Bcl-xL反义寡核苷酸对裸鼠人鼻咽癌移植瘤化疗药物敏感性的影响

目的观察Bcl-xL反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠人鼻咽癌移植瘤化疗药物顺铂敏感性的影响.方法建立裸鼠人鼻咽癌移植瘤模型,分为对照组、ASODN治疗组、顺铂(DDP)治疗组、ASODN DDP联合治疗组,观察裸鼠瘤体变化及组织形态学改变.结果单独应用ASODN和DDP治疗组的抑瘤率分别为14.2%和30.9%,而在相同条件下,联合用药组效果最明显,抑瘤率为52.2%,较ASODN、DDP单独应用差异有显著性.结论 ASODN与DDP联合化疗有协同作用,ASODN可以提高肿瘤细胞对顺铂的敏感性,具有增效作用.     

白桦酯醇对人卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：观察白桦酯醇对人卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用及对Bcl-2和Caspase-3表达的影响.方法：建立卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型,将30只荷瘤鼠随机分为5组：空白对照组、白桦酯醇高、中、低浓度组和顺铂组（阳性对照）.21天后处死裸鼠,称取瘤重量,观察抑瘤率;免疫组织化学SP法检测移植瘤Bcl-2和Caspase-3的表达.结果：高、中、低组抑瘤率为54.19％、35.75％、20.67％,与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;高剂量组抑瘤率与顺铂组无差异（P＞0.05）.免疫组化显示,各治疗组Bcl-2的表达较空白对照组明显下调;Caspase-3的表达较空白组明显活化,其高剂量组表达与阳性药物顺铂相当.结论：白桦酯醇有一定的抑制卵巢癌生长的作用,可能与其诱导细胞凋亡有关.     

手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO的增殖抑制作用

目的:研究手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO体外增殖及裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其机制。方法:MTT法检测手霉素及手霉素联合顺铂对3AO细胞的体外增殖抑制作用;建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,采用免疫组织化学SP法检测手霉素及手霉素联合顺铂对移植瘤组织survivin、NF-κB、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和caspase-3蛋白的表达,FCM检测移植瘤细胞周期和细胞凋亡率的变化。结果:手霉素对3AO细胞的增殖有明显抑制作用,且呈时间和剂量依赖效应(P<0.05)。手霉素可增强顺铂对3AO细胞的增殖抑制作用,随着手霉素浓度的增加(10～40 μmol/L),对3AO细胞的增殖抑制作用增强。手霉素或顺铂单药组以及联合用药组的裸鼠移植瘤体积均明显小于对照组,其中联合用药组裸鼠移植瘤体积明显小于手霉素或顺铂单药组(P<0.05)。各给药组裸鼠移植瘤组织中survivin、NF-κB和VEGF蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),其中联合用药组又明显低于各单药组(P<0.05);各给药组caspase-3蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。手霉素单药组、顺铂单药组和手霉素联合顺铂组的细胞凋亡率依次升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,G0/G1期细胞依次减少(P<0.05),G2/M期细胞依次增多(P<0.05),S期细胞变化不明显。结论:手霉素联合顺铂可明显抑制3AO细胞的体内外增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin、NF-κB和VEGF以及上调caspase-3蛋白的表达有关。     

消癥抑瘤方对人类顺铂耐药卵巢癌细胞凋亡的影响

 目的　检测中药消癥抑瘤方对顺铂（DDP）耐药卵巢癌OVCAR／DDP细胞多药耐药的逆转活性,并探讨其相关作用机制。方法　OVCAR／DDP细胞接种于40只裸鼠腋下,建立移植瘤模型,按随机数字表分为4组,依据不同的药物组合分为0.9 %氯化钠溶液对照组、DDP单独用药组、低剂量消癥抑瘤方+DDP组、高剂量消癥抑瘤方+DDP组。1个月后处死裸鼠,计算各组抑瘤率,末端转移酶介导脱氧尿苷三磷酸（TUNEL）法检测OVCAR／DDP细胞的凋亡率,RT-PCR检测移植瘤组织中Survivin mRNA的表达。结果　0.9 %氯化钠溶液对照组比较,DDP单独用药组、低剂量消癥抑瘤方+DDP组、高剂量消癥抑瘤方+DDP组对卵巢癌OVCAR／DDP细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为（5.56±1.14）%、（18.42±7.73）%、（31.59±12.58）%,各组间差异有统计学意义（F＝8.64,P＜0.01）。0.9 %氯化钠溶液对照组、DDP单独用药组、低剂量消癥抑瘤方+DDP组、高剂量消癥抑瘤方+顺铂组OVCAR／DDP细胞移植瘤组织细胞凋亡率分别为（2.35±1.04）%、（4.56±1.61）%、（12.42±3.68）%、（21.59±5.17）%,0.9 %氯化钠溶液对照组与DDP单独用药组比较差异无统计学意义（t＝0.84,P＞0.05）,2个消癥抑瘤方组与DDP单独用药组比较差异均有统计学意义（t＝5.89,P＝0.004;t＝9.83,P＝0.001）。2个消癥抑瘤方组以剂量依赖性下调裸鼠移植瘤OVCAR／DDP细胞Survivin mRNA的表达。结论　消癥抑瘤方可以增加DDP对卵巢癌顺铂耐药OVCAR／DDP细胞的抗肿瘤活性,下调Survivin的表达可能是其主要的作用机制。     

罗格列酮对肺腺癌裸鼠移植瘤化疗增敏作用的实验研究

目的探讨罗格列酮对人肺腺癌裸鼠移植瘤化疗增敏作用及其机制。方法体外培养人肺癌A549细胞,建立裸鼠模型,将28只成瘤雌裸小鼠随机分成7组:Ⅰ组给予生理盐水0.2 ml;Ⅱ组给予顺铂1 mg/kg;Ⅲ组给予顺铂4 mg/kg;Ⅳ组给予罗格列酮10 mg/kg;Ⅴ组给予罗格列酮30 mg/kg;Ⅵ组给予罗格列酮10 mg/kg+顺铂1 mg/kg;Ⅶ组给予罗格列酮30 mg/kg+顺铂1 mg/kg。隔天腹腔注射给药,共8次。于最后一次给药后48 h处死各组小鼠,测量皮下移植瘤体积和瘤重;HE染色观察移植瘤的组织形态变化;免疫组化检测PPARγ、bcl-2和caspase-3蛋白表达情况。结果各实验组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤重明显轻于对照组(P<0.01),瘤体积明显小于对照组(P<0.01)。低、高剂量ROZ联合用药组较低剂量顺铂组抑瘤作用明显增强(P<0.05),其瘤重抑制率分别为52.11%和83.80%。低、高剂量罗格列酮组与对照组比较,PPARγ、caspase-3的表达水平上调,bcl-2表达水平下调,具有显著性差异(P<0.05),联合用药组该调节作用进一步增强(P<0.01)。结论罗格列酮对人肺腺癌裸鼠移植瘤化疗具有增敏作用,其作用机制可能是上调PPARγ和caspase-3表达,下调bcl-2表达。     

MicroRNA-129-2对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠移植瘤的抑制及其可能的机制

目的：探讨microRNA-129-2（miR-129-2）对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其可能的机制。方法：建立人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,按皮下注射的药剂将32只模型小鼠用随机数字表法分为4组：对照组（皮下注射生理盐水0.2 ml/d）、空白质粒组\[(50 μg/只,0.2 ml/次,1次/d\]、顺铂（cisplatin,DDP）阳性对照组(1 mg/kg, 0.2 ml/次,1次/d）、miR-129-2组\[(50 μg/只,0.2 ml/次,1次/d\],共治疗5周,记录裸鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量。流式细胞术检测各组移植瘤组织S+G2-M期细胞比例,免疫组化和Western blotting方法检测miR-129-2对移植瘤组织中转录因子SOX4表达的影响。结果：成功建立CNE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,治疗第22天起,miR-129-2组移植瘤的体积和质量均显著低于对照组和空白质粒组（P<0.01）,而与DDP组始终无明显差异（P>0.05）;5周后,miR-129-2组荷瘤小鼠的体质量显著高于其他3组（均P<001）。miR-129-2组移植瘤组织S+G2-M期细胞比例显著低于与对照组和空白质粒组（P<0.01）,与DDP组无显著差异（P>0.05）。移植瘤组织SOX4表达显著高于瘤旁组织, miR-129-2组和DDP组移植瘤组织内SOX4蛋白表达均较对照组显著降低（均P<0.01）,且miR-129-2组SOX4蛋白表达显著低于DDP组 （P<0.05）。结论： miR-129-2对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠皮下裸移植瘤的生长有明显的抑制作用,其机制可能与SOX4表达下调有关。     

环孢菌素A联合顺铂对Lewis肺癌裸鼠移植瘤的协同抑制作用

目的：探讨亲环蛋白A（cyclophiline A, CyPA）抑制剂环孢菌素A（cyclosporine A, CsA）联合顺铂（Cisplatin,DDP）化疗提高肺癌细胞对DDP的敏感性。方法： C57BL/6裸鼠随机分为4组：空白对照组、DDP组、CsA组和联合组（DDP+CsA）,每组各10只。裸鼠左侧腋部皮下注射100 μl细胞密度为5×106/ml的小鼠Lewis肺癌细胞株（3LL）细胞悬液,接种2 d后开始腹腔给药,DDP给药剂量为2 mg/kg,每3 d 1次,共3次;CsA给药剂量5 mg/kg,隔天1次,共3次;此后实验组每周1次,维持血药浓度。空白对照组不给药。接种后每3天观察一次肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线。接种35 d后处死裸鼠取出瘤块,H-E染色观察组织形态学变化,免疫组化法观察移植瘤中Ki-67蛋白的表达情况。结果：联合组裸鼠的移植瘤体积（P<0.01）、移植瘤质量（P<0.05）、肿瘤细胞密度（P<0.05）、核分裂象（P<0.05）均较其余3组显著降低;DDP组和CsA组裸鼠移植瘤体积、瘤质量、肿瘤细胞密度和核分裂象均较空白对照组低（均P<0.05）。免疫组化观察联合组移植瘤组织的Ki-67表达水平明显降低。结论：免疫抑制剂CsA与DDP联合用药可提高肺癌细胞对DDP的敏感性,协同抑制肺癌细胞移植瘤的生长。     

奈达铂对裸鼠MGC-803胃癌移植瘤抑制作用及对p53基因表达影响

目的 奈达铂(Nedaplatin,NDP)是第2代铂类化合物,抗肿瘤的机制与顺铂(Cisplatin,DDP)相同,其肾脏和胃肠道等不良反应均小于DDP,且无需水化,使用方便.本研究探讨NDP对裸鼠MGC-803胃癌移植瘤的抑制作用及对p53基因表达的影响.方法 制备MGC-803胃癌荷瘤裸鼠模型,MGC-803人胃癌细胞株接种裸鼠约1周时间,待肿瘤生长至直径约5～9 mm随机分为空白对照组、DDP组和NDP低、中和高剂量组,每组8只.分别予以腹腔注射生理盐水、顺铂、不同剂量奈达铂(1.0、2.0和3.0 mg/kg),采用蛋白质印迹法及RT-PCR法检测瘤体中p53基因的表达.结果 空白对照组、DDP组和NDP低、中和高剂量组p53 mRNA表达量分别为0.297±0.024、0.892±0.098、0.444±0.016、0.561±0.034和0.585±0.021.空白对照组、DDP组和NDP低、中和高剂量组p53蛋白表达量分别为0.295±0.027、0.541±0.032、0.316±0.034、0.408±0.028和0.525±0.041.p53mRNA及蛋白在DDP组和NDP组相对表达量均高于空白对照组,P＜0.05.与DDP组对比,p53 mRNA在NDP组均降低,P＜0.05;p53蛋白表达在NDP低剂量组和NDP中剂量组中均降低(P＜0.05),而在NDP高剂量组中表达差异无统计学意义,P＞0.05.NDP不同浓度化疗组间比较,p53 mRNA及蛋白表达水平呈量效关系,即随着药物剂量增大,其表达量增高.结论 NDP能增加MGC-803胃癌荷瘤裸鼠肿瘤组织p53 mRNA及蛋白表达水平,但与DDP相比未见明显优势.     

尼美舒利联合顺铂对肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制探讨

目的 研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利(NIM)单独以及与顺铂联合对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长、Ki67及Caspase-3表达的影响,并进一步探讨其机制.方法 将裸鼠用统计学中的依体重按随机数字表法分为4组:对照组、尼美舒利组、顺铂组和联合用药组(尼美舒利+顺铂).将肺腺癌A549细胞接种至裸鼠皮下,并给予相应的药物治疗21d,观察移植瘤生长情况.免疫组化法检测Caspase-3及Ki67的表达变化.结果 尼美舒利联合顺铂对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用较单独用药明显,抑瘤率尼美舒利组为44.33％,顺铂组为53.61％,联合用药组为80.41％ (P ＜0.05).Caspase-3的表达率在联合用药组(67.43±23.57)％、顺铂组(48.40±20.37)％、尼美舒利组(38.65±15.37)％明显高于对照组(27.63±13.03)％,P＜0.05,联合用药组Caspase-3表达率(67.43±23.57)％高于顺铂组(48.40±20.37)％和尼美舒利组(38.65±15.37)％,P＜0.05.Ki67的表达率在联合用药组(24.34±15.90)％、顺铂组(40.85±22.47)％、尼美舒利组(53.33±19.67)％低于对照组(80.43±16.88)％,P＜0.05,且联合用药组Ki67的表达率(24.34±15.90)％低于顺铂组(40.85±22.47)％和尼美舒利组(53.33±19.67)％,P＜0.05.结论 尼美舒利可抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,与顺铂联合可增强顺铂对肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞Ki67表达,增强Caspase-3表达,抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

Exogenous p53 Upregulated Modulator of Apoptosis (PUMA) Decreases Growth of Lung Cancer A549 Cells

Purpose: To investigate the influence of exogenous p53 upregulated modulator of apoptosis (PUMA) expressionon cell proliferation and apoptosis in human non-small cell lung cancer A549 cells and transplanted tumor cellgrowth in nude mice. Materials and Methods: A549 cells were divided into the following groups: control, noncarrier(NC), PUMA (transfected with pCEP4- (HA) 2-PUMA plasmid), DDP (10μg/mL cisplatin treatment)and PUMA+DDP (transfected with pCEP4-(HA)2-PUMA plasmid and 10μg/mL cisplatin treatment). The MTTmethod was used to detect the cell survival rate. Cell apoptosis rates were measured by flow cytometry, andPUMA, Bax and Bcl-2 protein expression levels were measured by Western blotting. Results: Compared to thecontrol group, the PUMA, DDP and PUMA+DDP groups all had significantly decreased A549 cell proliferation(p<0.01), with the largest reduction in the PUMA+DDP group. Conversely, the apoptosis rates of the three groupswere significantly increased (P < 0.01), and the PUMA and DDP treatments were synergistic. Moreover, Baxprotein levels significantly increased (p<0.01), while Bcl-2 protein levels significantly decreased (p<0.01). Finally,both the volume and the weights of transplanted tumors were significantly reduced (p<0.01), and the inhibitionratio of the PUMA+DDP group was significantly higher than in the single DDP or PUMA groups. Conclusions:Exogenous PUMA effectively inhibited lung cancer A549 cell proliferation and transplanted tumor growth byincreasing Bax protein levels and reducing Bcl-2 protein levels.     

MK-2206联合顺铂对乳腺癌4 T1／DDP移植瘤耐药性的影响

目的：探讨蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）抑制剂MK-2206联合顺铂对三阴性乳腺癌4T1顺铂耐药（4T1／cisplatin,4T1／DDP）移植瘤耐药性的影响。方法采用顺铂（cisplatin,DDP）低剂量诱导及体内外交叉致瘤相结合的方法建立三阴性乳腺癌4T1／DDP耐药小鼠移植瘤模型,给予DDP腹腔注射（0．3 g／L,1次／d）单独或联合MK-2206灌胃（12 g／L,1次／周）治疗。给药28 d后处死小鼠,小动物成像检测观察肿瘤生长情况;Western blot法检测肿瘤组织中磷酸化Akt（phosphorate-Akt,p-Akt）和总Akt（total-Akt,t-Akt）蛋白水平变化;免疫组织化学法分析耐药相关蛋白P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）、乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein,BCRP）、基质金属蛋白酶7（matrix metalloproteinase 7,MMP7）表达差异。结果建立的三阴性乳腺癌耐药小鼠模型达中等耐药程度。建立非耐药小鼠与耐药小鼠肿瘤组织生长速度未见明显区别（P＞0．05）。分别给予这两种模型小鼠相同剂量（0．3 g／L）的DDP治疗后,耐药小鼠对DDP的敏感性低于非耐药小鼠（P＜0．01）。将MK-2206（12 g／L）与DDP （0．3 g／L）联合应用后小鼠肿瘤较单独应用DDP缩小,且可降低P-gp、BCRP、MMP7蛋白的表达（均P＜0．05）,并降低Akt蛋白磷酸化水平（P＜0．01）。结论 MK-2206联合顺铂能够逆转4T1／DDP移植瘤耐药性,且与抑制Akt蛋白磷酸化相关。     

ESO联合DDP对肝癌HepG2细胞增殖的抑制效应及其机制

目的： 探讨海洋生物口虾咕乙酸乙酯提取物（ethyl acetate extract of Squilla Oratoria , ESO）联合顺铂（cisplatin,DDP）对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制效应及其机制。 方法： MTT法测定不同浓度ESO和DDP 单独或联合处理对HepG2细胞增殖的抑制作用,并计算联合效应指数（CI）;流式细胞术检测ESO对细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blotting检测HepG2细胞Survivin、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。建立裸鼠皮下HepG2细胞移植瘤模型,并观察ESO和DDP单用或联用对移植瘤的抑制效应。 结果： ESO能有效地抑制HepG2细胞的生长（呈浓度依赖性）,促进细胞凋亡,将细胞周期阻滞在S期;与DDP联合用药时,对HepG2细胞增殖的抑制呈现出协同效应,凋亡率明显增加（ P <0.05）。ESO可下调Survivin和Ｂcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达,且呈浓度依赖性（ P <0.05）。裸鼠成瘤抑制实验发现,随着ESO浓度的增大,肿瘤增长的速度减慢,以联合用药组抑制作用更为明显。 结论： ESO可通过细胞周期阻滞及促细胞凋亡作用抑制HepG2细胞增殖;与顺铂联合用药,能对HepG2细胞增殖产生协同抑制效应。     

Wnt／β-catenin信号转导通路与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究

目的：探讨Wnt／β-catenin信号转导通路在肺腺癌顺铂耐药中的分子作用机制。方法：体外常规培养人肺腺癌A549细胞和其顺铂耐药A549／DDP细胞,取对数生长期的细胞用于实验。采用MTT法检测A549和A549／DDP细胞对顺铂的IC50;采用AnnexinV／PI法和Hoechst33342染色法检测顺铂处理后2种细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测2种细胞中β-catenin和Survivin的表达;采用siRNA干扰沉默pcatenin的表达,检测A549／DDP细胞的Ic5。值、细胞凋亡率及β-catenin和Survivin的表达。结果：顺铂对A549／DDP细胞的IC50值为（28．984±1．404）μmol／L高于A549细胞的（5．888±0．338）umol／L,t=27．696,P〈0．001;20umol／L顺铂诱导A549／DDP细胞凋亡率为（21．75±0．96）％,显著低于A549细胞的（39．38±0．88）％,t=23．474,P〈0．001。A549／DDP细胞中β-catenin蛋白的表达为1．890±0．060,显著高于A549细胞的1．063±0．035,t=20．595,P〈0．001;在A549／DDP细胞中Survivin蛋白表达量为1．107士0．061,明显高于A549细胞的0．503±0．025,t=15．814,P〈0．001。RNAi技术沉默β-catenin蛋白耐药性（14．615±0．939）gmol／L,显著低于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（28．984±1．404）μmol／L,t=14．732,P〈0．001;RNAi技术沉默pcatenin蛋白细胞凋亡率为（37．57±0．64）％,显著高于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（21．75±0．96）％,t=23．699,P〈0．001;RNAi技术沉默伊catenin蛋白下游靶基因Survivin蛋白的表达为0．527±0．065,显著低于A549／DDP组的1．027±0．025和瞬时转染阴性对照siRNA组的1．033±0．040,F=116．944,P〈0．001。结论：抑制Wnt／β-catenin信号转导通路的活性可以降低A549／DDP细胞对顺铂的耐药性。     

槲皮素联合苏拉明对肺腺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察槲皮素联合苏拉明对肺腺癌LA795细胞的T739小鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将40只接种LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组:A对照组、B顺铂组(DDP)、C槲皮素组、D苏拉明组、E槲皮素 苏拉明组。用药16d,观察药效、不良反应及肿瘤生长情况,于接种后24d处死各组小鼠,收集移植瘤标本行光镜观察,免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)及增殖核抗原(PCNA)的表达,原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果:①B、C、D、E各用药组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤质量明显低于A组(P<0.05),其抑瘤率分别为23.03%、39.77%、34.40%、54.70%,联合用药组抑瘤作用明显者增强(P<0.01)。②光镜观察:B、C、E组肿瘤细胞出现坏死,D、E组肿瘤间质中血管数减少。③免疫组化:D、E组MVD值明显低于A、B、C组,各用药组都能减少VEGF、PCNA表达,与对照组相比均具有差异显著性;各用药组的凋亡指数都比对照组明显提高(P<0.01)。④不良反应:B组有不良反应。结论:槲皮素联合苏拉明可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长,其作用机制可能是抑制其微血管形成、抑制细胞增殖和促进细胞凋亡。     

Inhibition of cytoplasmic GSK-3β increases cisplatin resistance through activation of Wnt/β-catenin signaling in A549/DDP cells

Cisplatin-based chemotherapy is recommended as the first-line therapy for advanced non-small cell lung cancer (NSCLC). However, acquired cisplatin resistance is ubiquitous in patients with NSCLC, but the molecular mechanism of such resistance remains ambiguous. The present study sought to examine the role of the Wnt/β-catenin signaling pathway in cisplatin resistance by assessing the phosphorylation and subcellular distribution of GSK-3β in a human lung adenocarcinoma cell line, A549, and its cisplatin-resistant subline, A549/DDP. Total GSK-3β, phosphorylated GSK-3β^ser9 and phosphorylated GSK-3β^tyr216 in cytoplasmic and nuclear fractions of A549/DDP and A549 cells were examined by western blot analysis. The regulation of cisplatin resistance, apoptosis, β-catenin and survivin protein expression by inhibition of cytoplasmic GSK-3β were determined by MTT assay, flow cytometry analysis, immunofluorescence technique and western blot analysis. In the present study, cytoplasmic levels of p-GSK-3β^ser9 were significantly increased in A549/DDP cells as compared with A549 cells (P < 0.01), and these levels were further increased by cisplatin treatment in A549/DDP cells (P < 0.01). In contrast, cytoplasmic levels of p-GSK-3β^ser9 were reduced in A549 cells after treatment with cisplatin (P < 0.01). However, cytoplasmic levels of p-GSK-3β^tyr216 were significantly decreased in A549/DDP cells as compared with A549 cells (P < 0.01), and these levels were further decreased by cisplatin treatment in A549/DDP cells (P < 0.01). Conversely, cytoplasmic levels of p-GSK-3β^tyr216 were raised in A549 cells after treatment with cisplatin (P < 0.01). Analysis of downstream effectors of the Wnt/β-catenin signaling pathway revealed upregulation of β-catenin and survivin expression in A549/DDP cells treated with cisplatin as compared to untreated cells. In A549 cells, cisplatin treatment decreased the expression of β-catenin and survivin. Furthermore, phosphorylation of GSK-3β at serine 9 by LiCl and transient interference of GSK-3β by siRNA increased β-catenin and survivin protein expression in A549/DDP cells. Low exogenous and endogenous cytoplasmic GSK-3β expression enhanced the IC50 and inhibited apoptosis. In conclusion, activation of the Wnt/β-catenin signaling pathway and upregulated survivin expression due to cytoplasmic GSK-3β inhibition might lead to cisplatin resistance in NSCLC.     

复方苦参注射液对荷DMS153裸鼠移植瘤的抑瘤作用及STAT3、MMP9表达的影响

目的:观察复方苦参注射液(compound Kushen injection,CKI)对荷DMS153小细胞肺癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并初步探讨其作用机制与STAT3、MMP9表达的关系。方法:建立荷DMS153裸鼠移植瘤模型。实验分为对照组、CKI低中高剂量干预组、顺铂干预组,共5组,每组10只裸鼠。CKI低中高干预组每天予以不同剂量CKI干预［1.0、2.0和4.0 ml/（kg·d）］,顺铂（DDP）干预组予以顺铂干预（第1、3、5天给药4.8 mg/kg）,每天观察移植瘤生长情况,并测量肿瘤体积,各实验组裸鼠在第29天处死取材。qPCR和Western blotting法检测肿瘤中STAT3和MMP9的mRNA和蛋白表达水平。结果:相比于对照组,CKI不同剂量干预均能不同程度抑制肿瘤的生长（P<0.05）,其中高剂量组抑制作用最为明显;与对照组相比,DDP干预亦能够显著抑制移植瘤生长（P<0.05）,与CKI高剂量干预组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,CKI不同剂量干预均能不同程度抑制移植瘤中STAT3和MMP9的mRNA转录和蛋白表达水平（P<0.05）,其中高剂量组抑制最为显著;CKI不同剂量干预组STAT3和MMP9的mRNA转录呈显著正相关（Pearson相关系数为0.912>0,P=0.044＜0.05）;CKI不同剂量干预组STAT3和MMP9的蛋白表达水平均呈显著正相关（Pearson相关系数为0.990>0,P=0.005＜0.05）;与对照组相比,DDP干预亦能够显著抑制移植瘤组织中STAT3和MMP9的mRNA转录和蛋白表达（P<0.05）,与CKI高剂量干预组相比差异亦具有统计学意义（P<0.05）。结论:CKI能够有效抑制荷DMS153小细胞肺癌裸鼠移植瘤的生长,且高剂量组抑瘤作用较优;CKI抗小细胞肺癌的作用机制可能与其调控STAT3和MMP9的基因和蛋白表达有关。     

晚期非小细胞肺癌中Survivin表达对顺铂敏感性和预后的预测价值

  目的  探讨Survivin预测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂敏感性的价值。  方法  RT-PCR、Western blot法检测人肺腺癌细胞株A549和耐药株A549/CDDP中Survivin表达, Survivin siRNA转染A549/CDDP细胞, MTT、流式细胞术检测细胞生长与凋亡; 免疫组织化学和RT-PCR检测晚期NSCLC组织中Survivin mRNA和蛋白表达。  结果  A549/CDDP中Survivin mRNA和蛋白表达均高于A549细胞(P < 0.01);A549/CDDP细胞中Survivin siRNA+CDDP组的生长抑制率达76.4%, IC ₅₀为(34.12+3.55)μg/mL, 耐药指数为6.71倍, 均低于对照组(P < 0.05)。该组的细胞凋亡率高于对照组(P < 0.01);93例NSCLC蜡块组织中, Survivin蛋白表达阴性组接受含顺铂方案化疗有效率(44.4%)高于阳性组(19.3%, P < 0.01);Survivin表达阴性组总生存、无疾病进展时间较阳性组长, 但差异无统计学意义(P < 0.05)。Cox多因素分析结果显示Survivin蛋白表达水平不是影响预后的独立因素。20例新鲜组织中Survivin mRNA低表达组反应率(RR)(60%)和蛋白表达阴性组RR(66.7%)高于mRNA高表达组(10%)和蛋白表达阳性组(9%, P < 0.05)。  结论  NSCLC组织中Survivin表达阳性提示顺铂耐药, 检测Survivin表达对晚期NSCLC筛选含顺铂化疗方案具有指导意义。      

瘤内局部注射重组人血管内皮抑制素对小鼠Lewis肺癌抑瘤作用的研究

目的探讨瘤内直接注射重组人血管内皮抑制素（恩度）联合腹腔注射顺铂对Lewis肺癌的抑制效果。方法成功建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型。按体质量将小鼠随机分为生理盐水组、顺铂组、瘤内注射恩度组、顺铂联合腹腔注射恩度组、顺铂联合瘤内注射恩度组5组。治疗后处死小鼠,计算肿瘤体积抑瘤率,用免疫组织化学法测定各组小鼠肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平及微血管密度（microvessel density,MVD）。结果顺铂组、瘤内注射恩度组、顺铂联合腹腔注射恩度组、顺铂联合瘤内注射恩度组的抑瘤率分别为61.8%、24.9%、70.3%、74.3%。免疫组织化学结果显示,顺铂联合瘤内注射恩度组的VEGF表达及MVD计数在各实验组中均最低,与顺铂联合腹腔注射恩度组比较两者差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论经皮穿刺瘤内注射恩度联合顺铂有协同抗肿瘤作用,能有效抑制肺癌的生长及转移,并且相同剂量的恩度,肿瘤内局部注射效果优于腹腔注射。