葛根素通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调节HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:观察葛根素对胰岛素抵抗Hep G2细胞内磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号分子的影响。方法:通过0.5 mmol·L~(-1)棕榈酸联合9×10~(-4)U·L~(-1)胰岛素孵育24 h诱导Hep G2胰岛素抵抗细胞模型,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率以确定葛根素给药浓度。实验设正常组、模型组和葛根素各剂量组(40,80,160,320μg·L~(-1))。葡萄糖检测试剂盒检测细胞培养液上清葡萄糖的含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量,肝糖原测定试剂盒测定Hep G2细胞内肝糖原含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内PI3K,Akt,磷酸化(p)-Akt,GSK-3β,p-GSK-3β的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组Hep G2细胞葡萄糖消耗率明显下调(P0.05),细胞内糖原含量减少(P0.05),细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量增加(P0.05),PI3K和p-Akt蛋白表达下降(P0.05),GSK-3β蛋白表达增加(P0.05);与模型组比较,葛根素可呈剂量依赖性增加细胞葡萄糖消耗率(P0.05),增加细胞内肝糖原含量(P0.05),降低细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量(P0.05),增加PI3K蛋白表达,上调Akt蛋白磷酸活化水平(P0.05),下调GSK-3β蛋白表达并增强其磷酸失活水平(P0.05)。结论:葛根素可通过增强PI3K/Akt/GSK-3β信号转导过程,增加肝细胞内糖原含量从而改善Hep G2细胞的胰岛素抵抗状态。     

大黄素通过线粒体通路诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究大黄素对Hep G2细胞的毒性和可能的作用机制。方法:通过细胞增殖与活性检测试剂(Am-blue)测定大黄素对Hep G2细胞的毒性;使用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)和花青染料(JC-1)探针检测细胞内活性氧与线粒体膜电位水平;使用流式细胞仪,通过磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色试剂盒检测大黄素对Hep G2细胞凋亡的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成熟型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3,8,9(cleaved Caspase-3,8,9)以及聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(cleaved-PARP)等凋亡相关蛋白表达。结果:与空白组比较,大黄素(15,30μmol·L~(-1))对Hep G2细胞具有增殖抑制作用(P0.01),并且具有浓度依赖性;大黄素(15,30μmol·L~(-1))能够升高细胞内活性氧水平,并且使细胞线粒体膜电位降低(P0.01);大黄素(15,30μmol·L~(-1))能够使Hep G2细胞早期和晚期凋亡增加(P0.01);大黄素(15,30μmol·L~(-1))能够激活cleaved Caspases-8,9,3和PARP蛋白的表达(P0.01)。结论:大黄素对Hep G2细胞有增殖抑制作用,说明大黄素具有潜在的肝脏毒性,其毒性作用机制是通过线粒体凋亡途径实现的。     

血根碱通过调控PI3K/Akt信号通路诱导胰腺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨血根碱对胰腺癌细胞凋亡的影响及其信号通路调控机制。方法:不同浓度血根碱(2,4,6μmol·L~(-1))处理小鼠胰腺癌Panc02细胞不同时间(24,48,72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测血根碱对细胞生长抑制作用的影响;采用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色试剂盒通过流式细胞仪检测血根碱对Panc02细胞凋亡影响;采用花青染料(JC-1)探针试剂盒荧光染料分析检测线粒体膜电位的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),总磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)的表达情况。结果:与空白组比较,不同浓度的血根碱作用同一时间后,随着药物浓度的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05),与空白组比较,同一浓度作用不同时间后,随着时间的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率无明显升高,与空白组比较,血根碱4,6μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率均明显升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组时红绿荧光无变化,血根碱4,6μmol·L~(-1)组红色荧光减弱,绿色荧光增强,Panc02细胞线粒体膜电位降低;与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组处理的Bax,Bcl-2,p-PI3K,p-Akt,Akt和PI3K蛋白表达均无变化,血根碱6μmol·L~(-1)组Bax蛋白表达增高,Bcl-2及PI3K/Akt信号通路中关键蛋白p-PI3K,p-Akt表达降低(P0.05)。结论:血根碱通过抑制PI3K/Akt信号通路有效地诱导小鼠胰腺癌Panc02细胞经线粒体凋亡途径发生凋亡。     

小檗碱对体外HepG2细胞IR模型抗IR的效应及机制

目的:探讨小檗碱对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型的改善作用及机制。方法:HepG2细胞采用高糖(25 mmol·L~(-1))和高胰岛素(1×10~(-6)mol·L~(-1))联合诱导24 h,建立体外IR模型。模型培养液中分别加入1×10~(-5),1×10~(-6)mol·L~(-1)小檗碱,设1×10-3mol·L~(-1)二甲双胍作为阳性药,孵育24 h。葡萄糖氧化酶法检测培养液葡萄糖含量,计算细胞葡萄糖消耗量,细胞增殖活性检测(CCK-8)测定细胞增殖活性;生化法检测细胞丙酮酸激酶(PK)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞葡萄糖激酶(GCK)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞胰岛素受体(InsR),磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)和GLUT2 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1),磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞葡萄糖消耗量显著降低(P0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著降低(P0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA表达水平显著降低(P0.01),IRS-1,p-PI3K,p-Akt蛋白表达水平显著降低(P0.01)。与模型组比较,小檗碱组和二甲双胍组的细胞葡萄糖消耗量明显增加(P0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著升高(P0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA和IRS-1,p-PI3K,p-Akt1蛋白表达水平均明显升高(P0.05,P0.01)。结论:小檗碱体外对HepG2细胞IR模型有显著的改善作用,其机制可能通过调节IRS-1/PI3K/Akt信号通路促进肝脏葡萄糖转运和改善葡萄糖代谢。     

基于PI3K/Akt通路探讨健脾化瘀方对大肠癌SW480增殖的影响

目的:探讨健脾化瘀方基于PI3K/Akt通路抑制大肠癌SW480增殖的相关机制。方法:取对数生长期的SW480细胞,噻唑蓝(MTT)检测不同质量浓度健脾化瘀方(0.25,0.5,1,2,4,8 g·L~(-1))对SW480细胞增殖的影响;不同质量浓度健脾化瘀方(1,2,4 g·L~(-1))培养24 h,另设空白组,流式细胞仪检测对SW480细胞凋亡、细胞周期的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),p27,细胞周期素D1(Cyclin D_1),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达的影响,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中PI3KⅢ,Akt,p27,Cyclin D_1,Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖有抑制作用,且呈现量效和时效关系。与空白组比较,健脾化瘀方作用于SW480细胞后明显促进细胞凋亡,细胞周期阻滞于G0/G1期,健脾化瘀方明显降低PI3K,Akt,Cyclin D_1,Bcl-2基因及蛋白的表达,明显升高p27,Bax基因及蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖具有抑制作用,其机制可能是通过下调PI3K和Akt的表达,从而影响下游的Cyclin D_1,p27,Bcl-2,,Bax的表达,引起SW480细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡。     

臭牡丹含药血清通过PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞的影响

目的:从磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路角度探讨臭牡丹含药血清对肝癌MHCC97-H细胞的影响及可能的机制。方法:臭牡丹15%含药血清作用于MHCC97-H细胞,细胞增殖/毒性法(CCK-8)观察臭牡丹含药血清对细胞增殖的影响,以筛选最佳作用时间和浓度; Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测臭牡丹含药血清作用于细胞72 h后对PI3K/Akt信号通路中关键蛋白中第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN),磷酸化Akt(p-Akt)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测臭牡丹含药血清作用于细胞72 h后对核转录因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的影响。结果:CCK-8结果显示,与空白组比较,臭牡丹含药血清对肿瘤细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。其中高剂量组抑制作用最为明显,在24,48,72 h的最大抑制率分别达到28%,32%,43%;流式细胞术结果显示,与空白组比较,随着臭牡丹含药血清浓度的增加,细胞的生长均受不同程度抑制,细胞的凋亡比例亦相应增加,72 h干预组抑制作用显著(P 0. 01),臭牡丹含药血清组各时间段最大凋亡率达19. 48%,19. 72%(P 0. 05); Western blot结果显示,与空白组比较,臭牡丹含药血清干预下各组PTEN表达量均升高(P 0. 05),PI3K,p-Akt蛋白表达均减少(P 0. 05); Real-time PCR结果显示,与空白组比较,臭牡丹含药血清可以下调NF-κB mRNA表达,上调TNF-αmRNA的表达(P 0. 05)。结论:臭牡丹含药血清可以有效抑制MHCC97-H肝癌细胞增殖并促进其凋亡,可能与PI3K/Akt信号通路并影响其关键因子有关。     

从PI3K/Akt/p53通路探讨藤茶总黄酮抗肝癌的作用机制

目的:研究藤茶总黄酮(TF)对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,预测其作用机制可能与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B/p53(PI3K/Akt/p53)通路的相关因子有关。方法:建立BEL-7404肝癌裸鼠移植瘤模型,实验分为模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,1.0 g·L~(-1))组及TF高、中、低质量浓度(30,15,7.5 g·L~(-1))组,给药干预2周后处死裸鼠,剥离出瘤组织,根据瘤重和瘤体积计算抑瘤率(IR)及相对肿瘤增殖率(T/C);采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K/Akt/p53中相关基因胞内PI3K,Akt1,p53,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;采用免疫组化检测相关蛋白PI3K,Akt1,p53,Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:TF高、中、低质量浓度组IR分别为53.26%,35.94%,26.74%,T/C分别为59.74%,69.66%,84.82%;逆转录聚合本科链式反应(RT-PCR)表明,与模型组比较,TF 30 g·L~(-1)能明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2 mRNA表达,显著上调抑癌基因p53,Capsase-3,Bax mRNA表达;免疫组化表明,与模型组比较,TF 30,15 g·L~(-1)均明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2蛋白的表达,显著上调p53,Capsase-3,Bax蛋白的表达。结论:TF有明显的体内抗肝癌活性,其机制可能与上调p53,Caspase-3的表达,激活细胞凋亡PI3K/Akt/p53通路,从而抑制Bcl-2,提高Bax的表达,促进肝癌细胞凋亡有关。     

温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞凋亡及PI3K，Akt，GSK3β表达的影响

目的:探讨温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞的保护作用及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为5组,其中正常组20只,氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组给予20 mL·kg-1生理盐水灌胃,氯氮平组给予氯氮平原药20 mg·kg-1灌胃,温胆汤组分别给予剂量为40,20,10 g·kg-1的温胆汤灌胃,1次/d,8 d后处死大鼠,取血,离心取血清,灭活,过滤除菌,离心管分装备用。将星型胶质细胞分为空白组、模型组、氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,其中空白组、模型组给予空白血清培养,其余各组给予相应含药血清培养;除空白组外,其余各组用10 mmol·L-1谷氨酸处理24 h后予流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测星型胶质细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞凋亡率则显著下降(P0. 01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达显著降低(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA的表达显著降低(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。结论:温胆汤含药血清可有效升高PI3K,Akt,GSK3β表达,从而调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路,保护神经细胞。     

蠲痛饮对子宫内膜异位症大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的影响

目的:探讨蠲痛饮对子宫内膜异位症(EMS)大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶分子(mTOR)信号通路蛋白的影响。方法:采用自体子宫内膜移植法建立EMS大鼠模型,随机将48只大鼠分为正常组、模型组、蠲痛饮低、中、高剂量组、通路阻滞剂组(LY294002) 6组,分别给予蠲痛饮高、中、低剂量(42. 9,14. 3,4. 8 g·kg~(-1))灌胃,通路阻滞剂组予PI3K通路阻滞剂LY294002(0. 04 g·kg~(-1))腹腔注射,正常组及模型组每天按照10 mL·kg~(-1)给予生理盐水灌胃,各组持续用药28 d。应用透射电镜观察大鼠异位内膜组织超微结构,免疫组化法检测异位内膜组织PI3K,Akt,mTOR蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测核糖体蛋白S6激酶(p70S6K) mRNA相对含量。结果:与正常组比较,模型组异位内膜PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达都明显升高(P 0. 05);与模型组比较,蠲痛饮中、高剂量、通路阻滞剂组干预后PI3K,Akt,mTOR蛋白和p70S6K mRNA的表达明显降低(P 0. 05)。透射电镜下可见蠲痛饮低、中、高剂量组和通路阻滞剂组均能促进腺上皮细胞萎缩或欠整齐,微绒毛减少或消失,胞核固缩,胞内线粒体肿胀或减少,间质细胞凋亡。结论:PI3K/Akt/mTOR信号通路参与子宫内膜异位症发生;蠲痛饮可能通过下调PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达及p70S6K mRNA表达,从而抑制上皮间质细胞活性,促进细胞凋亡,治疗子宫内膜异位症。     

白及多糖对GU模型大鼠胃组织PI3K/Akt的影响

目的:探讨白及多糖对胃溃疡(GU)模型大鼠胃组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt) m RNA及蛋白,以及其介导细胞因子白细胞介素-2受体(IL-2R),白细胞介素-4(IL-4)表达水平的影响。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,模型组大鼠采用乙酸直接烧灼法复制GU模型,将GU模型大鼠按随机数字表法分为模型组、盐酸雷尼替丁组和白及多糖高、中、低剂量组共5组,每组10只。空白组和GU模型组大鼠给予10 m L·kg~(-1)·d~(-1)蒸馏水灌胃,白及多糖高、中、低剂量组分别予0. 5,0. 25,0. 125 g·kg~(-1)·d~(-1)白及多糖灌胃,盐酸雷尼替丁组给予0. 3 g·kg~(-1)·d~(-1)盐酸雷尼替丁灌胃,治疗15 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠血清一氧化氮(NO)含量及胃组织胃蛋白酶活性及细胞因子IL-2R,IL-4含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测胃溃疡病灶组织PI3K及Akt m RNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃溃疡病灶组织PI3K及Akt蛋白表达水平。结果:与空白组比较,胃组织细胞因子IL-2R,IL-4含量及m RNA表达显著升高,PI3K,Akt m RNA及蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与GU模型组比较,白及多糖高、中、低剂量组IL-2R,IL-4含量及m RNA表达均降低,以白及多糖高剂量组降低显著,PI3K,Akt m RNA及蛋白表达水平均降低,以白及多糖高、中剂量组降低显著(P 0. 05,P 0. 01)。结论:白及多糖可通过下调PI3K及Akt m RNA和蛋白表达水平,抑制细胞因子IL-2R及IL-4异常分泌而发挥保护胃黏膜的作用。     

筋骨草总环烯醚萜对乳腺癌干细胞特性的干预作用及其机制分析

目的:研究筋骨草总环烯醚萜(iridoids in Ajuga decumbens,ADI)对乳腺癌干细胞特性的干预作用及分子机制。方法:采用无血清悬浮微球体形成实验,transwell迁移和侵袭实验检测乳腺癌干细胞自我更新能力、运动和侵袭能力。流式细胞法分析CD44+CD24-/low细胞亚群比例。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤干细胞干性相关蛋白,细胞外信号调节激酶(ERK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB或Akt)信号通路相关蛋白的表达。结果:5~80 mg·L-1ADI能浓度依赖性降低乳腺癌MCF-7细胞微球体形成的数量和体积,减少CD44+CD24-/low细胞亚群比例(P0.05,P0.01)。10~40 mg·L-1ADI对乳腺癌MCF-7干细胞的迁移和侵袭能力有明显抑制作用(P0.05,P0.01)。进一步研究发现,ADI能明显降低p-ERK,p-Akt,干性标志物八聚体结合转录因子-3/4(Oct-3/4),SRY相关的HMG盒转录因子-2(Sox-2)和胚胎干细胞转录因子(Ecat4或Nanog)蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:筋骨草总环烯醚萜能有效地抑制乳腺癌干细胞的自我更新和转移潜能等"干性"特性,作用机制可能与其调控ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和PI3K/Akt信号通路,下调相关干性标志物表达有关。     

1-磷酸鞘氨醇通过PI3K/Akt信号通路对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的调控作用研究

目的:观察1-磷酸鞘氨醇通过磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol-3-OH kinase,PI3K)/蛋白激酶B (Protein kinase B,Akt)信号通路对冠心病(Coronary heart disease,CHD)大鼠心肌细胞凋亡的调控作用。方法:将45只清洁级Wistar雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组和1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)组,每组各15只。模型组和S1P组诱导CHD模型。模型诱导成功1周后,进行尾静脉注射给药。S1P组按1.0 mg/kg剂量给予S1P,假手术组和模型组分别给予等体积的生理盐水,每周1次,连续给药4周。采用TTC染色法测定各组大鼠的心肌梗死面积,使用TUNEL染色方法观察计算各组大鼠心肌细胞的凋亡指数,通过Western blot检测PI3K/Akt信号通路中相关蛋白PI3K、Akt及凋亡因子含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)的表达情况。结果:TTC染色检测结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠均出现大面积的心肌梗死(P<0.01);与模型组比较,S1P组大鼠心肌梗死面积显著减小(P<0.01)。TUNEL染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡数量明显增加,其凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组比较,S1P组大鼠心肌细胞的凋亡指数显著降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,各组间PI3K、Akt蛋白表达量无显著性差异(P>0.05);与假手术组比较,模型组心肌细胞内p-PI3K、p-Akt的表达量显著下降(P<0.01),Caspase-3的表达水升高(P<0.05);与模型组比较,S1P组p-PI3K、p-Akt的表达水平显著增加(P<0.01)。Caspase-3的表达水平降低(P<0.05)。结论:S1P可能是通过调节PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达来有效抑制CHD大鼠心肌细胞凋亡的。     

清肺化痰汤通过抑制JAK2/STAT3通路上调CFTR的表达治疗COPD

目的:探索清肺化痰汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)的治疗作用及其机制研究。方法:应用烟雾吸入联合脂多糖(LPS)灌肺复合素的方法,建立COPD大鼠模型,造模成功后将大鼠随机分为6组,分别为正常组,COPD模型组,清肺化痰汤低、中、高剂量组和氨溴索组。造模28 d后开始给药,清肺化痰汤低、中、高剂量7.5,15,30 g·kg~(-1),氨溴索35 mg·kg~(-1),连续给药14 d。免疫组化和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)蛋白和mRNA的表达。应用LPS诱导NCI-H292细胞建立黏液高分泌模型,实验分为8组,分别为空白组,LPS组,LPS+10%胎牛血清,LPS+生理血清,LPS+5%含药血清,LPS+10%含药血清,LPS+20%含药血清,LPS+AG490组。免疫荧光、蛋白免疫印迹法(Western blot)和Real-time PCR观察LPS刺激后的NCI-H292细胞中CFTR蛋白和mRNA的表达,Western blot检测LPS刺激后的NCI-H292细胞中Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路表达。结果:正常组大鼠肺组织管腔周围有大量棕褐色颗粒,COPD表达升高,与正常组比较,模型组大鼠肺组织管腔周围的棕褐色颗粒极少,COPD表达较低。与正常组比较,COPD模型组大鼠肺组织中CFTR mRNA和蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,清肺化痰汤低、中、高剂量组明显升高大鼠肺组织CFTR mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。与空白组比较,LPS组NCI-H292细胞CFTR mRNA和蛋白表达显著降低(P0.01),p-JAK2,p-STAT3蛋白表达明显升高(P0.05);与模型组比较,清肺化痰汤5%,10%,20%含药血清组明显升高CFTR mRNA和蛋白表达,明显降低p-JAK2,p-STAT3蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:清肺化痰汤通过抑制JAK2/STAT3通路来上调CFTR治疗COPD。     

制何首乌中大黄素对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中JAK2/STAT3通路的影响

目的:探讨制何首乌中大黄素抗动脉粥样硬化的作用机制并对两面神激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路及相关因子细胞因子信号传导抑制蛋白3(SOCS3)的影响。方法:雄性Apo E基因敲除(Apo E-/-)小鼠80只,随机均分为8组,分别为大黄素高、中、低剂量组、模型组、阳性药组、阴性组、正常组和大黄素中剂量+AG490组(DA组)。除正常组,余7组用高脂饲料饲养,并皮下注射脂多糖,9周后停注。第10周开始小鼠给药,6周后处死。酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3及SOCS3的含量,苏木素-伊红(HE)染色检测胸主动脉病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肝脏JAK2,STAT3,SOCS3 mRNA的表达。结果:与模型组比较,大黄素高、中剂量组SOCS3含量显著增加,p-JAK2,p-STAT3含量显著减少(P0.01),低剂量组SOCS3含量明显增加(P0.05);JAK2,STAT3无变化;各指标DA组效果不如中剂量组且两组间存在明显差异(P0.01),但STAT3相对表达量中剂量组与DA组有差异(P0.05);各组SOCS3 mRNA表达明显增加,JAK2,STAT3 mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。HE染色切片镜下观察,大黄素高、中剂量能有效延缓动脉粥样硬化斑块形成,而低剂量的效果不明显。结论:大黄素能明显作用于Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变的发生发展,该作用机制可能与其抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

派特灵对HeLa细胞增殖迁移能力及PI3K/Akt信号转导通路的影响

目的:探索派特灵对HeLa细胞增殖迁移侵袭能力及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白的影响。方法:①将HeLa细胞分为空白组,派特灵组(3.906,2.604,1.953,1.563,1.302,1.116,0.977 g·L~(-1)),加药干预24 h,镜下观察细胞形态变化,并采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,计算派特灵对HeLa细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。②将HeLa细胞分为空白组,顺铂组(0.01 g·L~(-1)),派特灵高、中、低质量浓度组(2.974,1.487,0.991 g·~(-1)),采用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法检测派特灵对HeLa细胞增殖能力的影响,使用划痕实验检测细胞的迁移情况,采用侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭能力的变化。③增设抑制剂LY294002组(0.006 g·L~(-1)),采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测派特灵对PI3K,Akt,重组人B细胞淋巴瘤因子-xl(Bcl-xl),B细胞淋巴瘤/白血病相关d蛋白(Bad)表达的影响。结果:①与空白组比较,镜下观察显示,用药组细胞数目减少,细胞形态不完整;MTT比色法显示,派特灵对HeLa细胞增殖有显著抑制作用(P0.01),计算得出派特灵对HeLa细胞的IC_(50)为2.974 g·L~(-1)。②CCK-8法显示,与空白组比较,培养24,36,48 h,所有用药组均对HeLa细胞增殖有抑制作用(P0.01);与顺铂组比较,各时间点派特灵中、低质量浓度组对HeLa细胞增殖抑制作用减弱(P0.01);划痕实验显示,与空白组比较,各加药组均能抑制HeLa细胞的迁移能力(P0.01),派特灵高质量浓度组细胞迁移率低于顺铂组(P0.05);Transwell实验显示,与空白组比较,各加药组HeLa细胞穿膜数减少(P0.01),与顺铂组比较,派特灵中、低质量浓度组细胞穿膜数升高(P0.01)。③Western blot显示,与空白组比较,派特灵高、中、低剂量及LY294002组的PI3K,Bcl-xl,Akt表达量下降(P0.05,P0.01),Bad表达量增高(P0.01);与派特灵高质量浓度组比较,派特灵低质量浓度组的PI3K,Akt,Bcl-xl蛋白表达升高(P0.01),Bad表达降低(P0.01)。结论:派特灵能抑制HeLa细胞增殖迁移侵袭能力,符合一定量效和时效关系,可能与其影响PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达有关。     

黄芩苷通过p38 MAPK/NLRP3通路对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的影响

目的:观察黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:采用将80只健康雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,黄芩苷低、中、高剂量组,地塞米松组(DEX),SB203580组和黄芩苷+SB203580组(BA+SB203580),每组10只。黄芩苷低、中、高剂量组分别腹腔注射不同剂量(10,50,100 mg·kg^-1)的BA溶液;DEX组腹腔注射5 mg·kg^-1的DEX溶液;SB203580组腹腔注射0.5 mg·kg^-1的SB203580溶液;黄芩苷+SB203580组腹腔注射100 mg·kg^-1的BA溶液和0.5 mg·kg^-1的SB203580溶液;正常组和模型组均注射等体积的生理盐水,每天给药1次,连续7 d,末次给药1 h后,除正常组,其余大鼠均给予气管滴注5 mg·kg^-1LPS构建急性肺损伤模型,正常组大鼠气管滴注等体积的生理盐水溶液,12 h后结束实验,取材。苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和中性粒细胞计数;测定肺组织湿/干重比、血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;免疫荧光法检测肺组织中活性氧(ROS)的含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定BALF中细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;免疫组化(IHC)检测p-p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达的定位表达及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中p-p38 MAPK,硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP),NOD样受体蛋白3(NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织出现炎性病理变化,肺湿/干质量,BALF中细胞总数及中性粒细胞数目增高(P<0.01),SOD活性下降(P<0.01),ROS和MDA含量升高(P<0.01),细胞因子IL-1β,IL-18,IL-6,TNF-α和p-p38 MAPK,NLRP3,Caspase-1的表达量均上调(P<0.01)。与模型组比较,黄芩苷组,SB203580组和黄芩苷+SB203580组可有效减轻LPS所致肺组织病理变化,降低肺湿/干质量,BALF中细胞总数及中性粒细胞数目(P<0.05,P<0.01),升高SOD活性(P<0.05,P<0.01),并降低ROS和MDA水平(P<0.05,P<0.01),细胞因子IL-1β,IL-18,IL-6,TNF-α和p-p38 MAPK,NLRP3,Caspase-1的表达量均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩苷可有效保护LPS所致急性肺损伤,其作用机制可能与抑制p38 MAPK/NLRP3信号通路减轻炎症反应有关。     

PI3K/Akt信号通路影响食管癌细胞生长的机制及中药干预作用研究进展

食管癌是我国肿瘤发病死亡率较高的恶性肿瘤之一,国家癌症中心2019年发布的中国最新癌症报告中显示,2015年食管癌患病人口达到了24. 6万人,死亡人数高达18. 8万人。如何有效的治疗食管癌,提高患者的生存率也是当今医学领域中亟待解决的首要问题之一。磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路是调节机体内细胞存活、分化及凋亡的重要信号通路之一,在各种癌症的发生及作用机制中起到了重要的作用。近年来的研究表明,PI3K/Akt信号通路的激活是调节食管癌细胞的增殖、凋亡、周期阻滞、迁移与侵袭的重要因素。长期的临床观察发现中药治疗食管癌作用平稳、毒副作用小,尤其在改善肿瘤患者的生活质量,延长患者生存期等方面作用独特、效果显著。用中药干预该信号通路以探索其对食管癌的作用机制是目前中药治疗食管癌的研究热点。本文对2009—2019年CNKI,Pubmed数据库中PI3K/Akt信号通路,食管癌,miRNA为关键词进行检索,共检索文献226篇,整理、归纳与中药,食管癌,miRNA,PI3K/Akt信号通路相关文献61篇。综述了PI3K/Akt信号通路在食管癌中的作用机制,miRNA与PI3K/Akt信号通路与食管癌发生发展的关系以及中药如何通过调控PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达而抑制细胞增殖、影响细胞生长周期、诱导细胞凋亡、诱导细胞自噬、抑制肿瘤的侵袭和转移、抑制血管生成等,最终对食管癌起到一定的改善作用。对中医药治疗食管癌提供理论基础以及科学依据。     

La（NO3）3对猴头菌多糖产生的影响

在猴头菌（Ｈｅｒｉｃｉｕｍ ｅｒｉｎａｃｅｕｓ）菌丝发酵增减液中,加入不同浓度的Ｌａ（ＮＯ３）３,接种接头７ｄ后,测定菌体和上清液的多糖含量,发现０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｌａ（ＮＯ３）３可促进菌丝分泌胞外多糖,发酵液中多糖含量对照高１２６．６９％;０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｌａ（ＮＯ３）３可刺激菌丝多糖的合成,水提多糖含量比对照高１９．４％,碱提多糖含量比对照高４．７１％。     

痰脂消汤调控PCOS-IR模型大鼠卵巢PI3K/Akt途径探讨

目的:观察痰脂消汤对来曲唑灌胃联合高脂膳食诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(PCOS-IR)模型大鼠卵巢胰岛素信号转导途径的影响。方法:来曲唑灌胃联合高脂膳食喂养SD大鼠建立PCOS-IR模型,大鼠随机分为模型组、痰脂消汤组(35 g·kg~(-1)·d~(-1))、二甲双胍组(200 mg·kg~(-1)·d~(-1)),连续灌胃20 d;另设正常组。实验结束后,腹主动脉采血,测定血清空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)浓度,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠卵巢胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物(IRS)-1,酯酰肌醇-3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织INSR,IRS-1,PI3K,Akt蛋白及其相应磷酸化水平表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠空腹胰岛素(FINS),HOMA-IR水平均显著升高(P0.01),FPG无明显升高;模型组大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平明显降低(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显降低(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显降低(P0.05)。与模型组比较,中药和二甲双胍治疗后大鼠FINS,HOMA-IR均显著降低(P0.01);大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平均明显升高(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显升高(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显升高(P0.05)。结论:PCOS大鼠存在IR,卵巢内PI3K/Akt信号途径转导存在异常。痰脂消汤能够显著改善大鼠胰岛素抵抗,可能与调控胰岛素信号转导通路中关键的蛋白表达有关。     

敦煌平胃丸及其拆方对SCG-7901胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及对PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:研究敦煌平胃丸及其拆方对胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用,并从磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路研究敦煌平胃丸及其拆方可能的作用机制。方法:建立SCG-7901胃癌皮下荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,敦煌平胃丸组(14.04 g·kg^-1·d^-1),活血解毒组(6.50 g·kg^-1·d^-1),温中散寒组(3.64 g·kg^-1·d^-1)和顺铂组(2 mg·kg^-1·d^-1),每组8只。接种第8天开始给药,连续10 d,隔日小鼠称体质量并观察一般情况;末次给药后次日处死小鼠,剥取肿瘤称质量,计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和免疫组化法(IHC)分别检测肿瘤组织中PI3K,Akt,mTOR mRNA和蛋白表达情况。结果:接种第10天开始,顺铂组小鼠一般情况较差,体质量下降,模型、敦煌平胃丸、活血解毒和温中散寒组小鼠一般情况尚可,体质量增长,组间差异无统计学意义;敦煌平胃丸、活血解毒、温中散寒和顺铂组抑瘤率分别为30.74%,24.80%,4.19%和63.84%,除温中散寒组外,其余给药组瘤质量均较模型组显著降低(P<0.01),其中敦煌平胃丸与活血解毒组间差异无统计学意义;敦煌平胃丸和活血解毒组能明显降低肿瘤细胞密度,引起肿瘤细胞坏死;与模型组比较,敦煌平胃丸、活血解毒和顺铂组PI3K,Akt,mTOR mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05,P<0.01),其中敦煌平胃丸与活血解毒组差异无统计学意义。结论:敦煌平胃丸及其拆方(活血解毒方)对SCG-7901胃癌荷瘤小鼠具有一定的抑瘤作用,其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子表达有关。