日本血吸虫虫卵破坏小鼠脾脏结构的作用

目的观察日本血吸虫虫卵对脾脏结构的病理影响。方法 C57BL/6小鼠分别经尾静脉注射日本血吸虫虫卵或虫卵可溶性抗原,经剖腹手术后向小鼠脾脏注射虫卵,4周后剖杀小鼠分离脾脏,石蜡切片苏木素伊红染色观察脾脏结构。以单性和双性尾蚴感染小鼠,9周后剖杀比较组间脾脏质量,石蜡切片观察各组小鼠脾脏结构。结果尾静脉注射虫卵小鼠脾脏淋巴滤泡数目减少,边缘区模糊难辨。手术将虫卵注射入小鼠脾脏4周后,虫卵注射部位淋巴滤泡萎缩甚至消失。单性尾蚴感染小鼠脾脏质量（0.15±0.01）g,显著低于双性尾蚴感染组（0.41±0.03）g（P〈0.01）。苏木素伊红染色脾脏切片显示单性尾蚴感染组小鼠脾脏淋巴滤泡未被破坏,而双性尾蚴感染组脾脏淋巴滤泡消失。结论日本血吸虫虫卵对C57BL/6小鼠脾脏结构有破坏作用。     

性别因素对CC57BL/6小鼠日本血吸虫感染所致肝脏病理及抗体免疫的影响

目的探讨性别因素对日本血吸虫感染所致C57BL/6小鼠肝脏病理及抗体免疫的影响。方法雌、雄C57BL/6小鼠分别感染日本血吸虫8周,应用HE染色、天狼星红染色观察小鼠肝脏病理变化。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测雌、雄C57BL/6小鼠血清抗可溶性成虫抗原(SWA)和可溶性虫卵抗原(SEA)特异性Ig G抗体水平,采用流式细胞术检测雌、雄C57BL/6小鼠脾脏、淋巴结中滤泡辅助性T(Tfh)细胞和调节性T(Treg)细胞水平。结果感染日本血吸虫8周后,雌[(28.050±3.576)×10^4μm^2]、雄小鼠肝组织中平均单个虫卵肉芽肿面积[(26.740±4.093)×10^4μm^2]差异无统计学意义(t=0.241,P=0.821);天狼星红染色结果显示,感染日本血吸虫雌、雄小鼠肝纤维化程度差异亦无统计学意义[天狼星红染色阳性区域平均比例:(7.667±1.856)%vs.(7.667±1.764)%;t=0,P=1;平均光密度:(0.023±0.003)vs.(0.027±0.007);t=0.447,P=0.678]。ELISA检测结果显示,雌、雄小鼠感染日本血吸虫8周后血清抗SWA[(2.098±0.037)vs.(1.970±0.071);t=1.595,P=0.162]和SEA特异性Ig G抗体水平[(3.738±0.039)vs.(3.708±0.043);t=0.512,P=0.623]差异均无统计学意义。流式细胞术检测结果表明,感染日本血吸虫8周后雌、雄小鼠脾脏[雌鼠:(8.645±1.356)%vs.(1.730±0.181)%,t=5.055,P=0.002;雄鼠:(8.470±1.161)%vs.(1.583±0.218)%,t=5.829,P=0.001]、淋巴结[雌鼠:(3.218±0.153)%vs.(1.095±0.116)%,t=11.040,P <0.001;雄鼠:(3.673±0.347)%vs.(0.935±0.075)%,t=8.994,P <0.001]中Tfh细胞比例均显著高于未感染小鼠,但雌、雄小鼠脾脏[(8.645±1.356)%vs.(8.470±1.161)%;t=0.098,P=0.925]和淋巴结[(3.218±0.153)%vs.(3.673±0.347)%;t=1.332,P=0.241]中Tfh细胞比例差异均无统计学意义。感染日本血吸虫8周雄鼠脾脏中Treg细胞比例与未感染小鼠无显著差异[(10.060±0.361)%vs.(10.130±0.142)%;t=0.174,P=0.867],而日本血吸虫感染雌鼠脾脏中Treg细胞比例显著高于未感染小鼠[(10.530±0.242)%vs.(9.450±0.263)%;t=3.021,P=0.023],但感染日本血吸虫雌、雄小鼠脾脏中Treg细胞比例差异无统计学意义[(10.530±0.242)%vs.(10.060±0.361)%;t=1.077,P=0.323];日本血吸虫感染8周后,雌[(17.150±0.805)%vs.(13.100±0.265)%;t=4.781,P=0.003]、雄鼠淋巴结中Treg细胞比例均较未感染小鼠显著增加[(18.550±0.732)%vs.(12.630±0.566)%;t=6.402,P <0.001],但感染日本血吸虫雌、雄小鼠淋巴结中Treg细胞比例差异无统计学意义[(17.150±0.805)%vs.(18.550±0.732)%;t=1.287,P=0.246]。结论利用C57BL/6小鼠研究日本血吸虫感染所致肝脏病理及抗体产生机制时,不需要考虑性别因素。     

伯氏疟原虫氯喹抗性株感染ICR小鼠脾脏树突状细胞成熟和B细胞活化

目的 研究伯氏疟原虫氯喹抗性株(RC株)和氯喹敏感株(N株)感染鼠脾脏B细胞活化与树突状细胞(DC)的关系。 方法 分别用感染N株或RC株疟原虫的红细胞(iRBC)腹腔接种感染ICR小鼠(1×10⁶个iRBC/只)。当小鼠原虫血症N株达50%～80%、 RC株达61.7%～68.4%时, 断颈处死取脾脏。 常规方法制作石蜡切片, HE染色或免疫组织化学染色, 进行组织学观察。 制作超薄切片, 透射电镜观察脾脏细胞的变化。制作冰冻切片进行免疫荧光观察。流式细胞仪分析比较B细胞和DC变化。 结果 RC株感染小鼠脾脏白髓增生明显, 抗B细胞的特异性表面分子CD45R/B220和CD19抗体同时表达阳性的B细胞在脾细胞中的百分比增加, 中、 小淋巴细胞数量增多, 在红髓内浆母细胞与成熟的浆细胞数量增多。而N株感染小鼠脾小体则以大、 小淋巴细胞为主, 生发中心不明显, 红髓可见大量的含疟原虫的红细胞、 小淋巴细胞, 而浆母细胞和其他发育期浆细胞则少见。 RC株感染小鼠脾脏内白细胞分化抗原11c(CD11c) 阳性的DC数量明显增多, 尤其动脉周围淋巴鞘T细胞区。并且这些DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ (MHCⅡ) 类分子表达明显升高, 表明主要是成熟的DC增多。DC外形不规则, 胞质丰富, 电子密度高, 含发达的高尔基复合体和吞噬泡样结构。 结论 RC株感染小鼠脾脏成熟的DC 明显增加, 从而诱导B细胞的活化增殖。     

核因子-κB活性对BXSB狼疮小鼠脾脏自发性生发中心形成的影响

目的探讨核因子(NF)-kB活性对BXSB狼疮小鼠脾脏中自发性生发中心形成的影响及其机制。方法18只BXSB自发性狼疮小鼠随机分成对照组和吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)干预组,PDTC组：隔日腹腔注射PDTC(120mg/kg体重)；对照组：隔日腹腔注射等量溶媒。持续8周结束实验。以电泳迁移率改变实验检测脾脏组织NF-kB活性,双标记流式细胞术检测脾脏B细胞CD154表达及生发中心B细胞凋亡,组织化学方法染色脾脏生发中心,并以图像处理系统半定量分析。结果PDTC显著抑制BXSB狼疮小鼠脾脏组织NF-kB活性,较对照组下降62．82%；BXSB狼疮小鼠脾脏组织可见自发性生发中心形成,抑制NF-kB活性能下调脾脏B细胞CD154表达、使其自发性生发中心形成受阻、促进生发中心B细胞凋亡。结论NF-KB过度活化可通过上调脾脏B细胞CD154的异常表达而促进自发性生发中心形成、并减少生发中心B细胞凋亡。由此,自发性生发中心形成过程中生成的自身反应性B细胞得以逃逸凋亡,分化成产自身抗体浆细胞。提示NF-kB可成为防治系统性红斑狼疮的一个作用靶点。     

性别因素对CC57BL/6小鼠日本血吸虫感染所致肝脏病理及抗体免疫的影响

目的探讨性别因素对日本血吸虫感染所致C57BL/6小鼠肝脏病理及抗体免疫的影响。方法雌、雄C57BL/6小鼠分别感染日本血吸虫8周,应用HE染色、天狼星红染色观察小鼠肝脏病理变化。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测雌、雄C57BL/6小鼠血清抗可溶性成虫抗原(SWA)和可溶性虫卵抗原(SEA)特异性Ig G抗体水平,采用流式细胞术检测雌、雄C57BL/6小鼠脾脏、淋巴结中滤泡辅助性T(Tfh)细胞和调节性T(Treg)细胞水平。结果感染日本血吸虫8周后,雌[(28.050±3.576)×10~4μm~2]、雄小鼠肝组织中平均单个虫卵肉芽肿面积[(26.740±4.093)×10~4μm~2]差异无统计学意义(t=0.241,P=0.821);天狼星红染色结果显示,感染日本血吸虫雌、雄小鼠肝纤维化程度差异亦无统计学意义[天狼星红染色阳性区域平均比例:(7.667±1.856)%vs.(7.667±1.764)%;t=0,P=1;平均光密度:(0.023±0.003)vs.(0.027±0.007);t=0.447,P=0.678]。ELISA检测结果显示,雌、雄小鼠感染日本血吸虫8周后血清抗SWA[(2.098±0.037)vs.(1.970±0.071);t=1.595,P=0.162]和SEA特异性Ig G抗体水平[(3.738±0.039)vs.(3.708±0.043);t=0.512,P=0.623]差异均无统计学意义。流式细胞术检测结果表明,感染日本血吸虫8周后雌、雄小鼠脾脏[雌鼠:(8.645±1.356)%vs.(1.730±0.181)%,t=5.055,P=0.002;雄鼠:(8.470±1.161)%vs.(1.583±0.218)%,t=5.829,P=0.001]、淋巴结[雌鼠:(3.218±0.153)%vs.(1.095±0.116)%,t=11.040,P 0.001;雄鼠:(3.673±0.347)%vs.(0.935±0.075)%,t=8.994,P 0.001]中Tfh细胞比例均显著高于未感染小鼠,但雌、雄小鼠脾脏[(8.645±1.356)%vs.(8.470±1.161)%;t=0.098,P=0.925]和淋巴结[(3.218±0.153)%vs.(3.673±0.347)%;t=1.332,P=0.241]中Tfh细胞比例差异均无统计学意义。感染日本血吸虫8周雄鼠脾脏中Treg细胞比例与未感染小鼠无显著差异[(10.060±0.361)%vs.(10.130±0.142)%;t=0.174,P=0.867],而日本血吸虫感染雌鼠脾脏中Treg细胞比例显著高于未感染小鼠[(10.530±0.242)%vs.(9.450±0.263)%;t=3.021,P=0.023],但感染日本血吸虫雌、雄小鼠脾脏中Treg细胞比例差异无统计学意义[(10.530±0.242)%vs.(10.060±0.361)%;t=1.077,P=0.323];日本血吸虫感染8周后,雌[(17.150±0.805)%vs.(13.100±0.265)%;t=4.781,P=0.003]、雄鼠淋巴结中Treg细胞比例均较未感染小鼠显著增加[(18.550±0.732)%vs.(12.630±0.566)%;t=6.402,P 0.001],但感染日本血吸虫雌、雄小鼠淋巴结中Treg细胞比例差异无统计学意义[(17.150±0.805)%vs.(18.550±0.732)%;t=1.287,P=0.246]。结论利用C57BL/6小鼠研究日本血吸虫感染所致肝脏病理及抗体产生机制时,不需要考虑性别因素。     

核因子-κB活性对BXSB狼疮小鼠脾脏白发性生发中心形成的影响

目的探讨核因子（NF）-κB活性对BXSB狼疮小鼠脾脏中自发性生发中心形成的影响及其机制。方法18只BXSB自发性狼疮小鼠随机分成对照组和吡咯二硫氨基甲酸酯（PDTC）干预组，PDTC组：隔日腹腔注射PDTC（120mg／kg体重）；对照组：隔日腹腔注射等量溶媒。持续8周结束实验。以电泳迁移经改变实验检测脾脏组织NF-κB活性，双标记流式细胞术检测脾脏B细胞CD154表达及生发中心B细胞凋亡，组织化学方法染色脾脏生发中心，并以图像处理系统半定量分析。结果PDTC显著抑制BXSB狼疮小鼠脾脏组织NF-κB活性，较对照组下降62．82％；BXSB狼疮小鼠脾脏组织可见自发性生发中心形成．抑制NF-κB活性能下调脾脏B细胞CD154表达、使其自发性生发中心形成受阻、促进生发中心B细胞凋亡，结论NF-κB过度活化可通过上调脾脏B细胞CD154的异常表达而促进自发性生发中心形成、并减少生发中心B细胞凋亡。由此，自发性生发中心形成过程中生成的自身反应性B细胞得以逃逸凋亡，分化成产自身抗体浆细胞：提示NF-κB可成为防治系统性红斑狼疮的一个作用靶点。     

慢性日本血吸虫感染C57BL／6小鼠体内Th1／Th2细胞凋亡的检测

目的 观察日本血吸虫感染晚期C57BL／6小鼠体内Th1、Th2细胞凋亡水平的变化。方法运用流式细胞技术，采用表面分子、胞内因子同时染色的三色标记和间接标记的方法，对日本血吸虫感染13周的C57BL／6小鼠脾脏、淋巴结中的Th1、Th2细胞的凋亡水平进行观察。结果日本血吸虫感染晚期C57BL／6小鼠与正常小鼠相比，Th1、Th2细胞凋亡均显著增加，但Th1细胞凋亡较多而Th2细胞凋亡较少。此阶段Th1细胞凋亡比Th2细胞更加易感。结论Th1、Th2细胞凋亡易感性的不同可能是导致血吸虫感染晚期Th2极化的原因之一，此为血吸虫感染过程中Th极化研究提供了新的证据。     

日本血吸虫感染小鼠调节性T细胞水平动态变化及功能逆转研究

目的观察日本血吸虫感染小鼠调节性T细胞水平动态变化,筛选调节性T细胞功能抑制因子。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用流式细胞分析法检测不同感染阶段小鼠体内调节性T细胞水平;通过检测小鼠血清中细胞因子的水平变化,观察免疫反应的极化过程;采用磁珠分离法纯化小鼠脾脏的调节性T细胞,人工设计合成2条寡核苷酸（CpG1-ODN,CpG2-ODN）,通过淋巴细胞增殖试验筛选能逆转调节性T细胞功能的刺激因子。结果流式细胞分析发现,随着血吸虫感染进程的发展,小鼠外周血及脾脏调节性T细胞水平逐渐增加,免疫反应逐步向Th2型极化,血清IL-5水平增加,IFN-γ下降。淋巴细胞增殖试验显示,人工合成的寡核苷酸（CpG2-ODN）能有效刺激淋巴细胞增殖,使淋巴细胞的IL-2分泌增加,TGF-γ下降,并能解除调节性T细胞对效应T细胞增殖的免疫抑制作用。结论血吸虫感染可增加小鼠体内调节性T细胞水平,诱导免疫反应向Th2型极化。寡聚核苷酸CpG2-ODN能逆转调节性T细胞的免疫抑制功能。     

光学显微镜下日本血吸虫成虫生殖系统形态学观察

目的在光学显微镜下观察日本血吸虫雌雄成虫生殖系统的组织形态结构特征。方法感染性钉螺逸出尾蚴，经腹部皮肤感染小鼠，感染7周后解剖获得血吸虫成虫，经10%甲醛固定、脱水、石蜡包埋、切片和苏木素伊红(HE)染色后在光镜下观察。结果光镜下日本血吸虫雌雄成虫睾丸、卵巢、输卵管、卵黄腺、卵黄管、子宫等生殖器官的组织结构和细胞形态清晰。结论  日本血吸虫成虫经石蜡切片和HE染色后，雌雄成虫各生殖器官在光镜下清晰可见，为血吸虫形态学教学和血吸虫生殖生物学研究提供了简便的方法。     

慢性烟雾暴露引起小鼠肺气肿伴淋巴滤泡形成

目的 研究不同时间慢性香烟烟雾暴露对小鼠肺气肿和淋巴滤泡形成的影响.方法 6～8周龄SPF级近交系C57BL/6雌性小鼠24只,随机分组:12周暴露组、12周对照组、24周暴露组、24周对照组,观察12周和24周不同暴露时间小鼠肺气肿和肺淋巴滤泡新生情况,分析淋巴滤泡的细胞和分子构成.结果 24周烟雾暴露小鼠的肺泡破坏指数(48.28±2.01)％高于12周烟雾暴露小鼠(33.85±0.84)％,肺气肿程度加重;12周的烟雾暴露不能使肺组织形成结构成熟的淋巴滤泡,但是经24周暴露后,小鼠肺组织形成典型的淋巴滤泡.淋巴滤泡主要由大量的B细胞、CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞构成,少量基质细胞和CXCL13+细胞也参与了淋巴滤泡的形成.结论 24周慢性烟雾暴露刺激可以导致小鼠肺组织结构破坏并伴淋巴滤泡形成.     

COS信号对感染日本血吸虫小鼠CD154/CD40 表达的影响

目的 目的 探讨可诱导共刺激分子 （Inducible costimulator, ICOS） 信号对感染日本血吸虫小鼠的CD154/CD40表达及免疫病理的影响。方法 方法 建立ICOS转基因 （ICOS transgenic,ICOS?Tg） 小鼠及野生型FVB/NJ小鼠日本血吸虫病模型, 应用流式细胞术、 免疫组化技术分别检测感染前后的小鼠脾淋巴细胞与肝脏虫卵肉芽肿周围炎性浸润细胞CD154、 CD40 表达水平。应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变动态变化。结果 结果 与野生型FVB/NJ小鼠相比, ICOS?Tg小鼠脾淋巴细胞CD154、 CD40表达水平升高, 在感染后12、 16周差异有统计学意义 （P均 < 0.05）; ICOS?Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿炎性浸润细胞CD154、 CD40表达亦显著升高, 在感染后7、 12、 16、 20周差异有统计学意义 （P均 < 0.05）。且ICOS?Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿体积显著大于野生型小鼠 （P < 0.01或0.05）。结论 结论 在日本血吸虫感染中, ICOS信号对CD154/CD40表达具有一定的调控作用, 在免疫病理中起重要调控作用。     

芍药苷对日本血吸虫病肝纤维化小鼠CTGF PDGF及TNF-α的影响

目的观察芍药苷对日本血吸虫感染小鼠肝脏结缔组织生长因子（CTGF）、血小板衍化生长因子（PDGF）蛋白表达水平和血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平的影响,探讨芍药苷预防血吸虫病肝虫卵肉芽肿及纤维化的作用机制。方法小鼠随机分为A～E5组,A组不感染血吸虫尾蚴,为正常对照组;B、C、D、E4组小鼠感染尾蚴后6周以吡喹酮灌胃杀虫,剂量为400mg/（kg·d）,连续2d。B、C、D3组杀虫后给予芍药苷,剂量分别为30、60、120mg/（kg·d））,E组不给芍药苷,为感染对照组。5组小鼠均在芍药苷给药8周后处死,取血及肝脏。HE及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤维化程度,采用免疫组化技术检测CTGF和PDGF蛋白表达情况,采用ELISA法检测小鼠血清中TNF-α水平。结果芍药苷高剂量的D组与感染对照E组相比,肝组织中CTGF和PDGF蛋白表达明显减少,血清中TNF-α水平也明显下降（P均〈0.05）;而中、低剂量B组和C组的CTGF、PDGF和TNF-α水平亦较E组减少,但差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论芍药苷抗血吸虫病肝纤维化作用呈剂量依赖性,在吡喹酮杀虫处理基础上联合应用高剂量芍药苷,可通过减少肝组织CTGF和PDGF蛋白表达,降低血清中TNF-α水平,减轻肝纤维化程度。     

日本血吸虫感染过程中糖酵解途径对调节性T细胞产生的影响

目的 探索日本血吸虫感染过程中糖酵解途径对小鼠调节性T（Treg）细胞数量和功能的影响。方法 建立日本血吸虫感染小鼠模型,用糖酵解抑制剂2?Deoxy?D?glucose（2DG）或PBS对日本血吸虫感染小鼠进行6次腹腔注射后,分离脾脏细胞和肠系膜淋巴结,采用流式细胞术（FCM）检测分离得到的细胞中Glut1+CD4+ T细胞以及Treg细胞比例。结果 未感染组小鼠脾脏（43.58%±2.50% vs. 21.15%±0.96%;t = 8.834,P < 0.01）和肠系膜淋巴结中Glut1+CD4+ T细胞比例（38.97%±1.97% vs. 28.40%±2.11%;t = 3.662,P < 0.05）均显著高于感染日本血吸虫8周小鼠,但未感染组小鼠脾脏（6.83%±0.21% vs. 13.30%±0.35%;t = 15.65,P < 0.01）和肠系膜淋巴结中Treg细胞比例（8.26%±0.15% vs. 14.37%±0.44%;t = 13.14,P < 0.01）均显著低于感染组小鼠。感染小鼠给与2DG腹腔注射后,脾脏（15.50%± 0.76% vs. 13.07%±0.15%;t = 3.130,P < 0.05）和肠系膜淋巴结中Treg细胞比例（17.00%±0.41% vs. 13.83%±0.18%;t = 6.947,P < 0.01）显著高于给与PBS注射小鼠。结论 糖酵解途径抑制了日本血吸虫感染小鼠Treg细胞分化。     

CD4+CD25+调节性T细胞对日本血吸虫病疫苗保护性效果的影响及机制研究

目的 目的 探讨CD4+ CD25+ 调节性T细胞 （Tregs） 对日本血吸虫病疫苗保护性效果的影响及其机制。 方法 方法 雌性 BALB/c小鼠随机分成5组, 即正常对照组、 感染对照组、 抗CD25单克隆抗体 （anti?CD25 mAb） 组、 谷胱甘肽?S?转移酶 （Gluthatione?S?transferase,GST） 免疫组和GST/anti?CD25 mAb联合组。分别在感染后2、 3、 4、 5周剖杀小鼠, 收集脾细胞 及培养上清, 采用流式细胞术检测脾细胞中CD4+ CD25+ Tregs比例, 双抗夹心ELISA法测定脾细胞培养上清中的IFN?γ、 IL?2、 IL?4、 IL?5和TGF?β水平。感染后5周杀鼠, 门静脉冲虫, 统计每只小鼠虫荷及每克肝脏虫卵数; 肝组织石蜡切片HE 染色观察虫卵肉芽肿病理变化。 结果 结果 感染后5周, GST免疫组小鼠减虫率为24.98%, 而GST/anti?CD25 mAb联合组减 虫率达43.13%; GST免疫组小鼠脾细胞中CD4+ CD25+ Foxp3+ 比例显著高于感染对照组 （P < 0.05）, 而anti?CD25 mAb组小 鼠脾细胞中CD4+ CD25+ Foxp3+ 比例显著低于感染对照组 （P < 0.01）。使用anti?CD25 mAb后2周, GST/anti?CD25 mAb联合 组小鼠脾细胞培养上清中IL?4、 IL?5、 IFN?γ和IL?2含量均较其他组高; 各组小鼠肝脏病理变化和脾细胞培养上清中TGF? β水平间差异均无统计学意义 （P 均 > 0.05）。结论 结论 GST疫苗可引起日本血吸虫感染宿主CD4+ CD25+ Tregs 明显上升, 从 而导致其保护性效果欠佳; anti?CD25 mAb部分封闭CD4+ CD25+ Tregs后有利于增强日本血吸虫病疫苗的免疫保护性效 果, 其机制可能与Th1、 Th2型免疫反应增强有关。     

Reaction of germinal centers in the T-cell-independent response to the bacterial polysaccharide alpha(1-->6)dextran.

Primary immunization of BALB/c mice with alpha(1-->6)dextran (DEX), a native bacterial polysaccharide, induces an unexpected pattern of splenic B-cell responses. After a peak of antibody-secreting B-cell response at day 4, deposition of dextran-anti-dextran immune complexes, as revealed by staining with both dextran and antibodies to dextran, occurs and persists in splenic follicles until at least the fourth week after immunization. Antigen-specific B cells appear and proliferate in such follicles, leading by day 11 to development of DEX-specific germinal centers as characterized by the presence of distinct regions of DEX+ peanut agglutinin-positive (PNA+) cells. At this time, fluorescence-activated cell sorter analysis also reveals the appearance of a distinct population of DEX+ PNA+ splenic B cells. In contrast, DEX+ PNA- cells, characterized by intense cytoplasmic staining, are present outside of splenic follicles, peak at day 4 to day 5, and persist until at least day 28. The frequency of these cells correlates with DEX-specific antibody-secreting cells, as detected by the ELISA-spot assay. Thus, in addition to the expected plasma cellular response, the typical T-cell-independent type II antigen, DEX, surprisingly also elicits the formation of antigen-specific germinal centers. These observations raise fundamental questions about the roles of germinal centers in T-cell-independent immune responses.     

弓形虫感染小鼠血清对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的观察RH株弓形虫感染小鼠血清在体外对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖以及凋亡的影响。方法B16细胞在含5%、10%和20%RH株弓形虫感染小鼠血清RPM1640中培养24和48 h,四甲基氮噻唑蓝（MTT）法检测B16细胞增殖抑制率;在10%、20%感染小鼠血清中培养24 h,Annexin V/PI染色,流式细胞检测细胞凋亡,HE染色观察细胞形态改变。结果正常血清能促进B16细胞增殖。5%、10%和20%弓形虫感染小鼠血清与B16细胞共孵育24和48 h,细胞生长抑制率分别为（9.06±0.36）%（、14.77±0.94）%（、23.74±0.5）%和（14.82±0.77）%（、24.56±1.04）%、（39.77±2.82）%,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;10%、20%弓形虫感染鼠血清组B16细胞24 h凋亡率分别为（26.01±3.27）%和（44.55±2.87）%,显著高于对照组凋亡率（5.01±2.62）（P〈0.05）。弓形虫感染鼠血清作用的B16细胞生长密度明显降低,细胞核固缩、浓染。结论RH株弓形虫感染血清能够抑制B16细胞增殖并促进其凋亡。     

日本血吸虫感染小鼠肝脏及脾脏NKT细胞的变化

目的观察日本血吸虫感染后小鼠肝脏及脾脏自然杀伤(NK)T细胞的动态变化特征。方法将24只6～8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为4组,其中3组每鼠经腹部皮肤感染(14±2)条日本血吸虫尾蚴,分别于感染后3、6、12周剖杀小鼠,分离肝脏及脾脏单个核淋巴细胞,应用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD49b单克隆抗体及藻红蛋白(PE)标记的CD3e单克隆抗体标记细胞,流式细胞仪检测CD3/CD49b双阳性的NKT细胞占单核淋巴细胞的比例。体外刺激实验中将分离的正常小鼠脾脏单个核淋巴细胞,分别用SEA、虫卵蛋白、虫卵脂质作为刺激物,观察其中NKT细胞的比例变化。结果日本血吸虫感染小鼠脾脏中NKT细胞,于感染后12周比例为(4.73±0.41)%,显著高于对照组比例(2.07±0.12)%(P0.01);肝脏NKT细胞在感染后3周(8.03±0.23)%与对照组(8.60±1.48)%无明显变化,但感染后6周及12周NKT比例明显上升,分别为(15.90±0.76)%和(21.00±0.30)%,与对照组相比差异有统计学意义(P0.01)。体外实验结果显示,刺激物为SEA和虫卵脂质时,NKT细胞的比例分别为(0.77±0.03)%及(0.80±0.06)%,明显高于空白对照组(0.53±0.03)%及虫卵蛋白组(0.50±0.06)%(P0.05)。结论日本血吸虫感染导致小鼠脾脏及肝脏中NKT细胞比例上调,其上调可能与虫卵可溶性抗原中的脂质组分有关。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导小鼠抗雌虫生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫云南株未成熟卵可溶性抗原（SIEA）免疫小鼠产生的抗雌虫生殖效果及作用机制。 方法 3 000条日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤感染家兔,第34天收集兔肝中的未成熟卵制备SIEA。20只ICR小鼠随机分为两组,免疫组（11只）每鼠背部皮下多点注射SIEA（100 μg/只）,对照组（9只）给予等量生理盐水,每2周免疫1次,共5次。末次免疫后1周,用（30±2）条血吸虫尾蚴攻击感染每只鼠。第45天收集小鼠粪便,第46天剖杀小鼠,心脏灌注法收集成虫,比较成虫数及粪便、肝组织、雌虫子宫内虫卵数和肝表面虫卵结节密度;透射电镜观察雌虫卵黄腺及雄虫睾丸组织。 结果 免疫组与对照组检获成虫数差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组小鼠每克粪便每条雌虫虫卵数、每克肝组织每条雌虫虫卵数、每条雌虫子宫内虫卵数及肝表面虫卵结节密度分别为（56.68±24.78）个、 （5 826±437）个、 （49.94±12.53）个和（10.04±1.13）个/0.25 cm2; 对照组分别为（89.93±32.18）个、 （10 016±3 541）个、（76.54±19.77）个和（19.22±2.45） 个/0.25 cm2,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。透射电镜观察显示,与对照组相比,免疫组小鼠体内雌虫卵黄腺内成熟卵黄细胞和脂滴减少,雄虫睾丸组织内支持细胞多见而精细胞较少,且卵黄细胞和支持细胞胞质内出现空泡。 结论 SIEA可能通过抑制日本血吸虫生殖细胞的成熟而产生抗雌虫生殖免疫效应。     

亚洲日月蛤多糖的分子检测及其干预小鼠日本血吸虫肝纤维化的初步研究

目的 检测亚洲日月蛤多糖的分子特性,探讨其在干预小鼠日本血吸虫肝纤维化中的作用。方法 提取并纯化亚洲日月蛤多糖,采用凝胶排阻法对其分子量进行测定,应用PMP柱前衍生法对其单糖组成进行检测。取50只雌性BALB/c小鼠,随机分成5组,每组10只小鼠。A组给予生理盐水灌胃,B、C、D、E组小鼠分别经腹部皮肤攻击感染血吸虫尾蚴（30 ± 2）条/只;饲养第8周末,C、D、E组小鼠分别给予多糖、吡喹酮及多糖 + 吡喹酮治疗,B组小鼠给予生理盐水;第16周末,收集小鼠肝脏及血清,通过HE染色观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变及肝纤维化情况,采用ELISA法检测血清IFN?γ、IL?13水平。结果 亚洲日月蛤多糖相对分子量为11.7 kDa,其多糖主要由葡萄糖组成。C、D组和E组小鼠血清IFN?γ浓度显著高于对照组（F = 63.525,P < 0.01）,C、D组和E组小鼠血清IL?13浓度显著低于B组（F = 99.788,P < 0.01）。HE染色显示,B、C、D、E组小鼠肝组织均见不同程度虫卵结节和纤维化改变,A组小鼠肝脏正常,E组虫卵结节较B组少（c2 = 7.875,P < 0.05）。结论 亚洲日月蛤多糖具有明显的抗日本血吸虫肝纤维化作用,与吡喹酮联用效果更好。