基于IgY抗体检测日本血吸虫循环抗原的间接红细胞凝集试验的建立

目的 建立基于IgY的血吸虫循环抗原的间接红细胞凝集试验(indirect hemagglutination test,IHA)并初步探讨IgY在诊断日本血吸虫病中的应用价值.方法 以日本血吸虫卵可溶性虫抗原(soluble egg antigen,SEA)免疫海蓝蛋鸡,获得抗SEA的IgY抗体.取人O型红细胞醛化、鞣...     

卵黄抗体IgY检测血吸虫病人循环抗原的初步研究

目的 探讨抗可溶性虫卵抗原（SEA）卵黄抗体（IgY）检测血吸虫循环抗原的应用价值。方法以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法（S-ELISA）检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法（SEA-ELISA）作比较。结果S-ELISA测得SEA浓度（y）与吸光度（A450）值（x）呈明显的正相关（y=459．22x-108．14,r=0．9481）。急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100．00％（9／9）,慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84．44％（38／45）,健康人的特异性为96．00％（48／50）。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论S-ELISA具有较好的敏感性和特异性,可用于血吸虫病免疫诊断。     

组分抗原斑点金标免疫渗滤法检测血吸虫短程抗体的研究

目的建立一种可用于检测血吸虫病人短程抗体的斑点金标免疫渗滤法（dot immuno-gold filtration assay,DIG-FA）。方法将血吸虫可溶性虫卵组分抗原（107～121 kDa）包被于混纤膜上,以胶体金标记的抗人IgG为二抗,建立组分抗原-DIGFA。用该法检测慢性血吸虫病人、健康人、卫氏并殖吸虫病人和华支睾吸虫病人血清。同时与血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）-DIGFA比较。结果检测54份慢性血吸虫病人血清,组分抗原-DIGFA敏感性为94.4%,SEA-DIGFA敏感性为96.3%,两种方法检测50份正常人血清的特异性均为100%。检测19份卫氏并殖吸虫病人血清和30份华支睾吸虫病人血清,SEA-DIGFA敏感性分别为26.3%和10.0%,组分抗原-DIGFA均未检出阳性反应。结论应用组分抗原-DIGFA检测血吸虫短程抗体具有较高的敏感性和特异性,且与其他吸虫病几乎无交叉反应,特异性优于SEA-DIGFA。     

日本血吸虫感染兔尿液中具有诊断价值的循环抗原组分分析

目的 分析日本血吸虫感染兔尿液中具有诊断价值的循环抗原(CAg)组分,为建立尿液CAg免疫学诊断方法奠定基础。方法 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析尿液中蛋白抗原组分;甘氨酸盐酸缓冲液(简称甘盐液)解离尿液中循环免疫复合物(CIC),通过抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Solube egg antigen,SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),采用免疫印渍技术(Western blot)对解离后的CAg组分进行分析。结果  SDS-PAGE结果显示,正常兔尿液中未见明显蛋白条带:感染兔尿液在未作CIC解离前,有2条主带和3条次带,主带分子量为146kDa和60kDa,次带分子量为108kDa、72 kDa和67 kDa;而利用甘盐液解离感染兔尿液中的CIC后,仅见1条主带和1条次带,分子量分别为68kDa和86kDa。对甘盐液处理后的感染兔尿液作Western blot分析,结果显示其与日本血吸虫感染兔血清和抗日本血吸虫SEA特异性IgY抗体反应的蛋白条带均为68kDa,而与正常兔血清和免疫前IgY反应不产生条带。结论 日本血吸虫感染兔尿液中存在具有诊断价值的CAg组分,有望建立基于IgY的尿液CAg免疫学诊断方法。     

湖沼型流行区常用血吸虫病查病模式效能分析

目的 目的 评价湖沼型流行区常用血吸虫病查病模式效能。方法 方法 选择江陵县荆干村作为调查点, 采集6～65岁 常住居民静脉血, 采用间接血凝试验 （IHA）、 胶体染料试纸条法 （DDIA） 进行平行检测,对任一方法检测阳性者采用Kato? Katz法、 尼龙绢集卵孵化法进行平行检测。对两种免疫学方法的一致性进行评价, 并分别以IHA、 DDIA、 IHA+DDIA法筛 查再加病原学检测3种查病模式来推算受检人群的感染率。 结果 结果 血清学方法共检测530人,DDIA、 IHA的抗体阳性 率分别为46.98% （249/530）、 28.49% （151/530）, 前者显著高于后者 （χ2 = 59.55,P < 0.01）。两种方法共检出抗体阳性者 279人, 其中252人接受了病原学检测, Kato?Katz法和集卵孵化法共检出血吸虫感染者22例, IHA、 DDIA分别漏检7例和 3例。IHA、 DDIA、 IHA+DDIA法筛查再加病原学检测3种查病模式对530例受检人群的推算感染率分别是3.14%、 3.97%、 4.60%。 结论 结论 在疫情持续降低的情况下, 当前常用的血吸虫病查病模式易导致漏诊, 应开发更敏感和有效的诊 断方法, 并探索适合低度流行态势下的血吸虫病筛查新模式。     

胶体染料试纸条法(DDIA)诊断湄公血吸虫病的研究

目的评价胶体染料试纸条法诊断湄公血吸虫病的应用价值.方法制备以日本血吸虫虫卵可溶性抗原为抗原的胶体染料试纸条试剂盒(DDIA kit).采用该试剂盒检测来自柬埔寨湄公血吸虫病流行区的34例粪检阳性者和170例粪检阴性者,近年来经吡喹酮治疗后不同年份的人群122例,以及114例来自非血吸虫病流行区的健康人;同时对来自老挝湄公血吸虫病流行区的70例粪检阳性者和60例猫后睾吸虫感染者进行检测.对其中部分样本还采用日本血吸虫SEA-ELISA进行对照检测.结果 DDIA试剂盒检测湄公血吸虫病的敏感性为97.1%(33/34)(柬埔寨)和98.6%(69/70)(老挝),与ELISA的检测结果相一致.对非流行区健康人的特异性为100.0%.结论日本血吸虫DDIA试剂盒具有快速、简便、不需任何仪器设备等优点,同样适用于对湄公血吸虫病的现场大规模筛查.     

鄱阳湖区血吸虫病人免疫状态研究 III血吸虫病人抗体低应答现象初探

目的 目的 探讨血吸虫粪检虫卵阳性者抗体检测为阴性 （以下简称 “抗体低应答者” ） 的免疫机制。 方法 方法 对鄱阳 湖血吸虫病流行区142例粪检血吸虫卵阳性病例采用虫卵抗原与成虫抗原包被ELISA检测IgG抗体, 并利用ROC曲线确 定抗体高、 低应答组; 检测、 比较两组细胞免疫水平及细胞因子水平。 结果 结果 共筛查出8名抗体低应答者。高、 低应答组 各同型抗体水平相比, 除SWAP?IgA （t= -1.588, P > 0.1） 外, 差异均有统计学意义 （t= -14.517～-2.866, P 均< 0.05）。与抗 体高应答组相比, 抗体低应答组外周血CD3+ T细胞占比略升高, CD4+ T与CD8+ T细胞占比、 CD4+ /CD8+ 比值及CD4+ CD25+ Treg细胞占比均降低, 但差异均无统计学意义 （t = -1.72～0.974, P均 > 0.05）。在SEA或SWAP刺激下, 两组人群PBMC 分泌的IFN?γ水平和IL?10水平差异亦无统计学意义 （t = -2.426～0.216, P > 0.05）。 结论 结论 抗体低应答组与高应答组人 群仅见同型抗体水平差异; 低感染度者在血吸虫释放抗原物质、 形成抗原?抗体复合物后, 血液循环中抗体滴度非常低, 从而导致难以检出是抗体低应答的原因之一。     

血吸虫病控制后检测循环抗原和抗体比较研究

目的在已达到国家血吸虫病传播控制标准后,选择一种更有效的、准确的诊断方法用于血吸虫病传染源的监测,巩固已取得的防治成果。方法用检测血吸虫循环抗原(ScAg)和检测血吸虫抗体(ScAb)的几种常用方法,对历史疫情较重,现已达到传播控制的流行村作平行检测,与历史检测结果作比较研究,并以病原学检查的毛蚴孵化法和Kato-Katz法检查对照。结果应用皮内反应试验(SK)检测皮肤型IgE抗体阳性率为22.6%和20年前(1985)检测阳性率23.5%比较,差异无统计学意义(P>0.05),用间接血凝法(IHA)检测SK试验阳性者为25.5%与过去(1985)检出阳性率29.1%相比,降低较少,酶免疫试验(ELISA)检测抗体仍有28.6%的阳性;采用一步酶免疫法(EIA)检测血吸虫循环抗原(ScAg),对粪检阳性的血吸虫病患者和正常健康人血清的有效诊断率达96.0%,平行检测上述血清阳性率为6.5%,与控制前(1998)的22.2%相比下降15.7%(P<0.01),而经粪检查出阳性的3例均在ScAg检出阳性者之内。结论检测血吸虫皮肤型IgE的SK只能反映历史的流行状况,检测血吸虫ScAb的IHA、ELISA,在反复化疗取得防治成效的流行区只能反映既往感染情况,特异性低,粪便检查受排卵因素影响漏检率高,检测血吸虫ScAg准确性高又能反映治疗后的效果,适合血吸虫病传播控制后用于疫情监测及传染源控制的有效查病方法。     

抗日本血吸虫SEA鸡卵黄抗体的制备与鉴定

目的 制备特异性抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）并检测其特异性、敏感性。 方法 用日本血吸虫SEA经翅膀下静脉和皮下免疫25周龄海兰母鸡4次（首次剂量为60 μg/只，加强剂量为30 μg/只），每次间隔10 d。取免疫前和首次免疫后35 d的鸡蛋卵黄，分别用水稀释法提取IgY，BCA法测定蛋白含量，并进行十二烷基磺酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析，ELISA检测纯化后IgY特异性和敏感性。分别提取免疫后不同时间的卵黄抗体，观察抗体效价的变化。 结果 海兰母鸡经SEA首次免疫后35 d，每枚蛋经提纯后可得到约61 mg抗体，经SDS-PAGE和Western blotting分析，纯化的IgY有1条主要蛋白带，相对分子质量（Mr）为130 000，并可被SEA识别。母鸡初次免疫后第10天，经SDS-PAGE和ELISA分析，鸡蛋卵黄内即有抗体产生，初次免疫后31 d效价可达1∶1 600。双抗体夹心ELISA结果显示纯化后的IgY有较高的敏感性，可检测到的SEA达2.4 ng/ml。 结论 制备的抗SEA鸡卵黄抗体的特异性和敏感性均较高。     

山丘型血吸虫病流行区人群血吸虫抗体消长监测

目的 目的 了解山丘型血吸虫病轻疫区人群血吸虫抗体水平的变化规律。 方法 方法 选择四川省丹棱县桂香村为试区,每年秋季采用间接血凝试验 （IHA） 检查村民血吸虫感染情况, 阳性者再以Kato?Katz法检查。选择2006-2011年连续参加检查的人群, 分析人群血吸虫抗体阳性率、 抗体滴度 （GMRT）、 每克粪便虫卵数 （EPG） 变化。 结果 结果 2006-2011年桂香村共有353人连续参加血吸虫病检查, 人群血吸虫抗体阳性率从20.73%下降到13.67%, 人群GMRT从1.63下降到1.06。抗体阳性者转归以阴转为主, 抗体滴度逐年降低; 抗体阴性者多维持阴性。血吸虫病确诊患者化疗后, 抗体阳性率从100%下降到 20%, GMRT从34.29下降到1.58。GMRT与EPG呈高度正相关 （r = 0.94, P < 0.05）。 结论 结论 山丘型血吸虫病轻疫区人群血吸虫抗体阳性率维持在较高水平; 应规范血吸虫病免疫诊断方法, 开发适用于不同流行程度疫区的诊断试剂。     

Sensitive enzyme-linked immunosorbent assay with urine samples: a tool for surveillance of schistosomiasis japonica

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect antibodies to Schistosoma japonicum soluble egg antigens (SEA) in un-concentrated urine was developed. The urine ELISA was applied to samples collected in a schistosomiasis-endemic village in China. The levels of anti-SEA antibodies detected in urine correlated well with those obtained with paired serum samples (r = 0.694, p<0.0001). Among 129 serum ELISA positives, 112 (86.8%) were positive by urine ELISA, while all 40 serum ELISA negatives from a non-endemic area were negative. The levels of anti-SEA in urine samples were stable up to 8 weeks of storage at 37 degrees C, with sodium azide as a preservative. Therefore, ELISA with urine samples can be used for the surveillance of schistosomiasis.     

2008年全国血吸虫病潜在流行区监测预警报告

目的掌握血吸虫病潜在流行区血吸虫病潜在流行因素的动态变化,为建立血吸虫病监测预警系统以应对突发疫情提供科学依据。方法于2008年在湖北、江苏、安徽、山东、重庆等5省（市）10个县（市、区）选择血吸虫病潜在流行区设立固定监测点和流动监测点,采用血清学、病原学方法调查当地人群、流动人口及家畜的血吸虫感染情况;在危险地带及可疑环境开展钉螺孳生分布调查,并在通江河道开展钉螺扩散调查。结果对9县（市、区）6～65岁当地居民5225人进行血清学检测,阳性58例,阳性率为1.11%;其中IHA方法检测4224人,阳性35例,阳性率为0.83%,ELISA检测1001人,阳性23例,阳性率为2.30%。对56例血清学检查阳性者的粪样进行Kato-Katz法检测,结果均为阴性。对渔船民及其他流动人口2204人进行血清学检测,阳性51例,阳性率为2.31%;其中IHA检测1603人,阳性26例,阳性率为1.62%,ELISA检测601人,阳性25例,阳性率为4.16%。对29例血检阳性者进行粪检,8例检测到血吸虫虫卵。潜在流行区开展钉螺调查面积48.31 hm2,未查获钉螺;钉螺扩散及可疑环境调查亦未发现有钉螺从流行区扩散至潜在...     

不同流行程度下日本血吸虫病血清学诊断方法的Meta分析

目的 目的 通过Meta分析, 综合评价不同流行程度下间接血凝实验 （IHA）、 酶联免疫吸附测定 （ELISA） 和胶体染料 试纸条法 （DDIA） 的日本血吸虫病诊断效果。方法 方法 通过文献检索, 按照纳入和排除标准建立数据库, 采用Meta?disc和 R软件进行阈值检验、 异质性检验、 效应量加权定量合并及SROC曲线拟合等Meta分析。结果 结果 共有60篇文献符合纳入 标准。IHA在重、 中度及低度流行区的灵敏度分别为0.84、 0.76和0.94, 特异度分别为0.73、 0.64和0.73; ELISA在重、 中度 及低度流行区的灵敏度分别为0.88、 0.80和0.93, 特异度分别为0.59、 0.59和0.62; DDIA在重、 中度及低度流行区的灵敏 度分别为0.93、 0.81和0.93, 特异度分别0.66、 0.69和0.59。IHA、 ELISA与DDIA的加权合并灵敏度分别为0.83、 0.87和 0.90; 加权合并特异度为0.69、 0.60和0.62。IHA、 ELISA和DDIA的总体SROC曲线下面积分别为0.89、 0.96和0.92。结 结 论 论 不同流行程度下, 血吸虫病血清学诊断方法的检验效能存在一定差异。血吸虫病诊断试剂的灵敏度与特异度均需 进一步提高     

2008-2012年湖北省血吸虫病潜在流行区疫情监测

目的 目的 掌握湖北省血吸虫病潜在流行区疫情动态。 方法 方法 2008-2012年在湖北省选择三峡库区和汉江流域血吸 虫病潜在流行区设立固定监测点和流动监测点, 采用间接血凝试验 （IHA）、 Kato?Katz法或塑料杯顶管法调查当地居民、 流 动人口及家畜血吸虫感染情况。在可疑环境开展钉螺调查, 并在三峡库区开展钉螺扩散调查。结果 结果 调查当地6～65岁 居民6 052人, IHA阳性72例, 阳性率为1.19％, 72例IHA阳性者Kato?Katz法检测均为阴性。检测流动人口5 004人, IHA 阳性68例, 阳性率为1.36％, 68例IHA阳性者Kato?Katz法检测均为阴性。钉螺调查287.07 hm2 , 未查获钉螺, 钉螺扩散及 可疑环境调查亦未发现钉螺。结论 结论 湖北省血吸虫病潜在流行区发现一定数量的IHA阳性者, 应继续加强监测。     

2005－2014年血吸虫病门诊就诊者IHA检测结果分析?

目的 目的 了解血吸虫病专科门诊就诊者血清IHA检测阳性率变化。方法 方法 收集2005-2014年湖北省疾病预防控 制中心门诊就诊者IHA检测资料， 并进行统计分析。结果 结果 2005-2014年， 该专科门诊共采用IHA检测7 113人，547人 检测结果为阳性， 阳性率为7.69%； 2008年以前为阳性率增高阶段， 2008年血检阳性率达14.85%， 较2005年 （5.81%） 明显 升高 （χ2 = 47.40，P＜0.01）； 2008年后为回落阶段， 至2014年阳性率降至3.76%， 较2008年显著下降 （χ2 = 12.29，P＜ 0.01）。10 ～＜30岁年龄组IHA阳性率高于其他年龄组， 差异有统计学意义 （P 均＜ 0.012 5）； 男性就诊及血检阳性人数 均多于女性。结论 结论 湖北省血吸虫病疫情显著下降， 男性和10 ～＜30岁年龄组为感染高危人群， 应有针对性地开展健 康教育措施。     

基于2-DE和蛋白质组技术筛选的日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶的表达及其诊断应用

目的扩增并表达日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶（SjOAT）,评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值。方法构建pET28a／sjOAT质粒,转化至E．coli BL21,IPTG诱导表达;应用Ni^2＋亲和层析法纯化OAT;SDS-PAGE和Western blot分析、鉴定表达产物;应用ELISA法检测待检患者血清,比较SjOAT与日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）对血吸虫和其它寄生虫感染的检测结果。结果成功克隆表达了SjOAT,Western blot检测结果表明rSjOAT能被血吸虫病患者血清识别;以rSjOAT—ELISA和町SEA—ELISA分别检测急／慢性血吸虫病患者和其它寄生虫感染者血清的结果经校正χ^2检验,差异无统计学意义（P〉0．05）;对于正常对照者血清和疫区粪检阴性者血清,两种检测方法的特异性比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论rSjOAT在体外获得表达,用于诊断人血吸虫病具有高度敏感性和特异性。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原经两种免疫途径获得的鸡卵黄抗体IgY动态观察

目的对比两种免疫途径产生抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的特异性IgY抗体水平动态变化。方法7只新西兰兔感染日本血吸虫尾蚴(1500/只)42d后解剖收集虫卵,制备SEA。将SEA分别经皮下和静脉注射免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次和第2次免疫间隔2周,之后每次间隔4周,共免疫5次,50μg/(只·次)。取两组免疫前,以及首次免疫后2～18周生产的鸡蛋,用水稀释法粗提IgY,ELISA检测每2周IgY的动态变化。IgY纯化试剂盒(EGGstract IgY Purifiction System)纯化静脉组首次免疫后8～18周的IgY,紫外吸收法检测抗体浓度,琼脂糖双扩散法和ELISA检测IgY峰值水平的抗体效价,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析比较免疫前后抗体特异性。结果静脉组和皮下组分别在首次免疫后8和12周IgY抗体水平达高峰,A492值分别为1.28和0.78,静脉组IgY水平至18周仍维持较高水平,皮下组抗体水平达到峰值后逐渐下降。纯化后IgY浓度约为6.5～9.0mg/ml,琼脂糖双扩散法和ELISA测得静脉注射组峰值水平抗体效价分别为1∶16和1∶51200。经SDS-PAGE和Western blotting分析,纯化后的IgY在相对分子质量(Mr)25000和68000处各有一条清晰条带,且免疫后IgY可与SEA发生特异性反应。结论静脉注射法比皮下注射法能获得更高水平的鸡抗日本血吸虫SEA特异性IgY抗体,且纯化后的IgY抗体具有较好的特异性。     

胶体染料试纸条试剂盒检测曼氏血吸虫病的初步研究

目的探索日本血吸虫胶体染料试纸条试剂盒(DDIA)用于检测曼氏血吸虫病的可行性。方法采用日本血吸虫DDIA检测从埃及尼罗河地区曼氏血吸虫病流行区采集的曼氏血吸虫病人血清及当地健康人血清。结果34份曼氏血吸虫病人血清DDIA均呈阳性,14份当地健康者血清均为阴性。与用曼氏血吸虫IHA和ELISA法检测结果相同。结论日本血吸虫DDIA也可用于检测曼氏血吸虫病。