HPLC法同时测定不同产地酒制蜂胶中7种成分含量

目的:建立HPLC法同时测定酒制蜂胶中槲皮素、山柰酚、芹菜素、乔松素、咖啡酸苯乙酯、白杨素和高良姜素7个成分的含量.方法:采用Phenomenex Kinetex F5(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-0.3％冰醋酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为0.8 mL/min;检测波长为230 nm;柱温为...     

蜂胶降低黄嘌呤氧化酶活性及血浆尿酸值的作用

对中国产及巴西产蜂胶中的代表性成分白杨黄素、高良姜素、artepillin C、p-香豆酸及咖啡酸苯乙酯进行测定，同时对上述成分的黄嘌呤氧化酶（XOD）活性抑制作用进行比较，并以氧嗪酸诱发高尿酸血症动物模型，探讨了蜂胶降低血浆尿酸值的作用。     

何首乌6种成分对人孕烷X受体介导的CYP3A4的调控作用北大核心CSCD

该文探讨何首乌中6种化学成分(没食子酸、槲皮素、山柰酚、木犀草素、白藜芦醇、芹黄素)对人孕烷X受体(humanpregnant X receptor,PXR)介导的CYP3A4的转录调控作用。利用前期建立的PXR介导的CYP3A4药物诱导快速筛选技术,采用MTS细胞检测方法考察化学成分对细胞活性的影响,计算IC50;利用双荧光素酶报告基因系统,将PXR表达载体和含CYP3A4转录调控区的报告基因载体共转染HepG2细胞,10μmol·L-1利福平为阳性对照,10μmol·L-1酮康唑为阴性对照,用何首乌中6种成分--没食子酸、槲皮素、山柰酚、木犀草素、白藜芦醇、芹黄素(5,10,20μmol·L-1)分别处理24 h,进行双荧光素酶活性检测。结果表明,空载质粒pc DNA3. 1与p GL4. 17-CYP3A4共转染时没食子酸、白藜芦醇对CYP3A4的调控为抑制效应,槲皮素、山柰酚、木犀草素对CYP3A4产生诱导作用;pc DNA3. 14-PXR与p GL4. 17-CYP3A4共转染时,槲皮素、山柰酚、木犀草素、白藜芦醇、芹黄素均产生诱导效应。综上所述,6种成分对CYP3A4产生抑制或激活效应,PXR参与后,5种成分对CYP3A4产生诱导效应,其中3种成分的诱导效应具有显著性差异。该研究提示,在与何首乌联合用药时应注意潜在的药物相互作用,提高安全性和有效性。     

何首乌6种成分对人孕烷X受体介导的CYP3A4的调控作用

该文探讨何首乌中6种化学成分(没食子酸、槲皮素、山柰酚、木犀草素、白藜芦醇、芹黄素)对人孕烷X受体(humanpregnant X receptor,PXR)介导的CYP3A4的转录调控作用。利用前期建立的PXR介导的CYP3A4药物诱导快速筛选技术,采用MTS细胞检测方法考察化学成分对细胞活性的影响,计算IC50;利用双荧光素酶报告基因系统,将PXR表达载体和含CYP3A4转录调控区的报告基因载体共转染HepG2细胞,10μmol·L~(-1)利福平为阳性对照,10μmol·L~(-1)酮康唑为阴性对照,用何首乌中6种成分——没食子酸、槲皮素、山柰酚、木犀草素、白藜芦醇、芹黄素(5,10,20μmol·L~(-1))分别处理24 h,进行双荧光素酶活性检测。结果表明,空载质粒pc DNA3. 1与p GL4. 17-CYP3A4共转染时没食子酸、白藜芦醇对CYP3A4的调控为抑制效应,槲皮素、山柰酚、木犀草素对CYP3A4产生诱导作用; pc DNA3. 14-PXR与p GL4. 17-CYP3A4共转染时,槲皮素、山柰酚、木犀草素、白藜芦醇、芹黄素均产生诱导效应。综上所述,6种成分对CYP3A4产生抑制或激活效应,PXR参与后,5种成分对CYP3A4产生诱导效应,其中3种成分的诱导效应具有显著性差异。该研究提示,在与何首乌联合用药时应注意潜在的药物相互作用,提高安全性和有效性。     

水飞蓟宾对硫代乙酰胺所致肝损伤状态下CYP3A的调节作用及机制

目的：水飞蓟宾（sB）是植物奶蓟的主要成分,长期以来被用于治疗各种肝脏疾病。由于肝病往往伴随有CYP450酶的功能失调,因此本文以硫代乙酰胺（TAA）引起的大鼠肝损伤为模型,研究水飞蓟宾的肝保护作用和对CYP3A的调控作用之间的关系。方法：血清生化指标检测和肝脏病理切片实验评价水飞蓟宾的保肝作用。免疫组化实验测定0【一SMA的表达,ELISA试剂盒测定大鼠肝脏炎症因子的表达。实时定量PCR和westernblot实验考察CYP3A和PXR的mRNA和蛋白表达水平变化,咪达唑仑4一羟基化反应测定CYP3A的活性。siRNA转染实验沉默PXR后考察PXR在硫代乙酰胺细胞毒和CYP3A调节中的作用。结果：水飞蓟宾表现出明显的保肝、抗炎、抗纤维化作用,并能有效逆转硫代乙酰胺导致的大鼠肝脏CYP3A和PXR表达减少以及PXR的入核减少。PXR沉默实验显示PXR参与了水飞蓟宾的细胞保护和CYP3A调控过程。结论：PXR是参与CYP3A调控的重要因子,很可能是水飞蓟宾在硫代乙酰胺导致的大鼠肝损伤模型中的作用靶点,同时也提示在治疗肝脏疾病时要注意与水飞蓟宾合用的药物可能与水飞蓟宾之间存在潜在的药物相互作用。     

灯盏花素对大鼠CYP3A4体内活性的影响

目的以咪达唑仑作为探针药物,研究灯盏花素对大鼠细胞色素P450 3A4(CYP3A4)体内活性的影响,为临床合理用药提供参考。方法将SD大鼠随机分为3组,对照组、灯盏花素低剂量组和高剂量组。低剂量组和高剂量组每天分别尾静脉给予灯盏花素粉针剂0.18 mg/100 g及0.54 mg/100 g,共10 d,对照组给予生理盐水。各组分别于第11天注射咪达唑仑溶液,于给药前及给药后不同时间点眼内眦静脉取血0.8 ml,使用高效液相色谱(HPLC)法测定血浆中咪达唑仑的浓度。结果静脉给予大鼠灯盏花素粉针剂10 d后,与对照组相比,低剂量组和高剂量组咪达唑仑的AUC、MRT和tφ均显著高于对照组(P<0.05),CL显著低于对照组(P<0.05);灯盏花素高剂量组与低剂量组无显著性差异。结论灯盏花素可明显抑制大鼠CYP3A4的体内活性。     

蜂胶HPLC指纹图谱的研究

目的用高效液相色谱法建立蜂胶指纹图谱。方法采用迪马公司Diamonsil(钻石)C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-0.4%磷酸水为流动相,梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为283 nm,柱温为25℃。结果10批蜂胶样品得到的指纹图谱有13个共有峰,通过与对照品的保留时间比较,4、7、12、13号峰分别为芦丁、槲皮素、白杨素和高良姜素。方法学考察结果表明,稳定性试验、重现性试验所得指纹图谱的相似度均大于0.95,芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素保留时间和峰面积的RSD均小于2%。结论所建立的蜂胶HPLC指纹图谱分析方法准确、可靠,重现性好,能够用于控制蜂胶的质量和真伪的鉴别,为更好的控制蜂胶的内在质量提供了科学依据。     

HLC法测定芪蜂降糖胶囊中白杨素、高良姜素的含量

目的:建立芪蜂降糖胶囊中蜂胶的可行含量测定方法。方法:采用HLC法以蜂胶主要成分白杨素、高良姜素为指标,进行稳定性、精密度、准确度、专属性、线性考察等方法学研究,最终确定成品的两种成分含量限度为:每100g含白杨素不得少于0.53g,高良姜素不得少于0.50g。结果:说明该测定方法方便可行,重现性良好,可作为该产品的质量控制含量测定方法。     

不同地区蜂胶原料药的质量评价

目的:建立不同产地蜂胶的质量评价方法。方法:采用薄层色谱法,以白杨素和高良姜素为对照品,甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶4∶3)为展开剂,进行定性鉴别研究;采用高效液相色谱法,色谱柱Dikma Technologies(250 mm×4.6mm,5μm);流动相甲醇-0.15%磷酸水溶液(62∶38);流速1.0 mL·min-1;柱温25℃;检测波长268 nm。结果:28个产地蜂胶原料药中白杨素和高良姜素的含量均符合《中国药典》(2010年版)的规定的仅有6个地区,大部分地区蜂胶原料药中高良姜素含量符合标准,而白杨素含量不达标。结论:不同产地蜂胶原料药中白杨素和高良姜素的含量不同,建立的定性、定量方法准确可靠,专属性强,适合不同产地蜂胶原料药的质量控制。     

云南蜂胶化学成分研究北大核心CSCD

目的：研究蜜源植物为油菜花的云南蜂胶中的化学成分。方法：采用各种色谱方法提取、分离,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构。结果：从云南蜂胶中共分离得到20个化学成分,分别鉴定为：白杨素（1）,芹菜素（2）、柚木杨素（3）、高良姜素（4）、良姜素（5）、5-甲氧基高良姜素（6）、3-甲氧基高良姜素（7）、异鼠李素（8）、3,7-二甲氧基槲皮素（9）、3,3＇-二甲氧基槲皮素（10）、生松素（11）、球松素（12）、5-甲氧基短叶松素（13）、3-乙酰基短叶松素（14）、阿魏酸（15）、异阿魏酸（16）、3,4-二甲氧基桂皮酸（17）、硬脂酸（18）、二十八烷醇（19）、三十烷醇（20）。结论：其中,化合物5、6、8～10、13～17为首次从云南蜂胶中分离得到。     

Chemical composition of the ethanolic propolis extracts and its effect on HeLa cells

Ethnopharmacological relevance

Propolis is a resinous hive product collected by honeybees from various plant sources. It is widely used in traditional medicine and is reported to have a broad spectrum of pharmacological effects (antibacterial, antihepatoxic, antioxidative, anti-inflammatory, etc.). Thus the aim of this study was to assess cytotoxic effect of various ethanol propolis extractions on the cervical tumor cell line (HeLa) and compare it with their phenolic acids and flavonoids composition.

Materials and methods

Twenty samples of raw propolis were collected from 17 localities of Croatia (I-XVII), 2 of Bosnia and Hercegovina (XVIII, XIX) and 1 of Macedonia (XX). Reverse phase HPLC was used to determine the chemical composition of polyphenols. Biological experiments were carried out in vitro on cervix adenocarcinoma cell line (HeLa).

Results

Phenolic acids (ferulic acid, p-coumaric acid, caffeic acid) and flavonoids (tectochrysin, galangin, pinocembrin, pinocembrin-7-methylether, chrysin, apigenin, kaempferol, quercetin) have been determined using HPLC analysis in 20 ethanolic propolis extracts. All samples contain tectochrysin in ranges of 0.1988 mg/g (XVIII) to 1.2004 mg/g (III), while caffeic acid and quercetin have not been found. Flavonoid that is most abundant is galangin in ranges from 0.3706 mg/g (XVII) to 47.4879 mg/g (IX). The samples of propolis numbers I, VI and X applied in the investigated concentration range manifested significant reduction of cell growth. GI₅₀ value as indicator of cytotoxicity among propolis samples showed that propolis number VII is the most effective (GI₅₀ = 76 μg/ml) followed by propolis nos. XV, XVIII and I.

Conclusion

Antiproliferative and cytotoxic effect of propolis on the HeLa cells is not correlating with the concentration of particular components but on establishing the possible synergistic antiproliferative activity of individual phenolic acid and flavonoids. Differences in the chemical composition lead to diversity in biological activity of propolis samples.     

Evaluation of Inhibitory Effects of Caffeic acid and Quercetin on Human Liver Cytochrome P450 Activities

When herbal drugs and conventional allopathic drugs are used together, they can interact in our body which can lead to the potential for herb–drug interactions. This work was conducted to evaluate the herb–drug interaction potential of caffeic acid and quercetin mediated by cytochrome P450 (CYP) inhibition. Human liver microsomes (HLMs) were added to each selective probe substrates of cytochrome P450 enzymes with or without of caffeic acid and quercetin. IC₅₀, Ki values, and the types of inhibition were determined. Both caffeic acid and quercetin were potent competitive inhibitors of CYP1A2 (Ki = 1.16 and 0.93 μM, respectively) and CYP2C9 (Ki = 0.95 and 1.67 μM, respectively). Caffeic acid was a potent competitive inhibitor of CYP2D6 (Ki = 1.10 μM) and a weak inhibitor of CYP2C19 and CYP3A4 (IC₅₀ > 100 μM). Quercetin was a potent competitive inhibitor of CYP 2C19 and CYP3A4 (Ki = 1.74 and 4.12 μM, respectively) and a moderate competitive inhibitor of CYP2D6 (Ki = 18.72 μM). These findings might be helpful for safe and effective use of polyphenols in clinical practice. Our data indicated that it is necessary to study the in vivo interactions between drugs and pharmaceuticals with dietary polyphenols. Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Ltd.     

咖啡酸酯类衍生物的合成及其生物活性研究

目的 设计并合成天然产物咖啡酸的酯类衍生物,并对其进行体外抗脂质代谢紊乱活性的研究.方法 以咖啡酸为原料,通过2条反应路线制得目标化合物,利用HepG2细胞株评价该类化合物的调血脂活性.结果 设计并合成10个咖啡酸酯类衍生物C1～C10,均经波谱技术确证结构.药理结果表明,10个化合物对HepG2细胞呈现不同程度的调血脂活性,其中衍生物C3和C5的调血脂活性明显优于先导物咖啡酸和阳性药辛伐他汀.结论 化合物C5为未见文献报道的咖啡酸类新化合物,初步总结了咖啡酸酯类衍生物调血脂活性方面的构效关系.     

咖啡酸酰胺类衍生物的合成及调脂活性研究

目的设计并合成天然产物咖啡酸的酰胺类衍生物,并对该系列化合物进行体外抗脂质代谢紊乱活性评价。方法以咖啡酸为起始原料,卡特缩合剂(BOP)为缩合剂,与十四种胺依次反应制得目标产物,利用人肝癌HepG2细胞评价该类衍生物的调脂活性。结果设计并合成14个咖啡酸酰胺类化合物CA1～CA14,均经波谱技术确证结构。药理实验结果表明,14个化合物对HepG2细胞呈现不同程度的调血脂活性,其中衍生物CA6的调血脂活性优于先导物咖啡酸和阳性药辛伐他汀。结论化合物CA6、CA7和CA11均为未见文献报道的咖啡酸酰胺类新化合物,其中CA6和C11具有潜在的调脂生物活性,值得进一步深入研究。     

仙茅及其有效成分对不同状态L02细胞PXR-CYP3A的影响研究

目的: 明确仙茅水提液及其有效成分苔黑酚葡萄糖苷对正常、虚寒状态L02细胞中PXR-CYP3A的影响,为探讨仙茅在不同状态下药效表达差异的机制奠定基础. 方法: 分别用正常、虚寒大鼠血清培养L02细胞,诱导正常、虚寒2种状态细胞.仙茅水提液及其有效成分苔黑酚葡萄糖苷作用于不同状态细胞后,检测不同状态L02细胞PXR蛋白表达和CYP3A活性. 结果: MTT法结果显示,仙茅水提液和苔黑酚葡萄糖苷能使L02细胞活力明显增强;仙茅水提液能使正常组L02细胞PXR蛋白表达水平显著降低,苔黑酚葡萄糖苷能使正常组L02细胞CYP3A活性和PXR蛋白表达水平均显著降低;而仙茅水提液能使虚寒组L02细胞CYP3A活性和PXR蛋白表达升高,苔黑酚葡萄糖苷能使虚寒组L02细胞CYP3A活性水平显著降低,使虚寒组细胞PXR蛋白表达水平升高. 结论: 仙茅作用于虚寒状态L02细胞,能激活PXR诱导CYP3A活性,但对正常L02细胞的PXR及其介导的CYP3A活性没影响或作用相反.     

HPLC法测定不同产地蜂胶中高良姜素的含量

目的:建立蜂胶中高良姜素的含量测定方法。方法:采用HPLC法,Diamonsil(钻石)C18(46 mm×250mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.4%的磷酸水(65∶35)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为256 nm。结果:高良姜素在0.00412~0.02472 mg/ml范围内呈良好的线性关系(r2=0.9998);高良姜素的含量,山东最高,为11.7 mg/g,其次是内蒙和河南,分别为10.5 mg/g,10.3 mg/g,甘肃最低为9.8 mg/g。结论:本方法简便、可靠,适用于峰胶中高良姜素的含量测定。     

葛花解酒涤脂汤对酒精性脂肪肝小鼠肝脏核受体PXR,CAR表达的影响

目的:探讨葛花解酒涤脂汤对小鼠酒精性脂肪肝(AFLD)的干预作用及对肝组织孕烷受体(PXR),组成性雄甾烷受体(CAR)表达的影响。方法:将29只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组,模型组,葛花解酒涤脂汤高、低剂量组。采用美国国立卫生研究院酒精滥用和酒精中毒研究所(NIAAA)方法制备AFLD小鼠模型,经鉴定成功后,分别灌胃给予高、低剂量葛花解酒涤脂汤(4.9,2.45 g·kg-1·d-1)。9 d后处死小鼠,收集血清及肝组织样本。酶联免疫吸附法检测血清中游离胆固醇(FCHOL)及甘油三酯(TG)水平,苏木素伊红(HE)染色检测肝组织损伤情况;实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法(Western blot)分析肝组织PXR,CAR mRNA和蛋白表达,及其调控的细胞色素P450氧化酶(CYP3A11,CYP3A25,CYP2B9,CYP2B10)基因表达水平。结果:与模型组比较,葛花解酒涤脂汤组小鼠肝脏脂肪变性显著减轻,并呈剂量依赖性。与模型组和空白组比较,葛花解酒涤脂汤组可显著上调PXR,CYP3A25表达水平(P0.01),明显增加CAR mRNA水平(P0.05)。与正常组比较,模型组血清游离胆固醇及甘油三酯水平水平显著增加(P0.01)。结论:葛花解酒涤脂汤能够显著改善小鼠AFLD,其作用机制可能与肝脏PXR及其调控基因CYP3A25表达的活化有关。     

��μ�Ԧ�-�������������յ��Ĵ���֭�ٻ��Ը����˵�����

??OBJECTIVE To investigate the preventive protective effect of matrine(MT) on ??-naphthl isocyanate(ANIT)-induced cholestasis in rat, and to explore its possible mechanism. METHODS Thirty SD rats were randomly divided into five groups with six rats in each group: normal control group, model group, low dose matrine(5 mgkg^-1), high dose matrine group(10 mgkg^-1) and positive control group(ursodeoxycholic acid 100 mgkg^-1), which were administered continuously for 7 d. All groups except the normal control group were given 60 mgkg^-1 ANIT at the fifth day. After the last administration, all rats were fasted 24 h and arterial blood were collected to detect the indexes of total bilirubin(TBIL), aspartate aminotransferase(AST), alanine aminotransferase(ALT) and alkaline phosphatase(ALP). The livers were picked for HE staining, immunohistochemistry(IHC) analysis and Western blot(WB), to indentify the protein expressions of CYP3A4 and PXR. RESULTS Compared to model group, low-dose and high-dose matrine decreased TBIL, AST, ALT and ALP significantly; IHC analysis showed that the expression of CYP3A4 in high-dose group was significantly higher than that in model group(P??0.05). The results of WB showed that the expressions of CYP3A4 and PXR in two matrine groups were significantly higher than that in model group(P??0.05), however, only CYP3A4 expression in UDCA group was significantly higher than that in model group(P??0.05). CONCLUSION Matrine could improve cholestatic liver injury in rats and its mechanism might be related to the upregulation of CYP3A4 expression controled by inducing PXR expression.