低级别(Ⅰ～Ⅱ级)亚组46例和高级别(Ⅲ～Ⅳ级)亚组54例;同时选取90例急性颅脑损伤患者颅内减压术切除的脑组织为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织miR-744-5p表达和免疫组化学法检测PELI3蛋白表达;采用多因素Cox回归分析脑胶质瘤患者复发的影响因素。结果脑胶质瘤组PELI3蛋白阳性率显著高于对照组,miR-744-5p水平显著低于对照组(均P<0.000)。高级别组PELI3蛋白阳性率显著高于低级别组,miR-744-5p水平显著低于低级别组(均P<0.000)。PELI3、miR-744-5p表达水平与年龄、性别、肿瘤直径、KPS评分、肿瘤部位均无相关性(均P>0.05)。miR-744-5p低表达患者复发率显著高于高表达患者(P<...