CRNDE和miR-181a在结直肠癌中的表达及临床意义

摘 要：［目的］ 研究结直肠癌癌组织中长链非编码RNA（long-noncoding RNA,LncRNA）CRNDE及微小RNA（microRNA,miR）-181a表达及其临床意义。［方法］ 应用荧光实时定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测89例结直肠癌癌组织和癌旁组织中CRNDE及miR-181a的表达,分析组间CRNDE及miR-181a表达差异及两者表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析比较不同水平CRNDE、miR-181a患者3年总体生存率（OS）的差异。［结果］ 与癌旁组织相比,结直肠癌组织中CRNDE表达水平明显升高,miR-181a表达水平明显降低（P均<0.05）。结直肠癌癌组织中CRNDE、miR-181a表达与肿瘤分期、肿瘤分化有关（P均<0.05）,与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置及淋巴结转移无关（P均>0.05）。癌组织中CRNDE与miR-181a表达呈显著负相关（r=-0.558,P=0.008）。Kaplan-Meier分析表明癌组织中CRNDE高表达患者3年OS明显低于CRNDE低表达者（P<0.05）,而高表达miR-181a与低表达miR-181a患者3年OS无明显差异（P>0.05）。［结论］ 结直肠癌组织中CRNDE表达升高,而miR-181a表达降低,两者均参与结直肠癌的发生发展过程,有可能成为新的肿瘤标志物。     

miR-92a 在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管生成的作用*

目的:探讨miR-92a 在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管新生功能的影响和作用机制。方法:采用qRT-PCR方法检测广东医学院附属深圳南山医院2014年6 月至2015年12月经手术切除的25例结直肠癌组织和对应癌旁组织及4 种结直肠癌细胞（HCT 116、SW620、SW480、HT29）中miR-92a 的表达;免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁组织中CD31阳性表达的微血管密度（microvesseldensity,MVD）,Pearson相关性分析探讨miR-92a 表达与肿瘤血管新生MVD的相关性。通过转染miR-92a-mimic、inhibitor 上调或抑制结直肠癌细胞HCT 116、SW620 中miR-92a 的表达水平,采用小管形成实验检测miR-92a 不同表达对HUVEC小管形成的影响,免疫印迹法检测对其下游潜在靶点PTEN的蛋白表达的影响。结果:结直肠癌组织miR-92a 的表达水平显著高于对应癌旁组织（P < 0.01）;4 种人结肠癌细胞系miR-92a 的表达水平均显著高于正常肠上皮组织（P < 0.05）;结直肠癌组织CD31阳性微血管密度显著高于癌旁组织（P < 0.01）,miR-92a 表达水平与结直肠癌血管新生MVD呈显著正相关（r = 0.580,P = 0.01）;上调miR-92a 表达的HCT 116 细胞培养上清液可以显著促进HUVEC小管形成（P < 0.05）;上调miR-92a 表达可以显著抑制HCT116 细胞中PTEN蛋白表达水平（P < 0.01）。 结论:miR-92a 在结直肠癌细胞和组织中高表达,与肿瘤血管新生增加密切相关;miR-92a 可能通过抑制PTEN的表达发挥促进结直肠癌血管新生的生物学功能。      

Lnc SNHG16通过调控miR-140-5p/wnt1对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响

摘 要：［目的］ 探讨了Lnc SNHG16通过miR-140-5p/wnt1对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响。［方法］ 选取结直肠癌肿瘤组织和癌旁组织各102例,采用荧光定量PCR检测Lnc SNHG16和miR-140-5p表达水平和两者间的关系。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析Lnc SNHG16和miR-140-5p之间的关系以及靶基因;在结肠癌细胞系SW480建立Lnc SNHG16敲降和miR-140-5p过表达细胞系,采用Western blot分析Lnc SNHG16和miR-140-5p对目的蛋白的影响;采用CCK8分析不同处理结肠癌细胞增殖;采用Transwell分析不同处理的结肠癌细胞的迁移。［结果］ 与癌旁组织相比,结直肠癌组织中Lnc SNHG16表达水平显著增加,而miR-140-5p表达水平显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学研究发现Lnc SNHG16调控着miR-140-5p的表达水平,并调控wnt1蛋白的表达,调节WNT/β-Catenin信号通路活性。Lnc SNHG16敲降或过表达miR-140-5p可显著抑制SW480细胞的增殖和迁移,差异均有统计学意义(P<0.05)。［结论］ Lnc SNHG16通过靶向作用于miR-140-5p/wnt1轴进而调节着结直肠癌细胞的增殖和迁移。     

miR-23b-3p在结直肠癌中的表达及其靶向KLF3抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的机制研究

目的:研究miR-23b-3p在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响机制。方法:收集2018年01月至2020年12月我院胃肠外科手术切除的58例结直肠癌组织及癌旁组织标本,以及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、Lovo和人正常结直肠黏膜细胞FHC,采用qPCR法检测miR-23b-3p和KLF3相对表达水平。采用脂质体转染技术将miR-23b-3p mimics、mimics-NC转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变。利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和KLF3的结合位点。将KLF3过表达质粒（pcDNA3.1-KLF3）或空载质粒（Vector）单独或联合miR-23b-3p mimics转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用qPCR和Western Blot实验检测SW620细胞中KLF3 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,并与患者TNM分期和远处转移有关（均P＜0.05）;miR-23b-3p在结肠癌细胞系中的表达水平均显著低于FHC细胞,上调miR-23b-3p表达能显著抑制SW620细胞的侵袭和迁移能力。KLF3在结直肠癌组织和细胞中高表达,与miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关（r=-0.326,P=0.013）,双荧光素酶报告基因实验证实miR-23b-3p直接靶向调节KLF3的表达, KLF3过表达能促进SW620细胞的侵袭和迁移,同时转染miR-23b-3p mimics可下调KLF3蛋白和mRNA表达,逆转KLF3过表达对SW620细胞侵袭和迁移能力的促进作用。结论:miR-23b-3p在结直肠癌中低表达并与肿瘤患者TNM分期及远处转移相关,miR-23b-3p靶向调控KLF3表达抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力。     

长链非编码RNARUNX1-IT1通过靶向miR-21对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响

目的：探讨长链非编码 RNA(lncRNA)RUNX1-IT1在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响机制。方法：收集2017年1月—2019年1月于河北北方学院附属第一医院进行根治性手术切除的结直肠癌组织标本62例及其相应的癌旁正常组织标本,采用荧光定量PCR(qPCR)法检测结直肠癌组织和其相应的癌旁组织中lncRNA RUNX1-IT1的表达。并培养人结直肠癌细胞系(SW480、SW620、HCT-116)和人正常结直肠上皮细胞系(FHC),qPCR检测细胞系中 lncRNA RUNX1-IT1和 miR-21的表达水平,选择最适细胞系用于后续实验。通过上调或下调SW480细胞中lncRNA RUNX1-IT1和miR-21的表达后,采用qPCR检测lncRNA RUNX1-IT1和miR-21的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA RUNX1-IT1和miR-21的靶向关系,Transwell实验检测SW480细胞侵袭和迁移能力。结果：qPCR检测结果显示,与癌旁正常组织比较,lncRNA RUNX1-IT1在结直肠癌组织中表达降低(P<0.05),而miR-21在结直肠癌组织中表达升高(P<0.05),且lncRNA RUNX1-IT1与miR-21在结直肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.275,P=0.031)。与正常结直肠 FHC细胞相比,lncRNA RUNX1-IT1在 3种结直肠癌细胞系中的表达水平均显著降低(均为P<0.05),而miR-21均显著升高(均为P<0.05),且SW480细胞最明显,故后续采用SW480细胞系进行实验。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA RUNX1-IT1靶向调节miR-21的表达;与对照组相比,过表达lncRNA RUNX1-IT1可抑制SW480细胞侵袭和迁移能力(P<0.05);抑制 miR-21表达可抑制 SW480细胞侵袭和迁移能力(P<0.05);上调 miR-21表达可逆转过表达 lncRNARUNX1-IT1对 SW480细胞侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05)。结论：LncRNA RUNX1-IT1在结直肠癌中表达下调,lncRNARUNX1-IT1通过靶向miR-21调控SW480细胞侵袭和迁移。     

miR-618抑制结直肠癌生长转移的机制探讨

目的:探讨miR-618在结直肠癌发生发展中的作用。方法:Real-time PCR法检测结直肠癌组织及Caco-2细胞中miR-618表达情况,改变结直肠癌细胞中miR-618表达,应用平板克隆实验检测转染后的结直肠癌细胞克隆能力,创伤愈合实验检测转染后的结直肠癌细胞迁移能力,Transwell小室实验检测转染后的结直肠癌细胞侵袭能力,Western Blotting法检测结直肠癌组织、细胞中SMAD4蛋白的表达变化情况及改变结直肠癌细胞中miR-618表达对SMAD4蛋白的影响。结果:结直肠癌组织及Caco-2细胞中miR-618表达较正常癌旁组织及FHC细胞明显下降（P＜0.05）,但SMAD4蛋白的表达增高（P＜0.05）。上调Caco-2细胞中miR-618表达后,Caco-2细胞的克隆、迁移及侵袭能力均减弱（P＜0.05）,但SMAD4蛋白表达下降（P＜0.05）。结论:miR-618通过下调SMAD4蛋白表达抑制结直肠癌生长转移。     

miRNA-451通过MRP靶向调控胃癌细胞对5-Fu耐药性的机制研究

目的 探讨miR-451通过下调耐药基因MRP表达，调控胃癌对5-Fu耐药的相关机制。方法 采用实时荧光定量PCR检测20对人胃癌组织及癌旁组织和胃癌细胞系中miR-451的相对表达量，根据患者对药物的反应进行分组并检测耐药组以及非耐药组miR-451的表达水平。构建plent-miR-451稳定过表达胃癌细胞系，通过荧光实时定量PCR检测胃癌细胞系miR-451过表达效率，CCK8法检测不同浓度5-Fu对细胞增殖活力的影响。生物信息学方法分析miR-451的靶基因，并通过荧光素酶实验验证。实时定量PCR以及Western blot检测miR-451对靶基因MRP mRNA和蛋白水平的影响。结果 miR-451在正常组织中表达量高于胃癌组织，在非耐药胃癌组织中高于耐药胃癌组织。过表达miR-451降低了胃癌细胞对5-Fu的耐受能力（P=0.0006）。生物信息学分析显示MRP为miR-451的靶基因，荧光素酶实验同时也证实MRP为miR-451的潜在靶基因。过表达miR-451可导致耐药基因MRP mRNA以及蛋白水平均显著降低（P=0.00069）。结论 过表达miR-451可下调耐药基因MRP表达，使肿瘤细胞对5-Fu耐药性降低。