湖北钉螺基因组5种抽提方法的比较

目的 5种方法提取湖北钉螺基因组DNA,PCR扩增线粒体基因组的COⅡ基因以比较其扩增效果,从而选择适合湖北钉螺大样本基因组抽提的最佳方法。方法将50只钉螺分为5组,每组10只,分别用OMEGA基因组DNA抽提试剂盒、天根海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒、简化基因组抽提方法、CTAB法和饱和酚抽提法抽提单只湖北钉螺基因组DNA,从消化、抽提时间、抽提浓度、成本等方面评价各种方法的优劣;PCR扩增线粒体基因组COⅡ基因,测定目的条带相对浓度以衡量扩增效果。结果 5种方法均能提取基因组DNA,消化时间最短的为饱和酚法,其余均为3 h;抽提时间最短的为两种试剂盒和CTAB,最长的为简化法;抽提成本最高的为OMEGA试剂盒法,最低的为CTAB法。5种方法PCR均扩增出COⅡ基因,但目的条带浓度有一定差异,其中OMEGA公司和天根公司试剂盒及实验室简化法提纯的模板PCR扩增浓度较高。结论用OMEGA公司生产的基因组DNA抽提试剂盒抽提湖北钉螺基因组DNA效果好,但成本较高,适用于对小样本的抽提;简化法从提纯效果、成本等方面评价,较适用于大样本抽提。     

湖北钉螺线粒体基因组全序列测定研究

目的 测定并分析湖北钉螺（Oncomelania hupensis）线粒体基因组全序列。 方法 利用特异引物和通用引物分别扩增湖北钉螺线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ（COⅠ）、细胞色素b（Cytb）、16SrRNA（16S）和细胞色素C氧化酶Ⅲ（COⅢ）基因片段,在此基础上利用长PCR技术扩增上述4个基因间的长片段,纯化克隆后采用引物步移法测序。 结果 湖北钉螺线粒体基因组全序列为15 182 bp（GenBank登记号为FJ997214）,为闭合环状分子,A+T含量为67.3％;包括13个蛋白基因、22个tRNA基因、2个RNA基因和一段72 bp的A+T富集区;蛋白质编码基因均以ATG为启动子,除呼吸链NADH脱氢酶的第一亚单位（ND1）基因以潜在的T作为终止密码子外,其余基因均以典型的TAA或TAG为终止子;基因重叠区有2处,分别为4 bp和7 bp;基因间隔区共21处合计145 bp,长度范围为1～30 bp;22个tRNA中,除2个tRNASer和tRNAGln、tRNAIle以外均能形成典型的二级结构。 结论 获得了湖北钉螺的线粒体基因组全序列。     

广州管圆线虫线粒体基因组比较分析

目的 目的 比较我国大陆地区广州管圆线虫线粒体基因组的多态性。 方法 方法 在种群遗传学研究基础上, 选取7条雌虫进行线粒体基因组的测定。根据广州管圆线虫线粒体基因组已知序列 （GQ398121） 设计12对引物, 进行PCR扩增, 并对目的片段进行测序和拼接。利用多种生物学软件对测定的线粒体基因组进行基因定位、 结构图绘制、 核苷酸及变异位点分析、 进化关系分析。结果 结果 获得5个不同遗传类型的线粒体基因组。这些基因组的大小相似、 结构相同, 即 13 491～13 502对碱基, 含12个蛋白编码基因, 2个核糖体基因, 22个tRNA基因, 2个较大的非编码区。上述基因紧密地排列在同一条DNA链上, 并具有相同的转录方向。通过对这些基因组的比对发现, 变异位点745个, 占整个基因组的5.5%。其中, 缺失/插入突变59个, 碱基颠换105个, 碱基转换581个。这些突变位点均匀地分布在整个线粒体基因组中。结论 结论本研究提供了丰富的广州管圆线虫线粒体基因的突变位点, 为构建种内鉴别诊断技术提供了基础。     

四种全血基因组DNA提取方法的比较

为比较酚 氯仿抽提法、经典Miller盐析法、改进的Miller盐析法及胍盐酸法提取人全血基因组DNA的方法 ,分别测定所获DNA的效率和纯度。结果发现四种方法提取的DNA纯度分别为 1.6 2± 0 .2 6、1.5 8± 0 .2 8、1.6 1± 0 .2 8、1.5 6± 0 .2 7,各组间差异无显著性 ;5mL全血所提DNA总量分别为 6 4 .0± 33.0 μg、30 .3± 2 6 .9μg、11.1± 9.2μg和 6 5 .2± 2 4 .0 μg。酚 氯仿法和胍盐酸法提取的DNA总量明显高于其他两种方法。四种方法提取DNA的纯度相似 ,酚 氯仿法和胍盐酸法的提取效率高 ,胍盐酸法和盐析法的操作较简单、安全。胍盐酸法相对简单快速、安全、效率高 ,为四种全血基因组DNA提取方法中之首选     

大鼠新鲜骨组织基因组DNA提取方法的建立

目的建立大鼠新鲜骨组织基因组DNA的提取方法。方法取大鼠肋骨，研磨成粉末，脱钙，水洗．蛋白酶K消化，有机溶剂抽提，离心沉淀干燥．-20℃冰箱中保存。结果提取的骨组织基因组DNA纯度较高，数量大，性质稳定。结论本提取方法，简便易行，获得的基因组DNA量大，纯度高，值得推广。     

中国大陆不同地域隔离群湖北钉螺基因组DNA的限制酶切长度差异

为证实中国大陆湖北钉螺不同地理株的存在,制备了各地钉螺的基因组DNA,经限制性内切酶Bam HI和Pst I酶解后,置0.8%琼脂糖凝胶电泳,比较分析不同地域隔离群钉螺基因组DNA重复序列DNA的限制酶切长度差异.安徽、四川、云南、湖南、湖北、江苏、上海、福建、江西等9地隔离群钉螺的DNA酶切带型.主带基本一致;次带差异明显.以四川普格、云南巍山、江苏东台之间差异较大.湖北省的汉川、洪湖、荆州、石首、咸宁的钉螺酶切图谱基本一致.提示不同隔离群钉螺存在一定的同源和亲缘关系.在基因水平上的差异程度与隔离群之间距离和自然环境关系密切.在一定区域内的钉螺DNA相对稳定.     

几种不同方法制备恶性疟原虫基因组DNA的比较

目的　比较３ 种不同的基因组 Ｄ Ｎ Ａ 提取方法制备恶性疟原虫基因组 Ｄ Ｎ Ａ 的效果。方法　分别采用酚－ 氯仿－ 异戊醇抽提法、 Ｗｉｚａｒｄ 基因组 Ｄ Ｎ Ａ 纯化试剂盒和磷酸钠盐溶液, 分离提取恶性疟原虫基因组 Ｄ Ｎ Ａ, 通过 Ｄ Ｎ Ａ 含量测定和 Ｐ Ｃ Ｒ 鉴定, 比较它们的提取效果。结果　前两种方法制备恶性疟原虫基因组 Ｄ Ｎ Ａ 的效果相仿, 纯度较高; 第三种方法最为简便, 所得的 Ｄ Ｎ Ａ 含量明显高于前两种方法, 但其纯度较低, 蛋白质含量最高。结论　３ 种方法各有优缺点, 第３ 种方法简便、快捷、经济, 更有实用价值。     

钉螺肝脏线粒体的氧化磷酸化作用

应用氧电极技术及比色法测得钉螺肝脏线粒体具有氧化磷酸化作用;二磷酸腺苷(ADP)可使线粒体氧化反应从0.187增至0.318μmol O_2/mg蛋白·20min。有氧代谢三核酸循环的中间物可增加钉螺肝脏线粒体氧化反应0.353—0.444μmol O_2/mg蛋白·20min。线粒体氧化反应同时偶联磷酸化反应。钉螺肝脏具有三磷酸腺苷酶(ATPase)活力。二硝基苯酚及溴乙酰胺可明显抑制钉螺线粒体氧化磷酸化作用,氧化反应分别从0.431降至0.245及0.282μmol O_2/mg蛋白·20min。溴乙酰胺并不抑制ATPase活力。     

3种方法提取湖北钉螺RNA的比较

目的比较改良SDS法、TRIzol法和CTAB法对湖北钉螺RNA的提取效果,以期获得一种经济、高效,适于湖北钉螺大样本RNA的制备方法。方法采用改良SDS法、TRIzol法和CTAB法分别提取湖北钉螺RNA,利用核酸蛋白分析仪测定RNA浓度和纯度,通过浓度计算产率,纯度以A260/A280、A260/A230表示;以1%琼脂糖凝胶电泳进一步检验RNA完整性;以β-acting为目的基因进行RT-PCR,验证提取的RNA能否满足RT-PCR的实验要求。结果经方差分析,3种方法的产率差异具有统计学意义(F=16 895.85,P0.01);经LSD检验,改良SDS法产率较高,其次为TRIzol法,CTAB法产率较低。CTAB法提取的RNA纯度较高,A260/A280、A260/A230分别在1.8~2.0和2.0~2.2之间,其余两种方法的A260/A230均低于2.0。改良SDS法提取的RNA完整性较好,电泳结果显示28S、18S和5S条带完整清晰,条带之间无明显弥散现象;而TRIzol法未见28S条带,CTAB法仅见18S条带。3种方法提取的RNA经RT-PCR均能扩增出阳性条带。相比另外两种方法,改良SDS法成本低、耗时少。结论改良SDS法是一种经济、高效,适于湖北钉螺大样本RNA的制备方法。     

增龄大鼠心肌线粒体DNA损伤及DNA修复酶γ表达的变化

目的:探讨大鼠增龄过程中心肌组织DNA损伤和DNA修复酶表达的变化。方法:从不同月龄的大鼠心肌组织中提取DNA、RNA及蛋白。采用定量多聚酶链反应(Q-PCR)检测心肌DNA损伤;用RT-PCR和Western blot检测DNA修复酶γ(Polγ)表达的变化。用ELISA法检测DNA内8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的水平。结果:随着鼠龄的增长,大鼠心肌组织中核DNA(nDNA)损伤不明显,线粒体DNA(mtDNA)损伤严重,DNA内8-OHdG的水平增加,Polγ的表达下降。结论:随着鼠龄的增长,大鼠心肌组织中DNA修复酶Polγ的表达下降,mtDNA损伤增加。DNA损伤与DNA修复能力下降间会引起恶性循环,最终可导致DNA损伤的增加加快心脏衰老。     

氯硝柳胺乙醇胺盐粉粒剂杀钉螺效果

目的 目的 评价氯硝柳胺乙醇胺盐粉粒剂杀钉螺效果。方法 方法 分别在实验室和滩涂湿地采用撒 （喷） 施法进行4% 氯硝柳胺乙醇胺盐粉粒剂杀钉螺试验, 同时以4%氯硝柳胺乙醇盐粉剂作对照, 用单盲法进行质量控制。实验室试验比 较两种杀螺剂对钉螺的校正死亡率和半数致死浓度 （LC50 ）; 洲滩湿地现场试验比较钉螺校正死亡率和活螺密度下降 率。结果 结果 实验室施药后1 d粉粒剂4.0 g/m2 钉螺死亡率为96.67%, 粉剂2.0 g/m2 钉螺死亡率即达100%, 各剂量组钉螺死 亡率粉剂显著高于粉粒剂 （t1 d = 3.60, P < 0.01）; 施药后1、 3、 7 d对钉螺的LC50值亦显示粉剂优于粉粒剂。现场试验施药 后3、 7、 15、 30 d粉粒剂组钉螺校正死亡率分别为91.71%、 92.91%、 90.57%和85.33%, 粉剂组分别为71.09%、 90.11%、 90.13%和85.26%, 经统计现场施药后3、 7 d 粉粒剂杀螺效果优于粉剂 （c2 3 d = 731.57, c2 7 d = 25.90, P均< 0.01）; 施药后15、 30 d则无显著差异 （c2 15 d = 0.53, c2 30 d = 0.01, P均> 0.05）。结论 结论 4%氯硝柳胺乙醇胺盐粉粒剂既具有粉剂的吸附性, 又具 有颗粒剂的穿透性, 现场机械喷施杀螺效果与粉剂相当, 但药粉漂移仍未有效控制, 尚需进一步研究改进。     

湖北钉螺多态微卫星DNA位点筛选和特征初步分析

目的分离湖北钉螺的微卫星DNA序列,筛选多态的微卫星DNA位点并分析其特征。方法应用湖北钉螺基因组DNA的酶切片段与生物素标记的(AAT)17、(GA)25、(CCT)17、(CA)25等10个寡核苷酸探针杂交,富集、浓缩、克隆并测序,构建微卫星DNA库。挑选合适的微卫星DNA位点设计并合成引物,扩增钉螺样本经聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选多态性。结果获得湖北钉螺微卫星DNA序列205条,GenBank注册登记号GU204044～GU204248,其中完整重复序列74条,占36.10%;非完整重复序列102条,占49.76%;复合重复序列29条,占14.15%。设计合成的20对微卫星DNA位点引物中,经鉴定显示13个位点具有多态性。结论分离建立了湖北钉螺微卫星DNA序列库,为湖北钉螺群体遗传、种群溯源等相关研究提供了分子标志。     

杀螺胺乙醇胺盐不同"干"施剂型江滩现场灭螺效果

目的 了解杀螺胺乙醇胺盐不同“干”施剂型江滩现场灭螺效果。方法 选择南京市浦口区有螺江滩为试验现场,分别用杀螺胺乙醇胺盐粉剂、粉粒剂和颗粒剂对有螺环境进行喷粉法灭螺,比较3种杀螺胺乙醇胺盐剂型的现场灭螺效果。结果 杀螺胺乙醇胺盐粉剂、粉粒剂和颗粒剂在江滩现场施药后3、7 d,钉螺死亡率分别为66.67%、67.24%、66.87%和75.36%、79.73%、73.97%,差异均无统计学意义（[χ2] = 0.006、0.895,P均 > 0.05）;施药后15 d,钉螺死亡率分别为86.92%、72.86%、71.43%,差异有统计学意义（[χ2] = 9.709,P < 0.01）,粉剂组钉螺死亡率显著高于粉粒剂组和颗粒剂组。粉剂组钉螺校正死亡率和活螺密度下降率曲线呈稳定上升,而粉粒剂组和颗粒剂组则在15 d时出现下降。结论 杀螺胺乙醇胺盐粉剂在江滩现场喷粉灭螺效果较稳定,不同剂型尚需进一步研究完善。     

基于微卫星标记的不同壳型湖北钉螺小尺度景观群体遗传结构研究

目的 分析湖北松滋地区湖北钉螺小尺度景观群体的遗传结构。方法 选择T6-17、P101、D11、B14、T4-33和C22等6对微卫星位点对松滋地区10个生境的湖北钉螺群体进行基因扫描,计算各群体的等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、期望杂合度(He)、观察杂合度(Ho)、 多态信息含量(PIC)、群体间的遗传分化系数(FST)和遗传距离,根据遗传距离进行聚类分析,并进行分子变异方差分析(AMOVA)。结果 10个钉螺群体经鉴定螺壳分为光壳和肋壳(包括浅肋和深肋),10个群体共检测到141个等位基因,各位点20-34个不等,平均每个位点检测到23.5个;6个微卫星位点的平均有效等位基因数为1.575,各位点的有效等位基因数并不平衡,且数值差异较大,范围从0.445至3.060。群体的平均Ho范围为0.438-0.698,在光壳的团山村群体中最低,在深肋型的马木口村群体中最高;群体的平均He范围为0.589-0.892,在浅肋型的德胜村群体中最低,在深肋型的马木口村群体中最高;成对群体间的Fst为-0.01564-0.25247,各群体的PIC为0.528-0.857,显示出高度多态性;AMOVA 分析结果显示,变异主要存在于个体间,占总变异的88.4%;聚类分析结果显示,肋壳的马木口村、横堤村、义兴村三个群体与光壳的马狮子咀村、民主村、土桥村三个群体先聚为一支后,与浅肋的德胜村、木天河村两个群体与光壳的团山村、夹马槽村聚的一支合聚。结论 松滋地区不同景观环境下湖北钉螺呈现不同螺壳形态,尽管遗传多样性较为丰富,但遗传变异主要来自个体间,不同螺壳形态的湖北钉螺群体间并未体现出明显的遗传分化。     

氯硝柳胺及EDTA对不同螺龄湖北钉螺酚氧化酶活性的影响

目的 探讨氯硝柳胺及EDTA对不同螺龄湖北钉螺酚氧化酶（PO）活性的影响。方法 将不同螺龄湖北钉螺（即成螺、幼螺、螺卵）软体匀浆、离心获取粗制酶液,再依次通过盐析、透析及凝胶过滤层析而获取部分纯化的酚氧化酶酶液。以邻苯二酚作为底物,检测不同浓度氯硝柳胺及EDTA对不同螺龄湖北钉螺PO活性的影响。结果 随着氯硝柳胺和EDTA浓度的增大,不同螺龄湖北钉螺PO活性均逐渐降低。结论 氯硝柳胺和EDTA对不同螺龄湖北钉螺PO活性均有抑制作用。     

南通市“有螺无病”地区不同条件下血吸虫毛蚴感染钉螺的研究

目的探索南通市有钉螺无血吸虫病流行的原因,验证既往研究结论,为该类地区血吸虫病监测提供科学依据。方法采用控制现场试验方法,现场观察人工输入血吸虫毛蚴感染钉螺情况,同时实验室比较观察"有螺无病"和"有螺有病"区土壤对血吸虫毛蚴感染钉螺的影响。结果除如东县新店镇汤园村(有螺无病)现场光壳螺组外,实验钉螺在"有螺无病"和"有螺有病"现场控制环境均可以被血吸虫毛蚴感染。各组光壳钉螺感染率低于肋壳钉螺,但无统计学意义;各组光壳钉螺死亡率高于肋壳钉螺,差异有统计学意义(χ~2新店=135.118,χ~2双甸=122.836,χ~2白蒲=154.436,χ~2丁堰=138.288,χ~2对照=151.923,P均0.01)。"有螺无病"和"有螺有病"区土壤试验组钉螺感染率差异无统计学意义(χ~2如皋=0.071,χ~2如东=0.216,P均0.05),各组与无土实验对照组差异亦无统计学意义(χ~2=7.148,P0.05)。结论南通地区"有螺无病"区在输入足够数量血吸虫病传染源后有可能形成血吸虫病的传播,有必要开展血吸虫病和钉螺监测工作。     

基于百度地图的钉螺监测系统的实现

目的基于百度地图构建钉螺监测系统。方法收集历史有螺、现有螺等钉螺监测环境基础信息及各类钉螺监测数据,建立钉螺监测数据库,利用地理信息系统(Geographic Information System,GIS)电子围栏技术及百度地图开发者接口(Application Program Interface,API)完成各钉螺监测环境的电子围栏设定,并完成电子围栏同钉螺监测数据库的关联。结果基于百度地图建立了钉螺监测系统。该系统包含"钉螺监测环境数据库"、"动态监测端"、"电子地图展示"3个模块。通过PC端、智能手机端,均可在百度地图上查看钉螺监测信息。结论基于百度地图开发的钉螺监测系统,可以作为查、灭螺等钉螺监测资料数字化、动态化管理的工具,以及可视化展现的平台。     

湖沼型血吸虫病流行区钉螺抽样方法的对比研究

目的优化、简化湖沼型血吸虫病流行区钉螺调查方法,提高钉螺调查精度、效率和经济性。方法基于鄱阳 湖区域恒湖农场茶叶港草洲1块50 m×50 m试验样地,全覆盖查螺后再分别采用简单随机抽样、系统抽样与分层抽样等3 种方法进行钉螺调查,计算最小需求样本量、抽样相对误差与抽样绝对误差。结果本研究中简单随机抽样、系统抽样 与空间分层抽样等3种方法的最小需求样本量分别为300、300和225,抽样相对误差均小于15%,抽样绝对误差分别为 0.221 7,0.302 4和0.047 8。结论用高程作为分层依据进行空间分层抽样是钉螺实际调查中节省成本、提高精度的有 效途径。     

机械和人工土埋灭螺的效果-成本分析

目的 目的 探索特殊有螺环境 （特殊环境） 的高效灭螺方法。方法 方法 2006年对乱石溪滩、 渗水荒山等大面积特殊环 境, 采用挖掘机进行一次性深挖深埋灭螺 （机埋灭螺）, 灭螺后, 连续7年观察灭螺效果, 并与2005年采用春、 秋两季人工铲 草土埋2次、 药杀8次的灭螺方法 （人工灭螺） 的效果和成本进行比较。结果 结果 2006年采用机埋灭螺法, 投入为0.78元/ m2 , 有螺面积压缩率达100%; 2005年采用人工灭螺法, 投入为1.34元/m2 , 有螺面积压缩率为20.26%。机埋灭螺比人工灭螺投 入降低41.79%, 灭螺效果提高79.74%。结论 结论 大面积特殊环境采用机埋灭螺优于人工灭螺。