多柔比星联合X射线照射诱导胶质瘤细胞凋亡效果观察

用多柔比星联合X射线照射诱导大鼠C6胶质瘤细胞凋亡,HE染色显微镜下观察细胞凋亡情况,用流式细胞仪计算细胞凋亡率.结果HE染色显微镜下观察可见诱导后细胞皱缩,密度增高,染色质边集,多核巨细胞形成,凋亡小体形成.联合治疗组肿瘤细胞凋亡率为13.64%,低于化疗组的29.14%和半量联合治疗组的30.52%(P均0.05).认为联合化疗、放疗可诱导胶质瘤细胞凋亡;半剂量联合治疗效果强于全剂量.     

Frat1通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨Frat1能否通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、凋亡产生影响。方法 RT-PCR检测非小细胞肺癌组织及正常肺组织中Frat1、β-catenin的表达;CCK-8试验检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的增殖;TUNEL免疫荧光法检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的凋亡;Western Blot检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞β-catenin蛋白的表达。结果非小细胞肺癌组织中Frat1、β-catenin基因的表达显著高于正常肺组织(P0.05);Frat1沉默组细胞的增殖能力显著弱于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1沉默组细胞的凋亡显著高于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1正常表达组细胞β-catenin蛋白的表达显著高于Frat1沉默组(P0.05)。结论 Frat1与β-catenin在非小细胞肺癌的表达被激活;Frat1能促进非小细胞肺癌A549细胞的增殖,抑制其凋亡,这种作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路而实现的。     

姜黄素通过上调miR-15a/16表达抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖促进细胞凋亡的机制

目的探讨姜黄素抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖并促进细胞凋亡的分子机制。方法不同浓度(0.0、12.5、25.0、50.0μmol/L)姜黄素处理48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测A549细胞增殖,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3活性检测试剂盒检测Caspase3活性,RT-PCR检测细胞中微小RNA(miR-15a/16)表达;采用Lipofectamine2000转染miR-15a/16抑制剂后,MTT法、流式细胞仪和TUNEL-4′,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)双染法检测miR-15a/16对姜黄素处理的A549细胞增殖、周期和凋亡的影响;采用双荧光素酶报告基因实验检验miR-15a/16与细胞周期蛋白(Cyclin)D1和B淋巴细胞瘤(BCL)2的靶向关系,Western印迹检测CyclinD1和BCL2蛋白的表达。结果姜黄素能够呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖、增加Caspase 3活性和诱导miR-15a/16的表达;以50μl姜黄素处理A549细胞后,细胞的增殖能力受到抑制,细胞在G1期比例升高、S期和G2/M期比例降低,细胞凋亡能力和Caspase 3活性增强;转染miR-15a/16抑制剂后,姜黄素抑A549细胞增殖和促细胞凋亡的作用得以逆转;双荧光素酶报告基因实验证实CyclinD1和BCL2是miR-15a/16的靶基因,同时转染miR-15a/16模拟物后,CyclinD1和BCL2蛋白表达降低,反之则升高。结论姜黄素可通过上调miR-15a/16表达抑制A549细胞增殖并促进细胞凋亡。     

微波辐射诱导肺癌A549细胞凋亡的研究

微波能诱发肿瘤细胞凋亡，故能在微波凝固去除原发灶的同时抑制肿瘤邻近扩散，这对沿气道管壁或管外浸润生长的肿瘤、纤维支气管镜清除术后的进一步局部干预很有意义。本研究旨在探讨不同功率和作用时间的微波辐照后对肺癌A549细胞凋亡的影响及机制。[第一段]     

烟雾刺激通过损伤A549细胞DNA诱导细胞凋亡发生

<正>呼吸道烟雾吸入性损伤是一种极其常见的损伤,常发生于火灾、毒气泄漏或是吸烟等情况下~([1])。烟雾吸入性损伤常常由于吸入燃烧产生的高温、有毒气体而导致,轻者可以出现呼吸道的不适反应,重者则会影响呼吸道的通畅,导致患者窒息死亡。呼吸道烟雾吸入性损伤主要分为两个方面:首先,高温气体的吸入可以引起呼吸道的灼伤,导致呼吸道黏     

微波对人肺癌A549细胞凋亡的非热效应

目的了解微波对人肺癌A549细胞的非热作用。方法在冰浴排除热效应条件下用不同剂量微波(12 mV/cm2、18 mV/cm2和21mV/cm2)照射A549细胞10 min,24 h光镜观察照相后收集细胞,用超声裂解法提取蛋白,Western印迹检测凋亡相关蛋白表达变化;Rh123染色行流式分析细胞线粒体膜电势;间接免疫荧光法检测凋亡蛋白活化的caspase3变化;Hoechst荧光染色检测细胞凋亡。结果①光镜下所见:与对照组相比,照射强度越大细胞数减少越明显,细胞质越致密;②Rh123染色流式分析:随着微波照射强度的增加,线粒体膜电势降低,高荧光密度群百分率减少,荧光密度平均群百分率减少下降、低荧光密度群百分率增加(2.9%vs 5.4%、7.6%、9.9%;各照射组均高于对照组,P<0.01);③Hoechst荧光染色检测到微波辐射导致A549细胞凋亡,照射强度越大,细胞凋亡越多;④间接免疫荧光法检测到微波辐射导致A549细胞凋亡蛋白Caspase3活化增多,随照射强度升高表达明显增加;⑤Western印迹:各照射组凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、Caspase3均高于对照组(P<0.01),照射强度越大此值越高。结论微波对人肺癌A549细胞存在明显的促凋亡非热效应,且与照射强度呈正相关。     

三叶青提取物诱导肺癌A549株细胞凋亡的研究

目的探讨三叶青提取物对肺癌细胞A549的作用,初步探讨其机制。方法采用体外细胞培养技术,采用流式细胞仪检测A549细胞株的细胞周期分布相和细胞凋亡率。结果流式细胞仪检测结果显示:加三叶青提取物10-1g/L、10-2g/L处理后的细胞凋亡比例明显高于对照组。结论三叶青提取物对A549细胞具有诱导凋亡的作用。     

蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的机制

目的探讨蛋白酶体抑制剂(MG132)与顺铂(DDP)联合诱导肺癌A549细胞凋亡的机制及作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度MG132、DDP对肺癌A549细胞的最适作用时间以及抑制率;通过Hochest33342染色法检测细胞形态变化;应用流式细胞术(FCW)检测MG132、DDP及两药联合作用于肺癌A549细胞的凋亡率;采用Western印迹检测药物干预前后细胞中促凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(caspase)9、核转录因子(NF-κB)的表达情况。结果 MTT结果显示MG132、DDP能有效抑制细胞的增殖,呈浓度及时间依赖性;FCW结果显示MG132与DDP联合用药组作用于肺癌A549细胞凋亡率为(68.27±0.31)%,与MG132(22.13±0.36)%、DDP(25.76±0.25)%单用药组相比,细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。Western印迹结果显示,与单用药组相比较,联合用药组凋亡相关蛋白caspase9表达明显增强,NF-κB表达显著减少。结论 MG132与DDP联合应用可明显提高细胞凋亡率,其机制可能是通过提高促凋亡蛋白caspase9的表达,并降低细胞NF-κB的表达而实现的。     

热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌A549细胞凋亡相关基因的影响

目的探讨热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌(NSCLC)凋亡相关基因Bcl-2、Bax、热休克蛋白70(HSP70)的影响。方法培育NSCLC细胞株,分为热疗组、依托泊苷组、热疗联合依托泊苷组(联合组)和对照组,干预结束后提取RNA,用RT-PCR方法检测HSP70、Bcl-2、Bax的相对表达量和mRNA表达水平。结果热疗组、依托泊苷组及联合组Bcl-2、HSP70水平明显低于对照组(P均<0.01),Bax水平明显高于对照组(P<0.01)。结论热疗、依托泊苷均可一定程度地诱导NSCLC细胞凋亡,二者联合应用具有一定的协同作用,可进一步诱导NSCLC细胞的凋亡。     

Fas/Fasl表达与肺癌细胞凋亡关系的研究进展

Fas又名APO-1,现命名为CD95分子。Fas蛋白属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）及神经生长因子受体（NGFR）家族成员,是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白,由胞外区、跨膜区、胞质区三部分组成。Fas胞质区介导细胞死亡,又称为死亡区（DD）。胞外段含有两个功能域：一个是N端的配体结合前聚集域（PLAD）,具有在结合配体前即促使Fas自身三聚化作用;另一个是紧接配体的结合域（LBD）,具有亲和结合Fasl的作用。Fas主要以膜受体形成存在,还可通过转录水平不同拼接产生可溶性Fas（sFas）分子,它可阻断膜Fas与Fasl结合而抑制细胞凋亡。     

山茱萸多糖对肺癌A549细胞凋亡的影响及机制

目的探讨山茱萸多糖对人肺癌A549细胞凋亡作用的影响及机制。方法收集对数生长期A549细胞,加入终质量浓度分别为25、50、100 mg/mL的山茱萸多糖20μL,分别培养24、48、72 h,MTT法测定细胞增殖抑制率和山茱萸多糖的半抑制浓度(IC50)。倒置显微镜下观察50 mg/mL山茱萸多糖作用后细胞形态变化。免疫组化SP法检测Survivin蛋白表达,用免疫组化评分(IHS)表示。结果山茱萸多糖作用后A549细胞生长受到明显抑制,细胞增殖抑制率呈明显的量效、时效关系;倒置显微镜下观察到细胞凋亡的典型改变,免疫组化SP法染色显示Survivin表达降低,Survivin蛋白的IHS随浓度增加呈明显下降趋势。结论山茱萸多糖能诱导A549细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin表达有关。     

人肺癌A549细胞凋亡相关基因的表达及意义

基因,可能是导致细胞凋亡受抑、细胞耐药的主要原因.     

山茱萸水提取物对人肺癌A549细胞凋亡的作用

目的探讨山茱萸水提取物对人肺癌A549细胞的体外增殖的抑制及凋亡作用。方法采用MTT法及DNA琼脂糖凝胶电泳法检测山茱萸水提取物对A549细胞增殖的抑制及凋亡作用,并观察细胞形态改变。结果山茱萸水提取物对A549细胞抑制作用较明显,在一定范围内呈现较好的量效、时效关系;经不同剂量的山茱萸水提取物处理的细胞电泳均出现相差约200 bp的DNA梯状电泳图谱,形态学观察到细胞凋亡。结论山茱萸水提取物对人肺癌A549的细胞增殖有较强的抑制作用,能诱导其细胞凋亡。     

NIRF基因通过PI3K/Akt信号通路诱导人肺癌细胞凋亡

目的探究NIRF基因对人肺癌细胞凋亡的影响以及机制研究。方法使用重组质粒siRNANIRF(siRNA-NIRF组)和空载体(siRNA-NC组)转染人肺癌细胞A549,以未转染细胞为对照(Control组),免疫印迹试验(Western blot)检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测转染细胞增殖情况,使用流式细胞术检测转染细胞凋亡状况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白的表达量。结果转染重组质粒siRNA-NIRF后,细胞中NIRF蛋白的表达量显著低于对照组(P0.05);与对照组相比,siRNA-NIRF组细胞的存活率显著降低(P0.05),凋亡率显著增高(P0.05),siRNA-NC组无明显差异(P0.05);与对照组相比,siRNA-NIRF组和siRNA-NC细胞中Akt、PI3K蛋白的含量无明显变化(P0.05),但siRNA-NIRF组细胞中p-Akt和p-PI3K的含量显著低于对照组(P0.05)。结论干扰NIRF基因可抑制肺癌细胞A549增殖,促进其凋亡,其作用机制是影响PI3K/Akt信号通路的关键因子的表达量。     

肺癌平药物血清对A549人肺癌细胞凋亡及基因表达的影响

目的探讨肺癌平治疗肺癌的作用机制。方法采用血清药理学方法孵育A549人肺癌细胞，通过电镜、流式细胞术、免疫细胞化学方法检测肺癌平药物血清作用后对细胞凋亡及相关基因bcl-2、p53表达的影响。结果肺癌平药物血清作用后电镜下可见凋亡小体形成，流式细胞仪检测可见亚二倍体核型峰的特征，免疫细胞化学法显示抑癌基因p53主要定位在细胞核，部分细胞浆也有淡染。癌基因bcl-2主要表现为胞浆着色，流式细胞仪分析药物血清作用后，p53表达增强，bcl-2表达降低，随着作用时间延长，两种基因表达明显增强。结论肺癌平治疗肺癌的作用机制是通过诱导肺癌细胞凋亡及影响相关基因bcl-2、p53表达实现的。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用

目的观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予40、80、160μg/ml的藤梨根乙酸乙酯提取物（实验组）,同时设对照组（0.04%DMSO＋肺癌A549细胞）。采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测用药后DNA梯状条带、TUNEL检测用药后肺癌A549细胞凋亡率的变化、免疫组化SP法检测用药后肺癌A549细胞Survivin蛋白表达变化、RT-PCR法检测用药后A549细胞Survivin mRNA的表达。结果实验组细胞DNA凝胶电泳均出现凋亡细胞所特有的DNA梯状条带图谱,而对照组细胞未出现。各实验组细胞随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,并存在时相性和量—效依赖性;其Survivin蛋白和mRNA表达均低于对照组（P均〈0.05）,亦存在时相性和量—效依赖性。结论藤梨根乙酸乙酯提取物可明显诱导肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低Survivin蛋白和mRNA表达有关。     

藤梨根提取物对肺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,台盼蓝计数活细胞绘制不同浓度药物作用后细胞的生长曲线;四甲基耦氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度药物作用不同时间对A549细胞生长的抑制率;采用流式细胞术(FCM)测定肺癌细胞周期、凋亡率变化;采用透射电镜观察药物作用后细胞的超微结构变化.结果 台盼蓝计数活细胞及MTT实验结果 均显示当药物浓度在20～160 μg/ml之间时,体外藤梨根提取物可明显抑制肺癌A549细胞的生长,呈现出明显的时间和剂量依赖性.FCM检测显示药物作用后,Go/G1期细胞数目增多,S期和G2/M期细胞数目相应减少,细胞发生G0/G1期阻滞,细胞凋亡率亦明显增加,随药物浓度增加、作用时间延长,其细胞周期阻滞作用及凋亡诱导作用逐渐增强.药物处理48 h后各组A549细胞透射电镜下均可见不同阶段典型的凋亡细胞形态学变化.结论 藤梨根提取物对人肺癌A549细胞生长有明显的抑制作用,呈现时效-量效关系,其作用与使细胞周期发生阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

三乙酰白藜芦醇对非小细胞肺癌A549细胞增殖及STAT3凋亡通路的影响

目的 研究三乙酰白藜芦醇(TRES)对非小细胞肺癌A549细胞增殖及信号转导与转录激活因子3 (STAT3)凋亡通路的影响.方法 采用MTS法检测TRES对A549细胞抗增殖活性,流式细胞术检测TRES对A549细胞凋亡作用,Western blot法检测STAT3凋亡通路蛋白表达以及STAT3细胞核转移情况.结果 TRES可以随剂量和处理时间的增加抑制A549细胞的增殖,而且可以诱导A549细胞的凋亡.TRES降低了A549细胞中p-STAT3以及STAT3凋亡通路中抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1的表达,而且抑制了p-STAT3在A549细胞中由细胞质向细胞核的转移.结论 TRES可以抑制A549细胞的增殖,可以通过影响STAT3通路诱导A549细胞的凋亡.     

顺铂通过抑制RIP活性增强rhTRAIL杀伤肺癌A549细胞

目的探讨顺铂(DDP)通过抑制受体相互作用蛋白(RIP)增强肺癌细胞A549对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的分子机制。方法 Western印迹检测顺铂、Nec-1作用A549细胞后RIP的蛋白表达。MTT法检测联合应用DDP+rh TRAIL和Nec-1+rh TRAIL作用后A549细胞的生长抑制率。Western印迹检测DDP+rh TRAIL和Nec-1+rh TRAIL对A549凋亡相关蛋白caspase-8的活化情况。流式细胞仪检测DDP+rh TRAIL和Nec-1+rh TRAIL作用后对A549细胞凋亡的影响。结果 DDP和Nec-1能显著降低A549细胞中RIP的蛋白水平,DDP、Nec-1联合rh TRAIL可以实现caspase-8的活化,促进rh TRAIL对A549细胞的杀伤作用,凋亡率从(5.9±4.93)%提高到(60.5±4.93)%和(64.1±5.17)%(P0.01)。抑制率分别提高到(65.5±4.93)%和(76.3±9.52)%(P0.01)。结论抑制RIP蛋白活性能增加A549细胞对rh TRAIL诱导细胞凋亡的敏感性,有利于促进rh TRAIL蛋白在治疗NSCLC方面的应用。