金黄色葡萄球菌生物膜产生及相关毒力因子研究

目的 金黄色葡萄球菌引起的感染遍及临床各科,人体各部位。对临床分离的金黄色葡萄球菌进行生物膜、生物膜相关因子及毒力因子检测；方法 刚果红培养基法进行生物膜筛选；用电子显微镜观察生物膜的形成；用PCR方法检测生物膜相关基因及毒力因子。结果 100株金黄色葡萄球菌中,63株产生生物膜,产生物膜率达63.0％,均产生与生物膜高度相关的icaA基因、icaD基因；还可产生ebh、sea、seb、pvl、hla、fnbA 等毒力因子；产生物膜的菌中MRSA菌株占51.2%,MSSA占48.8%；结论 产生物膜的金黄色葡萄球菌已经成为医院感染的致病因素之一,常产生各种毒力因子。     

肺癌患者中心静脉导管相关表皮葡萄球菌icaA、icaD表达及转化生长因子β1与生物膜的关系

背景：研究证实,以生物材料为中心的感染细菌临床株致病力与其在中心静脉导管材料表面形成细菌生物膜的能力呈正相关。目的：分析肺癌患者中心静脉导管相关表皮葡萄球菌icaA、icaDmRNA表达及外周血转化生长因子β1水平与细菌生物膜形成的关系。方法：种属鉴定相关性血流感染肺癌患者表皮葡萄球菌类型后行细菌基因组DNA抽提,PCR法检测生物膜形成相关基因icaA、icaDmRNA表达及生物膜表型。酶联免疫吸附试验检测相关性血流感染与未感染肺癌患者血清转化生长因子β1水平。结果与结论：相关性血流感染肺癌患者表皮葡萄球菌操纵子icaA、icaD基因表达与生物膜形成呈正相关（P〈0.01）,且表皮葡萄球菌生物膜阳性患者外周血转化生长因子β1水平较无相关性血流感染肺癌患者高（P〈0.05）。表明置入中心静脉插管引起表皮葡萄球菌感染icaA、icaD基因表达阳性肺癌患者较易形成细菌生物膜,外周血高水平转化生长因子β1对细菌生物膜形成有积极作用。     

新生儿血培养中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的耐药基因及细胞间黏附基因A和D的研究

目的探讨新生儿血培养中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的耐药基因状况,并对分离株的细胞间黏附基因A和D在菌血症诊断中的意义进行了研究。方法对新生儿血培养中分离到的耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌进行抗生素药敏试验及菌株鉴定,采用PCR法进行mecA、icaA及icaD基因的检测。结果 100株耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的分离株中mecA、icaA及icaD基因阳性检出率分别54株(58.7%)、62株(67.4%)、13株(14.1%)。在11例icaA和icaD同时阳性的病例中,有10例被诊断为新生儿菌血症。结论新生儿败血症感染耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌携带耐药基因十分严重,应重视对其监测与控制。icaA和icaD基因同时阳性是临床诊断凝固酶阴性葡萄球菌败血症的一种潜在实验室方法。     

临床分离表皮葡萄球菌相关基因与生物膜表型的关系

目的：分析临床分离表皮葡萄球菌 icaA、aap 、atlE、sarA 基因与生物膜表型的关系。方法收集临床分离的表皮葡萄球菌78株,采用 PCR 法扩增 icaA、aap 、atlE、sarA 基因,组织细胞培养板黏附法检测生物膜表型,χ2检验分析上述基因与生物膜表型的关系,Wilcoxon 符号秩检验分别分析 icaA ＋菌及 icaA -菌在胰酶大豆肉汤（TSB）与TSB＋3％氯化钠中生物膜表型光密度（OD）值的差异。结果78株表皮葡萄球菌 icaA、aap 、atlE、sarA 基因阳性率分别为24．4％（19/78）、79．5％（62/78）、73．8％（57/78）、82．1％（64/78）。产生物膜株阳性率为51．3％（40/78）,其中高产生物膜16株,均携带 icaA 基因;弱产生物膜24株。经统计学分析,上述基因与生物膜表型之间有相关性,icaA 基因与高产生物膜表型有相关性。icaA ＋菌及 icaA -菌在 TSB 与TSB＋3％氯化钠中生物膜 OD 值的差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论表皮葡萄球菌生物膜表型涉及多种因子参与,而 icaA 基因有助于高产生物膜表型形成。环境因素也可影响表皮葡萄球菌生物膜表型。     

高水平莫匹罗星耐药MRSA体外生物膜形成能力及相关基因检测

目的 了解高水平莫匹罗星耐药甲氧西林耐药金葡菌(MuH MRSA)体外生物膜形成能力及介导生物膜形成相关基因的分布.方法 对分离自上海和浙江省温州地区5所教学医院的803 株临床分离MRSA进行莫匹罗星纸片扩散法检测最低抑菌浓度(MIC),mupA基因PCR扩增筛选MuH MRSA,分光光度计检测MuH MRSA菌株体外生物膜的形成能力,PCR扩增生物膜形成相关基因(icaA、icaD、agr、sarA、sasG、bap和ccpA).结果 共筛选出53株MuH MRSA,其中仅5株(9.4%,5/53)具有体外形成生物膜的能力;基因检测显示,icaD和agr基因存在于全部MuH MRSA菌株中,而icaA、sarA、sasG和ccpA基因则分别存在于83.0%、86.8%、84.9%和92.5%的菌株中,仅有1株细菌携带bap基因.结论 大部分生物膜形成相关基因广泛分布于MuH MRSA菌株中,但仅agr基因可能是该类菌株体外生物膜形成能力的主要影响因素.     

表皮葡萄球菌icaA和icaD基因表达及其与黏质物形成的关系

目的了解临床分离的表皮葡萄球菌所携带的icaA和icaD操纵子表达情况及其与黏质物形成之间的关系。方法收集1CU临床分离的表皮葡萄球菌62株,采用刚果红法检测其黏质物形成,PCR法检测icaA、icaD基因表达,卡方检验法进行统计学处理。结果62株表皮葡萄球菌中产黏质物菌株有26株（41．9％）;产黏质物菌株中icaA、icaD基因表达阳性的菌株分别为22株（84．6％）和19株（73．1％）,icaA、icaD基因表达均为阳性有17株（65．4％）,明显高于非产黏质物菌株（P〈0．01）;icaA、icaD基因表达均阴性为2株（7．7％）,明显低于非产黏质物菌株（P〈0．01）。结论icaA、icaD基因表达对表皮葡萄球菌的黏质物产生具有重要影响,但并不是其唯一的影响因素。     

4种方法检测表皮葡萄球菌生物膜形成能力的应用价值探讨

目的比较4种方法检测表皮葡萄球菌体外生物膜形成能力的应用价值,帮助临床选择检测生物膜形成能力的可靠方法。方法用刚果红实验、半定量粘附实验、扫描电镜实验、PCR扩增icaA分别检测临床分离的45株表皮葡萄球菌生物膜的形成能力,经行×列表χ2检验比较阳性检出率,并以扫描电镜检测法为＂金标准＂计算其他3种方法的灵敏度和特异性。结果 4种方法检出表皮葡萄球菌生物膜形成的阳性率分别为31.1%、40.0%、40.0%、28.9%,无统计学差异（χ2=1.80,P〉0.05）。刚果红实验、半定量粘附实验、PCR扩增icaA检测生物膜形成能力的灵敏度分别为77.8%、100%、77.2%,而特异性均为100%。结论 4种方法均可用于体外生物膜检测。     

自溶素基因与表皮葡萄球菌生物膜形成相关性研究

目的研究自溶素(atlE)基因与表皮葡萄球菌生物膜形成的相关性。方法收集2015年6月至2016年6月该院临床分离的表皮葡萄球菌64株进行研究,用生物膜形成试验检测细菌生物膜,采用聚合酶链反应扩增atlE基因,分析atlE基因与表皮葡萄球菌生物膜形成的相关性。结果检出生物膜阳性菌株24株,检出率为37.5%;检出atlE基因菌株31株,检出率为48.4%;atlE基因与表皮葡萄球菌生物膜形成有明显的相关性(P0.05)。结论表皮葡萄球菌有生物膜形成能力,atlE基因与表皮葡萄球菌生物膜形成相关。     

引起压疮感染的金黄色葡萄球菌生物膜形成情况及耐药性分析

目的 了解该院压疮感染患者标本中分离的金黄色葡萄球菌的人群分布、生物膜形成情况及耐药情况等流行病学特征,为临床提供重要依据。方法 2019年5月至2022年5月该院共收集到与压疮感染相关的金黄色葡萄球菌126株,采用Vitek MS质谱仪进行细菌鉴定,药敏试验采用纸片扩散法(K-B法),按美国临床实验室标准化协会2016-M100的标准进行药敏结果分析,用结晶紫染色法检测金黄色葡萄球菌生物膜并对生物膜形成能力进行判定,生物膜中分别加入葡萄糖和银离子粉末,观察其对生物膜形成的影响。结果 该院共收集到与压疮感染相关的金黄色葡萄球菌126株,各年龄段及各级压疮均有检出。形成生物膜的菌株占73.00%,其中Ⅳ期压疮分离的菌株形成生物膜的菌株比例(81.81%)高于其他分期(Ⅱ、Ⅲ期)分离的菌株(63.33%),差异有统计学意义(P<0.05);不同生物膜形成能力的菌株对青霉素G、四环素、环丙沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率较高,对替考拉宁、左氧氟沙星的耐药率较低,未检出对万古霉素耐药的革兰阳性菌,不同生物膜级别金黄色葡萄球菌的耐药性比较,差异无统计学意义(P>0.05);11.1...     

血流感染金黄色葡萄球菌毒力基因、agr分型及生物膜形成能力调查

目的 探讨血液来源金黄色葡萄球菌耐药性、毒力基因、agr分型、生物膜形成能力，并比较甲氧西林敏感株与耐药株间的差异。方法 收集2019年1月—2020年12月102株血液分离非重复金黄色葡萄球菌菌株，采用全自动微生物鉴定药敏分析系统进行药物敏感性检测；采用PCR及多重PCR分析菌株毒力基因携带情况及agr基因多态性；采用96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力。采用卡方检验和Fisher精确概率法比较分析甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株间耐药性、毒力基因、agr分型及生物膜形成能力的差异。结果 102株金黄色葡萄球菌中，43株为MRSA,59株为MSSA。毒力基因普遍表达葡萄黄质蛋白基因crtN(99.0%)、溶血素基因(hla 97.1%、hlb 98.0%、hld 96.1%),其次为表面因子CP8合成酶基因cap8H(34.3%)、中毒性休克综合征毒素-1基因tst(21.6%),其中携带crtN/hla/hlb/hld 4种毒力基因组合的菌株最多(48株)。agr分型阳性率为97.1%,其中agrⅠ型占56.9%,agrⅡ型占36...     

血流感染金黄色葡萄球菌毒力基因、agr分型及生物膜形成能力调查*

摘要:目的探讨血液 来源金黃色葡萄球菌耐药性、毒力基因、agr 分型、生物膜形成能力,并比较甲氧西林敏感株与耐药株间的差异。方法收集2019年1月一2020年12月102株血液分离非重复金黃色葡萄球菌茵株,采用全自动微生物鉴定药敏分 析系统进行药物敏感性检测;采用PCR及多重PCR分析菌株毒力基因携带情况及agr基因多态性;采用96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力。采用卡方检验和Fisher 精确概率法比较分析甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏 感金黃色葡萄球菌(MSSA)菌株间耐药性、毒力基因、agr 分型及生物膜形成能力的差异。结果102 株金黄色葡萄球菌中,43株为MRSA,59株为MSSA。毒力基因普遍表达葡萄黃质蛋白基因crtN(99.0%)、溶血素基因(hla 97. 1%、hlb 98. 0%、hld 96.1%),其次为表面因子CP8合成酶基因cap8H(34.3%)、中毒性休克综合征毒素-1基因tst( 21.6%),其中携带crtN/hla/hlb/hld 4种毒力基因组合的菌株最多(48株)。agr分型阳性率为97.1%,其中agr I型占56.9% ,agr I型占36.3%,agr I型占 4.9%,未检测出agt IV型,agr 未获分型3株。生物膜形成阳性共28株,其中12株可形成强生物膜。MRSA菌株对环丙沙星、四环素、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、莫西沙星的耐药率高于MSSA菌株(P<0.05) ;MRSA菌株tst基因携带率高于MSSA (P<0.01) ,cap8H基因携带率低于MSSA(P<0.05),差异有统计学意义;MRSA菌株中agr I和agr I型各占46.51 %和48.84% ;MRSA菌株更倾向形成中等或弱生物膜,与MSSA菌株相比在生物膜形成能力上差异无统计学意义。结论临床分 离血流感 染金黄色葡萄球菌存在多种毒力基因、agr分型、生物膜形成能力,需加强监测。     

表皮葡萄球菌生物膜形成与细菌耐药性的相关性分析

目的探讨表皮葡萄球菌临床分离株生物膜的形成情况,分析其生物膜形成与细菌耐药性的相关性。方法收集2014年1月至2015年2月住院患者血标本分离出的表皮葡萄球菌62株,采用生物膜形成试验和聚合酶链式反应(PCR)扩增试验检测细菌生物膜,并采用纸片扩散法(K-B法)进行细菌药物敏感性试验。结果利用生物膜形成试验检出生物膜阳性菌株23株,检出率为37.1%;PCR扩增试验检出icaA基因27株,检出率为43.5%,差异无统计学意义(P0.05);两种方法同时阳性的菌株为14株。生物膜阳性菌株对所测抗菌药物的耐药率普遍高于生物膜阴性菌株,其中对庆大霉素、青霉素G、苯唑西林、左旋氧氟沙星、头孢西丁的耐药率比较差异有统计学意义(P0.05),所有菌株对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀均敏感。结论两种方法对表皮葡萄球菌生物膜的检出率无明显差异,生物膜阳性菌株耐药率普遍高于生物膜阴性菌株。     

A蛋白与凝固酶凝集试验在金黄色葡萄球菌快速鉴定中的应用

目的探讨金黄色葡萄球菌快速检测的可能性。方法用凝固酶(CA)(试管法和玻片法)和葡萄球菌A蛋白(SPA)两种方法检测667株葡萄球菌。结果378株金黄色葡萄球菌中二者同时呈阳性的有303株,阳性率为80.2%,特异性、准确性均为100%;CA与SPA试验联合使用的阳性率之和高至98.9%,而其他289株葡萄球菌CA与SPA试验的阳性率之和仅为12.4%。结论CA与SPA试验联合运用对金黄色葡萄球菌的鉴定具有快速、准确、简便易行及特异性强等优点。     

凝固酶阴性葡萄球菌生物膜标志物3种检测方法比较

通过对凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）在生物膜形成过程中产生的胞间多糖黏附素表型特征和分子标志物检测结果的相关性分析,对刚果红试验、icaD片段PCR扩增及黏附试验进行评价。 方法 采用定性的刚果红试验、icaD片段PCR扩增试验检测116株临床分离的CNS胞外多糖黏附素产生能力,部分菌株采用定量的黏附试验检测生物膜的形成能力。 结果 116株CNS中,刚果红试验阳性率为20.7%,icaD片段PCR扩增阳性率为29.3%,两方法比较,χ^{2=5.062, P<0.05;刚果红试验和黏附试验结果比较,χ2=5.785,P<0.05;黏附试验结果与icaD片段的PCR扩增结果比较,χ2=0.143,P>0.05。 结论 生物膜不仅存在于表皮葡萄球菌还存在于其他CNS菌种中。刚果红试验操作简单易行,但敏感性稍差;定量黏附试验操作繁琐,不易质量控制,不适宜常规开展;以PCR技术扩增ica操纵子,方法简单易行,能够满足临床要求。}     

亚抑菌浓度红霉素对表皮葡萄球菌临床菌株的影响

目的探讨亚抑菌浓度红霉素对表皮葡萄球菌临床菌株的影响。方法收集该院表皮葡萄球菌临床菌株,按照临床实验室标准化协会推荐的方法进行药敏试验。采用免疫比浊法检测亚抑菌浓度红霉素对表皮葡萄球菌增殖的影响,并采用结晶紫染色法检测亚抑菌浓度红霉素对其生物膜形成的影响。最后,利用实时荧光定量PCR检测亚抑菌浓度红霉素对表皮葡萄球菌黏附基因表达的影响。结果共收集5株临床分离表皮葡萄球菌,最低抑菌浓度分别为16、32、16、64和32μg/mL。亚抑菌浓度的红霉素(8μg/mL)对表皮葡萄球菌浮游菌的增殖无影响(P0.05),但能显著抑制其生物膜的形成(P0.05)。8μg/mL的红霉素还能显著抑制黏附基因icaA和icaD基因的表达(P0.05)。结论亚抑菌浓度红霉素能抑制表皮葡萄球菌临床菌株生物膜的形成及黏附基因的表达。     

金黄色葡萄球菌sasX、psm-mec、pvl三种毒力基因的检测与分析

摘要：目的：分析54株金黄色葡萄球菌的mecA基因与sasX、psm mec、pvl三种毒力基因分布及临床相关性。 方法：收集2013年1～5月南京医科大学第一附属医院临床分离的54株金黄色葡萄球菌,用PCR及测序的方法分析mecA、sasX、psm-mec、pvl基因的携带情况,并结合患者的临床资料,探讨其临床相关性。 结果：54株金黄色葡萄球菌中有23株mecA基因检测阳性,31株mecA基因阴性。mecA基因阳性菌株较mecA基因阴性株体外药敏试验呈多重耐药表型。sasX基因阳性1株,阳性率为1.9%;psm-mec基因阳性10株,阳性率为18.5%;pvl基因阳性38株,阳性率为70.4%。mecA基因阳性菌株psm-mec基因阳性率显著高于mecA基因阴性菌株（P<0.01）,pvl基因阳性率显著低于mecA基因阴性菌株（P<0.05）。mecA基因和psm-mec基因与临床感染严重程度显著相关（P均<0.01）。 结论：联合检测mecA、psm-mec和pvl基因有利于金黄色葡萄球菌感染的诊断、治疗和预后综合评估。     

91株金黄色葡萄球菌毒力基因和耐药基因分布研究

目的探讨91株金黄色葡萄球菌菌株的毒力基因和耐药基因分布。方法采用PCR方法检测金黄色葡萄球菌30个毒力基因和13个耐药基因。结果毒力基因除肠毒素基因see和sep,其他28个均可在91株金黄色葡萄球菌菌株中检测到,且某些毒力基因如溶血素基因hla、hld、hlg-v和杀白细胞毒素基因lukED的阳性率较高(80%);耐药基因除氨基糖苷类耐药基因ant4′,其他12个均可在91株金黄色葡萄球菌菌株中检测到,特别是青霉素耐药基因blaZ,阳性率达100%。结论金黄色葡萄球菌流行株均携带多个毒力基因和耐药基因。     

1,2-二羟基蒽醌降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌混合生物膜的作用研究

目的分析1,2-二羟基蒽醌降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌混合生物膜的作用及其机制。方法收集2018年临床分离鉴定的2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)以及2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA);利用分光光度计法检测1,2-二羟基蒽醌作用后金黄色葡萄球菌与白念珠菌DAY185混合菌群生长能力变化,并进一步采用96孔板结晶紫染色法测定1,2-二羟基蒽醌作用前后金黄色葡萄球菌与白念珠菌DAY185单独生长时以及混合生物膜形成能力差异。结果1,2-二羟基蒽醌可以明显降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌DAY185混合菌群的生长能力;静态生物膜实验显示1,2-二羟基蒽醌可以明显降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌DAY185混合生物膜的形成能力,其作用主要是通过降低白念珠菌DAY185的生物膜形成能力。结论1,2-二羟基蒽醌可以降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌混合生物膜形成的能力,其机制主要通过降低白念珠菌菌丝形成的相关基因ALS3和RBT1的表达。     

金黄色葡萄球菌生物膜形成能力及其耐甲氧西林相关性

目的研究金黄色葡萄球菌临床分离菌株耐药性及其生物膜形成能力。方法采用药敏试验和人工生物膜培养方法,观察金黄色葡萄球菌耐药性及其生物膜形成能力。结果共检测201株临床分离的金黄色葡萄球菌,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为138株,占68.66%;甲氧西林敏感型金葡菌(MSSA)为52株,占25.87%。临床分离的金黄色葡萄球菌培养48 h后生物膜经结晶紫染色后的吸光度值MRSA与MSSA在生物膜形成能力方面无统计学差异。结论该医院临床分离的金黄色葡萄球菌中MRSA比例较高;可用结晶紫染色检测吸光度值的方法来测定生物膜形成能力。需进一步通过生物膜筛选法研究耐药性与生物膜形成能力之间的关系。     

慢性阻塞性肺疾病细菌生物膜检测及耐药性分析

目的 研究慢性阻塞性肺疾病( COPD)患者细菌生物膜检测及耐药机制.方法 100例慢性阻塞性肺疾病(COPD)住院患者痰液标本采用刚果红培养法,检测细菌生物膜形成,K-B琼脂扩散法进行抗菌药敏试验.结果 检测到G+细菌中14株产生生物膜(阳性率58.3％),其中金黄色葡萄球菌9株,表皮葡萄球菌5株;G-细菌中10株产生生物膜(阳性率17.3％),其中普通变形杆菌6株,铜绿假单孢菌4株;产生生物膜的葡萄球菌呈多重耐药,对复方新诺明耐药明显较重,且高于无生物膜葡萄球菌(x2=4.03,P＜0.05);有生物膜的铜绿假单孢菌/普通变形杆菌对哌拉西林和阿米卡星的耐药率明显比无生物膜的高(x2=6.43,P＜0.05).结论 细菌生物膜形成的实验室检查对COPD患者临床抗生素的使用有极大帮助.