外源性TGF-β1诱导人乳腺癌MCF-7细胞的乙醛脱氢酶1 mRNA及蛋白表达

 目的 本研究旨在探讨外源性TGF β1诱导人乳腺癌MCF 7细胞对乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)mRNA及蛋白表达的影响。方法 用不同浓度(1、5 ng/mL)的TGF β1诱导体外培养的MCF 7细胞48 h后,RT PCR 检测ALDH1 mRNA的表达变化,Western blot检测ALDH1蛋白的表达变化。结果 TGF β1(1、5 ng/mL)诱导的MCF 7细胞的ALDH1 mRNA及蛋白表达均高于未诱导的MCF 7亲本细胞,差异有统计学意义(P均<0.001);高浓度(5 ng/mL)TGF β1诱导的MCF 7细胞的ALDH1 mRNA及蛋白表达均高于低浓度(1 ng/mL)TGF β1诱导的MCF 7细胞,差异有统计学意义(P均<0.001)。结论 外源性TGF β1可诱导人乳腺癌MCF 7细胞上调ALDH1 mRNA及蛋白的表达,可能诱导ALDH1+乳腺癌肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)的转化,并有一定的浓度依赖性。     

豆蔻明对肺纤维化的治疗作用及机制

目的 观察豆蔻明（Cardamonin,CDN）对肺纤维化小鼠的作用,并探究其对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/smad信号通路的影响。方法 将小鼠随机分为生理盐水（Sham）组、博莱霉素（Bleomycin,BLM）组、豆蔻明低剂量（low dose of Cardamonin,CDN-L）组、豆蔻明中剂量（medium dose of Cardamonin,CDN-M）组、豆蔻明高剂量（high dose of Cardamonin,CDN-H）组、地塞米松（dexamethasone,DXM）组;单次气管注射BLM诱导肺纤维化,计算肺指数;酶联免疫吸附法测血清肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;试剂盒测肺组织羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）含量,苏木精-伊红、马松染色观察肺炎症程度及纤维化情况,RT-PCR法检测肺组织TGF-β1/smad信号通路相关基因表达情况。结果 与Sham组相比,BLM组小鼠肺指数、Szapiel评分、Ashcroft评分明显升高（...     

小鼠胸腺上皮细胞的培养、鉴定及对淋巴细胞促增殖作用的初步研究

目的 研究小鼠胸腺上皮细胞的分离培养方法、鉴定及其对胸腺淋巴细胞的促增殖作用。方法 无菌取4~5周龄BALB/c小鼠的胸腺, 组织块培养30天, 观察不同时间细胞形态的变化;0.1%胰蛋白酶消化细胞传代;用波形蛋白和角蛋白进行免疫组化鉴定;新型细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒比色法检测地塞米松对胸腺、脾脏淋巴细胞单独培养及胸腺淋巴细胞与胸腺上皮细胞共培养的抑制作用。结果 培养至第3~4天可见贴壁的组织块周围出现少量胸腺上皮细胞, 从内到外细胞形状为圆形、多边形、树突状、梭形等;培养至10天左右时, 细胞生长较快, 出现大量的贴壁细胞;培养21天左右细胞大量融合并呈典型的鹅卵石样排列;细胞免疫组化显示广谱角蛋白呈阳性反应, 波形蛋白呈阴性反应;随着药物浓度的增加, 胸腺、脾脏淋巴细胞存活率均降低, 共培养后胸腺淋巴细胞的存活率升高。结论 组织块法体外培养小鼠胸腺上皮细胞简单可行;胸腺上皮细胞具有促胸腺淋巴细胞增殖的作用。     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制

[目的] 观察淫羊藿苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮-间质转化的作用以及对Smad信号通路的影响。[方法] 将肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组。采用CCK-8法检测10、20、40 μmol/L的淫羊藿苷干预10 μg/L TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞的增殖影响; 使用实时定量聚合酶链式反应法检测检测上皮间质转化分管关键因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达量; 采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量; 划痕实验和侵袭迁移小室法(Transwell小室)分别检测HK-2细胞的迁移和侵袭能力。[结果] 与空白对照组比较, TGF-β1组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增高(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著增加(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.05)。与TGF-β1组比较, TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著降低(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著增加(P<0.05)。淫羊藿苷对TGF-β1诱导HK-2细胞抑制增殖、迁移和侵袭能力以及上皮间质转化无剂量依赖性。[结论] 淫羊藿苷可以抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮-间质转化的分化, 可能与抑制Smad信号通路有关。     

TGF-β1诱导人肝HL7702细胞发生上皮细胞间质转化的实验研究

目的:探讨体外培养的人肝细胞系在重组人转化生长因子β1(TGF-β1)诱导下是否发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchyme transition,EMT)以及相关标志物的表达变化。方法:人类肝细胞HL7702在含20%小牛血清的1640培养液培养2 d,改用无血清培养并TGF-β1分别诱导24 h,48 h,72 h;观察诱导前后细胞的形态学变化,实时荧光定量RT-PCR及蛋白质免疫印迹技术分析细胞中EMT相关基因和蛋白表达情况。结果:显微镜下观察到TGF-β1诱导前,肝细胞是不规则的六边形,诱导后细胞形态拉长变成纺锤形,细胞间隙变大;实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹显示上皮化标志物E-钙黏附蛋白在TGF-β1诱导后的细胞中表达显著下降,而间质化标志物N-钙黏附蛋白、波形蛋白和Twist却显著增加。结论:正常人类肝细胞株HL7702经重组人TGF-β1的诱导发生上皮-间质转化,这为深入研究TGF-β1和肝纤维化之间的关系奠定了基础。     

卵巢癌SOX4介导TGF-β1诱导的上皮间质转化对侵袭转移能力的影响

目的 探讨SOX4(SRY-related HMG-box4)在卵巢癌中的表达、调控及其对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导卵巢癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)能力的影响。方法 通过对TCGA、GEO等数据库中卵巢癌样本表达谱数据进行分析,探讨SOX4在卵巢癌中的表达情况,及其与EMT相关标志物的相关性。利用shRNA技术敲降卵巢癌SKOV3细胞系中SOX4的表达;利用Western blotting和qRT-PCR技术检测SOX4敲降对上皮标志物ZO1及间质标志物Vimentin和Slug表达的影响;利用Transwell技术检测SOX4敲降对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;使用TGF-β1(10 ng/mL)处理SKOV3细胞72 h,然后通过 Western blotting 和qRT-PCR技术,检测TGF-β1对SOX4表达的调控情况,以及SOX4敲除对TGF-β1诱导EMT能力的影响。结果 SOX4在卵巢癌中的表达显著上调,并与EMT间质标志物呈显著正相关;敲除SOX4可显著下调卵巢癌SKOV3细胞的EMT水平及其侵袭转移能力;TGF-β1可显著上调卵巢癌SKOV3细胞中SOX4的表达水平,而SOX4敲除可显著抑制TGF-β1诱导卵巢癌EMT的能力。结论 SOX4在卵巢癌中表达上调,通过激活EMT促进其侵袭转移能力;并且,作为TGF-β1下游靶蛋白,SOX4介导了TGF-β1对卵巢癌EMT的诱导过程。因此,SOX4是一个干预卵巢癌转移的重要靶点。     

远华蟾毒精对体外乳腺癌4T1细胞上皮间质转化的影响

【摘要】目的 观察远华蟾毒精对乳腺癌细胞4T1迁移、侵袭及上皮 间质转化 (epithelial mesenchymal transition, EMT) 的影响,并研究其相关机制。方法 将鼠乳腺癌细胞系4T1细胞与不同浓度远华蟾毒精( 0、 005、 01、 05、1 、125和15μg/ml)分别培养24 h后,MTT试验检测远华蟾毒精对4T1增殖活性的影响;将实验分为对照组（0μg/ml）和实验组（005、 05μg/ml）,细胞划痕实验和Transwell实验检测对照组（0μg/ml）和实验组（005、 05μg/ml）对细胞迁移、侵袭能力的影响; 免疫荧光检测对照组（0μg/ml）和实验组（05μg/ml）上皮间质转化相关蛋白E 钙粘蛋白(E cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维链接蛋百(Fibronectin)相关蛋白的变化;蛋白质印迹法检测对照组（0μg/ml）和实验组（005、 05μg/ml）上皮间质转化相关蛋白 E cadherin、Vimentin、Fibronectin、转录因子Snail以及PI3k/Akt/mTOR信号通路相关蛋白p Akt、p mTOR表达的变化。结果 MTT试验结果显示,低浓度远华蟾毒精( 0、 005、 01、05和1μg/ml)对4T1增殖无抑制作用,高浓度远华蟾毒精(125 和15μg/ml)对4T1增殖有抑制作用;细胞划痕实验结果显示,对照组与实验组细胞迁移率差异均有统计学意义（P＜005）;Transwell迁移实验结果显示,对照组与实验组穿至下室的细胞数差异均有统计学意义（P＜005）;Transwell侵袭实验结果显示,对照组与实验组穿至下室的细胞数差异均有统计学意义（P＜005）;免疫荧光结果显示,实验组与对照组相比,E cadherin表达增强,Vimentin和Fibronectin表达减弱（P＜005）;蛋白质印迹法结果显示,E cadherin表达上调,Vimentin和Fibronectin表达下调（P＜005）;转录因子Snail表达下调（P＜005）;PI3k/Akt/mTOR信号通路相关蛋白p Akt、p mTOR表达下调（P＜005）。结论 远华蟾毒精通过Akt/mTOR/Snail信号通路抑制乳腺癌的迁移、侵袭及上皮 间质转化,为远华蟾毒精的临床应用提供了理论依据。     

Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响及机制

目的:观察Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨?方法:real-time PCR和Western blot检测GES-1细胞中Trop2 mRNA和蛋白的表达水平;构建过表达Trop2质粒及空载对照质粒并转染GES-1细胞,检测转染效率;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测过表达Trop2后GES-1细胞迁移能力的变化情况;Western blot检测过表达Trop2后GES-1细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子[上皮细胞标志E-钙黏附蛋白(E-cadherin),间皮细胞标志纤维连接蛋白(fibronectin)?波形蛋白(vimentin)]的变化情况?结果:相比胃癌细胞株BGC823和MGC803,Trop2在GES-1细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较低;过表达Trop2的质粒转染GES-1后,Trop2的mRNA表达水平与未转染组相比提高(6.18 ± 0.52)倍,而空载对照组和未转染组相比无明显变化,蛋白水平的变化情况和mRNA相似;细胞划痕实验表明,转染72 h后,过表达组细胞迁移率达到95%,空载对照组细胞迁移率为50%,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Transwell迁移实验发现,转染24 h后,过表达组穿膜细胞数为(87 ± 6)个,而空载对照组为(41 ± 6)个,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Western blot检测过表达Trop2后,随着Trop2蛋白表达量增高,GES-1细胞E-cadherin表达下调,fibronectin和vimentin表达上调?结论:Trop2过表达可以提高胃黏膜上皮细胞的迁移能力,其机制与Trop2促进胃黏膜上皮细胞EMT有关?     

TM4 SF1对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移及EMT的影响

目的:探讨四次跨膜蛋白1(TM4SF1)在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用和可能机制.方法:合成靶向TM4SF1的siRNA并转染MDA-MB-231细胞(TM4SF1 siRNA组),以转染阴性对照siRNA细胞和未转染细胞为对照.用CCK-8实验、Transwell实验检测3组细胞增殖和侵袭转移能力;采用Western ...     

转化生长因子-β1对小鼠肝纤维化的促进作用

目的探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）对实验性小鼠肝脏细胞发生上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transitions,EMT）的促进作用,进而加速肝纤维化（hepatic fibrosis,HF）的形成。方法建立小鼠CCl4诱导HF模型,随机分为正常对照组、HF组与TGF-β1处理组。取对数生长期肝细胞,0.25%胰蛋白酶液消化细胞,0.4%FBS/DMEM同步化处理24 h后,按TGF-β1 2.5、5、7.5 ng/ml作用24、96、144 h分组给予相应处理,相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞组织化学及免疫荧光方法对细胞表型进行鉴定。RT-PCR及Western blot检测EMT[成纤维细胞特异性蛋白-1（fibroblast specific protein-1,FSP-1）,α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）,E-钙黏附素（E-cadherin,E-cad）]mRNA及蛋白表达情况。结果将含有TGF-β1无血清培养基刺激原代小鼠肝细胞48 h后可见较多肝细胞死亡,细胞数量减少,形态由多边形向梭形转变,96 h后小鼠肝细胞内出现凋亡小体,活细胞数量较少且大多数呈现间质细胞梭形形态。5 ng/ml的TGF-β1作用肝细胞96 h后,小鼠肝上皮细胞标志（E-cad）mRNA及蛋白表达逐渐减低,肝间质细胞标志（FSP-1和α-SMA）mRNA及蛋白表达逐渐升高（P〈0.05）。结论 5 ng/ml的TGF-β1作用于HF的小鼠肝细胞96 h后,肝细胞发生EMT现象,TGF-β1有促进实验小鼠肝细胞的迁移、侵袭能力及细胞凋亡的作用,进而发生EMT导致HF。     

NRP1基因敲除对放射性肺纤维化进程的影响及其作用机制

目的：观察神经菌毛蛋白1（NRP1）基因对放射性肺纤维化（RIPF）进程的影响,并探讨其在Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路和转化生长因子β1（TGF-β1）/Smads通路介导的上皮间质转化（EMT）发生发展过程和细胞外基质（ECM）沉积中的作用。方法：利用Cre-LoxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞（AT-Ⅱ）特异性敲除NRP1基因的转基因C57BL/6J小鼠并进行鼠尾鉴定,将160只小鼠按照射后不同时间点随机分为4周组、8周组、16周组和24周组,每组小鼠按随机数字表法分为野生型（Con）组、野生型单纯照射（IR）组、NRP1基因特异性敲除（KO-Con）组和NRP1基因特异性敲除+照射（KO+IR）组,每亚组10只。KO-Con和KO+IR组小鼠腹腔注射他莫昔芬特异性敲除AT-Ⅱ细胞NRP1基因,IR组和KO+IR组小鼠采用20 Gy全胸照射建立RIPF小鼠模型。模型构建完成后,利用HE染色法和Masson染色法验证模型是否构建成功;利用免疫组织化学（IHC）法检测小鼠肺组织中Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达水平;Western blotting法检测小鼠肺组织中NRP1、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白表达水平;实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测小鼠肺组织中NRP1、Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1、Smad2、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA表达水平。结果：HE染色和Masson染色显示RIPF小鼠模型构建成功,IR组小鼠肺部主要为放射性肺炎病理形态表现。与Con组比较,随时间的延长,IR组小鼠肺组织中NRP1蛋白和mRNA表达水平逐渐升高（P<0.05）,24周时达到最高（P<0.01）。与Con组比较,随时间的延长IR组和KO+IR组小鼠肺组织中Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白及mRNA表达水平逐渐升高（P<0.05或P<0.01）;与IR组比较,随时间的延长,KO+IR组小鼠肺组织中Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白和mRNA表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,但仍高于Con组（P<0.05或P<0.01）。与Con组比较,随时间的延长,IR组和KO+IR组小鼠肺组织中上皮细胞标志物E-Cadherin mRNA表达水平逐渐降低（P<0.05）,间质细胞标志物N-Cadherin和Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,但KO+IR组小鼠肺组织中E-CadherinmRNA表达水平明显高于IR组（P<0.05或P<0.01）,N-Cadherin和Vimentin mRNA表达水平均明显低于IR组（P<0.05或P<0.01）。结论：NRP1基因敲除可抑制RIPF的发生发展,其机制可能与调节小鼠肺组织中Wnt/β-catenin和TGF-β1/Smads信号通路的表达进而抑制EMT进程有关。     

黄芪注射液对KKA~y小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨黄芪注射液治疗肾间质纤维化的作用机制,为临床中药治疗糖尿病肾间质纤维化提供实验依据。方法将16只2型糖尿病模型KKAy小鼠随机分为模型组和黄芪注射液治疗组,另取8只C57BL/6J小鼠作为正常组,治疗组小鼠14周龄开始腹腔注射黄芪注射液。于24周龄处死小鼠,取肾脏分别观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、钙依赖性跨膜糖蛋白和转化生长因子β1的表达。结果可见模型组发生明显的纤维化改变,而经黄芪注射液治疗后,小鼠肾间质基质轻度增多,病变较轻微。治疗组KKAy小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1的表达较模型组减少,钙依赖性跨膜糖蛋白的表达增多。结论黄芪注射液可在一定程度上减少α-平滑肌肌动蛋白的表达,抑制KKAy小鼠肾脏组织中转化生长因子β1表达,上调钙依赖性跨膜糖蛋白的表达水平,阻断并逆转肾小管上皮-间质转化的过程,延缓肾小管上皮细胞转分化的发生发展进程。     

骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad 3信号转导的作用

目的探讨骨形成蛋白-7（BMP-7）对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK-2细胞分为以下各组：阴性对照组;阳性对照组：TGF-β1（5ng／ml）处理;MCP-1（0．1,1,10及50ng／ml）组,BMP-7组（0．1,1,10,50ng／ml）;MCP-1（1ng／ml）加BMP-7（50ng／ml）组;MCP-1（1ng／ml）加MCP-1中和抗体（5μg／ml）组。应用半定量RT—PCR方法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）mRNA表达,ELISA方法测定上清液中Ⅰ型胶原分泌,Western blot方法检测HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达。结果MCP-1（0．1,1ng／ml）组HK-2细胞α—SMAmRNA表达较阴性对照组明显增强（P〈0．01）。ELISA方法测定MCP-1（0．1,1ng／ml）组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组（P〈0．01）。MCP-1中和抗体与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后。HKC细胞α—SMAmRNA表达几乎被完伞抑制（P〈0．001）,而BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后HK-2细胞α—SMAmRNA表达仅部分被抑制（P〈0．01）;MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP-1（1ng／ml）组明显降低（P〈0．05）。Western blot方法检测显示,MCP-1（1ng／ml）组HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调（P〈0．01）。MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后,HK-2细胞TGF-β1表达均分别比MCP-1（1ng／mL）单独作用明显下调,以MCP-1中和抗体的作用更强（P〈0．01,P〈0．05）;在MCP-1中和抗体或BMP-7作用24h后,Smad3表达也有类似下调（P〈0．01,P〈0．05）。结论MCP-1能诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达上调有关。BMP-7能部分抑制MCP-7诱导HK-2细胞转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达部分下调有关;间时提示MCP-1诱导的转分化可能涉及非TGF—β依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。     

转化生长因子-β1诱导A549细胞向间充质细胞转化的作用研究

目的:观察重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对人肺上皮细胞株(A549)的转化作用。方法:将体外培养的A549用不同浓度的rhTGF-β1干预后,倒置显微镜观察细胞形态学的变化,用MTT法检测rhTGF-β1对A549增殖的影响。48 h收集蛋白用蛋白质印迹和间接免疫化学方法检测间充质细胞表型Fibronectin-EDA(Fn-EDA)表达变化。结果:rhTGF-β1诱导A549向间充质细胞形态转化,在体外对A549增殖无明显影响,上调间充质细胞表型Fn-EDA表达。结论:rhTGF-β1可诱导A549发生上皮细胞-间质转化(ephethlial-mesenchymal transition,EMT),支持肺上皮细胞发生EMT的观点。     

组蛋白去乙酰化酶1在慢性鼻窦炎上皮细胞中的表达及其对鼻黏膜上皮间质转化的影响

背景 慢性鼻窦炎是耳鼻喉科常见的慢性炎症性疾病.通常不伴鼻息肉的慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)更常见,其病因及发病机制尚不清楚.目的 研究组蛋白去乙酰化酶1(sirtuin 1,SIRT1)在CRSsNP上皮细胞中的表达,并探讨其对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导鼻黏膜上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 采用免疫组织化学染色、Real-time PCR、Western blot观察SIRT1在CRSsNP和正常对照筛窦黏膜上皮中的表达情况.对正常鼻黏膜上皮细胞进行原代培养,并予TGF-β1处理,通过Western blot检测SIRT1过表达对EMT相关蛋白(E-cadherin、α-SMA、N-cadherin、Vimentin)表达的影响.结果 与对照组相比,CRSsNP组SIRT1表达减少(P<0.001).TGF-β1下调鼻黏膜上皮中SIRT1的表达,同时E-cadherin表达减少,α-SMA、N-cadherin、Vimentin表达增加,这一效应可被SIRT1过表达所逆转.结论 SIRT1抑制TGF-β1诱导的鼻黏膜上皮EMT,可能在CRSsNP的病理生理过程中起重要作用.     

LPA在小鼠矽肺模型的表达及其对小鼠肺上皮细胞EMT影响

目的 探究溶血磷脂酸(LPA)在小鼠矽肺模型中的表达及其对小鼠肺上皮(MLE-12)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和模型组,对照组每天给予0.9%氯化钠溶液,模型组采用鼻腔滴注100 mg/L二氧化硅(SiO₂)悬浊液50μl,连续7 d,在第28天时处死,取部分肺组织,免疫组化观察溶血磷脂酸1型受体(LPAR1)的表达,Western blot检测平滑机动蛋白α(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)和LPAR1的蛋白表达;细胞增殖实验检测SiO₂对MLE-12细胞的增殖能力;细胞划痕实验检测SiO₂对MLE-12细胞的迁移能力;将MLE-12细胞分为对照组、SiO₂刺激组和抑制剂组,Western blot检测LPAR1和EMT相关蛋白的表达水平。结果 Western blot检测显示模型组小鼠肺组织内α-SMA和COLⅠ表达增高,模型建立成功;免疫组化显示在模型组小鼠气管支气管周围上皮细胞内LPAR1表达阳性,呈现亮棕色;Western blo...     

柴胡皂甙D对肺纤维化小鼠上皮-间质转化的干预作用及机制研究

目的 观察柴胡皂甙D(SSD)对肺纤维化小鼠上皮-间质转化(EMT)的影响及其机制.方法 将60只雄性昆明小鼠分为对照组、博来霉素(BLM)组和SSD组,BLM组和SSD组通过气管内注入浓度为5 mg/kg的BLM溶液制备肺纤维化模型,对照组给予相同体积的0.9％氯化钠.SSD组每日腹腔内注入SSD溶液(2.0 mg/kg),BLM组和对照组每日同等条件下腹腔内注入0.2mL生理盐水+DMSO(3 mL DMSO溶于97 mL生理盐水).分别在第14天和第28天,处死小鼠取肺组织行病理苏木素-伊红(HE)染色,观察肺泡炎和肺纤维化程度,并通过Western blot检测肺组织E钙黏蛋白、纤维连接蛋白、Wnt蛋白和β-actenin蛋白的表达水平.结果 SSD组和BLM组肺泡炎及肺纤维化程度评分均高于同期对照组,且SSD组低于同期BLM组;SSD组和BLM组纤维连接蛋白、Wnt蛋白和β-actenin蛋白表达均高于同期对照组,且SSD组低于同期BLM组;SSD组和BLM组E钙黏蛋白表达均低于对照组,且SSD组高于同期BLM组.结论 SSD对肺纤维化有一定治疗价值,SSD抑制Wnt/β-catenin信号传导通路负向调节EMT过程可能是其治疗机制之一.     

白介素-1β诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转化的实验研究

目的通过白介素-1β(IL-1β)诱导肾小管上皮细胞转化为肾间充质细胞的研究,探讨炎症因子促进肾间质纤维化的作用机制。方法用IL-1β分别刺激小鼠肾小管上皮细胞3天、4天、5天,提取细胞中的蛋白质,采用Western-blotting测定细胞α-SMA、Vimentin蛋白水平;用IL-1β分别刺激肾小管上皮细胞12h、36h和60h,提取细胞中的总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定α-SMA、Vimentin基因表达水平。结果IL-1β能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin蛋白质合成增加,并随着刺激的时间的延长,两种骨架蛋白的蛋白上皮亦增高;同时IL-1β可上调肾小管上皮细胞α-SMA、Vim-entin的基因表达,也有时间依赖性。10ng/mlIL-1β可显著抑制肾小管上皮细胞增生。结论炎症因子IL-1β可通过上调肾小管上皮细胞两种骨架蛋白的蛋白合成和基因表达,诱导肾小管上皮细胞向肾间充质细胞表型发生转化,从而在肾小管间质纤维化发生发展过程中发挥作用。     

TGF-β1介导的上皮-间质转分化在Gefitinib耐药中的作用

目的 调查上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者接受吉非替尼(Gefitinib)治疗反应性中的作用及机制.方法 突变富集PCR法检测NSCLC患者EGFR突变状况;免疫组化法检测癌组织中上皮钙粘蛋白(E-cadhefin)和纤维连接蛋白(Fibronectin)的表达情况,探讨EMT与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)治疗敏感性的关系.体外选取人肺腺癌细胞系PC9细胞,经TGF-β1反复处理4周,观察细胞形态学变化;MTT检测TGF-β1处理后细胞对Gefitinib敏感性的影响;Western blot验证EMT相关标记蛋白表达变化并检测EGFR信号通路下游蛋白的变化.结果 43例NSCLC标本中,EGFR 19、21外显子突变率为58.14％ (25/43).具有EGFR基因突变的肿瘤E-cadherin 的表达水平显著高于EGFR野生型(70.00％ vs 30.00％,P＜0.05).接受Gefitinib总体有效率为46.51％(20/43),具有E-cadherin阳性表达的患者治疗反应性明显好于Fibronectin阳性的患者(65.00％ vs 30.43％,P＜0.05).TGF-β1可诱导PC9细胞向间质型细胞形态转化,上调Fibronectin的表达;与亲本PC9细胞相比,TGF-β1处理的细胞对Gefitinib的敏感性下降(P＜0.05);这种敏感性的下降伴随着AKT和STAT3的持续活化.结论 EMT在EGFR-TKI耐药中发挥着重要作用,TGF-β1诱导的EMT可影响PC9细胞对Gefitinib的敏感性,这种效应可能是通过持续活化AKT和STAT3而发挥作用.