血清外泌体来源的microRNA-221-3p在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者血清外泌体来源microRNA(miRNA)-221-3p的表达水平及分析其临床意义。方法选取2010年2月-2014年12月南京大学医学院附属南京鼓楼医院经手术治疗后诊断为HCC的66例患者作为HCC组,选取25例同期在本院接受健康检查的体检者作为对照组。通过外泌体提取试剂盒分离HCC组和对照组血清中的外泌体,采用蛋白免疫印迹检测外泌体标记蛋白分子,透射电镜鉴定血清外泌体形态;实时荧光定量PCR方法检测两组血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达水平。计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验,计数资料两组间比较采用χ~2检验。采用Kaplan-Meier方法及logrank检验分析血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达与预后关系,采用Cox比例风险回归模型分析预后影响因素。结果血清来源的外泌体是直径为40～100 nm囊泡体,表达HSP70、Alix及CD63。HCC组血清来源外泌体中miRNA-221-3p较对照组表达水平升高,差异具有统计学意义(U=354.00,P0.001)。HCC患者血清外泌体miRNA-221-3p高表达与肿瘤大小(χ~2=6.016,P=0.014)、包膜侵犯(χ~2=7.580,P=0.006)和TNM分期(χ~2=6.340,P=0.012)有关。此外,血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达水平较高的HCC患者总体生存率较低,差异具有统计学意义(χ~2=17.105,P0.001)。多因素分析结果表明血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达水平(风险比=2.434,95%可信区间:1.178～5.027,P=0.016)及肿瘤分期(风险比=2.653,95%可信区间:1.222～5.760,P=0.014)是影响HCC患者预后的独立危险因素。结论 HCC患者血清外泌体来源的miRNA-221-3p表达水平明显升高,对HCC诊断及预后判断具有参考价值。     

肝细胞癌中耐药基因的表达及意义

目的通过对肝细胞癌（HCC）中3种耐药基因MDR1、MRP、GST-π的检测,探讨肝细胞癌中耐药基因的表达特点及临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测3种耐药基因在51例肝细胞癌组织和10例正常肝组织中的表达。结果 （1）MDR1、MRP、GST-π在肝细胞癌中的表达分别为0.55±0.27、0.62±0.29、0.64±0.31,正常肝组织中的表达分别为0.23±0.10、0.25±0.07、0.26±0.12,耐药基因在肝细胞癌中的表达高于正常肝组织,差异具有统计学意义（P〈0.05）;（2）耐药基因的表达与肿瘤Edmondson分级呈正相关（P〈0.05）;（3）MRP与GST-π的表达相关。结论肝细胞癌中存在有原发性耐药的现象,且多种机制并存。MDR1、MRP、GST-π在肝细胞癌中有较高的表达。联合检测对制定科学有效的治疗方案有一定价值。     

大鼠肝癌细胞与胎肝细胞间抑癌微小RNAs的表达差异

微小RNAs(miRNAs)是一类短序列、非编码、具有调控功能的单链小分子RNA[1],通过与其靶mRNA分子互补结合,在翻译水平上特异性抑制基因表达,参与调控生物生长和发育等许多复杂的生命过程[2,3],异常的miRNAs表达可能与人类许多疾病乃至肿瘤的发生和发展都密切相关[3,4].已知的miRNAs参与癌症发生的机制包括细胞黏附、血管生成、蛋白质水解、细胞信号系统、细胞增殖、侵袭转移和细胞死亡[5].miRNAs在肝癌组织中异常表达,它可能参与了肝细胞癌变及肝癌转移的病理过程[6].本研究应用Exiqon miRNA基因芯片技术,建立大鼠肝癌细胞和胎肝细胞之间miRNAs的差异表达谱,探索肝癌诊断和预后的新指标.DOI:10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2009.02.016     

原发性肝细胞癌血清中miR-888-5p的表达及临床意义

背景miR-888-5p高表达于原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及HCC细胞系,可促进肿瘤细胞侵袭及转移,与疾病分期及预后不良相关.然而HCC患者血清中miR-888-5p的表达水平尚未被检测,血清miR-888-5p对于HCC诊断及预后判断相关价值尚未被评估.目的检测HCC患者血清中miR-888-5p表达水平,探究其对HCC的诊断价值及与临床特征之间的关系.方法收集68例HCC患者、46例慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者、43例肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者及40例同期健康体检者,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测血清中miR-888-5p表达量,受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估其诊断HCC的价值,并分析与HCC临床特征之间的关系.结果HCC患者血清中miR-888-5p表达量较CHB、LC及健康者显著上调(P<0.05).ROC曲线提示,联合检测ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.907,敏感性91.18%,特异性72.50%)对HCC诊断价值优于分别检测血清miR-888-5p(AUC=0.737,敏感性79.41%,特异性62.50%)及甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)(AUC=0.819,敏感性73.53%,特异性97.50%),且对AFP阴性HCC也具有较高的诊断价值:AUC=0.793,敏感性90.90%,特异性62.50%.此外,miR-888-5p表达水平与HCC肺转移相关(P=0.01).结论血清miR-888-5p对HCC及AFP阴性HCC具有较高诊断价值,与AFP联合检测诊断价值更高.miR-888-5p表达水平与HCC肺转移相关,有望成为HCC早期诊断及评估预后的新型血清学分子标志物.     

microRNA在肝细胞癌有氧糖酵解中的调控作用

葡萄糖代谢重组是肝细胞癌(HCC)一个重要标志,癌细胞能迅速地将其能量来源从线粒体氧化磷酸化调整到糖酵解代谢,满足其在低氧环境下的高效增殖。近年来,越来越多的证据表明,microRNA(miRNA)的转录后调控在精细调节代谢重编程发挥关键作用,与HCC的临床病理特征及发生发展密切相关。影响糖酵解的因素有很多,系统的总结了miRNA在HCC中异常表达对有氧糖酵解的直接和间接调控的作用,为HCC的早期诊断、靶向治疗及预后检测提供理论依据。     

p73基因在肝细胞癌组织中的表达与临床意义

本文通过检测35例原发性肝细胞癌与相对应的癌旁组织中p73基因的表达及突变情况,结合临床资料,探讨肝细胞癌组织中p73基因的表达与临床预后的关系。     

c-myb在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 研究c-myb基因在HCC组织中的表达,探讨其在HCC发生、发展中的作用及临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测55例HCC组织、55例癌旁组织、12例肝硬化组织和11例正常肝组织中c-myb蛋白表达情况.结果 癌组织相对于正常的肝组织,癌旁组织相对于肝硬化组织,c-myb蛋白的表达明显增高(P=0.000).结论 提示,c-myb过表达是HCC发病中的早期事件,在HCC的发生、发展中可能起重要作用,检测c-myb的表达具有一定的临床意义.     

iNOS在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

肝细胞癌(HCC)是我国常见恶性肿瘤之一,其死亡率占消化系统恶性肿瘤第3位.它的发生、发展是多种癌相关基因协同作用的结果.一氧化氮(NO)是体内重要的生物活性分子和信号分子,它作为血管扩张因子、神经递质、抗微生物效应分子和免疫调节剂具有多种生理和病理功能.诱导型一氧化氮合酶(iNOS)主要在病理情况下,如炎症和肿瘤诱导下生成NO,参与血管生成、肿瘤的发生和发展等过程[1].本研究通过检测HCC癌组织中的iNOS的表达情况及其与临床生物学特点之间的关系,探讨iNOS与HCC的关系.     

抑癌基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

应用免疫组化SP法检测35例肝细胞肝癌（HCC）患者癌组织及癌旁组织中抑癌基因PTEN蛋白的表达水平。结果显示,HCC组织中PTEN蛋白阳性率和阳性强度均明显低于癌旁组织（P〈0．01）;PTEN蛋白表达与HCC的分化程度密切相关（P〈0．05）．与癌栓形成有关（P〈0．01）。提示PTEN异常表达在HCC发生、发展过程中可能起重要作用．其表达水平可作为反映HCC进展和预后的生物学指标。     

肝细胞癌miR-449a表达及临床意义

目的探讨miR-449a在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者癌组织中的表达与预后的关系。方法选取2012年1月至2013年10月在我院接受手术根治切除治疗的HCC患者289例,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-449a在HCC患者癌组织中的表达,并随访其生存状况。绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)并评价miR-449a对HCC预后的预测价值。采用Kaplan-Meier并Log-rank检验进行单因素生存分析,将单因素有意义的因素引入Cox多因素回归模型。结果 289例患者中,男性231例,女性58例。平均年龄(53.1±10.3)岁(范围:32～74岁)。根据Chid-Pugh分级,肝功能A级者258例,肝功能B级者31例。感染肝炎病毒者256例,未感染肝炎病毒者33例。miR-449a表达水平为1.84±0.78。截至2018年10月,289例HCC患者中,失访21例,随访率92.7%。平均随访时间(38.5±17.9)个月。在随访到的268例患者中,死亡146人。miR-449a预测HCC死亡的最佳临界点为1.2。当miR-449a为1.2时, miR-449a预测HCC死亡的灵敏度为63.0%,特异度为60.7%;AUC曲线下面积为0.63。多因素Cox回归分析显示:Child-Pugh B级[HR(95%CI):1.11(1.07～1.15)]、较高ALT水平[HR(95%CI):1.58(1.26～1.97)]、较高AST[HR(95%CI):1.73(1.31～2.28)]、ALP[HR(95%CI):1.36(1.05～1.76)]、AFP[HR(95%CI):2.09(1.85～2.12)]、较大肿瘤[HR(95%CI):1.14(1.06～1.18)]、较低ALB[HR(95%CI):1.38(1.37～1.52)]、miR-449a表达[HR(95%CI):2.17(1.68～2.28)]是HCC患者死亡风险增加的独立危险因素。结论 miR-449a表达是HCC患者预后独立危险因素,miR-449a表达下调者预后更差。     

血清microRNA检测在肝细胞癌诊断中的研究进展

随着肝细胞癌(HCC)患病率和病死率的逐渐上升,寻找精确、简便易行而无创的早期诊断标志物越来越重要。小分子RNA(microRNAs,miRNAs)是一类内源性非编码的小RNA,广泛存在于动物、植物和病毒中,并且在血清和组织中均稳定表达。介绍了miRNAs作为促癌基因和抑癌基因在肿瘤发生和发展中的作用,总结了多种血清miRNAs在肝细胞癌中的异常表达情况。分析表明可以利用这些稳定表达的miRNAs作为早期诊断肿瘤的无创性标志物。     

原发性肝细胞癌乙型肝炎病毒X抗原表达的分析

我们前已报道了抗ＨＢＶＸ抗原（ＨＢｘＡｇ）三种不同肽段的抗体检出肝癌细胞中ＨＢｘＡｇ的存在，我们用ＰＣＲ技术扩增肝癌组织中，ｘ基因，用重组ＨＢｘＡｇ及其抗体中的抗ＨＢｘ和ＨＢｘＡｇ并用免疫组织化学的方法分析肝组织中ＨＢｘＡｇ的表达及其分布，我们发现ＨＢｘＡｇ在肝癌肝组织中阳性率高达９２．６％，而且分布广泛，主要表达在细胞浆，但细胞核内亦有见到，癌旁组织检出率也很高，而在小胆管上皮细胞内亦见有ＨＢｘ     

原发性肝细胞癌中乙型肝炎病毒X抗原表达的分析

我们前已报道用抗ＨＢＶｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）三种不同肽段的抗体检出肝癌细胞中ＨＢｘＡｇ的存在。我们用ＰＣＲ技术扩增肝癌肝组织中的ｘ基因，用重组ＨＢｘＡｇ及其抗体分别检测肝癌患者血清中的抗ＨＢｘ和ＨＢｘＡｇ并用免疫组织化学的方法分析肝组织中ＨＢｘＡｇ的表达及其分布。我们发现ＨＢｘＡｇ在肝癌肝组织中阳性率高达９２．６％而且分布广泛，主要表达在细胞浆，但细胞核内亦有见到。癌旁组织检出率也很高，而且在小胆管上皮细胞内亦见有ＨＢｘＡｇ的存在。研究结果表明ＨＢｘＡｇ的表达与肝癌有密切关系     

lncRNA-SChLAP1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探究lncRNA-SChLAP1在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法收集经手术切除的92例HCC标本及46例癌旁肝组织标本,采用RT-PCR方法检测SChLAP1的mRNA表达水平,分析其与临床病理学参数及生存期的相关性。结果 SChLAP1在HCC组织中的表达水平明显高于癌旁肝组织,差异有统计学意义(P0.05)。SChLAP1的高表达率与肿瘤大小、临床分期、是否有门脉癌栓明显相关。门脉未侵犯组、早期组和晚期组患者行组内比较显示,SChLAP1高表达者的无病生存率和总生存率均低于低表达者。SChLAP1高表达是HCC患者预后不良的独立风险因子。结论 lncRNA-SChLAP1可作为评估HCC预后不良的潜在标志物。     

Autotaxin mRNA在人肝细胞癌中的表达

目的了解自分泌运动因子Ａｕｔｏｔａｘｉｎ（ＡＴＸ）ｍＲＮＡ在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）研究５例正常肝组织、３２例肝癌组织中ＡｕｔｏｔａｘｉｎｍＲＮＡ的表达，以βａｃｔｉｎ为内参照。结果５例正常肝组织及３２例肝癌中均有ＡｕｔｏｔａｘｉｎｍＲＮＡ表达；但Ａｕｔｏｔａｘｉｎ基因表达值（ｘ±ｓ）癌组织显著高于正常肝组织（６８．２３％±１５．３１％对３１．９７±８．０５％，Ｐ＜０．００１）。高表达ＡＴＸ肝癌与癌细胞肝内转移、门静脉癌栓形成、肿瘤的分化程度有关，而与年龄、性别、病因、肿瘤大小等无关。结论Ａｕｔｏｔａｘｉｎ基因过度表达与肝细胞癌的进展、转移有关。     

microRNA-335在慢性肝病中的作用

近年来,microRNA(miRNA)在肝脏病理过程中的调控作用备受关注。在病毒性及脂肪性肝炎中,miRNA-335通过Y盒上的性别决定区(SOX)4转录因子调控肝炎进展;在进展性肝纤维化及肝癌发生发展过程中,miRNA-335通过缺氧诱导因子1α、磷酸酶和紧张素同系物、靶向Rho蛋白激酶1、纤溶酶原激活物抑制剂1、碱性螺旋-环-螺旋转录因子家族1及间质-上皮细胞转化因子等靶基因调控肝脏中胶原的产生、沉积和降解,从而调控肝星状细胞或肝癌细胞的迁移和侵袭等生物学行为。主要归纳了近几年报道的miRNA-335在肝炎、肝纤维化和肝癌中作用的研究进展,同时,结合现有研究,提出miRNA-335/巯基氧化酶1调控轴可能通过抑制肝星状细胞活化介导青蒿琥酯抗血吸虫性肝纤维化的猜想,以期为抗肝纤维化及其他肝病治疗提供新思路。     

长链非编码RNA XLOC-007123在乙型肝炎相关肝细胞癌中的表达及临床意义

目的检测长链非编码RNA(lncRNA)XLOC-007123在乙型肝炎相关肝细胞癌(HCC)患者组织(癌、癌旁)及肝癌细胞系中的表达,并分析其表达水平与临床病理特征的关系。方法选取2013年12月-2015年12月于解放军三〇二医院肝胆外科行HCC切除术的52例乙型肝炎相关HCC患者的肝癌组织;同时取同一患者的癌旁组织作为对照。应用荧光实时定量PCR检测lncRNA XLOC-007123在乙型肝炎相关HCC患者癌组织、配对癌旁组织以及肝癌细胞系中的表达水平。其中研究所用细胞系L02、HuH7、HepG2、SMMC-7721均由解放军三○二医院临床管理中心提供。非参数Wilcoxon秩和检验比较lncRNA XLOC-007123在癌组织和配对癌旁组织的表达水平;独立样本t检验比较不同HCC细胞系与正常肝细胞系间lncRNA XLOC-007123表达水平。临床指标差异分析采用χ~2检验。结果与癌旁组织相比,lncRNA XLOC-007123在乙型肝炎相关HCC患者的癌组织中表达显著下调(P<0.01);与正常肝细胞株相比,IncRNA XLOC-007123在3种肝癌细胞系中均呈低表达(P值均<0.05)。lncRNA XLOC-007123表达水平与患者的血清AFP水平和肿瘤分期相关,差异有统计意义(χ2值分别为7.738、7.589,P值均<0.05)。结论 lncRNA XLOC-007123在乙型肝炎相关HCC组织中表达降低,且与临床患者血清AFP水平和病理分期有关联,推测lncRNA XLOC-007123在乙型肝炎相关HCC发生发展过程中发挥着调控作用,有望成为乙型肝炎相关HCC临床诊断的潜在标志物。     

HSPH1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的?基于癌症基因组图谱数据库（The Cancer Genome Atlas, TCGA）、高通量基因表达数据库（Gene Expression Omnibus, GEO）及人类蛋白质图谱数据库（Human Protein Atls, HPA）等生物信息学数据库探讨热休克蛋白H1（heat shock protein H1, HSPH1）在肝细胞癌中的表达及临床意义。方法?下载TCGA和GEO数据库肝细胞癌相关mRNA微阵列表达谱,比较肝细胞癌和癌旁组织的HSPH1 mRNA表达差异,并利用HPA数据库信息验证其蛋白水平的表达。分析HSPH1表达与肝细胞癌患者预后的相关性。建立ROC曲线和列线图模型,比较不同HSPH1表达组患者的生存差异。采用R软件分析HSPH1表达与肝细胞癌组织中免疫细胞浸润、免疫细胞生物标志物和免疫检查点的相关性。采用STRING数据库分析HSPH1相关蛋白质-蛋白质相互作用网络信息。并利用基因本体分析 （Gene Ontology, GO）、京都基因与基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）和基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis, GSEA）等数据库分析HSPH1在肝细胞癌中的功能及信号通路。结果?HSPH1在肝细胞癌组织中的表达水平高于癌旁组织（P=0.000）,Kaplan-Meier图显示HSPH1高表达肝细胞癌患者的总体生存期（P=0.000）、疾病特异性生存期（P=0.000）和无进展间隔期（P=0.010）均较HSPH1低表达者更短,HSPH1对肝细胞癌具有较好的诊断价值（AUC=0.895,95%CI：0.862～0.928,P=0.000）。多因素Cox回归分析显示,HSPH1是肝细胞癌患者预后的预测因素（HR=2.226,95%CI：1.393～3.557,P=0.000）。时间依赖性ROC曲线图显示1年、3年和5年AUC分别为0.699、0.581、0.588。在肝细胞癌组织中,HSPH1蛋白表达水平与树突状细胞和细胞毒性细胞浸润呈负相关,与巨噬细胞、CD56高表达的NK细胞等免疫细胞浸润及免疫检查点程序性死亡受体1和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4表达呈弱正相关。蛋白质-蛋白质相互作用、GO、KEGG和GSEA通路富集分析显示HSPH1与HSPA2、HSPA4、HSPA8和HSPA9等分子相互作用,并与HSPA4、HSPA8表达呈正相关,且具有调节凋亡、抗原加工和提呈、调节免疫等功能。结论?HSPH1在肝细胞癌组织中高表达,是肝细胞癌潜在的诊断和预后标志物。HSPH1参与了肝细胞癌的免疫调节过程,可能成为其治疗靶点之一。     

腹腔积液细胞DNA倍体及miRNA-21联合检测对肝细胞癌诊断的临床价值

目的评估联合检测腹腔积液细胞DNA倍体与微小RNA-21(miRNA-21)表达诊断肝细胞癌(HCC)的效能。方法将2012年1月1日-2014年1月1日鄂州市中心医院所收治临床表现伴有腹腔积液的患者纳入研究,HCC患者分入试验组,非HCC患者分入对照组。比较两组患者相关危险因素指标的差异性,采用Logistic回归分析进一步提取独立敏感指标,绘制相应指标的ROC曲线,计算曲线下面积(AUC)及约登指数(YI)。结果两组患者组间资料单因素比较显示:性别(男性比例)、吸烟史、HBV阳性、上腹部CT疑似阳性、卡氏功能量表(KPS量表)、ALT、甲胎蛋白(AFP)、异常凝血酶原(APT)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、腹水细胞miRNA-21、腹水细胞DNA异倍体阳性共计11项指标差异存在统计学意义(P值均0.05)。Logistic回归分析显示,吸烟史、AFP、APT、腹水细胞miRNA-21、腹水细胞DNA异倍体是诊断HCC的敏感指标。腹水细胞miRNA-21与DNA异倍体的AUC分别为0.742与0.801;吸烟史、AFP与APT三者联合断HCC的AUC为0.852,YI为0.5992。吸烟史、AFP、APT腹水细胞miRNA-21与DNA异倍体五项指标联合诊断的AUC增至0.869、YI增至0.6222。结论腹水细胞DNA异倍体与miRNA-21是诊断HCC的独立危险因素,单项指标检测即具有良好的诊断价值,将其联用能够显著增大HCC的诊断价值,对于该病的早期诊断具有重要临床意义,是当前HCC诊断体系的良好补充。     

microRNA-145在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

[目的]探讨肝细胞肝癌中microRNA-145(miR-145)水平的变化及其临床意义。[方法]采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测30例肝癌组织、癌旁组织及3例正常肝组织中miR-145表达量,以及Hep G2肝癌细胞、L-O2胎肝细胞中miR-145表达量并计算miR-145相对表达量。结合采集组织的性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、HBV感染、AFP浓度等临床病理参数分析miR-145表达水平有无明显差异。[结果]肝癌组织中miR-145表达明显低于正常肝组织,差异有统计学意义(P0.05),癌旁组织与正常肝组织及肝癌组织之间表达差异无统计学意义(均P0.05),Hep G2细胞中miR-145表达明显低于L-O2细胞,差异有统计学意义(P0.05)。miR-145在肝癌中的表达异常与性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、HBV感染、AFP浓度无相关,差异无统计学意义。[结论]miR-145在肝癌患者中低表达,在肿瘤发生发展过程中可能担任了抑癌基因的角色,对肝细胞肝癌的临床诊断有意义。