基于NLRP3/caspase-1通路研究丹参提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的保护作用

目的基于NLRP3/caspase-1通路探讨丹参提取物对系膜增生性肾小球肾炎(mesangial proliferative glomerulonephritis,MsPGN)大鼠的保护作用。方法取48只大鼠建立MsPGN模型,随机分为4组:(1)模型组:不给予药物治疗;(2)丹参提取物组:每日给予丹参提取物(10 mL/kg)灌胃;(3)VX-765组:每日给予VX-765(NLRP3炎性小体抑制剂,50 mg/kg)腹腔注射;(4)丹参提取物+VX-765组:每日给予丹参提取物(10 mL/kg)灌胃,并给予VX-765(50 mg/kg)腹腔注射。另取12只大鼠设为假手术组。各组均持续给药28 d。末次给药结束24 h后,收集各组大鼠24 h尿液,检测24 h尿蛋白含量;检测各组大鼠血清中BUN、Scr、IL-1β、IL-18水平;观察各组大鼠肾组织病理变化,并根据肾小球系膜细胞增殖程度、肾小管-间质病变程度进行病理评分;采用实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测各组大鼠肾组织中NLRP3、caspase-1的mRNA和蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠出现肾小球体积变大、内部细胞数量增多,系膜细胞弥漫性增生、细胞基质增多,肾间质有炎性细胞浸润等肾组织病理损伤症状,肾小球系膜细胞增殖程度评分、肾小管-间质病理评分、24 h尿蛋白含量、血清BUN、Scr、IL-1β、IL-18、肾组织NLRP3及caspase-1表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,丹参提取物组、VX-765组、丹参提取物+VX-765组大鼠上述病理损伤症状减轻,肾小球系膜细胞增殖程度评分、肾小管-间质病理评分、24 h尿蛋白含量、血清BUN、Scr、IL-1β、IL-18、肾组织NLRP3及caspase-1表达均显著降低(P<0.05);与丹参提取物组及VX-765组分别比较,丹参提取物+VX-765组大鼠上述病理损伤症状进一步减轻,肾小球系膜细胞增殖程度评分、肾小管-间质病理评分、24 h尿蛋白含量、血清BUN、Scr、IL-1β、IL-18、肾组织NLRP3及caspase-1表达均显著降低(P<0.05)。结论丹参提取物可以减轻MsPGN大鼠炎症反应及系膜增生性病变,保护大鼠肾组织,修复大鼠肾功能,可能通过下调NLRP3/caspase-1通路实现。     

达格列净通过抑制NLRP3炎性小体缓解糖尿病大鼠肾脏损伤

目的:观察达格列净对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾脏损伤的影响及分子机制。方法:应用高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)腹腔注射建立T2DM大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组(Model)、二甲双胍组(Met)和达格列净组(DAPA),并设立正常对照组(Control),每组5只。Met组给予每日150 mg/kg灌胃,DAPA组给予每日10 mg/kg灌胃,Control组和Model组予以等体积蒸馏水灌胃,持续治疗6周,每周称重1次,根据体重变化调整给药剂量。于第6周,将各组大鼠放代谢笼中,检测24 h尿量、24 h尿白蛋白总量(UTP)、尿白蛋白/尿肌酐比值(ACR)。6周末处死大鼠,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG);HE、PAS染色观察大鼠肾脏病理变化;免疫组织化学法观察大鼠肾组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体及相关组分蛋白的表达;Western blot检测肾脏NLRP3炎症小体及相关组分蛋白表达。结果:与Control组比较,Model组大鼠FBG、TC、TG升高(P<0....     

百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效及对Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体水平的影响

目的:观察百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效及对Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体水平的影响。方法:采用随机数字表法将80例糖尿病肾病患者分成观察组和对照组。对照组予达格列净治疗，观察组同时联合百令胶囊治疗。经连续治疗3个月，比较两组治疗前后空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肾功能指标[肾小球滤过率(eGFR)、血肌酐(Scr)、24 h尿微量白蛋白]、NLRP3炎性小体、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA、炎性因子[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]水平变化，统计两组治疗总有效率，评价治疗安全性。结果:治疗后，两组FPG、2 h PG、HbA1c水平，Scr、eGFR、24 h尿微量白蛋白水平，Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体表达水平，TNF-α、IL-1β、hs-CRP水平均明显低于治疗前(P<0.05),且观察组治疗以上指标水平均低于对照组(P<0.05);观察组总有效率为92.5%,优于对照组(75.0%)(P<0....     

TNF-α抑制剂对重症急性胰腺炎大鼠凝血功能及钙离子的影响

【摘要】 目的 分析TNF-α抑制剂对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠凝血功能及钙离子的影响,为TNF-α抑制剂治疗SAP提供实验依据。方法〓制做SAP大鼠模型;对照组:假注射组,20只,制备成SAP模型,尾部注射生理盐水;治疗组:SAP模型大鼠60只,治疗组1、治疗组2、治疗组3三个亚组各20只,模型制作成功后,分别按照0.15 mg/kg、0.30 mg/kg、0.45 mg/kg剂量水平,经阴茎背静脉注射TNF-α抑制剂;24 h后,麻醉,采血针抽取各组大鼠颈总动脉血3 mL,行凝血系列检测及观察血钙水平。结果〓试验期间,大鼠均存活,治疗组大鼠状态稍好,部分仍有自主活动、进食;治疗组1、治疗组2、治疗组3的APPT、FIB水平低于假注射组,治疗组血清离子钙水平高于假注射组;治疗组内3组间PT、APPT、FIB、血清离子钙比较差异具有统计学意义(P<0.05),治疗组内3组间血清总钙比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论〓SAP可致大鼠凝血功能减退,血钙水平降低,TNF-α抑制剂有助于改善SAP模型大鼠凝血功能及血清离子钙水平,作用机制与抑制炎症反应有关,且呈较明显的剂量依赖,在0.45 mg/kg剂量水平,改善效果更显著。     

左肾切除术联合链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病肾病大鼠模型的建立

目的探讨左肾切除术联合链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病肾病(DN)大鼠模型的建立。方法健康雄性SD大鼠共16只,随机分为3组,对照组(5只)、假手术组(5只)和模型组(6只)。适应性喂养3 d后,模型组行左侧肾脏切除术,术后1周单次腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素,建立DN大鼠模型;假手术组做手术切口,但不切除左肾,术后给予等体积的柠檬酸缓冲液腹腔注射;对照组小鼠不做任何处理。以造模后72 h内2次随机血糖大于16.7 mmol/L为糖尿病模型成立标准。在成模后3个月时所有大鼠留取血液、尿液及肾脏标本,检测血尿生化指标,HE、PAS、Masson染色及电镜观察肾脏病理特点。结果与对照组及假手术组比较,模型组大鼠体质量增加缓慢,后期体质量呈负增长趋势,饮水量明显增加,且出现糖尿病视网膜病变,24h尿量、24h尿蛋白定量及尿微量白蛋白定量显著增加,血肌酐、尿素氮水平升高,HE、PAS、Masson染色提示:模型组大鼠肾小球基底膜增厚,肾小管空泡样变性,血管内膜增厚,部分大鼠出现肾间质纤维化。电镜提示:肾小球基底膜增厚,部分足细胞足突融合或缺失。结论左肾切除术联合链脲佐菌素腹腔注射能够建立可靠的DN大鼠模型。     

富甲烷生理盐水对大鼠急性脊髓损伤的治疗作用及剂量效应研究

目的研究富甲烷生理盐水(MS)腹腔注射对大鼠脊髓损伤的治疗作用及剂量效应关系。方法 50只雌性SD大鼠,随机取40只采用改良Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,其余10只纳入假手术组。40只脊髓损伤大鼠随机分为脊髓损伤组、0.5 ml/kg MS组、5 ml/kg MS组、20 ml/kg MS组,每组10只。0.5 ml/kg MS组、5 ml/kg MS组、20 ml/kg MS组大鼠每12 h腹腔内注射相应剂量的MS。造模72 h后处死大鼠,迅速取出以脊髓损伤部位为中心、周围6 mm内组织,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、TNF-α、IL-1β和IL-6含量。结果与假手术组比较,脊髓损伤组大鼠脊髓组织中MDA含量显著升高,而SOD活性显著降低,IL-1β、TNF-α、IL-6含量显著升高,差异有统计学意义(P 0.05)。与脊髓损伤组比较,0.5 ml/kg MS组、5 ml/kg MS组、20 ml/kg MS组MDA含量逐渐降低,SOD活性逐渐升高,IL-1β、TNF-α、IL-6含量逐渐降低,差异有统计学意义(P 0.05)。结论大鼠腹腔注射MS可以通过抑制脊髓受损节段的炎症反应、氧化应激,起到治疗脊髓损伤的作用,剂量与效应呈正相关。     

青蒿琥酯通过NLRP3炎症小体抑制细胞焦亡减轻大鼠肾缺血-再灌注损伤

目的探究青蒿琥酯对大鼠肾缺血-再灌注损伤(IRI)的作用及机制。方法将25只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(IRI组)、低剂量青蒿琥组(ART-L组)、高剂量青蒿琥酯组(ART-H组)和NLRP3炎症小体抑制剂组(INF39组),每组5只。分析各组大鼠血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平及肾组织病理损伤情况;检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;用免疫组织化学染色法检测各组大鼠肾组织IL-1β的表达;免疫荧光染色和蛋白质免疫印迹法检测焦亡相关蛋白的表达。结果与Sham组比较,IRI组Scr和BUN水平升高,肾组织损伤较重,炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平升高,肾损伤分子(KIM)-1及焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、Gasdermin D(GSDMD)、IL-1β蛋白表达水平均升高;与IRI组比较,ART-L组、ART-H组和INF39组Scr和BUN水平均下降,肾组织损伤均较轻,TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平均降低,KIM-1、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白表达水平均下降。结论青蒿琥酯可抑制NLRP3炎症小体诱导的细胞焦亡,减少肾IRI后焦亡相关蛋白的表达及炎症因子的释放,减轻肾IRI。     

棓丙酯对早期糖尿病肾病保护作用机制的实验研究

目的:探讨早期糖尿病肾病肾小球新生血管的特征及其棓丙酯对早期糖尿病肾病肾小球病变的保护作用及可能机制。方法:将30只SD大鼠随机分为3组,模型组与治疗组大鼠应用链脲佐菌素(60mg/kg)一次性腹腔注射建立糖尿病肾病模型,对照组注射相应体积的柠檬酸盐溶液,治疗组给予棓丙酯(2mg.kg-1.d-1)腹腔注射治疗。模型建立8周后PAS染色评价各组肾组织病理变化,观察大鼠24h尿蛋白排泄率与肾组织CD31的IOD变化,运用CD31及PCX标记免疫荧光检测肾小球血管增生程度和结构特点。结果:造模后8周,模型组肾小球增殖血管在结构上可见无足细胞包被的幼稚血管,在肾小球血管增殖方面较对照组显著增加(P<0.01),但在治疗组这种升高被显著抑制(P<0.05);模型组新生血管的程度与白蛋白尿的程度正相关(r=0.62)。结论:早期糖尿病肾病大鼠肾小球内不成熟血管增殖明显,促进早期糖尿病肾病的进展,棓丙酯可抑制肾小球异常血管增殖从而对早期糖尿病肾病发挥保护作用。     

Toll样受体4与Nod样受体蛋白3炎性小体在糖尿病肾脏疾病中的研究进展

慢性肾脏病发病率逐年上升,现已成为威胁全世界公共健康的主要疾病之一。导致慢性肾脏病的基本病因众多,主要包括原发性与继发性肾小球肾炎、糖尿病肾脏疾病、高血压肾损害、肾小管间质病变、遗传性疾病等。而糖尿病肾脏疾病作为慢性肾脏病的病因之一,是糖尿病引起的肾脏微血管病变的并发症,不加以控制可进展为终末期肾病。糖尿病肾脏疾病的具体发病机制尚不完全清晰,主要以高糖等代谢因素导致的免疫介导性炎症对肾脏破坏为主,而近年来发现免疫介导性炎症因素是糖尿病肾脏疾病发生的重要原因之一。在糖尿病肾脏疾病中,机体处在高糖状态下募集如白介素、肿瘤坏死因子等炎症反应细胞在肾脏浸润,从而刺激肾脏微血管病变的发生,这一过程涉及多种信号通路的发生。在天然免疫应答系统中,Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)以及Nod样受体蛋白3(nod-like receptor family pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)炎性小体在肾脏相关免疫炎症疾病中扮演着重要角色。近来研究发现,TLR4以及NLRP3炎性小体与糖尿病肾脏疾病的发病机制密切相关。在高糖条...     

糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时Rev-erbα与NLRP3炎症小体的关系

目的评价糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时Nr1D1核受体亚家族1, 组D, 成员1(Rev-erbα)与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 (NLRP3)炎症小体的关系。方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠, 体重210～240 g, 采用腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg制备1型糖尿病模型。取非糖尿病大鼠18只, 采用随机数字表法分为2组:非糖尿病假手术组(NS组, n=6)和非糖尿病心肌缺血再灌注组(NIR组, n=12)。取糖尿病大鼠30只, 采用随机数字表法分为3组:糖尿病假手术组(DS组, n=6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DIR组, n=12)和糖尿病心肌缺血再灌注+ Rev-erbα抑制剂SR8278组(DIR+SR组, n=12)。采用结扎左冠脉前降支30 min后再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。DIR+SR组于缺血前1 h时经股静脉注射SR8278 2 mg/kg。再灌注结束时经采用ELISA法检测血清CK-MB、LDH和cTnI浓度, TTC法测心肌梗死面积百分比, HE染色法观察心肌组织病理学结果, Western blot法检测心肌组织Rev-...     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在心肺转流大鼠围术期神经认知障碍中的作用

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体在心肺转流(CPB)大鼠围术期神经认知障碍(PND)中的作用。方法成年雄性SD大鼠30只,体重350～450 g,进行Morris水迷宫训练5 d后随机分为三组,每组10只:假手术组(S组)、CPB组(C组)和CPB+NLRP3炎性小体抑制剂Ac-YVAD-cmk组(Y组)。S组进行双侧隐动脉、右大隐静脉和右颈内静脉穿刺置管,但不进行CPB;C组穿刺置管后行CPB 60 min;Y组在CPB前30 min给予Ac-YVAD-cmk 8 mg/kg腹腔注射,穿刺置管后行CPB 60 min。术后第3天采用Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能,ELISA法检测血浆和海马组织IL-1β和IL-18浓度,Western blot法检测海马组织NLRP3、凋亡相关点样蛋白(ASC)和半胱氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-caspase-1)蛋白含量,TUNEL法检测海马组织凋亡情况,计算凋亡指数。结果与S组比较,C组和Y组逃避潜伏期明显延长(P0.05),120 s穿越原平台次数明显减少(P0.05),血浆和海马组织IL-1β和IL-18浓度、NLRP3、ASC和pro-caspase-1蛋白含量以及凋亡指数明显升高(P0.05)。与C组比较,Y组逃避潜伏期明显缩短(P0.05),120 s穿越原平台次数明显增多(P0.05),血浆和海马组织IL-1β和IL-18浓度、NLRP3、ASC和pro-caspase-1蛋白含量以及凋亡指数明显降低(P0.05)。结论 CPB后大鼠PND可能与NLRP3炎性小体的激活有关,使用NLRP3炎性小体抑制剂可减轻大鼠PND的发生。     

硫化氢通过减轻肾小管上皮细胞凋亡改善糖尿病肾病

目的研究H_2S在糖尿病肾病中的作用及探讨其可能的机制。方法给予C57BL/6J小鼠STZ(50 mg/kg×4 d)腹腔注射和高脂饮食制备糖尿病模型,将造模成功小鼠分两组:STZ+GYY 4137组(H_2S组)给予20 mg/kg GYY 4137腹腔注射,STZ+生理盐水组(DKD组)给予等量生理盐水腹腔注射。另外取正常C57BL/6J小鼠作为正常对照组,给予等量生理盐水腹腔注射。连续注射12周后,观察各组小鼠24 h尿白蛋白情况、肾组织形态学改变以及肾组织细胞凋亡情况。给予小鼠近端肾小管上皮细胞高糖(25 mmol/L)刺激并H_2S预孵,观察细胞凋亡情况。结果 DKD组小鼠24 h尿白蛋白较正常对照组增加,H_2S治疗后小鼠尿白蛋白减少;DKD组小鼠肾小球系膜增殖,H_2S治疗后小鼠肾小球系膜增殖改善;DKD组小鼠肾组织凋亡增加,H_2S治疗后小鼠肾组织细胞凋亡减少;H_2S产生酶胱硫醚β合成酶、胱硫醚β裂解酶、3-巯基丙酮酸转硫酶在肾脏表达,其中糖尿病小鼠仅胱硫醚β合成酶减少,胱硫醚β裂解酶、3-巯基丙酮酸转硫酶无改变。近端小管上皮细胞在高糖刺激下cleaved-caspase-3增加,H_2S预孵降低cleaved-caspase-3的表达,改善细胞凋亡。结论 H_2S治疗能够降低糖尿病小鼠尿白蛋白,减轻肾小球系膜增殖,机制可能是通过降低caspase-3活性从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡。     

糖尿病大鼠肾小管整合素连接激酶的表达及氯沙坦的干预作用

目的：观察糖尿病大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶（ILK）的表达以及氯沙坦对其的影响。方法：雄性Wistar大鼠腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病模型,随机分为模型组和氯沙坦组;另设正常组腹腔注射缓冲液。第8周、第16周测24h尿蛋白定量和血肌酐,处死大鼠,取肾组织行HE、Masson染色,观察肾脏病理改变;免疫组化法检测大鼠肾小管上皮细胞ILK、TGF-β1的表达。结果：模型组大鼠肾小管上皮细胞胞浆ILK表达增高,与小管间质病变程度一致;同时TGF-β1表达亦增高,并与ILK表达呈正相关性。氯沙坦组大鼠尿蛋白较模型组明显减少,肾小管间质病变减轻,肾小管上皮细胞ILK、TGF-β1表达明显减弱。结论：糖尿病大鼠肾小管上皮细胞存在有ILK的高表达,ILK的表达强度与肾小管间质损伤程度相一致,并与TGF-β1的表达呈正相关;氯沙坦能下调肾小管上皮细胞ILK的表达。     

依贝沙坦对阿霉素肾病大鼠肾小管间质的保护作用

目的 探讨依贝沙坦（irbesartan)对阿霉素诱导重复单肾大鼠肾小管及间质的保护作用及其可能的调节机制。方法 将诱导的肾病大鼠分为肾病组和依贝沙坦治疗组，并设假手术组为正常对照。检测依贝沙坦治疗4周后，3组大鼠肾功能和组织病理改变，并用免疫组织化学（组化）或原位杂交的方法检测肾小管间质中转化生长因子β1(TGF-β1），基质金属蛋白酶9（MMP-9）及组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）的表达。结果 治疗组大鼠24h尿蛋白，肾重/体重，肾小球截面积以及病理改变与对照组相比明显减轻，肾小管间质中TGF-β1，MMP-9，TIMP-1表达均有不同程度的减少。结论 通过调节细胞外基质降解作用。依贝沙坦能延缓单侧肾切除加重复阿霉素注射诱导的肾病大鼠肾小管间质的病变。     

冬虫夏草通过抗氧化抗炎抑制细胞凋亡改善顺铂肾损伤

目的:观察顺铂(cisplatin,CP)小鼠肾损伤后肾组织氧化应激、炎症及细胞凋亡情况以及冬虫夏草干预的影响,探讨冬虫夏草的肾保护作用机制。方法:用腹腔注射cisplatin的方法建立顺铂肾损伤模型,28只8周龄C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、CP组、冬虫夏草组、冬虫夏草+CP组,每组7只。72 h后处死小鼠,检测各组小鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr),肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),HE染色观察小鼠肾小管间质病理变化,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡情况; ELISA的方法测定组织中TNF-α、IL-1β、IL-6。结果:与对照组及冬虫夏草相比,CP组与冬虫夏草+CP组小鼠的BUN、Scr及肾组织MDA水平增高(P0.01),肾组织SOD降低(P0.01),肾小管病理半定量计分显示小管间质损伤明显加重(P0.01),TUNEL阳性细胞表达增多(P0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6明显增加(P0.01);与CP组相比较,冬虫夏草+CP组的血清BUN、Scr及肾组织MDA水平下降(P0.01),肾组织SOD上升(P0.05),肾小管病理半定量计分显示冬虫夏草+CP组较CP组小管间质损伤明显改善(P0.01),TUNEL阳性细胞表达明显减少(P0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6明显减少(P0.01)。结论:顺铂肾损伤肾组织中MDA明显增高,SOD活性降低,TNF-α、IL-1β、IL-6及凋亡细胞显著增加,提示顺铂至急性肾损伤与其诱导氧化应激、炎症及细胞凋亡有关。冬虫夏草干预后肾组织中MDA明显降低,SOD活性升高,TNF-α、IL-1β、IL-6及凋亡细胞显著减少,提示冬虫夏草可能通过抑制氧化应激、炎症及肾小管上皮细胞凋亡而达到肾保护作用。     

ARA290抑制糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)衍生肽ARA290对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及其可能机制。方法采用链脲菌素腹腔注射制备糖尿病大鼠模型。将成模大鼠随机分为4组:糖尿病模型组(DM组)皮下注射生理盐水0.5 mL,隔日1次;ARA290治疗组(DA组)皮下注射ARA290(50 U/kg),隔日1次;EPOR阻断肽+ARA290治疗组(DAEB组)皮下注射EPOR阻断肽(10μg/kg)和ARA290(50 U/kg),隔日1次;CD131阻断肽+ARA290治疗组(DACB组)皮下注射CD131阻断肽(10μg/kg)和ARA290(50 U/kg),隔日1次。同时设立正常对照组(NC组),皮下注射生理盐水0.5 mL,隔日1次。药物干预12周后检测大鼠尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAER)、尿N-乙酰葡萄糖苷酶(N-acetylglucosidase,NAG)、β_2微球蛋白(β_2-microglobulin,β_2-MG)、α_1微球蛋白(α_1-microglobulin,α_1-MG)、血肌酐(Scr)。肾组织切片HE染色,观察肾脏病理变化。采用免疫荧光检测肾脏EPO受体(EPO receptor,EPOR)、CD131的表达,TUNEL染色检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫组化及Western印迹检测大鼠肾脏Caspase-3表达。结果免疫荧光检测显示大鼠肾脏表达EPOR、CD131,且两者存在共定位表达;TUNEL检测显示ARA290可以抑制糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡;免疫组化及Western印迹检测显示ARA290降低糖尿病大鼠肾脏Caspase-3表达;生化检测显示ARA290可以降低糖尿病大鼠UAER、尿NAG、β_2-MG、α_1-MG、Scr,HE染色显示ARA290可以减轻肾脏病理损伤。此外,给予糖尿病大鼠ARA290和EPOR或CD131阻断肽皮下注射后,ARA290抑制糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡、降低早期肾脏病变指标及减轻肾脏病理损伤的作用减弱。结论大鼠肾脏表达EPOR和CD131,EPO衍生肽ARA290可通过EPOR、CD131介导抑制糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡,发挥肾脏保护作用。     

Nod样受体家族3抑制剂CY-09对大鼠急性胰腺炎的保护作用及机制

目的:探讨Nod样受体家族3(NLRP3)抑制剂CY-09对大鼠急性胰腺炎(AP)的保护机制。方法:60只购自河南实验动物中心的远交群大鼠随机数字表法分为对照组、模型组和治疗组,每组20只。模型组和治疗组大鼠采用2%牛磺酸胆酸钠建立AP模型,对照组不做AP模型。建模后治疗组经腹腔注射CY-09 50 mg/kg;模型组...     

氯沙坦对实验性糖尿病大鼠肾脏的炎症抑制作用

目的：观察氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏的炎症抑制作用。方法：采用链脲佐菌素（streptomtoein，STZ）65mg／kg腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。试验分正常对照组、模型组、治疗组，后一组于模型成功后1周给予氯沙坦20mg／kg灌胃，共12周。分别测定3组24h尿蛋白排泄量、血肌酐、肾重／体重、血浆C反应蛋白（CRP）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；观察肾脏病理形态学变化；应用免疫组化法检测肾组织T011样受体4（TLR4）、核因子-κB（NF-κB）的蛋白表达；RT-PCR检测肾组织TLR4的核酸表达。结果：模型组与对照组相比：模型组大鼠24h尿蛋白、血肌酐、尿素氮、肾重／体重明显升高，肾小球肥大，细胞增生，PAS阳性物质沉积增多；血CRP、TNF-α含量及肾组织TLR4、NF-κB的表达明显增加。经氯沙坦治疗后大鼠血CRP、TNF-α含量下降，肾组织TLR4、NF-κB的表达亦减弱，治疗前后比较存在差异（P〈0．05）。结论：氯沙坦对糖尿病肾病具有保护作用，其作用机制还可能是通过下调NF-κB、TLR4的表达，降低血浆CRP、TNF-α含量，抑制炎症反应而减少糖尿病肾病损伤。     

IL-17A对脂多糖致老年大鼠早期中枢炎症和场景性恐惧实验的作用

目的探讨IL-17A对脂多糖(LPS)致老年大鼠早期中枢炎症和恐惧实验的影响。方法雄性SD大鼠70只,18月龄,首先取30只大鼠随机均分为五组:腹腔注射生理盐水(生理盐水组,A组)、腹腔注射LPS 500μg/kg 6h组(B组)、12h组(C组)、24h组(D组)、48h组(E组)。检测LPS注射后各组大鼠海马IL-17A的表达。随后,将剩余40只大鼠随机均分为四组:空白对照组(O组)、IL-17A抗体组(P组)、LPS腹腔注射组(Q组)、IL-17A抗体+LPS腹腔注射组(R组)。P组和R组大鼠侧脑室给予IL-17A抗体3μl(200μg/μl),O组和Q组给予同体积生理盐水;30min后,Q组和R组大鼠腹腔注射LPS(500μg/kg),O组和P组给予同体积生理盐水,24h后各组行场景性恐惧实验,记录四组大鼠的僵直时间,检测海马TNF-α和IL-6水平及CA1区Iba1阳性细胞的表达。结果 B、C和D组大鼠海马中IL-17A的表达明显高于A组(P0.01),E与A组IL-17A的表达差异无统计学意义;Q组和R组大鼠僵直反应时间明显短于O组(P0.05或P0.01),R组大鼠僵直反应时间明显长于Q组(P0.01);Q组和R组大鼠海马TNF-α和IL-6的水平明显高于O组(P0.01),R组大鼠海马TNF-α和IL-6水平明显低于Q组(P0.01);Q组和R组大鼠海马CA1区Iba1阳性细胞数目明显多于O组,R组大鼠海马CA1区Iba1阳性细胞数目明显少于Q组(P0.05)。结论 IL-17A参与LPS引起的老年大鼠早期中枢炎症因子TNF-α和IL-6的表达、小胶质细胞的活化以及场景性恐惧实验的僵直时间改变。     

Toll样受体3在糖尿病模型大鼠脊髓中的表达

目的 研究Toll样受体3(TLR3)在糖尿病模型大鼠脊髓中的表达,探讨其与糖尿病神经病理性疼痛的关系.方法 50只SD大鼠,其中40只大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)65 mg/kg建立糖尿病大鼠模型,C组腹腔注射相同剂量的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液.1周后断尾取血测血糖,空腹血糖＞16.7 mmol/L为糖尿病模型制备成功.分别测定大鼠制模后2周(D2组)、4周(D4组)、6周(D6组)、8周(D8组)机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL).采用RT-PCR法测定大鼠L4～6脊髓TLR3表达和TNF-α水平.结果 与C组比较,D2、D4、D6、D8组大鼠MWT明显降低(P＜0.05),脊髓TLR3表达、TNF-α水平明显升高(P＜0.05);与D2组比较,D4、D6、D8组大鼠MWT明显降低(P＜0.05),TLR3表达、TNF-α水平明显升高(P＜0.05).与C组和D2组比较,D4、D6、D8组大鼠TWL明显降低(P＜0.05).结论 糖尿病大鼠脊髓TLR3表达出现上调,并可能通过促使TNF-α释放诱发神经病理性疼痛.