自噬在胶质母细胞瘤化疗中的作用

胶质母细胞瘤是化疗耐药性最强的肿瘤,其对诱导凋亡的化疗抵抗,而越来越多的证据显示其对诱导自噬的化疗较少抵抗。虽然很多化疗方案都参与调节自噬过程,但胶质母细胞瘤的化疗效果一直不理想,这与其耐药性密切相关。目前,自噬在胶质母细胞瘤化疗中具体起什么作用及其作用机制还不十分清楚。作者对近年来自噬在胶质母细胞瘤化疗中的作用的研究进展进行了综述。     

细胞自噬在肿瘤化疗耐药中的作用

自噬是一种进化上保守的溶酶体依赖的自身降解途径,不仅在保持基因组完整性和维持内环境稳定方面发挥重要作用,也与肿瘤的发生发展和肿瘤耐药密切相关。一方面,保护性自噬能够促进耐药细胞生存;另一方面,自噬作为程序性死亡机制能够直接促进耐药肿瘤细胞死亡。本文综述自噬在肿瘤细胞化疗耐药中的研究进展和相关的信号转导通路,为克服肿瘤多药耐药提供新思路。     

Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞自噬及凋亡的影响

目的:研究Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞自噬及凋亡的影响。方法:培养视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞,构建Survivin-shRNA载体。按照处理不同分为Survivin-shRNA组、GFP组和CON组。分别采用流式细胞术检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞凋亡和细胞周期的影响,应用MTT法检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞活性的影响,Western blot法检测Survivin-shRNA对HXO-RB44 细胞自噬相关蛋白LC3、p62 与mTOR 表达的影响。结果:流式细胞术结果表明,与Control组和GFP组相比,Survivin-shRNA组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;随着作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组（P＜0.05）。MTT结果发现Survivin-shRNA可抑制HXO-RB44细胞增殖活性,与Control组和GFP组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blot结果发现,与对照组相比,LC3表达量显著增加（P＜0.01）;而mTOR表达量降低（P＜0.01）。结论:Survivin-shRNA可促进视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。     

细胞自噬在肿瘤中的作用

自噬为一种细胞的自我消耗过程,其具有潜在的抗肿瘤生物学活性,亦与肿瘤耐药有关.该文从自噬的调节机制入手,综述自噬参与肿瘤发生的机制,自噬在肿瘤治疗中的作用及应用,以期为自噬在临床上的应用提供依据.     

紫檀芪诱导人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞的细胞凋亡及其机制研究

背景与目的：紫檀芪是一种天然抗氧化剂,其抗视网膜母细胞瘤的效果仍不明确。拟探讨紫檀芪对人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞的细胞增殖、细胞凋亡及细胞自噬的作用,并初步阐明其作用机制。方法：采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法测定细胞的增殖活力,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,吖啶橙染色观察细胞内自噬囊泡的变化,蛋白［质］印迹法(Western blot)检测LC3B及P62蛋白的表达。结果：紫檀芪显著抑制WERI-Rb-1细胞的增殖活力(P<0.01),以25、50和100 μmol/L的药物浓度作用细胞24 h时,细胞增殖活力分别为(93.02±0.47)%、(55.10±2.04)%和(30.33±1.45)%;50 μmol/L紫檀芪处理细胞12、24和48 h时,细胞增殖活力分别为(88.38±3.70)%、(53.37±1.17)%和(29.60±1.05)%。紫檀芪显著诱导细胞凋亡(P<0.01),对照组、24和48 h细胞的凋亡率分别为(4.08±0.79)%、(13.44±2.12)%和(23.49±2.01)%。紫檀芪能够激活WERI-Rb-1细胞发生细胞自噬,上调LC3蛋白的表达,下调P62蛋白的表达,增加细胞内自噬囊泡的数量(P<0.01)。3-MA及Beclin1 siRNA抑制细胞自噬后能够部分逆转紫檀芪的抗肿瘤作用(P<0.01)。3-MA抑制细胞自噬后,紫檀芪处理组的细胞凋亡率为(12.97±2.09)%,3-MA+紫檀芪组为(8.35±1.11)%。siRNA敲低Beclin1后,紫檀芪处理组和siRNA+紫檀芪组的细胞凋亡率分别为(13.80±2.19)%和(9.62±0.52)%。结论：紫檀芪可以显著抑制WERI-Rb-1细胞的细胞增殖并激活细胞自噬促进细胞凋亡。     

丙戊酸促进神经母细胞瘤细胞自噬性死亡

目的探讨丙戊酸(VPA)对神经母细胞瘤细胞自噬性死亡的调控。方法用含不同浓度的VPA培养基培养SH-SY5Y细胞,应用MTT法检测细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞损伤,单丹磺酰尸胺(MDC)染色评价细胞质内酸性自噬泡的形成,Western blotting法检测巨自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值及Beclin-1的表达。结果与对照组比较,VPA孵育48 h后,SH-SY5Y细胞存活率明显降低,且具有剂量依赖性(P<0.05);SH-SY5Y细胞培养基中LDH明显增高,且具有剂量依赖性(P<0.05);VPA诱导细胞内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值及Beclin-1的表达水平明显上调(P<0.05)。结论 VPA诱导神经母细胞瘤细胞细胞自噬性死亡,为神经母细胞瘤的治疗提供新的手段。     

miRNA与视网膜母细胞瘤耐药相关性的研究进展

视网膜母细胞瘤（retinpblastorua,RB）是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤,严重威胁患儿的视功能及生命安全。化疗是RB临床治疗的重要手段,但产生化疗耐药性是造成RB治疗失败的重要原因。微小RNA（miRNA）是一类长约21~23个核苷酸的非编码小分子RNA,能在转录后水平调控靶基因的表达,目前已成为肿瘤研究的热点之一。miRNA在肿瘤中表达具有组织特异性,能够参与不同肿瘤的发生发展过程。近年来研究发现,多种miRNA在RB中异常表达,可通过细胞凋亡、药物转运、自噬和长链非编码RNA（lncRNA）等调控机制,参与RB化疗耐药过程。本文对miRNA调控RB耐药的最新研究进行综述,以期为解决RB化疗耐药问题找到新的生物标志物和治疗靶点。     

自噬在膀胱癌中的研究进展

自噬是一种广泛存在于真核生物中高度保守的分解代谢和能量生成过程,通过促进细胞内物质或受损细胞器的降解,为细胞提供可再循环利用的单体物质,用以合成新的成分并产生能量.自噬异常与多种疾病,尤其是癌症的发生、发展密切相关.自噬可以在正常情况下预防癌症的发展,而一旦发展为癌症,自噬又通常会促进肿瘤细胞的存活和生长.大量研究表明...     

冬凌草甲素逆转黑色素瘤细胞顺铂耐药的作用及机制

目的：探讨冬凌草甲素（Ori）逆转人黑色素瘤细胞顺铂（DDP）耐药的作用及其机制。方法：分别将黑色素瘤DDP耐药细胞A375/DDP和M14/DDP分为对照组、2μmol/L Ori组、4 mg/L DDP组和2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组。CCK-8法、Transwell实验、Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞术分别检测各组细胞的增殖活力、侵袭和迁移能力及凋亡水平,透射电子显微镜观察自噬小体,免疫荧光染色法观察微管相关蛋白轻链3(LC3)点状结构,WB法检测A375/DDP细胞自噬相关蛋白Beclin-1、p62、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的表达。结果:与4 mg/L DDP组相比,2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著下降（均P<0.01）,凋亡水平显著升高（P<0.01）。4 mg/L DDP组细胞中可见大量自噬小体以及LC3点状染色,但2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组仅可见少量。与对照组相比,4 mg/L DDP组细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达水平均显著升高（均P<...     

骨肉瘤化疗耐药与自噬的研究进展

骨肉瘤是起源于间叶组织的恶性肿瘤,多发生于儿童和青少年,是最常见的原发于骨的恶性肿瘤,好发于股骨远端和胫骨近端.单纯依靠手术治疗效果差,容易复发和转移.化疗和手术的结合是骨肉瘤的重要治疗手段,而多药耐药的发生是导致骨肉瘤化疗失败的主要原因之一.自噬对化疗耐药的影响主要认为其是骨肿瘤细胞逃避凋亡的一种重要机制,抑制自噬则可以显著提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.本文主要探讨骨肉瘤化疗耐药与自噬相关因子的关系、相关机制和最新研究.     

顺铂耐受胶质瘤细胞株诱导和细胞自噬的观察

背景与目的:明确胶质瘤耐药相关分子机制,有助于寻找新的治疗对策。我们将诱导对顺铂耐药的脑胶质瘤细胞株,探讨细胞自噬和胶质瘤细胞顺铂耐受的关系。方法:应用人胶质瘤细胞株U251,采用顺铂剂量梯度爬升筛选方法,诱导耐药胶质瘤细胞株;用MTT法测定该耐药细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50);电镜和GFP-LC3荧光染色检测细胞内自噬体;AnnexinV-FITC染色检测细胞凋亡;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1以及凋亡分子Caspase-3水平。结果:我们诱导获得的耐药胶质瘤细胞株U251/CP2对顺铂半数抑制浓度(IC50)较亲代U251增加了62.7倍(分别是1.2±0.4μg/ml和76.5±22.5μg/ml)。电镜和GFP-LC3荧光染色观察表明胶质瘤细胞呈现典型的自噬特征,表现为电镜下广泛的自噬性空泡的出现和GFP-LC3斑点状分布,且能够被自噬抑制剂3-MA和ERK抑制剂PD98059抑制。凋亡检测表明,经顺铂处理后,U251/CP2较U251凋亡率低,3-MA和PD98059能够显著增强顺铂对U251/CP2的凋亡诱导作用。Western blot检测表明,U251/CP2较U251具有显著上调的LC3和Beclin1水平,而Caspase-3水平较低。结论:U251胶质瘤细胞能够通过自噬作用保护细胞免受化疗药物顺铂的杀伤,从而免于发生细胞凋亡。     

自噬与急性白血病治疗

自噬在急性白血病发生、发展中具有重要的双重作用:一方面可以诱导白血病细胞的凋亡,抑制疾病发展,另一方面可以对白血病细胞产生保护作用而维持细胞生存,以及抵抗化疗药物诱导的凋亡。目前已有研究发现通过调控自噬可增强急性白血病细胞的药物敏感性,促进白血病细胞死亡。因此,通过调控自噬有望为难治复发急性白血病找到更为有效的治疗措施。文章对近年来自噬与急性白血病治疗相关研究进展进行综述。     

自噬在EGFR-TKI类肿瘤靶向药物对肺癌的治疗和耐药中作用的研究进展

表皮生长因子受体激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor, EGFR-TKI）是一类针对肿瘤细胞中EGFR的异常活化而开发的肿瘤靶向药物,可以有效抑制带有EGFR敏感突变的肿瘤细胞的生长。然而先天性以及获得性耐药严重制约了该类药物的使用。近些年的研究发现自噬（autophagy）,作为一个细胞编码的高度保守的应对压力的存活机制,其与肿瘤的发生发展及抗肿瘤药物的耐药密切相关。EGFR的激活可以通过多条通路调控自噬。EGFR-TKI也可以诱导自噬,且自噬在EGFR-TKI的治疗和产生耐药性的过程中发挥着双刃剑的作用：一方面EGFR-TKI诱导的自噬是肿瘤细胞的一个保护机制,联合使用自噬抑制剂可以增强药物的细胞毒性效果;同时还有研究证明EGFR-TKI诱导的高水平自噬可以在凋亡缺陷的细胞中造成自噬性死亡,这种情况下联合使用自噬诱导剂则可能产生更好的效果。因此,针对不同的情况通过调控自噬以提高EGFR-TKI的治疗效果是一个颇具前景的治疗方案。本文对EGFR-TKI和自噬相关的信号通路进行了阐述,并对自噬在EGFR-TKI类药物对肺癌的治疗和耐药中作用的最新研究进展进行了总结,为设计联合方案提高EGFR-TKI的抑制效果,降低耐药性提供线索。     

HSP27在卵巢癌顺铂耐药细胞系中的作用

目的探讨HSP27在卵巢癌耐药细胞系及敏感细胞系中的表达及其在卵巢癌顺铂耐药中的作用。方法通过 RT-PCR及Western blot检测卵巢癌细胞株OV2008和CI3K中HSP27 mRNA和蛋白的表达水平;将合成的针对HSP27基因的特异性siRNA及正义真核表达质粒pEGFP-C1-HSP27(命为p-HSP27),分别转染CI3K和OV2008细胞。通过RT-PCR及Western blot检测转染前后CI3K及OV2008细胞中HSP27 mRNA和蛋白表达的变化;MTT及流式细胞仪分别测定转染前后CI3K及OV2008细胞对顺铂敏感度的变化。结果(1)HSP27 在CI3K细胞中的mRNA和蛋白表达水平显著高于OV2008细胞,差异有统计学意义(P<0.05);(2)转染siRNA 48 h,CI3K细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50 )明显低于转染空载体和未转染的CI3K细胞(P<0.05);转染正义质粒p-HSP27 48 h,OV2008细胞对顺铂的IC50明显高于转染空载体和未转染的OV2008细胞(P<0.05);(3)转染siRNA及正义质粒 48 h,再用顺铂作用CI3K细胞24 h。转染siRNA的CI3K细胞的凋亡率比转染空载体和未转染的CI3K细胞的凋亡率明显增加,前者明显高于后两者(P<0.05);转染正义质粒的OV2008细胞的凋亡率比转染空载体和未转染的细胞的凋亡率明显下降,前者明显低于后两者(P<0.05)。结论CI3K及OV2008细胞内 HSP27基因表达的强弱可影响其对顺铂的敏感度,提示HSP27可能在卵巢癌顺铂耐药中起重要作用。     

Autophagy and multidrug resistance in cancer

Multidrug resistance (MDR) occurs frequently after long-term chemotherapy,resulting in refractory cancer and tumor recurrence.Therefore,combatting MDR is an important issue.Autophagy,a self-degradative system,universally arises during the treatment of sensitive and MDR cancer.Autophagy can be a double-edged sword for MDR tumors:it participates in the development of MDR and protects cancer cells from chemotherapeutics but can also kill MDR cancer cells in which apoptosis pathways are inactive.Autophagy induced by anticancer drugs could also activate apoptosis signaling pathways in MDR cells,facilitating MDR reversal.Therefore,research on the regulation of autophagy to combat MDR is expanding and is becoming increasingly important.We summarize advanced studies of autophagy in MDR tumors,including the variable role of autophagy in MDR cancer cells.     

天然中药单体及衍生物调控非小细胞肺癌自噬的研究新进展

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发病率、病死率高,亟待研发高抗癌活性、低毒副作用的新型疗法.自噬既可诱发NSCLC癌细胞死亡又可介导死亡逃避,多样化的角色使之成为抗癌的新机制.天然中药众多活性单体及其衍生物具备抗NSCLC的活性,甚至可影响其获得性耐药,而对自噬的调控多被证实为其潜在的作用机制.针对多种天然药物来源的萜类化合物、生物碱、膳食多酚、皂苷类化合物及其它活性成分的研究证实,不同单体成分既可影响NSCLC保护性自噬水平,亦可调控其死亡性自噬活性,相应的影响NSCLC的生长及对某些药物的反应性.因而,本文就天然中药成分及其衍生物通过双向调节自噬活性参与NSCLC治疗的最新进展做一综述.     

GRP78在肺腺癌细胞顺铂耐药中的作用

背景与目的糖调节蛋白78(GRP78)在肺癌细胞中表达增高并与其对化疗药物VP-16的耐药性有关,而GRP78的表达与其对化疗药物顺铂的耐药性是否相关,研究较少。本研究旨在通过检测GRP78在人肺腺癌细胞SPCA-1中的表达及顺铂作用后的细胞生存率,研究GRP78在肺腺癌细胞顺铂耐药中的作用。方法依据是否应用诱导剂A23187将细胞分为实验组和对照组,采用RT-PCR、Western blot方法检测各组细胞中GRP78在核酸和蛋白水平的表达,利用MTT法测定细胞在顺铂作用下的生存率,分析GRP78在SPCA-1细胞顺铂耐药中的作用。结果A23187可以明显诱导SPCA-1细胞中GRP78在核酸和蛋白水平的表达,且其表达水平与A23187具有一定的浓度依赖性,MTT检测显示:实验组细胞生存率明显低于对照组,亦呈一定的A23187浓度依赖性。结论在人肺腺癌细胞SPCA-1中,诱导剂A23187可以诱导GRP78核酸和蛋白水平的表达,其表达与肺癌细胞在顺铂作用下的生存率呈负相关,表明GRP78可提高SPCA-1细胞对顺铂的敏感性,与肺癌细胞化疗耐药有一定的相关性。     

自噬对人肺腺癌A549细胞放疗敏感性的影响

背景与目的放射治疗是肺癌最重要的治疗手段之一,然而却因放疗抵抗极易导致肿瘤的复发和转移。放疗可诱导肿瘤细胞自噬发生,最新研究也报道,自噬可能与DNA损伤修复过程相关。本研究旨在探讨通过雷帕霉素上调A549细胞自噬,能否增加细胞放疗敏感性,其过程是否与DNA损伤修复过程相关。方法以人肺腺癌A549细胞作为实验对象,实验设对照组（N）、单纯放疗组（IR）、雷帕霉素联合放疗组（R+ARPA）。采用Western blot检测γ-H2AX蛋白质、Rad51蛋白质、Ku70/80蛋白质、p62蛋白质、LC3蛋白质表达;电镜检测自噬体形成;细胞克隆形成实验检测细胞存活分数（survival fraction, SF）值。结果与单纯放疗组相比,放疗联合雷帕霉素组自噬活性增加,且Rad51、Ku80蛋白质表达减少,细胞增殖能力下降。结论通过雷帕霉素上调自噬可增加肺癌细胞放疗敏感性,其机制可能与抑制DNA损伤修复过程相关。     

沉默 UVRAG 对白血病K562/ADM 细胞自噬及耐药性的影响

目的：探讨沉默紫外线抵抗相关基因（UVRAG）对人白血病 K562/ ADM 细胞自噬及耐药性的影响。方法 Western Blotting 检测 UVRAG 蛋白在 K562及 K562/ ADM 细胞中表达差异。特异性干扰 UVRAG 基因的 UVRAG siRNA 及 Scramble siRNA 在 LipofectamineTM2000介导下转染 K562/ ADM 细胞,CCK-8法、MDC荧光染色及 Western Blotting 分别检测 UVRAG siRNA 转染前后 K562/ ADM 细胞耐药性、自噬水平以及 P-糖蛋白（P-gp）表达的变化。结果 Western Blotting 检测显示 K562/ ADM 细胞中 UVRAG 蛋白表达明显高于K562细胞（P ﹤0.05）;与 K562/ ADM 组及 Scramble siRNA 转染组相比,UVRAG siRNA 转染组 UVRAG 蛋白表达显著下降（P ﹤0.05）,以48 h 效果最佳,提示 UVRAG siRNA 能高效沉默 K562/ ADM 细胞 UVRAG;CCK-8法显示与 K562/ ADM 组及 Scramble siRNA 转染组相比,UVRAGsiRNA 组对阿霉素敏感性显著增高,IC50值明显下降（P ﹤0.05）;MDC 染色荧光显微镜观察到 UVRAG siRNA 转染后 K562/ ADM 细胞胞浆中自噬泡明显减少;Western Blotting 显示 K562/ ADM 细胞中 Beclin-1、P-gp 表达及 P62降解明显高于 K562细胞,与K562/ ADM 细胞及 Scramble siRNA 转染组相比,UVRAG siRNA 转染组 Beclin-1、P-gp 表达及 P62降解显著降低（P 均﹤0.05）。结论 UVRAG 蛋白在 K562/ ADM 细胞中高表达,与白血病 MDR 密切相关;UVRAG siR-NA 下调 UVRAG 表达可降低 K562/ ADM 细胞耐药性,其机制可能与降低自噬水平及下调 P-gp 表达有关。     

MFG-E8对卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感度的影响及分子机制

目的 探讨沉默MFG-E8基因对SKOV3细胞抗癌药物敏感度的影响及其相关机制.方法 小干扰技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中MFG-E8基因并对干扰效率进行测定.CCK-8检测转染MFG-E8 siRNA后SKOV3细胞对顺铂的敏感度.qRT-PCR检测MFG-E8基因沉默后多重耐药蛋白ABCB1及ABCC1 mRNA的...