DNMT1与EZH2在急性髓系白血病中的表达及相关性研究

目的:探讨DNA甲基转移酶DNMT1与EZH2在急性髓系白血病(AML)中的表达及其相关性。方法:采用荧光定量PCR技术检测50例AML患者和30例正常供者骨髓细胞中DNMT1与EZH2mRNA的表达水平,分析DNMT1表达水平与临床特征和预后的关系及其与EZH2的相关性。结果:AML患者骨髓细胞中DNMT1mRNA的表达显著高于正常供者[(2.72±0.73)∶(0.89±0.27),P0.01];EZH2mRNA的表达水平也显著高于正常供者[(4.39±1.06)∶(1.87±0.33),P0.01];EZH2与DNMT1的表达水平呈显著正相关(r=0.51,P=0.002);DNMT1mRNA表达水平与外周血幼稚细胞比例≥60%、WBC≥50×109/L显著相关(均P0.05);DNMT1mRNA高表达组患者中位生存时间15个月(95%CI9~19个月),显著低于DNMT1mRNA低表达组患者的32个月(95%CI27~40个月)(P=0.006)。结论:DNMT1和EZH2在AML患者中均高表达,二者表达水平呈正相关,DNMT1与AML患者预后不良相关。     

多发性骨髓瘤患者PTEN、FAK的表达及其与临床分期、髓外浸润的关系

目的 检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓瘤细胞中PTEN及FAK mRNA及其蛋白水平变化,分析两者的关系及与MM临床分期、髓外浸润的关系,以探讨二者在MM发病中的可能作用.方法 收集55例MM患者与20个缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞,应用CD138抗体将MM细胞进行纯化.实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测PTEN、FAK mRNA表达,Western印迹法测定其蛋白表达水平.结果 ①55例MM患者PTEN和FAK mRNA表达水平分别为0.723±0.059和1.072±0.626,对照组分别为0.984±0.359和0.433±0.240,二组相比有显著差异(P ＜0.05,P＜0.01).Spearman双变量相关分析结果显示,MM患者中PTEN mRNA与FAK mRNA表达水平呈显著性负相关(r=-0.560,P＜0.01).②按DurieSalmon分期将MM患者分为两组.Ⅰ+Ⅱ期MM患者组15例,PTEN和FAK mRNA表达水平分别为0.909±0.429和0.726±0.317.Ⅲ期MM患者组40例,PTEN和FAK mRNA表达水平分别为0.653 ±0.347和1.224±0.667,二组比较有显著差异(P ＜0.05,P＜0.01).③按是否伴有髓外浸润将所有MM患者分为两组.伴髓外浸润组12例,PTEN mRNA表达水平为0.656±0.296,伴髓外浸润患者共43例,PTEN mRNA表达水平为(0.742±0.407),二组相比差异不显著(P＞0.05).伴有髓外浸润组FAK mRNA表达水平为1.791±0.618,无髓外浸润组为0.878±0.468,二组相比差异显著(P＜0.01).④选择12例Ⅲ期MM患者和6例对照患者行Western印迹检测,其中无髓外浸润MM患者6例,伴髓外浸润患者6例.12例MM患者PTEN蛋白平均表达水平为0.081±0.087,与对照组(0.332±0.119)相比差异显著(P＜0.01);T-FAK蛋白平均表达水平为0.257±0.119,与对照组(0.106±0.090)比较差异显著(0.01 ＜P＜0.05);p-FAK蛋白在6份对照骨髓中均未测出,11例患者均有不同程度的表达,平均水平为0.082±0.040.二组阳性率比较差异显著(x2=14.14,P＜0.01).⑤无髓外浸润的6例MM患者和伴髓外浸润的6例MM患者PTEN蛋白平均表达水平分别为0.093±0.091和0.069±0.089,T-FAK蛋白平均表达水平分别为0.257±0.126和0.257±0.123,p-FAK蛋白的平均表达水平分别为0.053±0.142和0.097±0.038,p-FAK蛋白平均表达水平在两组之间有显著差异(P＜0.05),PTEN和T-FAK在两组之间无明显差异(P＞0.05).结论 PTEN和FAK mRNA以及蛋白表达水平与MM疾病的发生、进展密切相关.PTEN表达减少是引起p-FAK表达增高的关键因素之一.     

组织因子微粒在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的:检测多发性骨髓瘤(MM)患者血浆中组织因子微粒(MP-TF)的表达,探讨其临床意义。方法:将76例MM患者分为静脉血栓(VTE)组7例和非VTE组69例,应用流式细胞术检测76例MM患者治疗前后和30例健康献血员(对照组)血浆中MP-TF水平。结果:①VTE组治疗前后MP-TF水平差异有统计学意义[(62.70±1.63)%∶(82.07±3.39)%,P0.01],VTE组治疗前后MP-TF水平均明显高于对照组的(37.50±16.29)%,均P0.01。②非VTE组治疗前MP-TF水平明显高于治疗后和对照组[(60.92±14.29)%∶(46.33±15.88)%∶(37.50±16.29)%,均P0.01]。③VTE组治疗后MP-TF水平明显高于非VTE组治疗后[(82.07±3.39)%∶(46.33±15.88)%,P0.01]。④MM患者组内血小板升高的患者MP-TF水平明显高于血小板正常及减少患者[(66.38±8.46)%∶(51.72±11.15)%,P0.01];D二聚体升高的患者MP-TF水平高于D二聚体正常及减少的患者[(61.46±10.70)%∶(53.68±16.83)%,P0.05];凝血酶原时间(PT)延长3s的患者MP-TF水平低于PT延长3s患者[(48.84±15.25)%∶(53.40±17.12)%,P0.05];浆细胞比例15%的患者MP-TF水平明显高于浆细胞比例15%的患者[(61.41±15.52)%∶(48.90±14.84)%,P0.01]。⑤MP-TF水平与PT水平呈负相关(r=-0.302,P0.05);MP-TF水平与浆细胞比例呈显著正相关(r=0.509,P0.01)。结论:初诊MM患者血浆MP-TF水平高表达,治疗后明显下降,但并发VTE的患者治疗后MP-TF水平有所增高。MP-TF与MM患者血栓形成有一定关系,可作为一项监测病情进展的指标。     

Visfatin在妊娠糖尿病孕妇血清及胎盘组织中的表达

目的 通过测定妊娠糖尿病(GDM)及正常妊娠妇女血清visfatin、胎盘组织visfatin及过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ的表达,探讨visfatin、PPARγ在GDM中的作用及相互关系.方法 选取2011年10月至2012年10月在河北省人民医院妇产科行择期剖宫产终止妊娠的患者57例,其中GDM组30例、正常妊娠组27名.酶联免疫吸附法测定血清visfatin水平,实时荧光定量反转录PCR测定胎盘组织visfatin及PPARγ mRNA表达水平,免疫蛋白印迹法检测胎盘组织visfatin及PPARγ蛋白的表达水平.结果 GDM组产前血清visfatin水平明显低于正常妊娠组[(6.72±3.79)ng/ml vs.(8.87±4.08) ng/ml,t=-2.06,P=0.04];胎盘组织visfatin mRNA及蛋白表达水平在两组间无明显差异(P＞0.05);GDM组PPARγ mRNA及蛋白表达水平低于正常妊娠组[(0.26±0.11)vs.(0.60±0.41),t=-2.77,P＜0.05;(0.34 ±0.09)vs.(0.73±0.13),t=-7.03,P＜0.05],在GDM组,胎盘组织visfatin mRNA表达与PPARγ mRNA表达水平呈正相关(r=0.67,P=0.02).结论 Visfatin在GDM的发病中起一定作用,并与胎盘组织中PPARγ mRNA表达相关.     

心肌营养素-1对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的:研究心肌营养素-1(CT-1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响。方法:利用AngⅡ刺激心肌细胞,导致细胞肥大,应用CT-1反义脱氧寡核苷酸进行干预。检测心肌细胞大小及3H-亮氨酸掺入率的变化;以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CT-1 mRNA及β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达,免疫组织化学法检测心肌细胞CT-1蛋白的表达。结果:经AngⅡ刺激后,在相差显微镜下可见心肌细胞面积变大,3H-亮氨酸掺入率、CT-1蛋白的表达增高;CT-1和β-MHC mRNA水平的表达增加。利用Fugene6可将CT-1反义脱氧寡核苷酸转染入心肌细胞。CT-1反义脱氧寡核苷酸组心肌细胞面积较肥大组明显减小[(81.257±3.995)mm2∶(127.214±5.693)mm2],3H-亮氨酸掺入量[(1653.33±17.91)cpm∶(1971.50±42.16)cpm]及CT-1蛋白[(3.16±0.17)%∶(3.51±0.29)%]明显减少;CT-1[(0.2137±0.0227)∶(0.4023±0.0160)]和β-MHC mRNA[(0.5032±0.0261)∶(0.773 4±0.0486)]表达亦显著减少(P0.05~0.01)。各指标Fugene 6组、错义组与肥大组无明显差异。结论:AngⅡ致心肌细胞肥大过程中伴有CT-1表达增加,应用CT-1反义脱氧寡核苷酸后可使之下降,说明CT-1参与了心肌细胞的肥大机制。     

NK细胞及调节性T细胞在多发性骨髓瘤中的表达水平及其意义

目的:初步探讨多发性骨髓瘤(MM)中NK细胞、Treg细胞表达水平与疾病进展及预后的关系。方法:收集48例初诊MM患者治疗前及3～4个疗程治疗后外周血标本,采用流式细胞仪测定CD16~+CD56~+NK细胞、CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-) Treg细胞百分比,并收集初诊MM患者年龄,性别,血红蛋白(Hb),白细胞计数(WBC),血小板计数(PLT),β_2-微球蛋白(β_2-MG),血清白蛋白(Alb),血肌酐(Cr),血钙(Ca~(2+)),乳酸脱氢酶(LDH),骨髓浆细胞比例、免疫球蛋白、M蛋白、染色体荧光原位杂交(FISH)检测等临床资料。结果:治疗有效组CD16~+CD56~+NK细胞百分比治疗后[(21.38±8.76)%]较治疗前[(16.00±7.11)%]升高,CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-) Treg细胞治疗后[(1.90±0.92)%]较治疗前[(2.29±0.99)%]降低,差异有统计学意义(P0.05),而治疗无效组MM患者治疗前后NK细胞百分比[(15.63±3.50)%∶(18.13±5.30)%]及Treg细胞百分比[(2.93±1.43)%∶(2.81±0.94)%]无明显变化(均P0.05);不同ISS分期的MM患者外周血NK细胞百分比Ⅲ期低于Ⅰ期、Ⅱ期,Treg细胞百分比Ⅲ期Ⅱ期Ⅰ期,差异有统计学意义(P0.05);与临床指标的相关性分析研究发现,NK细胞百分比与β_2-MG、LDH呈负相关,Treg细胞百分比与患者年龄、β_2-MG呈正相关,与Hb水平呈负相关(均P0.05);核型有异常组CD16~+CD56~+NK细胞百分比显著低于核型无异常组[(14.81±7.22)%∶(20.27±4.98)%],差异有统计学意义(P0.05);核型有异常组较核型无异常组CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-) Treg细胞百分比稍升高[(2.45±1.16)%∶(2.33±1.04)%],差异无统计学意义(P0.05)。结论:外周血CD16~+CD56~+NK细胞、CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-) Treg细胞可作为判断MM疾病进展及预后的重要指标。     

燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中PURA基因及其蛋白的表达

目的 探讨PURA基因及其蛋白在燃煤污染型氟中毒大鼠肾组织中的表达情况.方法 SD大鼠36只,体质量80-100 g.将大鼠按体质量随机分对照组、加氟组、高氟组,每组12只,雌雄各半.对照组、加氟组和高氟组大鼠分别饲以含氟量为1.5、25.0、60.0 ms/ks的饲料.4个月后,采用RT-PCR技术及免疫组化技术检测大鼠肾组织PURA基因及其蛋白表达水平.结果 加氟组和高氟组大鼠肾组织PIJRA mRNA[(2.74±1.06)、(4.29±2.11)]及蛋白表达[(28 827.91±4801.94)、(61 146.96±4997.55)]均高于对照组[(1.13±0.87)、(7131.95±1524.54),P均<0.05)],高氟组大鼠肾组织PURA mRNA及蛋白表达高于低氟组(P均<0.05).结论 高氟可以导致大鼠肾组织PURA mRNA及蛋白表达水平增强.     

二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠肾组织色素上皮衍生因子表达影响的研究

目的观察二甲双胍(MET)对T2DM模型大鼠肾组织色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响,探讨MET对DKD的保护机制。方法高脂饲料喂养结合腹腔注射小剂量STZ建立T2DM大鼠模型并随机分为糖尿病模型(T2DM)组、MET组[MET,300 mg/(kg·d)]和格列本脲(GLY)组[GLY,5 mg/(kg·d)],并设正常对照组(NC)。检测各组FPG、HbA_1c,UAlb、尿肌酐(Ucr)、尿PEDF水平和肾小球基底膜厚度(GBMT);免疫组织化学法检测肾组织PEDF蛋白表达,Western blot法检测肾组织PEDF蛋白水平;荧光定量PCR检测肾组织PEDF mRNA表达。结果与NC组比较,T2DM组PEDF的mRNA、蛋白相对表达量降低[(7.11±0.30)vs(0.33±0.03)、(1.07±0.01)vs(0.40±0.01),P0.05],FPG、HbA_1c、UACR、PEDF/Ucr(UPCR)和GBMT升高(P0.05)。与T2DM组比较,MET组PEDF的mRNA、蛋白相对表达量升高[(0.33±0.03)vs(3.10±0.67)、(0.40±0.01)vs(0.80±0.04),P0.05],UACR、UPCR和GBMT降低(P0.05);与GLY组比较,MET组PEDF的mRNA和蛋白相对表达量升高[(1.76±0.67)vs(3.10±0.67)、(0.61±0.15)vs(0.80±0.04),P0.05],UACR、UPCR、GBMT降低(P0.05)。结论 MET可增加T2DM大鼠肾组织PEDF表达,降低尿蛋白排泄,改善肾脏病理结构,其机制可能与肾脏保护作用有关。     

自发性高血压大鼠淋巴细胞KCa3.1及其炎性因子的表达研究

目的:研究自发性高血压大鼠(SHR)外周血淋巴细胞钙激活钾通道(KCa)3.1和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的变化及其意义。方法:取SHR和正常Wistar大鼠作为实验动物,使用密度离心法分离SHR外周血淋巴细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SHR外周血淋巴细胞KCa3.1和TNF-αmRNA及蛋白表达水平。结果:①SHR组KCa3.1mRNA[(1.302 5±0.211 7)∶(0.447 5±0.201 2),P<0.05]及TNF-αmRNA[(1.425 7±0.131 7)∶(0.383 6±0.162 6),P<0.05)]表达水平均高于对照组;②SHR组KCa3.1[(1.33±0.02)∶(0.50±0.01),P<0.05]、TNF-α[(1.02±0.04)∶(0.41±0.03),P<0.05]蛋白表达水平均高于对照组。结论:SHR淋巴细胞KCa3.1和TNF-α表达增多,提示KCa通道可能通过激活淋巴细胞释放炎性递质参与高血压的发生发展。     

过表达NR2E1对棕榈酸诱导的NIT1细胞凋亡及内质网应激的影响

目的研究孤儿核受体NR2E1对棕榈酸(PA)诱导的胰岛β细胞凋亡及内质网应激的影响。方法建立过表达NR2E1小鼠胰岛细胞系NIT1细胞株,予500μmol/L PA处理24 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA表达变化,Western blot检测磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)的水平。结果过表达NR2E1能减少PA诱导的NIT1细胞凋亡率[(27.5±0.4)%vs(11.9±0.4)%]和CHOP mRNA表达[(10.54±1.98)vs(3.03±0.49)],增加GRP78 mRNA表达[(3.28±0.20)vs(5.28±0.49)]和eIF2α磷酸化水平[(1.26±0.13)vs(1.67±0.06)](P0.05)。结论过表达NR2E1能减轻PA诱导的胰岛β细胞凋亡,其机制可能与调节内质网应激有关。     

Homer在2型糖尿病大鼠海马中的表达及意义的研究

目的评价Homer蛋白在T2DM大鼠海马中的表达及意义,并分析其与T2DM大鼠认知障碍间的关系。方法糖尿病大鼠模型组(T2DM组)、对照(Con)组大鼠各13只。取T2DM组及Con组各8只大鼠的海马组织,采用RT-qPCR法检测大鼠海马组织中Homer1c、Homer2、Homer3mRNA的表达。取两组另外各5只大鼠海马组织,Western blot法检测上述基因蛋白表达是否存在差异。结果T2DM组海马组织Homerlc[(29.99±5.11)vs(19.91±4.08)]、Homer2[(26.62±4.14)vs(15.79±2.58)]和Homer3[(35.08±3.27)vs(16.16±2.49)]的mRNA水平高于Con组(P0.05或P0.01);T2DM组海马组织Homerlc[(8.4±0.9)vs(3.2±0.5)]、Homer2[(6.8±0.6)vs(1.5±0.3)]和Homer3[(2.4±0.3)vs(0.9±0.2)]蛋白水平高于Con组(P0.05)。结论Homerlc、Homer2和Homer3可能参与T2DM认知障碍,为糖尿病脑病提供新的实验依据和潜在的治疗靶点。     

碘对体外培养哺乳期乳腺细胞钠碘转运体表达的作用及肿瘤坏死因子α对其的影响

目的 观察不同碘营养水平时体外培养哺乳期乳腺细胞钠碘转运体(NIS)表达水平,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对其的影响作用.方法 体外培养小鼠原代哺乳期乳腺细胞,分为低碘1组、低碘2组、适碘组、高碘1组、高碘2组,分别加入含碘0、5、50、3000、10 000μg/L的DEME/F12培养液培养24 h,然后部分换成含对应剂量的碘加TNF-α(10-2 mg/L)的DEME/F12培养液,继续培养24 h.用实时荧光定量PCR方法检测哺乳期乳腺细胞NIS mRNA表达水平,并用In-Cell Western方法检测NIS蛋白表达水平.结果 单纯加碘时低碘1组[(64.66±14.99)×10-4]乳腺细胞NIS mRNA表达水平高于适碘组[(22.76±7.36)×10-4,P＜0.05],高碘1组[(10.18±3.53)×10-4]、高碘2组[(8.59±2.89)×10-4]低于适碘组(P均＜0.05);随着碘剂量升高,乳腺细胞NIS mRNA表达水平呈下降趋势.在碘加TNF-α时,低碘1组、低碘2组、适碘组[(2.72±0.45)、(2.69±0.68)、(1.80±0.67)×10-4]乳腺细胞NIS mRNA表达水平低于单纯加碘时对应各组[(64.66±14.99)、(29.82±4.47)、(22.76±7.36)×10-4,P均＜0.05];高碘1组[(6.58±2.87)×10-4]、高碘2组[(7.04±.1.36)×10-4]高于适碘组(P均＜0.05);随着碘缺乏和碘过量程度加重,乳腺细胞NIS mRNA表达水平呈上升趋势.随着碘剂量升高,单纯加碘时乳腺细胞NIS蛋白表达水平呈下降趋势.碘加TNF-α时各组乳腺细胞NIS蛋白表达水平与单纯加碘时对应各组比较有降低的趋势.碘加TNF-α时,随着碘缺乏和碘过量程度加重,乳腺细胞NIS蛋白表达水平均呈上升趋势.结论 随着碘剂量升高,哺乳期乳腺细胞NIS mRNA和蛋白表达水平均呈下降趋势.TNF-α对不同碘营养水平下哺乳期乳腺细胞NIS mRNA和蛋白表达具有抑制作用.     

p53基因在亚砷酸钠致人胚胎肺成纤维细胞凋亡中的作用

目的 探讨p53、Bax、bcl-2基因在亚砷酸钠(NaAs02)致人胚胎肺成纤维细胞(HELF)凋亡中的作用.方法 分别取转染了p53质粒HELF细胞(p53组)、转染了PC质粒的HELF细胞(PC组)、常规培养的HELF细胞(正常组),在6孔板中培养48 h后,分别加入0、3、9、15 mmoL/L NaAsO2溶液,培养24 h后,用real-time PCR法检测p53、Bax、bcl-2 mRNA基因表达水平,采用免疫组织化学SABC法检测p53、Bax、bcl-2基因蛋白表达水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 p53组细胞p53基因mRNA表达水平(0.51±0.29)低于PC组及正常组[(1.32±0.26),(1.00±0.20),P均<0.05],p53组p53基因蛋白表达水平[(4.10±1.20)%]低于PC组和正常组[(8.00±1.63)%、(7.90±1.79)%,P均<0.05];p53组、PC组、正常组在染砷0、3、9、15 mmol/L时,细胞凋亡率[(0.57±0.28)%、(22.91±4.86)%、(40.05±3.93)%、(44.87±3.58)%,(0.65±0.24)%、(14.09±3.49)%、(20.31±3.66)%、(32.42±3.63)%,(0.56±0.25)%、(12.14±3.70)%、(19.61±3.63)%、(30.43±2.83)%]、Bax mRNA表达水平[(12.73±3.96)、(25.12±6.42)、(104.96±26.77)、(154.04±3052),(14.63±3.57)、(36.75±3.67)、(272.26±66.11)、(846.12±243.36),(14.75±5.65)、(37.22±11.27)、(278.51±37.42)、(861.67±369.29)]、Bax蛋白表达水平[(15.07±0.83)%、(23.79±3.99)%、(3851±158)%、(53.86±124)%,(15.43±1.45)%、(36.11±1.37)%、(56.86±1.97)%、(76.09±2.01)%,(15.20±1.03)%、(35.25±1.09)%、(55.56±2.17)%、(74.48±2.85)%]均随着染毒剂量的增加而增高(P均<0.05),而bcl-2 mRNA表达水平[(443.00±244.47)、(156.79±53.18)、(62.13±13.66)、(23.10±6.44),(420.55±110.77)、(48.15±10.02)、(14.91±6.53)、(7.54±2.62),(577.75±123.22)、(49.68±10.11)、(12.41±1.28)、(7.22±1.89)]、bcl-2蛋白表达水平[(47.20±3.77)%、(41.80±2.94)%、(36.00±2.36)%、(29.00±2.91)%,(45.90±4.15)%、(35.70±2.77)%、(29.80±2.78)%、(24.80±2.66)%,(46.70±3.47)%、(36.20±2.90)%、(30.10±3.21)%、(25.10±2.28)%]均随着染毒剂量的增加而降低(P均<0.05);在染砷3、9、15 mmol/L时,p53组的细胞凋亡率、bcl-2 mRNA表达水平、bcl-2蛋白表达水平均高于同一染砷剂量的正常组和PC组(P均<0.05),而Bax mRNA表达水平、Bax基因蛋白表达水平均低于同一染砷剂量的正常组和PC组(P均<0.05).结论 p53基因减少了NaAsO2致HELF的凋亡,可能是通过改变部分凋亡途径实现.     

多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞CUL4A表达及意义

目的检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞中CUL4A mRNA表达,探讨其临床意义。方法采用实时荧光PCR相对定量法检测38例MM患者(MM组)和20例非血液肿瘤患者(对照组)骨髓单个核细胞CUL4A mRNA的表达情况。结果 MM组骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量较对照组增加(P<0.05)。MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量与临床分期、血清β2-MG水平相关(P均<0.05),与性别、年龄、免疫学分型不相关(P均>0.05)。治疗有效的MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达水平低于治疗无效患者(P=0.003)。结论 MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA表达上调可能是促进MM发展的因素之一,检测CUL4A可以为MM的诊断及治疗提供参考。     

miR-363靶向调控E2F3表达影响HepG2细胞增殖和凋亡研究

目的探讨微小RNA-363(miR-363)靶向调控E2F转录因子3(E2F3)的表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养HepG2细胞,采用Lipofectamine法将miR-363抑制剂或其阴性对照转染到HepG2细胞,继续培养48 h,收获细胞,采用四噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率,使用流式细胞术法检测细胞凋亡率,采用实时荧光RT-PCR法检测HepG2细胞miR-363 mRNA水平,采用Western Blot法检测HepG2细胞E2F3、BAX和Caspase-3蛋白表达水平。结果对照组HepG2细胞增殖率为(96.4±9.7)%,显著高于抑制剂处理组[(72.3±6.5)%,P0.05],凋亡率为(8.2±1.4)%,显著低于抑制剂处理组[(9.7±0.8)%,P0.05];对照组HepG2细胞miR-363 mRNA相对水平为(1.0±0.1),显著高于抑制剂处理组[(0.6±0.2),P0.05],E2F3蛋白表达量为(1.0±0.1),显著高于抑制剂处理组[(0.6±0.1),P 0.05],而对照组HepG2细胞Bax和Caspase-3蛋白表达量分别为(0.4±0.0)和(0.5±0.1),均显著低于抑制剂处理组[(0.6±0.1)和(0.7±0.0),P均0.05]。结论 miR-363可靶向调控E2F3的表达,抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡。本研究结果为肝癌靶向治疗提供了一定的理论依据。     

白细胞免疫球蛋白活化受体3与炎症性肠病的关系研究

[目的]探讨中国汉族人群中白细胞免疫球蛋白活化受体A3(LILRA3)基因多态性与炎症性肠病(IBD)发病的关系。[方法]收集378例确诊IBD患者[溃疡性结肠炎(UC)组193例,克罗恩病(CD)组185例]和509例健康者(正常对照组),通过连接酶检测反应-聚合酶链反应(LDR-PCR)技术分析LILRA3基因第1内含子第161位碱基(G→C突变)多态性。对所有入选者使用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测外周血、肠黏膜中LILRA3mRNA表达情况,使用Western blotting方法检测肠黏膜中LILRA3蛋白表达。[结果]所有纳入样本中均未发现LILRA3基因第1内含子第161位的纯合子突变(CC)。CD组患者该位点突变基因型频率与等位基因频率均明显低于正常对照组,差异具有统计学意义(P值分别为0.017,0.021),且突变基因型GC及突变等位基因C是CD发病的保护因素(OR=0.489,95%CI:0.269~0.890;OR=0.509,95%CI:0.284~0.914)。基因型与临床表型相关性分析提示:突变基因型GC与CD17-40岁发病及CD炎症型疾病行为相关(P值分别为0.039,0.049),且均是保护性因素(OR=0.490,95%CI:0.245~0.977;OR=0.473,95%CI:0.221~0.953)。UC组与正常对照组相比该位点基因型频率与等位基因频率分布无差异(P0.05)。qRT-PCR结果提示:1 CD组、UC组患者外周血LILRA3mRNA表达量均明显高于正常对照组[(14.25±2.29)、(15.71±2.74)∶(7.54±1.26)],差异具有统计学意义(P值分别为0.035,0.025);2突变个体(GC)LILRA3表达量明显高于野生型个体(GG)[(27.58±3.70)∶(10±1.39)],差异具有统计学意义(P0.001);3 CD、UC组患者肠黏膜LILRA3mRNA表达量也明显高于正常对照组[(14.31±0.88)、(13.87±0.98)∶(2.29±2.88)],差异具有统计学意义(P0.001)。与对照组相比,CD组、UC组肠黏膜LILRA3蛋白表达量均明显升高[(0.55±0.82)、(0.59±0.13)∶(0.27±0.09)],差异具有统计学意义(P0.001)。[结论]LILRA3基因第1内含子第161位基因多态性与IBD发病相关,且突变影响其mRNA表达。IBD患者外周血及肠黏膜中LILRA3表达量均较正常对照者增高,提示LILRA3可能是IBD的一个新的致病基因。     

不同糖耐量人群血浆25-羟维生素D与葡萄糖转运子4及胆固醇调节元件结合蛋白1C表达关系的研究

目的探讨不同糖耐量人群血浆25-羟维生素D[25(OH)D]与葡萄糖转运子4(GluT-4)及胆固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP-1C)表达的关系。方法随机分为T2DM组、IGR组及正常对照(NGT)组。检测血糖、血脂、HbA1 c等,电化学发光法测定25(OH)D和FIns。Western blot检测GluT-4及SREBP-1C蛋白的表达,RT-PCR检测GluT-4和SREBP-1C mRNA的表达。结果T2DM组、IGR组25(OH)D低于NGT组[(8.77±4.52)vs(18.35±5.90)vs(30.67±5.47)ng/ml,P0.05],T2DM组低于IGR组(P0.05)。T2DM组、IGR组血浆GluT-4 mRNA及蛋白表达低于NGT组[(0.235±0.412)vs(3.386±0.698)vs(6.325±0.959),(1.235±0.092)vs(2.430±0.153)vs(4.843±0.299),P0.05],T2DM组较IGR组降低(P0.05)。T2DM组、IGR组血浆中SREBP-1C mRNA及蛋白表达水平高于NGT组[(7.570±1.233)vs(5.561±0.820)vs(2.880±0.483),(8.340±1.092)vs(5.279±0.798)vs(2.340±0.135),P0.05],T2DM组较IGR组升高(P0.05)。Pearson相关性分析显示,25(OH)D与血浆中GluT-4 mRNA、蛋白表达呈正相关(P0.05),与HbA_1 c、HOMA-IR、FIns、FPG、2 hPG、TG及SREBP-1C mRNA、SREBP-1C蛋白表达呈负相关(P0.05)。血浆中GluT-4表达与SREBP-1C表达呈负相关(P0.05)。结论血浆25(OH)D降低可引发糖耐量异常,甚至导致糖尿病,其机制可能与血浆中GluT-4表达降低及SREBP-1C表达升高有关。     

Bcl-2与乳腺癌耐药蛋白基因在老年急性髓系白血病中表达的意义

目的 探讨Bcl-2和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因在老年急性髓系白血病(AML)中的表达及其相关性.方法 RT-PCR法检测20例老年AML患者及20例老年非恶性血液病对照组的骨髓白细胞BCRP mRNA,同时流式细胞仪(FCM)检测其骨髓单个核细胞(BMMNC) Bcl-2蛋白表达.结果 AML组Bcl-2总阳性率较对照组显著增高,其中初治组阳性率与对照组无显著差异,而难治与复发组阳性率明显高于初治组和对照组(P＜0.05);BCRP总阳性率明显高于对照组,其中初治组和难治与复发组阳性率均较对照组明显增高(P＜0.05),而初治组和难治与复发组间无显著差异(P＞0.05).Bcl-2+组和BCRP+组完全缓解(CR)率明显低于Bcl-2-组和BCRP-组,早期复发率明显高于Bcl-2-组和BCRP-组(均P＜0.05).Bcl-2和BCRP基因在初治组和难治/复发组表达不相关(P＞0.05).结论 Bcl-2和BCRP基因均与临床耐药密切相关,二者高表达均提示预后不良,但二者无相关性,联合检测Bcl-2和BCRP基因对评价AML预后有较大意义.     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

胰岛素治疗对糖尿病大鼠肾脏自噬水平及纤维化影响的观察

目的观察胰岛素治疗对糖尿病大鼠肾脏纤维化的影响。方法将24只健康清洁级雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC,n=8)、糖尿病模型组(DM,n=8)和胰岛素治疗组(DMA,n=8)。HE、Masson染色,qRT-PCR和Western blot分别检测肾组织中自噬及纤维化相关指标的变化。结果HE、Masson染色结果显示,DM组肾小管上皮细胞空泡变形甚至萎缩脱落,肾小管基底膜增厚,炎症细胞浸润;肾小管及肾间质大量蓝色胶原纤维沉积。qRT-PCR结果显示,与DM组比较,DMA组肾组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)[(1.06±0.42)vs(0.22±0.02)]和胶原I(Col I)mRNA[(18.03±8.42)vs(6.36±1.89)]表达下降(P0.05),自噬相关蛋白Beclin1mRNA[(0.74±0.26)vs(1.35±0.61)]表达上调(P0.05)。Western blot结果显示,与DM组比较,DMA组肾组织中α-SMA[(0.06±0.02)vs(0.02±0.01)],Col I[(0.74±0.18)vs(0.22±0.12)]以及泛素结合蛋白(p62)[(0.7±0.1)vs(0.3±0.11)]表达减少(P0.05),Beclin1[(0.02±0.01)vs(0.05±0.01)]和自噬标记蛋白(LC3)[(0.02±0.01)vs(0.06±0.04)]表达增加(P0.05)。结论自噬相关蛋白可能有参与胰岛素对糖尿病肾脏疾病治疗的作用机制。