miR-127-5p靶向IRAK4对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的探究miR-127-5p靶向白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响方法首先分为对照组和感染组,感染组用肺炎链球菌感染A549细胞,感染组细胞分别转染miR-127-5p mimic、si-IRAK4及阴性对照质粒,qRT-PCR检测A549细胞中miR-127-5p的表达水平,western blot检测IRAK4、Bax、Bcl-2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)水平,双荧光素酶报告基因检测miR-127-5p与IRAK4的靶向关系。结果与对照组比较,肺炎链球菌感染后A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著降低,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高(P<0.05);与感染+miR-NC组比较,过表达miR-127-5p后,A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著升高,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6显著降低;与感染+si-NC组比较,抑制IRAK4表达后,A549细胞中细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著降低,Bcl-2、IL-10水平显著升高;双荧光素酶报告基因及Western blot结果显示,miR-127-5p可通过与IRAK4特异性结合负向调控IRAK4的表达;与感染+miR-127-5p+pcDNA组比较,感染+miR-127-5p+pcDNA-IRAK4组A549细胞中凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高,Bcl-2、IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论miR-127-5p靶向IRAK4调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子IL-10、IL-6的表达。     

MiR-506-3p靶向TRAF6抑制心肌炎的炎性反应和心肌细胞凋亡

目的探讨miR-506-3p调节心肌炎炎性反应及心肌细胞凋亡的潜在作用机制。方法使用SD大鼠制备病毒性心肌炎(VMC)动物模型,RT-qPCR法检测正常SD大鼠和VMC模型大鼠心脏组织中miR-506-3p相对表达水平;分离培养VMC大鼠心肌细胞,将模拟物对照、miR-506-3p模拟物或miR-506-3p抑制剂转染至心肌细胞,分别采用RT-qPCR、ELISA和Hoechst 33342染色法检测转染后细胞中miR-506-3p表达、细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平及细胞凋亡情况。Targetscan在线预测,RT-qPCR和双荧光素酶报告基因实验验证miR-506-3p和肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)6的靶向关系。结果与正常SD大鼠相比,VMC模型大鼠心脏组织中miR-506-3p表达显著下调(P<0.05)。以VMC模型大鼠心肌细胞为研究对象,转染miR-506-3p模拟物后,细胞中miR-506-3p表达显著上调(P<0.05),细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡显著减少(P<0.05);转染miR-506-3p抑制剂则结果相反。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和RT-qPCR实验结果表明,TRAF6是miR-506-3p的潜在靶基因,并且miR-506-3p可负调控TRAF6表达。结论 miR-506-3p在心肌炎组织中呈低表达,过表达miR-506-3p可抑制心肌炎炎症反应和心肌细胞凋亡,其机制可能与TRAF6有关。     

MiR-506-3p/SOCS-3促进BCG感染巨噬细胞引发的炎症应答反应

目的 探究miR-506-3p在卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin, BCG)感染巨噬细胞诱导的炎症应答进程中的作用及其机制。方法 制备BCG感染巨噬细胞RAW264.7模型;采用RT-PCR检测miR-506-3p及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS的mRNA表达水平;利用ELISA方法测定炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平;用Griess法评估NO的分泌情况;CFU计数法评估BCG存活率;应用双荧光素酶报告实验、RT-PCR及Western Blot法验证miR-506-3p与SOCS-3的靶向调控关系。结果 BCG感染能够引起RAW264.7细胞中miR-506-3p的表达量显著下调,并且具有时间依赖性。另外,miR-506-3p过表达后可显著增加BCG感染的RAW264.7细胞中炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白水平。同时,miR-506-3p上调能够明显增加BCG感染后RAW264.7中NO的产生及iNOS的表达。此外,过表达miR-506-3p可明显降低胞内BCG的存活率。更为重要的是miR-506-3p能够靶向结合SOCS-3的3′-UTR,并可负调控其表达。结论 MiR-506-3p通过抑制靶基因SOCS-3从而促进BCG刺激诱导的巨噬细胞炎症反应进程,从而导致胞内BCG的存活率降低,有望为结核病的临床研究和治疗提供一个新的潜在靶点。     

miR-497-5p靶向沉默核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出

目的观察miR-497-5p对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)靶向调控及其对细胞胆固醇流出的影响。方法生物信息学与荧光素酶报告基因验证miR-497-5p与NLRP1靶向结合。人源THP-1单核细胞经佛波酯及氧化低密度脂蛋白处理后成为泡沫细胞。使用miR-497-5p mimic和miR-497-5p inhibitor处理细胞。实时荧光定量PCR和Western blot检测NLRP1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达情况。酶联免疫吸附法测定细胞培养液白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量。液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出水平。高效液相色谱法检测泡沫细胞内脂质含量。结果 miR-497-5p mimic能够显著性降低野生型NLRP1 3′UTR报告基因的荧光素酶活性。与对照组相比,miR-497-5p mimic组NLRP1、ASC、Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平明显下调,IL-1β和IL-18分泌明显减少。miR-497-5p mimic较对照组显著促进细胞胆固醇流出,减少细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量。结论 miR-497-5p可能通过靶向调控NLRP1,抑制巨噬细胞源性泡沫细胞炎症反应并促进胆固醇流出。     

lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...     

miR-140-3p通过靶向趋化因子受体4和抑制JAK2/STAT3通路减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

目的]探讨miR-140-3p对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制。[方法]构建体外心肌细胞H/R模型,使用miR-140-3p mimics、趋化因子受体4(CXCR4)过表达质粒转染H9c2细胞。噻唑蓝法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;反转录聚合酶链反应和Western blot检测细胞中miR-140-3p、CXCR4、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的激活以及凋亡相关蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与CXCR4的靶向关系。相应试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性和炎症因子、活性氧(ROS)的水平。[结果]体外H/R可抑制miR-140-3p的表达,上调CXCR4表达和JAK2/STAT3通路的磷酸化,诱导H9c2细胞凋亡而抑制H9c2细胞增殖,促进炎症因子和ROS的释放并上调LDH的活性。miR-140-3p可以通过靶向CXCR4 3′UTR抑制CXCR4表达,从而抑制JAK2/STAT3通路的磷酸化激活,抑制炎症因子和ROS的释放,下调LDH的活性,促进H9c2细胞增殖而抑制其凋亡。[结论]miR-140-3p可能通过靶向抑制CXCR4而抑制JAK2/STAT3通路,从而减轻缺血再灌注诱导的心肌细胞损伤。     

miR-132-3p靶向调控Gab2抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭分子机制的研究

背景 miR-132-3p在肿瘤中呈低表达,但miR-132-3p在胃癌(gastric cancer,GC)发生过程中的调控机制尚未阐明.Starbase靶基因预测显示Gab2可能是miR-132-3p的靶基因.本研究假设miR-132-3p可能通过调控Gab2表达从而影响GC细胞增殖、迁移及侵袭.目的探讨miR-132-3p对Gab2表达的调控作用及其对GC细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测正常胃黏膜上皮细胞系GES1与人GC细胞系SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p、Gab2的表达水平;以BGC-823细胞为研究对象,利用脂质体转染法分别将miR-132-3p模拟物(miR-132-3p组)、阴性对照(miR-NC组)、miR-132-3p与pcDNA(miR-132-3p+pcDNA组)、miR-132-3p与pc DNA-Gab2(miR-132-3p+pcDNA-Gab2组)转染至BGC-823细胞,通过qRT-PCR、Western blot验证转染效果.甲基噻唑基四唑检测各组细胞存活率; Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭;Starbase预测Gab2为miR-132-3p的靶基因,分别将野生型Gab2基因3’UTR荧光素酶报告基因载体与miR-132-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至BGC-823细胞,双荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性; Western blot检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、P21、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达量.结果与GES1细胞相比, SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p的表达水平显著降低(P0.05), Gab2的表达水平显著升高(P 0.05);与miR-NC组相比,miR-132-3p组细胞存活率显著降低(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著降低(P 0.05),P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P 0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向调控Gab2基因;与miR-132-3p+pcDNA组相比, miR-132-3p+pcDNA-Gab2组细胞存活率显著升高(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05), P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05).结论 miR-132-3p能够通过靶向调控Gab2而抑制GC细胞增殖、迁移及侵袭.     

MiR-224-5p靶向沉默前蛋白转化酶枯草溶菌素9影响HepG2细胞脂质摄取与蓄积

目的探讨miR-224-5p对前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)表达及对HepG2细胞摄脂能力的影响。方法运用生物信息学方法对miR-224-5p基因位置、保守性、种子序列进行分析。在Targetscan、miRanda、miRDB、RNAhybrid等多个数据库分析miR-224-5p与PCSK9结合位点及结合自由能。双荧光素酶报告基因验证miR-224-5p与PCSK9 mRNA 3′UTR直接靶向结合。Western blot检测miR-224-5p模拟物和miR-224-5p抑制剂对PCSK9和低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白的影响。细胞免疫荧光直接观察细胞膜上的LDLR。油红O染色和DiI-LDL分别观察miR-224-5p对HepG2细胞脂滴含量和脂质摄取能力的影响。结果生物信息学分析发现人的miR-224-5p基因定位于Xq28,不同物种间高度保守。miR-224-5p与PCSK9 mRNA 3′UTR存在靶向结合的基础,结合自由能较低。双荧光素酶报告基因显示,miR-224-5p模拟物能抑制PCSK9-WT 3′UTR荧光素酶活性,而对PCSK9-Mut 3′UTR没有抑制作用,表明PCSK9 mRNA 3′UTR是miR-224-5p的靶点。进一步实验发现miR-224-5p模拟物能够明显抑制PCSK9蛋白表达,增加LDLR蛋白含量。miR-224-5p下调后则表现为PCSK9表达增加,细胞LDLR水平降低。此外,油红O染色可见miR-224-5p模拟物组HepG2细胞内的脂滴明显减少,而miR-224-5p抑制剂组HepG2细胞内的脂滴明显增多。miR-224-5p高表达后明显促进HepG2细胞对LDLC的摄取。结论 miR-224-5p靶向结合PCSK9 mRNA 3′UTR,抑制PCSK9表达,进而降低HepG2细胞内脂滴含量,增加HepG2细胞对脂质的摄取。     

miR-203a-3p对食管癌细胞侵袭迁移能力的影响及其与Survivin的靶向调控关系

目的 观察微小RNA(miR)-203a-3p对食管癌细胞侵袭、迁移能力的影响并分析其与Survivin的靶向调控关系。方法 收集对数生长期的食管癌细胞TE-1及正常食管黏膜上皮细胞HEEC,RT-qPCR法检测细胞miR-203a-3p、Survivin mRNA。双荧光素酶报告基因检测法分析miR-203a-3p与Survivin的靶向调控关系。将TE-1细胞分为对照组、miR-203a-3p模拟组、miR-203a-3p抑制组及阴性对照组。miR-203a-3p模拟组转染miR-203a-3p mimic,miR-203a-3p抑制组转染miR-203a-3p inhibitor,阴性对照组转染miR-203a-3p NC,对照组不进行转染,RT-qPCR法验证转染效率。采用MTT法检测转染后2、12、24、36、48 h的细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 食管癌细胞中miR-203a-3p mRNA表达低于正常食管黏膜上皮细胞,Survivin mRNA表达高于正常食管黏膜上皮细胞（P均<0.05）。TargetSc...     

慢病毒载体介导的miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响研究

目的探讨miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及分子机制。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌组织及细胞中miR-342-3p和NUCKS1的表达水平;构建慢病毒介导的miR-342-3p过表达载体(LV-miR-342-3p),将LV-miR-342-3p和阴性对照空病毒载体(LV-NC)转染至肺癌细胞A549、H1299中,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测miR-342-3p和NUCKS1的靶向关系,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果肺癌组织及肺癌细胞A549和H1299中miR-342-3p表达水平降低,NUCKS1表达水平升高(P0.05)。miR-342-3p靶向调控NUCKS1。miR-342-3p过表达后,细胞活力降低,迁移和侵袭细胞数降低,NUCKS1表达水平降低(P0.05)。结论 miR-342-3p通过靶向下调NUCKS1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移。     

miR-142-5p靶向调控TGF-β2促进人巨噬细胞凋亡

目的探讨miR-142-5p在动脉粥样硬化组织中的表达及对人巨噬细胞凋亡的作用。方法构建动脉粥样硬化大鼠模型,qRT-PCR检测动脉粥样硬化组织中miR-142-5p的表达水平。50μg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人巨噬细胞、血管平滑肌细胞(VSMC)、内皮细胞24 h后,提取细胞RNA,qRT-PCR检测细胞中miR-142-5p的表达水平。靶基因预测软件预测miR-142-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因鉴定靶基因的正确性。细胞转染miR-142-5p mimic、mimic control、miR-142-5p inhibitor、inhibitor control,Western blot和qRT-PCR检测miR-142-5p对靶基因的调控作用,流式细胞仪检测miR-142-5p和靶基因对巨噬细胞凋亡的作用。结果 miR-142-5p在动脉粥样硬化组织中表达上调,与正常组织相比差异显著(P0.01)。血管平滑肌细胞和内皮细胞经ox-LDL刺激后miR-142-5p的表达水平与刺激前没有明显变化,而巨噬细胞经ox-LDL刺激后miR-142-5p的表达水平较刺激前明显升高(P0.01)。预测miR-142-5p的靶基因为转化生长因子β2(TGF-β2)。miR-142-5p mimic与TGF-β2共转染后荧光素酶活性最低;miR-142-5p mimic组TGF-β2蛋白和mRNA的表达水平与mimic control组相比明显下降,miR-142-5p inhibitor组TGF-β2蛋白和mRNA的表达水平与inhibitor control组相比明显升高(P0.01);miR-142-5p mimic组细胞凋亡率明显高于mimic control组,TGF-β2 siRNA组细胞凋亡率明显高于siRNA control组(P0.01)。结论 miR-142-5p在动脉粥样硬化中过度表达,miR-142-5p通过下调靶基因TGF-β2促进人巨噬细胞凋亡。     

miR-125a-5p抑制剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的探讨miR-125a-5p抑制剂对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响。方法将30只大鼠随机分为假手术组(sham组)、I/R损伤组(I/R组)和I/R+miR-125a-5p抑制组。采用生物信息学软件及荧光素酶报告体系预测和验证信号传导与活化转录因子3(STAT3)和miR-125a-5p之间靶向性。分析定量即时聚合酶连锁反应(qRT-PCR)鉴定体系中STAT3和miR-125a-5p表达;苏木素-伊红(HE)检测心肌组织细胞损伤情况;免疫组织化学法检测组织白介素-6(IL-6)表达情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测组织细胞氧化应激产物;免疫印迹试验(Western Blot)测定体系中凋亡相关分子的表达。结果经生物信息学和荧光素酶报告系统验证STAT3和miR-125a-5p具有较强的靶向性。I/R组miR-125a-5p表达量上调,STAT3表达受到抑制,细胞内氧化应激及炎症因子增加,细胞发生凋亡(P0.01);I/R+miR-125a-5p抑制组miR-125a-5p表达量下调,STAT3表达上升,细胞内氧化应激及炎症因子下调,凋亡现象有所改善(P0.01)。结论应用miR-125a-5p抑制剂可有效降低miR-125a-5p对STAT3的抑制效果,减少细胞凋亡和氧化应激反应,进而减缓大鼠心肌I/R损伤。     

miR-145-5p通过靶向PAK4促进非小细胞肺癌对吉非替尼的敏感性

目的 研究miR-145-5p通过靶向p21活化激酶(PAK)4对非小细胞肺癌对吉非替尼的敏感性的作用及机制。方法 RT-qPCR检测miR-145-5p mRNA和PAK4 mRNA的表达,利用Lipofectamine2000将miR-NC(miR-NC组)、miR-145-5p mimic(miR-145-5p mimic组)、miR-145-5p inhibitor(miR-145-5p inhibitor组)、pc-PAK4质粒分别或联合转染进入A549/GR细胞,未转染的A549/GR细胞为对照组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞法检测细胞凋亡,双荧光素酶报告检测靶向关系,Western印迹检测PAK4蛋白相对表达水平。在裸鼠左腋下皮下注射转染过的A549/GR细胞,分为空白组、miR-145-5p mimic组、pc-PAK4组、miR-145-5p mimic+pc-PAK4组。每隔一天给每只小鼠口服吉非替尼(100 mg/kg)。第24天颈椎脱位法处死裸鼠,完整取出皮下肿瘤,电子天平称重,RT-PCR检测小RNA和靶基因表达,TUNEL染色检测凋亡。结果 与正...     

TGF-β1通过调节miR-155表达影响胃癌相关巨噬细胞表型的研究

目的探讨miR-155参与TGF-β1对胃癌微环境中的巨噬细胞分型的调控机制。方法免疫组织化学法检测胃癌组织内M2型巨噬细胞标志物CD163的表达和TGF-β1的表达;定量PCR检测胃癌细胞上清培养佛波酯诱导的巨噬细胞中miR-155的表达水平,并观察将TGF-β1受体阻滞后,胃癌细胞上清对miR-155表达的影响;利用双荧光素酶报告基因实验探讨miR-155对TGF-β1信号通路上的TGF-β1受体Ⅱ的靶向调控作用。结果胃癌组织中CD163、TGF-β1的表达显著高于癌旁组织;胃癌细胞上清作用于佛波酯诱导的巨噬细胞后,巨噬细胞内miR-155表达显著降低,TGF-β1作用于巨噬细胞后,miR-155表达降低,而阻断TGF-β1受体作用后,miR-155的表达回升。佛波酯诱导的巨噬细胞中过表达miR-155可使细胞分泌IL-10减少,IL-12增加。双荧光素酶报告基因实验结果显示miR 155可靶向负调控TGF-β1受体Ⅱ。结论胃癌微环境中的TGF-β1可以降低肿瘤相关巨噬细胞内miR-155的表达,后者具有调节巨噬细胞分型的作用,miR-155可通过调节TGF-β1受体Ⅱ对TGF-β1信号通路进行负反馈调节。     

长链非编码RNA H19靶向miR-194-5p抑制LPS诱导心肌细胞炎症反应

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)H19对LPS诱导的心肌细胞炎症因子分泌的影响及其机制。方法建立LPS诱导的心肌细胞H9c2损伤模型;pc-con组(转染pc-con)、pc-H19组(转染pc-H19)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-194-5p组(转染anti-miR-194-5p)、pc-H19+miR-con组(pc-H19和miR-con共转染)、pc-H19+miR-194-5p组(pc-H19和miR-194-5p共转染)均用脂质体法转染至H9c2细胞;qRT-PCR检测各组细胞中H19、miR-194-5p的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与Control组相比,LPS组心肌细胞中H19表达下调,miR-194-5p表达上调,且过表达H19、敲减miR-194-5p均可抑制LPS诱导的心肌细胞H9c2炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌;miR-194-5p是H19的靶标。过表达miR-194-5p可逆转过表达H19对LPS诱导心肌细胞炎症因子TNF-α、IL-6、 IL-1β的抑制作用。结论 H19可抑制LPS诱导的心肌细胞炎症因子的分泌,其机制可能与靶向miR-194-5p有关,可为心血管损伤的治疗提供新靶点。     

miR-31-5p通过靶向抑制胰岛素降解酶发挥促进动脉粥样硬化作用

目的　探讨miR-31-5p是否通过靶向抑制胰岛素降解酶（IDE）发挥促进动脉粥样硬化作用。方法　应用生物信息学和双荧光素酶技术筛选并验证miR-31-5p与IDE　3’UTR靶向结合情况。miR-31-5p　mimic和inhibitor转染THP-1巨噬细胞及THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞;采用miR-31-5p　agomir处理高脂饮食的ApoE^－/－小鼠;Western　blot检测IDE蛋白表达;ELISA检测ApoE^－/－小鼠血浆脂质水平;油红O染色检测小鼠肝脏脂质蓄积及主动脉粥样硬化斑块病变。结果　miR-31-5p靶向结合IDE　3’UTR　并引起转录抑制;miR-31-5p可下调THP-1细胞、小鼠肝脏和主动脉组织中IDE蛋白表达（P<　0.05）,同时引起泡沫细胞和小鼠血清中脂质含量增加（P<　0.05）,小鼠主动脉窦和主动脉树病变面积明显增加（P<0.05）。结论　miR-31-5p可通过靶向抑制IDE发挥促进动脉粥样硬化作用。     

miR-301a调节小鼠巨噬细胞中炎症因子的表达

目的探讨miR-301a对巨噬细胞炎症因子表达水平的影响,从microRNA角度阐明动脉粥样硬化的发病机制,为动脉粥样硬化的防治提供新的思路。方法高脂喂养Apo E-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型,收集小鼠主动脉血管,利用real-time PCR检测组织中miR-301a的表达水平;利用脂质体在RAW264.7细胞中转染miR-301a mimic和miR-301a inhibitor,用real-time PCR检测细胞中miR-301a水平,并检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平,用Western blot检测NF-κB抑制因子(NKRF)蛋白水平,用免疫荧光染色检测p65细胞定位。结果在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a的表达水平升高;在RAW264.7细胞中过表达miR-301a可抑制NKRF蛋白水平,促进p65细胞核定位,升高细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达;在RAW264.7细胞中低表达miR-301a可升高NKRF蛋白水平,促进p65细胞质定位,减少细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达。结论在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a表达水平升高;在RAW264.7细胞中miR-301a通过调节NKRF的表达影响p65活性进而调控TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达,提示microRNA在动脉粥样硬化发病的炎症机制中具有重要作用。     

LncRNA ZBTB20-AS1靶向miR-132-3p/MAPT轴影响阿尔茨海默病的发生发展

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA锌指蛋白ZBTB20反义RNA1(ZBTB20-AS1)靶向miR-132-3p/微管相关蛋白tau(MAPT)轴对阿尔茨海默病(AD)发生发展的影响。方法采用Aβ_(25～35)(20μmol/L)处理SK-N-SH细胞构建AD细胞模型。将si-con、si-ZBTB20-AS1、miR-con、miR-132-3p mimics、si-MAPT分别转染SK-N-SH细胞,经Aβ_(25～35)处理后,反转录及荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ZBTB20-AS1和miR-132-3p的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测MAPT、细胞周期蛋白(Cyclin)D1和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证ZBTB20-AS1和miR-132-3p、miR-132-3p和MAPT的靶向关系。结果 AD细胞模型中ZBTB20-AS1和miR-132-3p的表达水平显著升高,MAPT的表达水平显著降低。沉默ZBTB20-AS1、过表达miR-132-3p或沉默MAPT均可促进SK-N-SH细胞增殖,抑制Aβ_(25～35)诱导的细胞凋亡。miR-132-3p是ZBTB20-AS1的靶基因,ZBTB20-AS1可靶向负性调控miR-132-3p表达。MAPT是miR-132-3p的靶基因,miR-132-3p可靶向调控MAPT表达。抑制miR-132-3p表达或过表达MAPT均可逆转沉默ZBTB20-AS1对Aβ_(25～35)诱导的SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响。结论沉默ZBTB20-AS1通过调控miR-132-3p/MAPT轴可促进SK-N-SH细胞增殖,抑制Aβ_(25～35)诱导的SK-N-SH细胞凋亡。     

MicroRNA-26b对糖氧剥夺诱导的BV-2细胞表达白介素-6的靶向调控作用研究

目的研究microRNA-26b对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导BV-2细胞释放白介素-6(interleukin6,IL-6)的影响。方法 OGD诱导小鼠胶质细胞系BV-2细胞活化,通过ELISA和RT-qPCR定量培养上清IL-6浓度及BV-2细胞IL-6 mRNA水平。转染IL-6microRNA-26b模拟物(miR-26b mimics)和阴性对照(negative control,NC)至BV-2细胞后,经OGD处理检测培养上清IL-6浓度。通过共转miR-26b mimics和携带有IL-6 mRNA3'UTR的双荧光素酶报告质粒至293T细胞,明确miR-26b对IL-6的靶向调节作用。结果与对照组比较,经1 h OGD处理后的BV-2细胞IL-6 mRNA水平和培养上清中IL-6增加(P<0.05);转染microRNA-26b可以减少OGD引起的IL-6释放(P<0.05);共转miR-26b和双荧光素酶报告质粒后萤火虫荧光素酶活性高于对照组(P<0.05)。结论microRNA-26b可结合至IL-6 mRNA的3'UTR区,可能通过这一机制下调OGD诱导的BV-2细胞IL-6表达。     

过氧化物酶增殖体激活受体γ通过上调miR-124表达抑制急性肺损伤肺泡巨噬细胞炎症反应

目的探讨PPARγ上调miR-124表达对急性肺损伤(ALI)肺泡巨噬细胞炎症反应的抑制作用及分子机制。方法分离和培养10例ALI和10例健康非吸烟者的肺泡巨噬细胞,检测PPARγ、miR-124及其靶基因TRAF6的表达变化;分别用PPARγ激动剂罗格列酮(RGZ)、PPARγ拮抗剂GW9662或miR-124抑制剂(antagomir-124)干预人肺泡巨噬细胞后,real time RT-PCR检测miR-124及其靶基因TRAF6的表达;人单核细胞THP-1细胞转染含miR-124启动子区的虫荧光素酶报告基因质粒,再经PPARγ激动剂RGZ或拮抗剂GW9662处理,检测报告基因活性;小鼠经LPS刺激后再经PPARγ激动剂RGZ处理,或经antagomir-124预处理后,再经PPARγ激动剂RGZ处理后,real time RT-PCR检测小鼠肺组织中miR-124、炎症相关因子TRAF6、IL-6、TNF-α的表达。结果 ALI患者肺泡巨噬细胞中PPARγ与miR-124的表达均降低,而miR-124靶基因TRAF6表达显著升高;激动剂活化的PPARγ能上调人肺泡巨噬细胞的miR-124,并下调miR-124靶基因TRAF6,而PPARγ拮抗剂GW9662可削弱罗格列酮上调miR-124的表达进而减弱miR-124对其靶基因TRAF6表达的抑制作用,并且miR-124抑制剂减弱PPARγ对TRAF6表达的抑制作用;活化的PPARγ显著促进miR-124启动子活性,而PPARγ拮抗剂GW9662,明显减弱PPARγ激动剂罗格列酮对miR-124启动子的转录活性的上调作用;在LPS诱导的小鼠ALI模型上,活化的PPARγ通过上调miR-124抑制小鼠肺组织IL-6、TNF-α的表达,而PPARγ拮抗剂GW9662和antagomir-124预处理均减弱PPARγ对小鼠肺组织IL-6、TNF-α的表达的抑制作用。结论PPARγ激活后可通过上调miR-124表达抑制ALI肺泡巨噬细胞的炎症反应。