凋亡素体外诱导表达Survivin膀胱癌细胞凋亡效果观察

目的:观察凋亡素对表达Survivin膀胱癌细胞株的作用效果,并结合相应机制探讨其临床意义.方法:利用免疫组织化学法检测膀胱癌细胞株BIU-87中Survivin的表达水平,并计算平均每高倍镜视野中阳性细胞比率.将肿瘤细胞分为单纯细胞组、转染空质粒pCDNA3组及转染pCDNA3/Apoptin组,利用脂质体转染法将真核表达栽体pCDNA3/Apoptin及pCDNA3空质粒转染入膀胱癌细胞中,并于转染后24h通过RT-PCR法检测细胞中Apoptin的表达情况.分别于转染后24、48、72h利用MTT法检测各组细胞存活率,并利用流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞的凋亡率.结果:利用免疫组织化学法检测发现膀胱癌细胞株BIU-87中Survivin呈高表达状态,平均每个高倍镜视野中阳性细胞比例约70%,并有较多细胞呈现高表达状态.转染后24h通过RT-PCR法可见Apoptin在膀胱癌细胞中表达.分别于转染后24、48、72h利用MTT法检测各组细胞存活率,发现转染pCDNA3/Apoptin组肿瘤细胞存活率均明显低于对照组,差别有统计学意义(P<0.05);利用流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞的凋亡率,发现转染pCDNA3/Apoptin组肿瘤细胞凋亡率均明显高于对照组,差别有统计学意义(P<0.05).结论:凋亡素可在体外诱导高表达Survivin的膀胱癌细胞株BIU-87高效凋亡,结合相关机制表明凋亡素可在一定程度上克服Survivin的抗凋亡作用,因此有可能成为Survivin拮抗的抗肿瘤药物的协同用药选择.     

益气养阴解毒方含药血清对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡影响的体外实验

目的观察益气养阴解毒方含药血清对体外培养Lewis肺癌细胞(LLC)增殖和凋亡的影响。方法采用血清药理学方法,用SD大鼠制备益气养阴解毒方低、中、高剂量、顺铂(DDP)、益气养阴解毒方联合DDP、0.9%氯化钠溶液(NS)含药血清,体外培养LLC,采用MTT法测各组血清对LLC增殖的影响,流式细胞仪(FCM)Annexin V- FITC/PI标记法检测细胞凋亡率,免疫组织化学(SP法)测Caspase-3表达水平。结果益气养阴解毒方含药血清能够抑制体外培养LLC生长,且呈浓度和时间依赖性,高浓度作用72h抑制率达50%,中药联合DDP抑制率最高达94.67%;与对照组比较,各组含药血清均具有诱导LLC细胞凋亡的作用,并呈剂量和时间依赖关系,中药联合DDP作用最强,作用72h时,细胞凋亡率下降,而坏死率升高;凋亡相关蛋白Caspase-3的表达与药物剂量及作用时间呈依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),与其他各组比较,中药联合DDP作用最强(P<0.05)。结论益气养阴解毒方具有抑制LLC增殖及诱导其凋亡的作用,促进Caspase-3蛋白表达可能是其诱导LLC凋亡机制之一。     

消癥抑瘤方对人类顺铂耐药卵巢癌细胞凋亡的影响

 目的　检测中药消癥抑瘤方对顺铂（DDP）耐药卵巢癌OVCAR／DDP细胞多药耐药的逆转活性,并探讨其相关作用机制。方法　OVCAR／DDP细胞接种于40只裸鼠腋下,建立移植瘤模型,按随机数字表分为4组,依据不同的药物组合分为0.9 %氯化钠溶液对照组、DDP单独用药组、低剂量消癥抑瘤方+DDP组、高剂量消癥抑瘤方+DDP组。1个月后处死裸鼠,计算各组抑瘤率,末端转移酶介导脱氧尿苷三磷酸（TUNEL）法检测OVCAR／DDP细胞的凋亡率,RT-PCR检测移植瘤组织中Survivin mRNA的表达。结果　0.9 %氯化钠溶液对照组比较,DDP单独用药组、低剂量消癥抑瘤方+DDP组、高剂量消癥抑瘤方+DDP组对卵巢癌OVCAR／DDP细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为（5.56±1.14）%、（18.42±7.73）%、（31.59±12.58）%,各组间差异有统计学意义（F＝8.64,P＜0.01）。0.9 %氯化钠溶液对照组、DDP单独用药组、低剂量消癥抑瘤方+DDP组、高剂量消癥抑瘤方+顺铂组OVCAR／DDP细胞移植瘤组织细胞凋亡率分别为（2.35±1.04）%、（4.56±1.61）%、（12.42±3.68）%、（21.59±5.17）%,0.9 %氯化钠溶液对照组与DDP单独用药组比较差异无统计学意义（t＝0.84,P＞0.05）,2个消癥抑瘤方组与DDP单独用药组比较差异均有统计学意义（t＝5.89,P＝0.004;t＝9.83,P＝0.001）。2个消癥抑瘤方组以剂量依赖性下调裸鼠移植瘤OVCAR／DDP细胞Survivin mRNA的表达。结论　消癥抑瘤方可以增加DDP对卵巢癌顺铂耐药OVCAR／DDP细胞的抗肿瘤活性,下调Survivin的表达可能是其主要的作用机制。     

晚期非小细胞肺癌中Survivin表达对顺铂敏感性和预后的预测价值

  目的  探讨Survivin预测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂敏感性的价值。  方法  RT-PCR、Western blot法检测人肺腺癌细胞株A549和耐药株A549/CDDP中Survivin表达, Survivin siRNA转染A549/CDDP细胞, MTT、流式细胞术检测细胞生长与凋亡; 免疫组织化学和RT-PCR检测晚期NSCLC组织中Survivin mRNA和蛋白表达。  结果  A549/CDDP中Survivin mRNA和蛋白表达均高于A549细胞(P < 0.01);A549/CDDP细胞中Survivin siRNA+CDDP组的生长抑制率达76.4%, IC ₅₀为(34.12+3.55)μg/mL, 耐药指数为6.71倍, 均低于对照组(P < 0.05)。该组的细胞凋亡率高于对照组(P < 0.01);93例NSCLC蜡块组织中, Survivin蛋白表达阴性组接受含顺铂方案化疗有效率(44.4%)高于阳性组(19.3%, P < 0.01);Survivin表达阴性组总生存、无疾病进展时间较阳性组长, 但差异无统计学意义(P < 0.05)。Cox多因素分析结果显示Survivin蛋白表达水平不是影响预后的独立因素。20例新鲜组织中Survivin mRNA低表达组反应率(RR)(60%)和蛋白表达阴性组RR(66.7%)高于mRNA高表达组(10%)和蛋白表达阳性组(9%, P < 0.05)。  结论  NSCLC组织中Survivin表达阳性提示顺铂耐药, 检测Survivin表达对晚期NSCLC筛选含顺铂化疗方案具有指导意义。      

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP细胞凋亡

目的：观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法：A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果：对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著（P〈0.01）,逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著（P〈0.01）。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论：A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

VLA-4抗体联合依托泊苷对儿童白血病细胞凋亡的影响

 目的　研究细胞黏附分子VLA-4抗体联合化疗药物依托泊苷（VP16）对儿童白血病细胞凋亡的影响,探讨骨髓基质细胞（BMSC）对儿童白血病细胞的保护作用及其可能的机制。方法　分离儿童白血病骨髓单个核细胞,以BMSC+白血病细胞组为对照,在此基础上分别加入VLA-4抗体和VP16组成抗体组、药物组及抗体加药物组等三个实验组,采用流式细胞术检测各组白血病细胞的凋亡率;采用RT-PCR方法检测各组白血病细胞Survivin、bcl-2基因的表达。结果　与对照组比较,三个实验组12 h及24 h的早期凋亡率及总凋亡率均显著增高（P＜0.05）;抗体加药物组白血病细胞早期凋亡率及总凋亡率最高（P＜0.05）;除对照组,三个实验组白血病细胞24 h的早期凋亡率及总凋亡率均显著高于12 h（P＜0.01）。三个实验组Survivin、bcl-2基因的表达均有不同程度的降低,抗体加药物组降低最明显。结论　BMSC对白血病细胞具有保护作用,VLA-4抗体能够抑制白血病BMSC与白血病细胞间的黏附,促进白血病细胞的凋亡,并且增强白血病细胞对VP16诱导凋亡的敏感性。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP 细胞凋亡

目的:观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法:A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果:对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著(P<0.01),逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著(P<0.01)。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论:A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺促凋亡素基因治疗肝癌移植瘤的实验

目的探讨超声靶向微泡破碎(UTMD)联合半乳糖聚乙烯亚胺(PEI-Gal）介导凋亡素基因对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。方法建立c57BL/6小鼠皮下肝癌移植瘤模型,随机分为4组：对照组;PEI-Gal+质粒组;PEI-Gal+超声+质粒组;PEI-Gal+UTMD+质粒组。对组织行冰冻切片采用免疫荧光法检测转染率、Tunel检测凋亡率。观察肿瘤的体积和组织学变化,同时计算抑瘤率。采用免疫组织化学法检测移植瘤Bcl-2及Caspase-3蛋白在各组肿瘤标本中的表达。结果PEI-Gal+UTMD+pEGFP-N3组基因转染效率明显高于对照组、PEI-Gal+质粒组与PEI-Gal+超声+质粒组(P均<0.01）且对组织无明显损伤。治疗12天后PEI-Gal+UTMD+pCDNA-VP3组肿瘤凋亡率(34.57%±3.56%）、抑瘤率(56.6%)均显著高于对照组和PEI-Gal+质粒组(P均<0.01）。肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显下降,Caspase-3蛋白表达增加与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 超声靶向微泡破碎联合半乳糖聚乙烯亚胺能显著增强基因转染效率,且对组织无明显影响。联合凋亡素基因能通过诱导凋亡抑制肿瘤生长发挥抗瘤作用。     

Livin基因反义寡核苷酸诱导肺腺癌A549细胞的凋亡

目的探讨Livin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响.方法用阳离子脂质体介导Livin ASODN转染A549细胞后,MTT法检测对A549细胞增殖抑制率的影响;RT-PCR法和细胞免疫荧光化学检测Livin ASODN转染前后,A549细胞中Livin mRNA和蛋白表达的变化;吖啶橙/溴乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)复合染色检测A549细胞的凋亡率.结果在A549细胞中同时有Livin α和Livin β的表达,Livin蛋白在细胞质和细胞核中均有分布.Livin基因ASODN可显著抑制A549细胞的增殖(P＜0.01).且作用具有剂量依赖性.终浓度为400 nmol/L的Lip-ASODN转染后,A549细胞Livin mRNA和Livin蛋白的表达均被明显抑制,细胞凋亡率达(31.25 ±5.75)%,与对照组(3.23±1.98)%相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论Livin ASODN可下调Livin基因表达,有效抑制A549细胞的增殖,并促进A549细胞凋亡.因此,Livin基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点.     

单独及联合转染survivin和bcl-2反义寡核苷酸诱导胆囊癌细胞凋亡的研究

目的:探讨单独及联合转染survivin、bcl-2反义寡核苷酸(AsODN)对胆囊癌细胞系GBC-SD的凋亡促进作用.方法:设计并合成特异性靶向survivin及bcl-2的AsODN.免疫组织化学法观察胆囊癌细胞中Survivin及Bcl-2蛋白的表达情况;实验分为4组:空白对照组、survivin AsODN转染组、bcl-2 AsODN转染组、联合survivin及bcl-2 AsODN转染组.转染24 h 后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin基因表达的变化,电镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测AsODN对细胞的生长抑制率.结果:Survivin及Bcl-2蛋白在胆囊癌细胞中均有较高表达;单独及联合转染survivin及bcl-2 AsODN后,胆囊癌细胞内survivin基因mRNA表达下调47.8%;,电镜下胆囊癌细胞呈典型凋亡样改变;凋亡率分别为11.38%±3.91%(survivin AsODN组)、9.26%±4.15%(bcl-2 AsODN组)、28.45%±6.34%(联合转染组);分别与对照组相比差异有显著性(P＜0.01),而联合转染组同单独转染survivin AsODN组及bcl-2 AsODN组相比差异也有显著性(P＜0.05).各转染组相对于空白对照组的AsODN抑制率分别为54.3%,47.6%,76.5%.结论:Survivin及Bcl-2蛋白在胆囊癌细胞中呈高表达,单独及联合转染survivin和bcl-2反义寡核苷酸可促进胆囊癌细胞凋亡,而联合转染更具显著性.     

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低（P＜0.05）,LMNB1表达水平明显升高（P＜0.05）。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。     

槐耳颗粒联合沙利度胺抑制鼠肝癌H22细胞种植瘤的实验

目的探讨槐耳颗粒和沙利度胺治疗肿瘤的作用机制。方法将雄性昆明小鼠(每组10只)分为对照组（A组）、槐耳颗粒组(B组)、沙利度胺组(C组)和槐耳颗粒+沙利度胺组(D组)。用H22细胞给小鼠皮下注射,复制皮下瘤模型。观察各组移植瘤质量和抑瘤率,采用免疫组织化学法检测各组瘤组织VEGF、CD31蛋白表达。结果与对照组比较,3个用药组小鼠的移植瘤重和瘤组织CD31阳性率显著低于对照组(P＜0.01),槐耳颗粒+沙利度胺组VEGF表达显著低于对照组VEGF表达(P＜0.01);与沙利度胺组和槐耳颗粒组比较,槐耳颗粒+沙利度胺组小鼠瘤质量和瘤组织CD31阳性率显著降低 (P＜0.05)。结论槐耳颗粒和沙利度胺联合用药有明显抑制肿瘤生长的作用,其机制可能是通过下调VEGF蛋白表达和降低微血管密度,促进肿瘤细胞凋亡;并且两者有协同作用。     

过表达OMA1通过促进线粒体释放细胞色素C诱导肺腺癌A549细胞凋亡

目的:探讨OMA1在肺腺癌中的表达水平及其对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及机制。方法:收集2018年01月至2019年10月在本院保存的42例经病理确诊为肺腺癌患者的癌组织样本及其癌旁组织(距离肿瘤边缘≥5 cm),免疫组化染色法检测癌组织及癌旁组织中OMA1表达情况。体外培养人肺腺癌细胞系NCI-H2009、Calu-3、SPC-A-1、A549及人正常肺上皮细胞BEAS-2B,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中OMA1 mRNA和蛋白表达水平。采用OMA1过表达慢病毒及其空载慢病毒感染A549细胞,分为OMA1过表达慢病毒感染组(OMA1组)和空载慢病毒感染组(Vector组),另设置空白对照组(Blank组)。采用MTT检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;JC-10染色法检测细胞线粒体膜电位变化;qRT-PCR法检测细胞中OMA1 mRNA表达水平;Western blotting法检测细胞中OMA1、cleaved caspase-3、OPA1以及细胞线粒体和胞浆中Cyt C蛋白表达水平。结果:肺腺癌患者癌组织中OMA1表达水平显著低于癌旁组织...     

ABL2在肺癌中的作用及机制研究

目的 探究ABL2在肺癌中的作用及其机制。方法 采用Realtime PCR方法检测ABL2在肺癌组织和癌旁组织中的表达情况。然后建立稳定低表达ABL2的肺腺癌A549细胞株;通过MTT、细胞迁移和克隆形成实验检测细胞增殖和迁移能力的变化情况;Western blot检测EMT、凋亡和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果 肺癌组织中ABL2的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.001)。在A549细胞系中沉默ABL2后,与对照组相比,48 h后细胞的迁移能力减弱(P＜0.001),从第3天开始细胞的生长速度开始明显减缓(P＜0.05),15天后形成的平均克隆数也减少(P＜0.01)。Western blot结果显示,沉默ABL2后上皮细胞标志物E-cadherin表达升高(P＜0.001),间质细胞标志物N-cadherin(P＜0.001)、Vimentin(P＜0.01)及Snail(P＜0.001)表达降低。凋亡相关蛋白Bcl-XL表达下降(P＜0.01),BAX表达上调(P＜0.001)。PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K P110(P＜0.05)、AKT(P＜0.01)和p-AKT(P＜0.05)蛋白的表达都明显降低。结论 沉默ABL2基因能够通过PI3K/AKT信号通路促进细胞凋亡,抑制肺癌细胞的增殖和迁移。     

lncRNA RP11-297P16.4促进肺腺癌细胞侵袭及迁移的机制探讨

目的:探究长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）RP11-297P16.4对人肺腺癌细胞H1299和A549侵袭及迁移的影响。方法:利用qRT-PCR检测在肺腺癌细胞H1299、A549及人正常支气管上皮细胞HBEC 中RP11-297P16.4的相对表达水平;设计合成针对RP11-297P16.4的特异性shRNA,慢病毒感染建立稳定敲低lncRNA RP11-297P16.4的H1299、A549细胞;将其分为对照/H1299组、实验/H1299组、对照/A549组、实验/A549组,对照组感染shRNA-NC,实验组感染shRNA-RP11-297P16.4;qRT-PCR检测shRNA敲低效率;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测RP11-297P16.4对肺腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响;采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2和-9的mRNA和蛋白质表达水平。结果:与对照组相比,RP11-297P16.4在肺腺癌细胞中高表达,差异有统计学意义（P＜0.001,P＜0.01）;qRT-PCR分析确定,shRNA敲低后RP11-297P16.4的mRNA表达水平显著降低(P＜0.001,P＜0.001);划痕实验表明24 h、48 h实验组细胞伤口愈合率均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01; P＜0.001,P＜0.001);Transwell小室检测结果显示,实验组细胞侵袭数量显著少于对照组,差异有统计学意义（P＜0.001,P＜0.001）;qRT-PCR和蛋白印迹法结果显示,实验组细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白质表达量均低于对照组,差异具有统计学意义（均P＜0.05）。结论:lncRNA RP11-297P16.4 通过促进MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达来增强H1299、A549细胞的侵袭和迁移能力。     

低氧环境下肺腺癌A549细胞对顺铂化疗抵抗的实验研究

目的:探讨低氧对肺癌A549细胞顺铂化疗抵抗作用,并分析可能机制.方法:将A549细胞分为常氧、常氧顺铂、低氧、低氧顺铂组.在常氧顺铂组和低氧顺铂组,加入不同浓度顺铂(10、40、80、100、200 μmol/L)后,采用CCK8法测定半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)和抑制率.流式细胞仪检测各组细胞周期和凋亡率.RT-PCR和Western Blot检测各组缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC1)的转录和蛋白表达变化.结果:常氧顺铂组IC50为25.82nmol/L,低氧顺铂组为39.98 nmol/L,常氧顺铂组和低氧顺铂组之间各个浓度顺铂抑制率有统计学差异(P＜0.05).低氧顺铂组的细胞凋亡和G2/M期细胞阻滞较常氧顺铂组减少.RT-PCR和Western Blot显示,低氧组HIF-1α、VEGF、ERCC1转录和表达水平较常氧组明显上升(P＜0.01),顺铂作用后表达均下降,在常氧顺铂组和低氧顺铂组之间有显著差异性(P＜0.01).相关分析显示HIF-1α、VEGF、ERCC1之间有显著正相关关系(P＜0.01).结论:低氧诱导A549细胞对顺铂化疗抵抗,与低氧激活HIF-1α、VEGF及ERCC1高表达有关.     

DNAJ热激蛋白家族B8基因对肺腺癌侵袭转移的作用及其可能的机制

目的:探讨DNAJ热激蛋白家族B8基因(DNAJ heat shock protein family member B8,DNAJB8在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞侵袭转移的作用和可能机制.方法:收集四川省人民医院2006年至2008年的肺腺癌手术切除标本102例,通过免疫组织化学(IHC)实验检测DNAJB8在肺腺癌组织中的表达情况,并分析其与临床病理参数及预后的关系.构建NAJB8稳定敲低的肺腺癌A549细胞和DNAJB8稳定过表达的肺腺癌H1299细胞,CCK-8实验检测DNAJB8敲降或过表达对肺腺癌细胞增殖的影响,Transwell法检测其对肺腺癌细胞侵袭能力的影响,Western blotting检测其对肺腺癌细胞内侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9和ERK表达及活性的影响.裸鼠尾静脉注射DNAJB8稳定敲低的A549细胞构建肺腺癌转移模型,观察DNAJB8对A549细胞体内转移能力的影响.结果:DNAJB8在肺腺癌组织中的表达明显高于正常肺组织,其高表达与患者的淋巴结转移及TNM分期呈正相关,并且预示着患者有较差的预后(均P＜0.01).DNAJB8在A549细胞中的表达量高于H1299细胞,下调DNAJB表达能够抑制A549细胞的侵袭[(41±3)vs (192±11)个,P＜0.01],而上调DNAJB8的表达能够促进H1299细胞的侵袭[(235±14) vs(25±4)个,P＜0.01].实验组肺腺癌转移模型裸鼠肺脏肿瘤结节数显著低于对照组[(5±1)vs(17±3)个,P＜0.01].A549细胞中DNAJB8敲降后,MMP-2、MMP-9表达量和p-ERK水平均显著下降(均P＜0.01);而H1299细胞高表达DNAJB8后,MMP-2、MMP-9表达量和p-ERK水平均显著升高(均P＜0.01).结论:DNAJB8能够促进肺腺癌的侵袭和转移,其机制可能与MEK/Erk信号通路有关.     

survivin反义寡核苷酸提高人肺腺癌A549耐药细胞系对顺铂敏感性的研究

目的探讨存活素反义寡核苷酸(ASODN)体外转染对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/ CDDP凋亡及其对顺铂(CDDP)敏感性的影响。方法常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的survivin ASODN转染细胞,采用RT-PCR法和免疫细胞化学法检测survivin mRNA及蛋白表达。通过形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、caspase-3酶活性及细胞凋亡率(AI)的测定,评价细胞凋亡程度。采用MTT法测定细胞存活率和生长抑制率,计算半效抑制浓度(IC_(50))及耐药倍数(RI)。结果转染组survivin mRNA及蛋白表达下调明显,分别达41．56%和0．864±0．045,与其他各组比较,差异均有统计学意义(P＜0．05)。细胞形态学显示有细胞凋亡改变,表现为细胞核固缩、核边集和核碎裂等;DNA凝胶电泳可见DNA梯形条带;ASODN转染组细胞凋亡率和caspase-3相对活性分别增高至34．03%和1．1298±0．2502,而ASODN+CDDP组增高更为明显,分别达65．85%和1．6805±0．2758,与其他各组比较,差异均有统计学意义(P＜0．05)。ASODN转染组和ASODN+CDDP组生长抑制率分别增高至59．3%和83．7%(P＜0．05);而ASODN转染组细胞对CDDP的IC_(50)由对照组的(225．03±10．59)μmol/L减低至(158．84±4．26)μmol/L,RI由11．9减至8．4。结论survivin ASODN通过下调survivin的表达,自身诱导了细胞凋亡,并逆转细胞对CDDP诱导的细胞凋亡的耐受,降低凋亡阈值,从而增强了人肺腺癌细胞对CDDP的敏感性。