miR-205对胃癌细胞侵袭迁移的调控作用及其潜在机制

目的 探讨miR-205对胃癌HGC27细胞侵袭、迁移的作用及其机制。方法 实时荧光定量PCR法测定4种不同胃癌细胞（AGS、MKN74、HGC27、SGC7901）中miR-205的表达情况。体外培养的HGC27细胞通过转染miR-205 mimic上调细胞中miR-205的表达,划痕实验和Transwell实验观察其侵袭和迁移能力;Western blot检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）进程及相关信号通路的活性。结果 miR-205在4种胃癌细胞中均呈低表达（均P<0.05）。过表达miR-205后,HGC27细胞的迁移率由（54.7±4.1）%降低至（34.1±4.5）% （P=0.005）;细胞的侵袭率由（52.8±6.3）%降低至（32.2±4.9）%（P=0.001）。此外,过表达miR-205之后,胃癌细胞中上皮细胞标志物E-cadherin、β-catenin蛋白表达显著上升（P=0.002, P=0.003）,而间质细胞标志物N-cadherin、vimentin的蛋白表达显著下降（P=0.005, P=0.004）,Notch和snail的蛋白表达水平也显著降低（P=0.002, P=0.003）。结论 miR-205在胃癌细胞中低表达,且与胃癌细胞的侵袭和迁移密切相关;其分子机制可能与抑制EMT及Notch/snail信号通路有关。     

miRNA-26a下调COX-2的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨miR-26a在乳腺癌组织和细胞中表达量的改变及其对人乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测20例患者乳腺癌组织及对应的癌旁组织、人乳腺癌细胞MCF-7、BT474及健康者乳腺细胞MCF-10A中miR-26a的表达,用Western bolt法检测COX-2的表达。MCF-7及BT474细胞分别转染miR-NC和miR-26a,采用Western blot法检测转染后细胞中COX-2的表达水平,同时采用CCK-8和克隆形成实验检测转染后细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-26a在乳腺癌组织中的表达明显低于癌旁组织（t=20.33, P=0.001）,在MCF-7和BT474细胞中的表达明显低于MCF-10A细胞（Dunnett t test I-J=-0.031, P=0.001）。COX-2在乳腺癌组织和细胞中的表达明显高于癌旁组织（t=18.01, P=0.002）和健康者乳腺细胞（Dunnett t test I-J=-0.028, P=0.000）。转染miR-26a后,乳腺癌细胞内COX-2的表达量显著下调。CCK-8和克隆形成实验结果显示,过表达miR-26a能明显抑制乳腺癌细胞的增殖（F=6.032, P=0.013）和侵袭（Dunnett t test I-J=-0.21, P=0.037）。结论 过表达miR-26a可以通过下调乳腺癌细胞中COX-2的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

Linc00460通过海绵吸附影响miR-320a对乳腺癌细胞的有氧糖酵解作用

目的 探讨Linc00460通过海绵吸附miR-320a对乳腺癌（BC）细胞有氧糖酵解作用的影响。方法 qRT-PCR法检测正常乳腺上皮细胞系MCF-10A及5种BC细胞系中Linc00460和miR-320a表达水平。qRT-PCR检测干扰Linc00460对miR-320a表达的影响,双荧光素酶报告基因实验检测miR-320a和Linc00460的靶向关系。将si-Linc00460和miR-320a inhibitor共转染至MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测细胞中miR-320a表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;2-NBDG法检测细胞葡萄糖摄取率;比色法检测细胞上清液中乳酸含量;酶活性试剂盒检测糖酵解关键酶的活性;Western blot检测酵解途径中关键蛋白表达水平。结果 与MCF-10A细胞比较,5种BC细胞系中Linc00460高表达,而miR-320a低表达。干扰Linc00460后,MDA-MB-231细胞中miR-320a表达显著升高。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-320a和Linc00460可靶向结合。干扰Linc00460表达后MDA-MB-231细胞增殖能力受到明显抑制（P=0.000）,细胞葡萄糖摄取率和细胞上清液中乳酸含量降低（均P=0.000）,PFK、PK和LDH酶活性受到抑制（均P=0.000）,PFKM、GLUT1和LDHA蛋白表达水平下调（均P=0.000）。抑制miR-320a可明显逆转si-Linc00460对MDA-MB-231细胞增殖和糖酵解的抑制作用（均P=0.000或0.001）。结论 Linc00460可能通过海绵吸附miR-320a,上调PFKM表达,从而促进BC细胞有氧糖酵解作用。     

跨膜接头蛋白PAG1过表达对皮肤鳞癌细胞A431运动能力的影响

目的 研究跨膜接头蛋白PAG1过表达对人皮肤鳞状细胞癌A431运动能力的影响。方法 构建PAG1-EGFP融合蛋白的慢病毒表达载体,采用反转录病毒转染的方法建立PAG1过表达的A431细胞株,实验分为3组：亲本细胞组（未进行基因转染的A431细胞）、对照组（A431细胞转染仅含EGFP阴性对照病毒）、实验组（A431细胞转染PAG1-EGFP病毒）。流式细胞术检测细胞转染率,实时荧光定量PCR及Western blot检测转染后PAG1 mRNA及其蛋白表达,进一步验证细胞转染成功与否;利用划痕修复实验、Transwell迁移实验、侵袭实验三种不同的方法检测PAG1基因的过表达是否会对皮肤鳞癌细胞的生长、迁移和侵袭能力产生影响。 结果 实验组和对照组目的基因病毒的转染表达率分别为（94.97±0.15）%、（94.60±0.35）%;实验组细胞中PAG1基因mRNA的表达量约为亲本细胞组的1.6倍（P=0.000）,转染后实验组中PAG1蛋白的相对表达水平明显增加（P=0.000）,建立了稳定过表达PAG1的A431细胞系;PAG1过表达明显降低A431细胞愈合率（P=0.000）;实验组A431细胞迁移、侵袭能力明显降低（P=0.001, P=0.000）。结论 PAG1的过表达能抑制人皮肤鳞癌细胞运动能力,影响肿瘤的浸润及远处转移。     

miR-1269a 在食管癌组织中的表达及其对KYSE30 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨miR-1269a 在食管癌组织中的表达及其对KYSE30 细胞恶性生物学行为的影响,并研究其可能的作用机制。方法：选取90 例在河北医科大学第四医院通过手术切除的食管癌组织标本,并收集正常食管永生化上皮细胞和食管癌细胞系,应用qPCR 实验检测癌组织和细胞系miR-1269a 的表达水平。将miR-1269a 的mimics 和inhibitor 分别转染食管癌细胞KYSE30 后,用MTS、Transwell 和克隆形成实验分别检测miR-1269a 对KYSE30 细胞增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响。通过生物信息学软件预测miR-1269a 的靶基因,并通过WB实验和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269a 对靶基因的调控作用。转染SOX6 质粒后,采用MTS、Transwell 和克隆形成实验分别检测SOX6 对KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响,并利用回复实验进一步验证结果。结果：食管癌组织中miR-1269a 的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）;与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞系中miR-1269a 的表达水平显著升高（P<0.05 或P<0.01）。miR-1269a mimics 转染组KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著高于mimics NC组（P<0.05 或P<0.01）;inhibitor 转染组KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著低于inhibitor NC组（P<0.05 或P<0.01）。miR-1269a 可与SOX6 的3’UTR区相结合,且过表达miR-1269a 后,KYSE30细胞的SOX6 表达水平和荧光素酶报告基因的活性均显著降低（P<0.05）。回复实验表明,高表达miR-1269a 可以促进食管癌细胞增殖、侵袭和迁移（P<0.05 或P<0.01）,同时高表达SOX6 后,miR-1269a 的促进作用出现部分逆转。结论：miR-1269a 在食管癌组织和细胞系中表达上调,能够促进KYSE30 细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成等恶性生物学行为,其机制可能是通过抑制靶基因SOX6 实现的。     

miR-590靶向SIP1抑制胆管癌细胞上皮间充质转化的实验研究

目的 探讨miR-590在胆管癌细胞上皮间充质转化（EMT）中的作用及可能机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC以及人胆管癌细胞系HUCCT1、HCCC-9810、RBE中miR-590的表达情况。双荧光素酶报告试验评价miR-590对SIP1的靶向调控作用。向HUCCT1细胞转染miR-590 mimics（转染组）和无义核苷酸序列（NC组）,Western blotting 检测两组EMT相关蛋白的表达。向HUCCT1细胞转染SIP1 siRNA,Western blotting 检测干扰SIP1后EMT相关蛋白的表达。结果 HUCCT1、HCCC-9810、RBE细胞系中miR-590水平分别为0.37±0.084、0.31±0.071和0.53±0.089,显著低于人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC的1.12±0.201,差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-590可抑制野生型SIP1 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型SIP1 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。转染miR-590 mimics可以下调HUCCT1细胞中Vimentin、N-cadherin、ZEB1、ETS1、SNAIL1及TWIST1蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达。SIP1沉默能上调上皮标志物E-cadherin蛋白表达,并下调间充质蛋白Vimentin和N-cadherin蛋白表达。结论 miR-590通过靶向SIP13’-UTR阻断其翻译,最终抑制胆管癌细胞上皮间充质转化。     

miR-125b-5p对喉鳞状细胞癌细胞能量代谢及增殖的影响

目的  探讨miR-125b-5p对喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）细胞能量代谢和增殖的影响及其可能的作用机制。方法 实验分为miR-125b-5p转染组（miR-125b-5p模拟物转染LSCC）和对照组（空质粒转染LSCC细胞）。采用RT-qPCR 检测miR-125b-5p在正常支气管上皮细胞和LSCC细胞中的表达,CCK-8和流式细胞术检测LSCC细胞增殖、凋亡情况,Western blot检测miR-125b-5p过表达后LSCC中HK2的表达,3H-2DG法和乳酸盐比色测定实验分别检测LSCC细胞葡萄糖消耗和乳酸产生的情况。结果 RT-qPCR实验结果显示,与正常支气管上皮细胞相比,LSCC细胞中miR-125b-5p的表达降低（0.68±0.03 vs 0.22±0.05,t=7.025,P=0.001）。CCK-8实验结果显示,转染72 h和96 h后,miR-125b-5p转染组LSCC细胞的增殖能力均较对照组明显降低（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,miR-125b-5p转染组LSCC细胞凋亡率较对照组升高 ［（37.52±2.34）% vs （12.46±3.52）%,t=7.025,P<0.001）］,但细胞集落形成能力降低（0.29±0.02 vs 1.02±0.03,t=5.689,P=0.005）;荧光素酶报告基因测定实验结果显示,miR-125b-5p转染组的荧光素酶活性低于对照组（0.32±0.03 vs 1.01±0.02,t=7.543,P=0.001）;Western blot法实验结果显示,miR-125b-5p转染组HK2蛋白表达水平较对照组降低（0.12±0.02 vs 0.75±0.03,t=5.875,P=0.023）;miR-125b-5p转染组葡萄糖消耗量［（3.85±0.86） dpm/mg vs （10.52±1.34） dpm/mg,t=6.118,P=0.005］以及乳酸产生量［（4.23±1.36） dpm/mg vs （10.96±2.45） dpm/mg,t=5.907,P=0.002］亦较对照组降低。结论 miR-125b-5p可能通过下调HK2表达降低喉鳞状细胞癌细胞的能量代谢和增殖能力,诱导细胞凋亡。     

miR-590靶向SIP1抑制胆管癌细胞上皮间充质转化的实验研究

目的 探讨miR-590在胆管癌细胞上皮间充质转化（EMT）中的作用及可能机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC以及人胆管癌细胞系HUCCT1、HCCC-9810、RBE中miR-590的表达情况。双荧光素酶报告试验评价miR-590对SIP1的靶向调控作用。向HUCCT1细胞转染miR-590 mimics（转染组）和无义核苷酸序列（NC组）,Western blotting 检测两组EMT相关蛋白的表达。向HUCCT1细胞转染SIP1 siRNA,Western blotting 检测干扰SIP1后EMT相关蛋白的表达。结果 HUCCT1、HCCC-9810、RBE细胞系中miR-590水平分别为0.37±0.084、0.31±0.071和0.53±0.089,显著低于人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC的1.12±0.201,差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-590可抑制野生型SIP1 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型SIP1 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。转染miR-590 mimics可以下调HUCCT1细胞中Vimentin、N-cadherin、ZEB1、ETS1、SNAIL1及TWIST1蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达。SIP1沉默能上调上皮标志物E-cadherin蛋白表达,并下调间充质蛋白Vimentin和N-cadherin蛋白表达。结论 miR-590通过靶向SIP13’-UTR阻断其翻译,最终抑制胆管癌细胞上皮间充质转化。     

circ＿0000615通过靶向miR-432-5p调控胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨circ＿0000615在胆管癌细胞中的表达及其对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响和可能的调控机制。方法:通过qPCR检测circ＿0000615在正常胆管上皮HIBEC细胞和胆管癌CCLP-1、QBC939、TFK-1和RBE细胞中的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ＿0000615与miR-432-5p的靶向关系。将si-NC、si-circ＿0000615(si-circ-1、si-circ-2)、inhibitor-NC和inhibitor-miR-432-5p转染至CCLP-1和QBC939细胞,转染细胞分为si-NC组、si-circ-1组、si-circ-2组、si-NC+inh-NC组、si-NC+inh-miR-432-5p组和si-circ-1+inh-miR-432-5p组,通过CCK-8、EdU和Transwell实验检测各转染组胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果:在胆管癌细胞中circ＿0000615呈高表达而miR-432-5p呈低表达(P<0.05或P<0.01);双荧光素酶报告基因实验证实circ＿0000615与...     

microRNA-133b对胶质母细胞瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨microRNA(miR)-133b对胶质母细胞瘤(GBM)细胞的作用,并分析其作用的分子机制。方法应用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例人GBM标本及正常人脑胶质细胞系HEB中miR-133b的表达水平。Transwell侵袭实验评估miR-133b对GBM细胞迁移和侵袭的影响。Western blotting和荧光素酶报告实验来确定miR-133b的靶基因。结果与正常人脑胶质细胞系HEB比较,miR-133b在GBM标本中的相对表达量明显降低(1.0±0.17 vs.2.42±0.69,P<0.05);转染miR-133b mimic后GBM迁移和侵袭跨膜细胞数分别为66±17和60±14,均低于转染NC组(P<0.05);与转染NC组比较,转染miR-133b mimic后MMP-14蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。荧光素酶报告基因分析实验进一步验证mir-133b靶向调节MMP-14。结论 miR-133b通过直接靶向调节MMP-14抑制GBM的迁移和侵袭能力,可作为GBM诊断和治疗的候选靶点。     

miRNA-101通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化

目的 探讨miRNA-101（miR-101）通过靶向CDK8对结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路激活的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot测定结肠癌组织、癌旁正常组织及五种结肠癌细胞株中miR-101和CDK8的表达。双荧光素酶报告实验测定其相互作用关系。通过miR-101 mimic、pBabe-CDK8转染调控CDK8表达并测定其对肿瘤细胞侵袭和Wnt/β-catenin激活的影响。结果 与癌旁正常组织相比,miR-101在结肠癌组织中表达水平显著降低,而CDK8的表达显著增加。双荧光素酶报告实验证实miR-101可直接与CDK8 3'UTR的结合位点作用调节荧光素酶的活性。转染miR-101 mimic组细胞的侵袭能力比阴性对照组和CDK8组明显下降。转染miR-101 mimic后TOP/FOP荧光素酶活性显著降低,β-catenin的蛋白表达也出现下降。CDK8过表达载体转染能显著减弱miR-101 mimic对荧光素酶活性和β-catenin蛋白表达的作用。结论 miRNA-101可通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化。     

miR-198靶向MAPK1调控宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和侵袭

目的 探究miR-198对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制。方法 用miR-198 mimic转染HeLa细胞,qRT-PCR检测miR-198和丝裂原活化蛋白激酶1 （Mitogen-activated protein kinase1, MAPK1）的mRNA水平;荧光素酶实验检测miR-198和MAPK1的靶向关系;用pcDNA3.0-MAPK1（pc-MAPK1）和miR-198 mimic转染细胞,CCK-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测蛋白的表达。结果 miR-198 mimic转染细胞后,miR-198表达水平明显升高,MAPK1 mRNA表达水平明显降低;荧光素酶报告实验表明miR-198序列上存在MAPK1结合位点;miR-198过表达能显著降低宫颈癌细胞增殖倍数、诱导细胞凋亡,同时还能明显降低HeLa细胞侵袭能力;此外,miR-198 mimic能显著抑制MAPK1下游基因核糖体S6激酶2（Ribosomal S6 kinase 2, RSK2）、c-Myc和c-fos的蛋白表达;pc-MAPK1能明显减弱miR-198 mimic对HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭及对MAPK1下游蛋白表达的调控作用。结论 miR-198过表达能通过靶向MAPK1抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力并诱导细胞凋亡。     

miR-124 通过靶向BECN1 基因调控细胞自噬抑制食管癌KYSE170 细胞的侵袭和迁移

目的：探讨miR-124 通过调控细胞自噬对食管癌KYSE170 细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：食管癌KYSE170 细胞转染miR-124 mimic,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化,双荧光素酶报告基因验证miR-124 对BECN1(Beclin1)基因的靶向调控作用,Western blotting 分析对BECN1、P62 及LC3 蛋白表达水平的影响。向KYSE170 细胞中转染BECN1 siRNA沉默BECN1 的表达,Transwell 法检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting 检测BECN1、P62 及LC3 蛋白的表达。将miR-124 mimic 与BECN1 过表达质粒共转染至KYSE170 细胞,Transwell 实验检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting 检测自噬相关基因表达的变化。结果：转染miR-124 mimic 后,KYSE170 细胞的侵袭和迁移能力下降(P<0.05),BECN1 蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),自噬相关蛋白P62 表达增高,LC3 表达水平明显降低(均P<0.01)。沉默BECN1 表达抑制食管癌细胞侵袭及迁移(P<0.01),而过表达BECN1 使miR-124 mimic 对KYSE170 细胞自噬、侵袭和迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01),自噬相关蛋白P62 表达降低、LC3 蛋白表达水平明显升高(均P<0.01)。结论：miR-124 能够抑制食管癌细胞侵袭及迁移能力,其机制可能与靶向调控自噬相关基因BECN1 的表达影响细胞自噬有关。     

miR-424靶向NRP2对宫颈癌细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响

目的:探讨微小RNA（miR）-424靶向神经纤毛蛋白2（NRP2）对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响。方法:实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测宫颈癌组织和癌旁组织以及宫颈癌细胞SiHa和人宫颈上皮细胞HCerEpiC中miR-424和NRP2蛋白表达情况。将体外培养的SiHa细胞分为对照组、miR-ctrl组（转染miR-ctrl）、miR-424组（转染miR-424模拟物）、miR-424+pcDNA3.1组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）和miR-424+NRP2组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1-NRP2过表达载体质粒）,采用实时荧光定量PCR法验证转染效率,免疫印迹法检测SiHa细胞中NRP2蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424和NRP2靶向关系,MTT法检测细胞增殖和顺铂敏感性,Transwell小室检测细胞迁移。结果:双荧光素酶报告基因实验证实miR-424可与NRP2靶向结合;相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;相较于HCerEpiC细胞,SiHa细胞中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;与miR-ctrl组比较,miR-424组SiHa细胞中miR-424表达水平明显升高,而NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的半数抑制浓度（IC50）值均明显降低（P＜0.05）;与miR-424+pcDNA3.1组比较,miR-424+NRP2组细胞中NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的IC50值均明显升高（P＜0.05）;miR-ctrl组和对照组之间以及miR-424+pcDNA3.1组和miR-424组之间上述各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-424可通过靶向调控NRP2表达抑制SiHa细胞增殖、迁移并增强顺铂敏感性。     

miR-503 靶向ERCC1 抑制食管鳞状细胞癌放疗抵抗作用的机制

[摘要] 目的:探讨miR-503 通过调控人切除修复交叉互补基因1（ERCC1）介导食管鳞状细胞癌（ESCC）放疗抵抗作用的分子机制。方法：采用qPCR法检测在放疗抵抗的ESCC肿瘤组织及KYSE140、KYSE140R细胞中miR-503 的表达水平。将miR-503模拟物、miR-503 抑制物或si-ERCC1 转染至KYSE140 和KYSE140R细胞中,经射线照射后,克隆形成实验和CCK-8 实验检测KYSE140R细胞的增殖活力,流式细胞仪检测KYSE140R细胞的凋亡情况,WB实验检测ERCC1 蛋白表达水平的变化。双荧光素酶报告基因验证miR-503 与ERCC1 的靶向关系。结果：miR-503 在ESCC放疗抵抗组织和细胞中均低表达（均P<0.01）。过表达miR-503 可显著抑制KYSE140R细胞增殖并诱导细胞凋亡（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实ERCC1 是miR-503 的靶基因,且miR-503 负调控ERCC1 的表达。过表达miR-503 显著下调KYSE140、KYSE140R 细胞中ERCC1 表达水平（均P<0.01）,并显著抑制细胞增殖活力（均P<0.01）、显著提高细胞凋亡率（均P<0.01）;敲降ERCC1 有类似作用,而同时敲降ERCC1 和miR-503 则逆转以上影响。结论：过表达miR-503 通过靶向ERCC1 调控KYSE140R细胞对放疗的敏感性。     

MicroRNA-1277 Inhibits Proliferation and Migration of Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells by Targeting and Suppressing BMP4 Expression and Reflects the Significant Indicative Role in Hepatocellular Carcinoma Pathology and Diagnosis After Magnetic Resonance Imaging Assessment

Our study aimed to investigate the roles and possible regulatory mechanism of miR-1277 in the development of hepatocellular carcinoma (HCC). HCC patients were identified from patients who were diagnosed with focal liver lesions using magnetic resonance imaging (MRI). The expression levels of miR-1277 in the serum of HCC patients and HepG2 cells were measured. Then miR-1277 mimic, miR-1277 inhibitor, or scramble RNA was transfected into HepG2 cells. The effects of miR-1277 overexpression and suppression on HepG2 cell proliferation, migration, and invasion were then investigated. Additionally, the expression levels of epithelial– mesenchymal transition (EMT)-related markers, including E-cadherin, -catenin, and vimentin, were detected. Target prediction and luciferase reporter assay were performed to explore the potential target of miR-1277. miR-1277 was significantly downregulated in the serum of HCC patients and HepG2 cells. Suppression of miR-1277 promoted HepG2 cell proliferation, migration, and invasion, whereas overexpression of miR-1277 had opposite effects. In addition, after miR-1277 was suppressed, the expressions of E-cadherin and -catenin were significantly increased, while the expressions of vimentin were markedly decreased. Bone morphogenetic protein 4 (BMP4) was identified as the direct target of miR-1277. Knockdown of BMP4 reversed the effects of miR-1277 suppression on HepG2 cell migration and invasion, as well as the expressions of E-cadherin, -catenin, and vimentin. Our results indicate that downregulation of miR-1277 may promote the migration and invasion of HepG2 cells by targeting BMP4 to induce EMT. Combination of MRI and miR-1277 level will facilitate the diagnosis and treatment of HCC.     

胶质瘤组织中miR-205-5p的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨miR-205-5p在胶质瘤中的表达以及对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的调控及可能的作用机制。方法 收集2018 年6 月至2019 年12 月于郴州市第一人民医院诊治的58 例新发神经胶质瘤患者的胶质瘤组织和癌旁组织标本。将miR-205-5p mimic转染至U251和T98G细胞,构建过表达细胞模型。采用RT-qPCR检测胶质瘤组织及细胞模型中miR-205-5p的表达水平并分析其表达水平与患者临床病理特征的关系,CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell小室实验分别检测胶质瘤细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭情况,Western blot检测过表达miR-205-5p对Runt相关因子2（runt-related gene 2,Runx2）蛋白表达水平的影响;用双荧光素酶报告基因实验检测miR-205-5p与Runx2的靶向关系。结果 miR-205-5p在胶质瘤组织和胶质瘤细胞U251和T98G中低表达（均P＜0.01）,其表达水平与肿瘤大小和病理分级有关（均P＜0.05）。过表达miR-205-5p可以显著抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（均P＜0.05）。双荧光素酶报告实验证实Runx2基因是miR-205-5p的潜在靶基因。过表达miR-205-5p可明显下调胶质瘤细胞中Runx2蛋白的表达水平（P＜0.001）。结论 miR-205-5p在胶质瘤中低表达,过表达miR-205-5p可抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭,作用机制可能与靶向调控Runx2有关。     

miR-126通过靶向调控Crk基因抑制非小细胞肺癌细胞增殖及侵袭

目的:探究miR-126通过靶向调控Crk基因来调控非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖及侵袭。方法:应用实时定量PCR检测NSCLC组织及其癌旁肺组织中miR-126和Crk mRNA的表达。应用荧光素酶报告基因系统验证Crk是miR-126的靶基因。在NSCLC细胞转染miR-126 mimics或特异沉默Crk的siRNA后,用MTT法检测NSCLC细胞增殖能力,Transwell测定NSCLC细胞侵袭能力。结果:与癌旁肺组织相比,miR-126在肺癌组织中表达显著降低（P＜0.05）,Crk mRNA在肺癌组织中表达明显升高（P＜0.05）。miR-126直接作用于Crk-3' UTR的预计靶位点;MTT细胞增殖实验及Transwell侵袭实验表明,miR-126过表达或Crk基因沉默均能减弱肺癌细胞增殖及侵袭能力（P＜0.05）。结论:miR-126通过靶向调控Crk来抑制NSCLC细胞的增殖及侵袭。     

长链非编码RNA TUG1调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸调节基因1(TUG1)调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:在骨肉瘤细胞U-2OS中转染TUG1 siRNA和siRNA control,qRT-PCR测定干扰效果,MTT测定增殖,流式细胞术测定凋亡,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移。starBase预测TUG1与miR-138-5p有结合位点,双荧光素酶报告载体鉴定靶向调控关系。将miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染至骨肉瘤细胞中,测定干扰miR-138-5p对下调TUG1的骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染TUG1 siRNA后的骨肉瘤细胞中TUG1表达水平明显低于转染siRNA control后的细胞（P<0.05）。下调TUG1后的骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,细胞凋亡率升高（P<0.05）。野生型TUG1荧光素酶报告载体与miR-138-5p共转染后细胞荧光素酶活性降低（P<0.05）。与转染TUG1 siRNA的细胞比较,miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染后的细胞增殖、侵袭和迁移能力升高,细胞凋亡率降低（P<0.05）。结论:下调LncRNA TUG1表达通过调控miR-138-5p表达抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力并诱导细胞凋亡。