养阴活血解毒方对载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化小鼠调节性T细胞的影响

目的探讨养阴活血解毒方(YHF)对Apo E基因敲除(Apo E~(-/-))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变及其外周血调节性T细胞(regulatory T-cell,Treg)的影响。方法 Apo E~(-/-)小鼠随机分为正常组、模型组、YHF高、低剂量组(36,18 mg·kg~(-1))和辛伐他汀组(33 mg·kg~(-1)),除正常组喂食普通饲料之外,其余各组均高脂饮食造模并灌胃给药20周后收集血清及抗凝血,试剂盒检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);油红O法染色法观察主动脉血管内膜脂质聚积情况;Elisa检测血清IL-10、TGF-β、IL-6、IL-12p70含量;流式细胞术检测外周血中Treg细胞比例变化;用蛋白免疫印迹(Western blot)法分析主动脉组织叉头状螺旋转录因子3(forkhead box protein3,Foxp3)蛋白的表达。结果与模型组相比,YHF低剂量组TG水平降低、HDL-C水平升高,主动脉斑块面积减少,血清IL-10含量升高,IL-6、IL-12p70含量降低,Treg细胞比例升高(P0.05),Foxp3蛋白表达水平显著上调(P0.01);YHF高剂量组TC、TG、LDL-C水平较模型组均显著降低(P0.05,P0.01),HDL-C水平提高,主动脉斑块面积减少,血清IL-10、TGF-β含量升高,IL-6、IL-12p70含量降低,Treg细胞比例升高(P0.05),Foxp3蛋白表达水平显著上调(P0.01)。结论 YHF可以改善高脂饮食诱导的Apo E~(-/-)小鼠脂质代谢异常、减少主动脉粥样斑块面积的同时能够上调Treg细胞的比例以及相关细胞因子(IL-10、TGF-β)的分泌。     

补阳还五汤稳定ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块的作用机制

目的:探究补阳还五汤(BYHWT)对高脂饮食的载脂蛋白E敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)易损斑块的影响及其相关的作用机制。方法:8周龄ApoE~(-/-)小鼠高脂饮食喂养12周复制AS易损斑块模型,以C57/BL-6J小鼠作为正常组给于正常饮食饮水。随机取4只小鼠中头臂动脉与主动脉弓制作病理切片,通过计算斑块面积及其易损指数判定模型复制成功。72只ApoE~(-/-)小鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、自噬诱导剂组及BYHWT低、中、高剂量组,BYHWT低、中、高剂量组分别给予5,10,20 g·kg~(-1)BYHWT灌胃8周,自噬诱导剂组给予雷帕霉素4 mg·kg~(-1)灌胃8周,正常组继续给于正常饮食饮水。8周后,小鼠处死,游离胸主动脉到腹主动脉末端,制备血管组织标本用于斑块的易损指数测定,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分析血管组织中自噬体形成。结果:ApoE~(-/-)小鼠成功诱导AS易损斑块模型,模型组AS斑块形成明显,斑块易损指数显著大于正常组(P0.01);补阳还五汤各剂量组明显缩小斑块面积,易损指数与模型组比较有不同程度的降低(P0.05)。模型组斑块血管组织中基质金属蛋白酶(MMP)-1,2,3mRNA水平明显高于正常组;与模型组比较,补阳还五汤、雷帕霉素组的MMP-1,2,3 mRNA的水平明显降低(P0.05,P0.01);与正常组比较,模型组的微管轻链蛋白3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)含量显著降低,高、中、低剂量的补阳还五汤及其雷帕霉素组可以明显升高LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ含量(P0.05)。结论:补阳还五汤具有缩小AS斑块面积、降低血管中的基质金属蛋白酶的表达,调节斑块内巨噬细胞自噬从而降低斑块的易损指数,提高AS斑块的稳定性的作用。     

雷帕霉素对动脉粥样硬化小鼠斑块面积影响及机制探讨

[目的]探讨雷帕霉素对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块面积影响及机制。[方法]选取30只雄性ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠为研究对象,将其随机分为模型组、雷帕霉素组、阳性药物(瑞伐他汀)组。高脂饮食12周后灌胃干预4周。处死后取主动脉斑块组织油红O和苏木精-伊红(HE)染色评估斑块脂质情况、斑块面积;采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定外周血中促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(INF-γ)、白介素-6(IL-6)和转化因子β(TGF-β)、白介素-10(IL-10)表达情况。[结果]雷帕霉素组斑块面积明显小于模型组,差异有统计学意义(P0.05);在炎症因子方面,雷帕霉素组能有效降低外周血TNF-α、INF-γ、IL-6表达,增加IL-10、TGF-β表达,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]雷帕霉素可通过增加抗炎因子含量、降低促炎因子含量来调控炎症反应,进而抑制斑块发展,降低血管狭窄程度。     

犀角地黄汤对免疫性血小板减少症模型大鼠外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞及Th17细胞的影响

目的探讨犀角地黄汤对免疫性血小板减少症(ITP)模型大鼠外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞(Treg)、Th17细胞及相关细胞因子的影响。方法将48只大鼠随机分为正常组、模型组、醋酸泼尼松组及犀角地黄汤低、中、高剂量组,每组8只。除正常组外,其余组均采用腹腔注射兔抗大鼠血小板血清(APS)建立ITP模型,于造模开始后第7天开始,各给药组灌胃给予相应剂量药物,连续14 d。采用血细胞计数仪检测造模前、灌胃前、灌胃结束后各组大鼠外周血中血小板数目;灌胃结束后,采用流式细胞术检测各组大鼠Treg、Th17细胞比例,采用实时荧光定量PCR法检测淋巴细胞Foxp3 mRNA相对表达量,采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-17(IL-17)、IL-35水平。结果灌胃结束后,与模型组比较,犀角地黄汤各剂量组大鼠血小板数目明显上升(P均0.05),外周血淋巴细胞中Treg所占比例、Foxp3 mRNA相对表达量及IL-35水平均明显上升(P均0.05),而Th17细胞所占比例及IL-17水平均明显下降(P均0.05),且具有剂量依赖性;犀角地黄汤高剂量组各指标与醋酸泼尼松组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论犀角地黄汤可能通过上调ITP大鼠外周血中Treg细胞表达,下调Th17细胞表达,维持Treg/Th17平衡,进而调节相关细胞因子IL-17、IL-35的表达发挥抗血小板减少作用。     

人参皂甙Rh2对大鼠主动脉TIMP-1、VEGF表达的影响

目的探讨人参皂甙Rh2对大鼠主动脉基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法将40只6周龄雄性普通级大鼠随机分为正常组、阳性组、雷帕霉素组、人参皂甙组,每组10只。正常组给予正常饮食喂养13周,其余组给予高脂饮食喂养13周,雷帕霉素组同时给予雷帕霉素1.25 mg/(kg·d)灌胃,人参皂甙组同时给予人参皂甙Rh2 400 mg/(kg·d)灌胃,均1次/d。13周后,处死大鼠留取血标本,检测血脂及白细胞介素-6(IL-6)水平;留取主动脉标本,Western Blot法检测主动脉组织中TIMP-1、VEGF表达情况。结果阳性组、雷帕霉素组、人参皂甙组血TC、TG、LDL-C、IL-6水平和主动脉组织中TIMP-1、VEGF蛋白表达量均明显高于正常组(P均<0.05);雷帕霉素组、人参皂甙组血脂指标水平与阳性组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),血IL-6水平和主动脉组织中TIMP-1、VEGF蛋白表达量均明显低于阳性组(P均<0.05),雷帕霉素组各指标与人参皂甙组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论人参皂甙Rh2可以通过降低大鼠血清IL-6水平和抑制主动脉TIMP-1、VEGF的表达,从而起到抗动脉粥样硬化的作用。     

养阴活血解毒方对载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化小鼠调节性T细胞的影响

目的 探讨养阴活血解毒方(YHF)对ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)病变及其外周血调节性T细胞(regulatory T-cell, Treg)的影响。方法 ApoE-/-小鼠随机分为正常组、模型组、YHF低剂量组（18 mg·kg-1）、YHF高剂量组（36 mg·kg-1）、辛伐他汀阳性对照组（33 mg·kg-1）,除正常组喂食普通饲料,其余各组均高脂饮食造模并灌胃给药20周后收集血清及抗凝血,试剂盒检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);油红O法染色法观察主动脉血管内膜脂质聚积情况;Elisa检测血清IL-10、TGF-β、IL-6、IL-12p70含量;流式细胞术检测外周血中Treg细胞比例变化;用蛋白免疫印迹(Western blot)法分析主动脉组织叉头状螺旋转录因子3(forkhead box protein3, Foxp3)蛋白的表达。结果 与模型组相比,YHF低剂量组TG水平降低、HDL-C水平升高,主动脉斑块面积减少,血清IL10含量升高,IL-6、IL-12p70含量降低,Treg细胞比例升高(Plt;0.05), Foxp3蛋白表达水平显著上调(Plt;0.01);YHF高剂量组TC、TG、LDL-C水平较模型组均显著降低(Plt;0.05,Plt;0.01),HDL-C水平提高,主动脉斑块面积减少,血清IL-10、TGF-β含量升高,IL-6、IL-12p70含量降低,Treg细胞比例升高(Plt;0.05),Foxp3蛋白表达水平显著上调(Plt;0.01)。结论 YHF可以改善高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠脂质代谢异常、减少主动脉粥样斑块面积的同时能够上调Treg细胞的比例以及相关细胞因子(IL-10、TGF-β)的分泌。     

益气补肾方对自然流产小鼠Th17/Treg细胞及相关细胞因子的影响

目的:观察益气补肾方对自然流产模型小鼠外周血Th17/Treg及相关细胞因子的影响及其对妊娠结局的影响。方法:孕鼠随机分为正常妊娠模型组、自然流产模型组、环孢素组、中药高、中、低剂量组,每组6只。正常妊娠模型组和自然流产模型组给予生理盐水;环孢素组给予环孢素A;中药高、中、低剂量组分别给予48、24、12g/kg益气补肾方,连续2周,每天1次。给药结束后取血,检测外周血Th17、Treg细胞含量及Th17/Treg细胞比例,检测干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)、白介素-17(IL-17)、白介素-10(IL-10)含量。观察子宫胚胎数量并计算胚胎吸收率。结果:连续给药2周,中药各剂量组均能显著减少胎盘吸收率(P0.05),增加胎盘存活数量;中药各剂量自然流产模型小鼠Th17/Treg细胞百分率比值均显著降低,中药高、中剂量组Th17细胞比例显著降低(P0.05);中药低、中剂量组Treg细胞比例显著升高(P0.05);中药各剂量自然流产模型小鼠IL-17、IFN-γ含量均显著降低(P0.05);中药低剂量组IL-10含量显著升高(P0.05);中药中剂量组IL-4含量显著升高(P0.05)。结论:益气补肾方可能通过调节Th17及Treg细胞的表达水平,降低Th17/Treg比例,并调节相关细胞因子的表达水平,影响Th17/Treg平衡,诱导妊娠免疫耐受,促进胚胎发育,从而改善妊娠结局。     

清肺口服液对RSV感染小鼠Treg/Th17及IL-2和IL-17水平的影响

目的观察清肺口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠Treg/Th17细胞平衡的影响及对白介素-2(IL-2)和白介素-17(IL-17)表达的影响。方法将50只BABL/c小鼠按随机数字法分为空白组、模型组、清肺低剂量组(1.33 g/mL)、清肺高剂量组(4 g/mL)、利巴韦林组,每组10只。用RSV(Long株)滴鼻48 h后,经口灌胃分别给予相应药物及等量0.9%氯化钠注射液刺激,24 h后处死小鼠,立即取小鼠肺组织行病理分析,ELISA方法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-2、IL-17的含量,流式细胞术方法检测小鼠脾脏细胞中Treg、Th17细胞的表达含量。结果与空白组相比,模型组的Treg/Th17及IL-2的水平下降(P0.01),IL-17的水平升高(P0.01);与模型组相比,各给药组的Treg/Th17升高(P0.05),IL-2水平升高(P0.01),IL-17的水平下降(P0.01);与利巴韦林组相比,清肺组IL-2水平升高(P0.01),清肺高剂量组Treg/Th17升高(P0.05),IL-17的水平下降(P0.01),清肺低剂量组Treg/Th17下降(P0.01),IL-17的水平升高(P0.01)。结论清肺口服液可以调节Treg/TH17细胞的平衡,并上调RSV感染小鼠IL-2的表达水平及下调IL-17的水平,从而发挥其抗RSV的作用。     

重组水蛭素对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的影响及机制

目的探讨重组水蛭素对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的影响及机制。方法高脂饲喂7~8周龄Apo E-/-小鼠24只,按体重、窝别进行随机配对分组,分为药物组及模型组,每组12只,以12只高脂饲喂的7~8周龄C57BL/6J小鼠为正常对照组。药物组于10周龄起隔日给予重组水蛭素0.25 mg/kg腹腔注射,连续注射5周;模型组给予等量生理盐水注射;正常对照组不进行任何处理,均给予高脂饮食饲喂20周龄时处死。检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、E-选择素(E-selectin)、白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)水平;HE染色及形态计量学测定主动脉根部斑块面积/管腔面积及细胞外脂质面积/斑块面积;Western blot测定主动脉钙库操纵性钙通道信号分子,包括基质交感分子1(STIM1)、Orai1蛋白、瞬时受体电位通道1(TRPC1)变化。结果 20周龄时模型组小鼠主动脉血管壁脂质斑块形成。与正常对照组比较,模型组小鼠TC、TG、LDL-C明显升高(P0.01),血清炎症因子hs-CRP、IL-6、E-selectin、MMP-2水平亦明显升高(P0.01,P0.05);小鼠主动脉STIM1、Orai1及TRPC1蛋白表达增多(P0.01);与模型组比较,药物组小鼠斑块面积/管腔面积及细胞外脂质面积/斑块面积明显下降(P0.05,P0.01);血清TC、LDL-C、hs-CRP、E-selction、IL-6、MMP-2水平亦降低(P0.05,P0.01);主动脉根部STIM1、TRPC1、Orai1蛋白表达下调(P0.05,P0.01)。结论水蛭素能改善Apo E-/-小鼠的血脂、内皮功能,下调STIM1、Orai1、TRPC1的表达,并通过影响上述环节进而延缓动脉粥样硬化的发生与发展。     

补中益气汤对实验性结肠炎Treg细胞的影响

目的:观察补中益气汤对实验性结肠炎Treg细胞的影响。方法:将SPF级雄性SD大鼠48只随机分为空白对照组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组和美沙拉嗪组,每组各8只。采用5%葡聚糖硫酸钠溶液制备UC大鼠模型。造模结束后,补中益气汤组分别予低、中、高剂量补中益气汤灌胃,空白对照组和模型组给予生理盐水灌胃,美沙拉嗪组给予美沙拉嗪溶液灌胃,连续7天。观察大鼠结肠组织形态学改变,检测大鼠外周血清中的IL-10的含量、结肠组织中Foxp3基因表达水平及Foxp3蛋白的含量,并检测大鼠外周血、肠系膜淋巴结、结肠固有层和脾脏中Treg细胞的数量。结果:(1)与模型组比较,补中益气汤中、高剂量组和美沙拉嗪组均可上调大鼠血清中IL-10含量(P0.01);(2)与模型组比较,补中益气汤低、高剂量组和美沙拉嗪组结肠组织中Foxp3的基因表达均有所升高(P0.05),各给药组大鼠结肠中的Foxp3蛋白表达均明显增加(P0.01);(3)模型组大鼠结肠固有层中的Treg细胞数量低于各组,且与补中益气汤中剂量组和美沙拉嗪组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补中益气汤可以改善DSS诱导的大鼠结肠黏膜损伤,其作用机制可能与上调损伤部位Treg细胞数量,促使Treg分泌IL-10有关。     

浅议影响小儿头皮静脉穿刺的因素

头皮静脉穿刺是儿科护士必备的技术，其成功率的高低直接危机患儿的痛苦乃至生命，掌握这门过硬的技术，尽量做到一针见血，是儿科护士的天职，也是衡量合格护士的标准之一。本人从事儿科护理工作已多年，现将这方面的体会做一报告。     

对《伤寒论》与《温疫论》的再思考

通过分析伤寒与温疫的证治特点、《伤寒论》与《温疫论》的篇章结构、张仲景与吴又可所处的时代背景,以及现代医学对出血热与鼠疫的认识,梳理热病证治的发展历史与脉络。     

基于效应的针刺穴位组学研究思考

根据“穴位组学概念”的提出,针对针刺机理进行深入研究。目的在于揭示针刺的生物学基础,阐明针刺的科学性,并对相关针刺处方进行优化,围绕临床针刺治疗手段中的关键技术进行标准化与规范化研究,实现针刺科学机理转化为实际应用,从而更好的服务于临床。     

中药蛇床子的研究进展

概述近年来有关蛇床子的化学成分、药理作用和临床应用和研究进展。     

基于《伤寒论》引发古代伤寒学派思考

《伤寒论》这一中医经典著作,指导临床,疗效显著,活人无数,尤其是对外感热病的发展影响颇深.伤寒学派是以研究或阐述张仲景《伤寒论》辨证论治及理法方药为中心的医学学术群体,该学派学术璀璨,连绵千年.现就以古代此派的形成、发展、争鸣3个阶段进行初步探析,认为其形成于晋唐,发展于宋元,争鸣于明清.     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之二)

从中华人民共和国建立到文化大革命爆发的近20年间,是新时期仲景学说研究队伍的形成———发展期。在这一时期,对《伤寒论》原著的注释和校正工作,揭开了新中国教材编写的序幕;对《伤寒论》中一些有代表性问题或关键性字词的考订,是一个特点;对《伤寒杂病论》方法论的研究,也是这一时期出现的新特点。此外,这一时期,对六经的研究逐渐深入;对方证的研究仍是热门话题;对伤寒方中用药规律的研究出现热潮;对张仲景治疗方法原理的研究开始活跃;比较性研究热度不减;专题性研究渐成趋势。     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之一)

近百年来,公开发表的研究《伤寒论》的学术论文约3万篇,内容涉及张仲景生平事迹、《伤寒论》版本传承、《伤寒论》学术思想和临床应用研究等多个方面。民国时期是近代仲景学术研究的萌芽——发动期,这一时期的文章具有以下时代特点:①期刊和作者群有明显的地域和社团性;②体现了中西医结合的研究方向;③研究空间不断扩大;④学术争鸣空前活跃。     

艾灸足三里对胃黏膜病变的作用机制研究

艾灸足三里在脾胃病的临床疗效肯定,其机制研究也随着现代医学的发展不断完善。大量研究证明,艾灸足三里促进胃黏膜修复的信号传导是通过神经实现的,其作用机制是系统而复杂的,既可以直接调节胃肠内分泌激素的水平,也可以作用于胃黏膜损伤的信号传导途径上。因此,艾灸足三里对于各种原因引起的胃黏膜病变及病变的各个阶段都有一定作用,且作用机制不尽相同。据现有研究,对未来艾灸足三里的机制研究进行展望。     

"软系"疗法的中医探讨

从中医角度探讨“软系”疗法的科学性,探求“软系”疗法疗效显著的原因。     

探讨肝郁的影响

社会各方面压力的增加会引起人们的情志变化，本文利用中医的基本观点和肝的特性，探讨肝气郁结所导致的多种脏器疾病发生的机理，详细探讨肝郁的各种影响提出治疗要兼顾情志。