RSK4与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin在乳腺癌裸鼠移植瘤中的相关性研究

目的 分析乳腺癌裸鼠移植瘤中核糖体 S6蛋白激酶 4（ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4） 与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin表达的相关性,进一步探讨RSK4在乳腺癌发展中的作用机制。方法 将转染siRNA （RSK4-RNAi-LV）的MCF-7细胞（实验组）、转染siRNA （NC-GFP-LV）的MCF-7细胞（阴性对照组）和未转染的MCF-7细胞（空白对照组）分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,剥离裸鼠移植瘤;采用免疫组织化学法检测移植瘤标本中增殖因子RSK4、Ki-67、cyclin D1 及侵袭因子CXCR4、E-cadherin蛋白的表达。结果 实验组RSK4、E-cadherin蛋白的表达水平分别为（3.2±0.5）％、（28.2±0.7）％,明显低于空白对照组的（36.7±3.4）％、（51.7±4.2）％和阴性对照组的（61.1±5.1）％、（49.2±3.8）％,差异有统计学意义（F=56.79,61.89,P＜0.05）。实验组Ki-67、cyclin D1、CXCR4蛋白的表达水平分别为（67.8±5.8）％、（61.7±4.6）％、（56.3±3.9）％,明显高于空白对照组的（34.5±1.4）％、（29.7±2.5）％、（30.7±3.1）％和阴性对照组的（29.8±1.9）％、（35.7±4.6）％、（28.5±3.7）％,差异有统计学意义（F=45.24,52.16,61.24,P＜0.05）。相关性分析显示,RSK4与 Ki-67、cyclin D1、CXCR4表达呈负相关（r=-0.857,-0.826,-0.867,P<0.001）,与E-cadherin表达呈正相关（r=0.879,P<0.001）。 结论 RSK4可能通过调节CXCR4、Ki-67、CyclinD1和E-cadherin肿瘤相关因子的表达,在乳腺癌在乳腺癌生长及转移过程中发挥作用。     

Sphk1基因对间充质干细胞诱导结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响

目的： 探讨鞘氨醇激酶1 （sphigosine kinase 1, SphK1）基因下调对间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）诱导的 结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。 方法： 采用MSC条件培养液（MSC-CM）和对照培养液（Control-CM）分别干预RKO细胞, CCK-8法检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力,Western blotting法检测Ki-67抗原（Ki-67）、MMP-2/9、肿瘤干 细胞标志物CD44和CD133蛋白的表达。用慢病毒shRNA载体转染RKO细胞抑制SphK1的表达,观察抑制SphK1的表达对 MSC-CM诱导的RKO细胞增殖、迁移以及MMP-2/9、CD44和CD133蛋白表达的影响。 结果： MSC-CM可时间依赖性促进RKO 细胞的增殖(P<0.05),并明显增强细胞的迁移能力(P<0.01)和细胞中Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达(均P<0.05或P< 0.01)。慢病毒shRNA转染明显抑制RKO细胞SphK1的表达,抑制SphK1的表达可显著抑制MSC-CM对RKO细胞增殖和迁移的 促进作用(均P<0.05或P<0.01),且明显抑制MSC-CM诱导的Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达。 结论： MSC-CM可 促进RKO细胞的增殖和迁移,下调SphK1可通过抑制MMP-2/9、CD44和CD133的表达逆转MSC-CM诱导的细胞增殖和迁移。     

siRNA干扰Mig-7基因对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制迁移诱导基因7（Mig-7）基因表达,对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 化学合成靶向Mig-7基因的siRNA,脂质体法转染MKN45细胞,分别用real-time PCR和Western blot法验证其沉默效率;MTT法检测细胞的增殖情况;Transwell小室方法检测细胞侵袭及迁移能力;Western blot法检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9蛋白表达。结果 化学合成siRNA转染胃癌MKN45细胞后,Mig-7的mRNA 水平下降（80±2.91）%,蛋白表达水平下降（89.1±2.67）%;沉默Mig-7基因后,各组细胞体外生长速度差异无统计学意义（P>0.05）,但侵袭和迁移能力下降,MMP-2蛋白表达水平下降,与阴性转染组和对照组相比差异有统计学意义（P=0.000）。而各组MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 下调人胃癌MKN45细胞中Mig-7的表达,可能通过下调MMP-2蛋白表达从而抑制细胞的侵袭和迁移能力。     

miRNA-26a下调COX-2的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨miR-26a在乳腺癌组织和细胞中表达量的改变及其对人乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测20例患者乳腺癌组织及对应的癌旁组织、人乳腺癌细胞MCF-7、BT474及健康者乳腺细胞MCF-10A中miR-26a的表达,用Western bolt法检测COX-2的表达。MCF-7及BT474细胞分别转染miR-NC和miR-26a,采用Western blot法检测转染后细胞中COX-2的表达水平,同时采用CCK-8和克隆形成实验检测转染后细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-26a在乳腺癌组织中的表达明显低于癌旁组织（t=20.33, P=0.001）,在MCF-7和BT474细胞中的表达明显低于MCF-10A细胞（Dunnett t test I-J=-0.031, P=0.001）。COX-2在乳腺癌组织和细胞中的表达明显高于癌旁组织（t=18.01, P=0.002）和健康者乳腺细胞（Dunnett t test I-J=-0.028, P=0.000）。转染miR-26a后,乳腺癌细胞内COX-2的表达量显著下调。CCK-8和克隆形成实验结果显示,过表达miR-26a能明显抑制乳腺癌细胞的增殖（F=6.032, P=0.013）和侵袭（Dunnett t test I-J=-0.21, P=0.037）。结论 过表达miR-26a可以通过下调乳腺癌细胞中COX-2的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

沉默B7-H3基因表达对人肝癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究靶向沉默B7-H3基因表达对HepG2细胞侵袭能力的影响及可能机制。方法 设计针对B7-H3基因的shRNA沉默质粒,转染HepG2细胞,下调B7-H3的表达。划痕修复实验检测转染前后HepG2细胞移行能力的变化,Transwell实验检测基因沉默对细胞侵袭能力的影响,MST-1法和ELISA凋亡试剂盒分别检测细胞增殖和凋亡水平变化。通过Western blot实验和明胶酶谱实验检测侵袭相关分子MMP-2、MMP-9的表达和活性变化。结果 成功构建B7-H3 shRNA沉默质粒并转染HepG2细胞。与对照质粒转染组和未转染组比较,沉默B7-H3基因表达后,B7-H3 shRNA转染组HepG2细胞的移行（24 h: P=0.001; 48 h: P<0.001; 72 h: P<0.001）和侵袭（P<0.001）能力受到显著抑制,细胞的增殖和凋亡水平没有明显变化（P>0.05）。MMP-2、MMP-9的蛋白表达（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P=0.007）和活性（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P<0.001）均显著下降。结论 通过B7-H3 shRNA沉默质粒靶向沉默B7-H3的基因表达能抑制HepG2细胞的侵袭能力,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性有关。     

盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB- 231增殖和凋亡

目的 探讨盐霉素（salinomycin,Sal）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用流式细胞术筛选ALDH高表达乳腺癌细胞系;采用MTT法检测不同浓度Sal（1~32 μmol/L）对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测Sal对细胞凋亡以及肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达的影响;采用qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2、PARP mRNA和蛋白表达;TCGA（the Cancer Genome Atlas）数据库下载乳腺癌患者数据集（n=1 218）,采用Pearson法分析ALDH与凋亡相关分子表达的相关性。结果 Sal在24 h、48 h、72 h均可以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.001）;Sal作用MDA-MB-231细胞48 h后,与对照组比较,2 μmol/L组、4 μmol/L组、8 μmol/L组的细胞凋亡率均升高（均P<0.05）;Bcl-2、PARP、Caspase-3 mRNA表达下降（均P<0.05）,Bax mRNA表达升高（均P<0.05）;Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达下降（均P<0.05）,PARP、Bax 蛋白表达升高（均P<0.05）;MDA-MB-231乳腺癌干细胞表面标志物ALDH表达下降（均P<0.05）。TCGA数据库分析显示,ALDH与抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-3的表达呈正相关（r=0.209,P=0.007;r=0.235,P=0.002）,与Bax、PARP的表达呈负相关（r=-0.326,P＜0.001;r=-0.453,P＜0.001）。结论 Sal可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,可能通过下调肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达实现。     

miR-204对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨miR-204在人乳腺癌组织及MCF-7细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 提取癌症和肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库中浸润性乳腺癌的miR-204相关数据进行汇总,转染miR-204过表达病毒,筛选稳定转染细胞株并通过RT-qPCR检测转染率,MTT法检测过表达miR-204后乳腺癌MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果 miR-204在浸润性乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调（P＜0.001）,且与淋巴结转移和远处转移相关（P＜0.05）。过表达miR-204能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力（P＜0.05）;miR-204上调后,细胞凋亡率达到（34.7±1.9）%,细胞凋亡能力明显增强（P＜0.001）。结论 miR-204可抑制乳腺癌细胞增殖并介导细胞凋亡。     

iRNA沉默Chk1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨siRNA沉默检测点激酶1（Chk1）基因对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响及其作用机制。方法 采用RNAi技术将乳腺癌细胞MCF 7中Chk1基因沉默,用Western blotting检测转染前后MCF 7细胞中Chk1蛋白表达情况;采用MTT比色法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响。结果 Chk1 siRNA转染后,MCF-7细胞中Chk1蛋白表达下降约82％,明显低于未转染组和脂质体转染组（P＜0.05）。Chk1 siRNA转染组转染48h的MCF-7细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为44.7％,明显高于脂质体转染组的5.26% （P＜0.05）。流式细胞仪检测显示,Chk1 siRNA转染组G2／M期比例为（11.3±0.7）％,明显低于未转染组（44.2±1.9）％和脂质体转染组（45.3±2.1）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 siRNA沉默Chk1基因可明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并且其抑制增殖作用与减弱G2／M期阻滞有关。     

RNA干扰MDM2下调人乳腺癌细胞中VEGF的合成并抑制肿瘤血管的生成

目的 探讨小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）抑制人乳腺癌细胞中鼠双微粒体2 （murine double minute 2, MDM2）的表达对癌细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）合成以及裸鼠移植瘤组织内血管生成的影响。方法 根据MDM2已知的cDNA序列设计并转录合成特异性siRNA,转染高表达MDM2的人乳腺癌MDA-MB-468细胞,低氧培养后应用蛋白质印迹法和ELISA法检测肿瘤细胞及其上清液中VEGF的水平。构建裸鼠乳腺癌移植瘤模型,观察MDM2沉默后肿瘤生长情况,蛋白质印迹法、免疫组织化学及ELISA方法检测荷瘤组织和裸鼠血清标本中的VEGF含量,并以CD34标记血管内皮细胞计数微血管密度（microvessel density, MVD）。结果 siRNA抑制MDM2表达后,MDA-MB-468细胞分泌的VEGF蛋白显著减少（P=0.006）。裸鼠移植瘤模型显示,封闭MDM2表达使荷瘤组织生长变慢（P=0.008）,且荷瘤小鼠血清VEGF水平明显减低（P=0.008）,荷瘤组织内MVD也明显降低（P=0.003）。结论 MDM2 siRNA能有效减低乳腺癌细胞中VEGF的合成,并抑制裸鼠移植瘤组织内新生血管的生成,为MDM2/VEGF途径抗肿瘤血管生成作用的研究及靶向药物开发提供了新的思路。     

羧基末端结合蛋白1对肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的 研究羧基末端结合蛋白1（C-terminal binding protein1,CtBP1）对人肝癌细胞HepG2增殖的影响及机制。 方法 采用CtBP1 siRNA转染HepG2细胞,实验分为4个组：空白对照组、转染试剂对照组、阴性序列对照组与干扰组。于转染后不同的时间收集细胞,用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果 CtBP1 siRNA转染有效抑制了HepG2细胞中CtBP1蛋白表达,与空白对照组比较,转染后72 h后,CtBP1蛋白下调了57.80%。 CtBP1沉默后细胞生长受到抑制（P＜0.05）,转染后24、48、72、96 h生长抑制率分别为22.34%、52.15%、53.97%和54.77%;而对细胞周期分布无明显影响（P＞0.05）; 但CtBP1表达下调有促凋亡作用,与对照组相比,干扰组的细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。结论 CtBP1沉默能抑制HepG2细胞增殖,其机制是通过促凋亡来实现的。CtBP1能促进肿瘤生长和抑制凋亡,是潜在的肿瘤治疗靶点。     

Effects of RNA interference-mediated gene silencing of JMJD2A on human breast cancer cell line MDA-MB-231 in vitro

Previous data demonstrate that JMJD2A is a cancer-associated gene and may be involved in human breast cancer by demethylation of H3K9me3. The aim of this study was to investigate depressive effects on JMJD2A by transfection with JMJD2A-sepcific siRNA in human breast cancer cell line MDA-MB-231 and effects on cell proliferation, invasion and migration. JMJD2A-specific siRNA was chemically synthesised and transfected into human breast cancer cell line MDA-MB-231. Expression levels of JMJD2A were detected by quantitative real-time PCR and Western blot analysis. Cells proliferation was evaluated by using flow cytometric anlysis and MTT assay. The abilities of invasion and migration were evaluated by cell migration and invasion assay with Boyden chambers. The results showed that the transfection was successful and expression levels of JMJD2A mRNA and protein in siRNA group were both down-regulated. By MTT assay, the mean actual absorbance in siRNA group was significantly lower than that in blank control group (P < 0.05) and negative control group (P < 0.05). In addition, the percentage of cells in G0/G1 phase in siRNA group was significantly more than that in blank control group (P < 0.05) and negative control group (P < 0.05). Furthermore, by cell invasion and migration assay, the decreased number of migrated cells in siRNA group was observed (P < 0.05). These data imply that silencing JMJD2A gene could result in cell cycle change and proliferation inhibition, and lead to suppress tumor cell invasion and migration. It provides a new perspective in understanding the pleiotropic functions of JMJD2A and its contribution to human breast cancer.     

沉默I2PP2A基因对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨siRNA沉默I2PP2A基因表达对人胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的影响及其可能的分子机制。方法 脂质体转染法将靶向I2PP2A的短发夹状RNA（short hairpin RNA, shRNA）转染BGC-823细胞;Real-time RT-PCR和Western blot观察转染后胃癌BGC-823细胞I2PP2A mRNA和蛋白表达的变化;WST-1法和Transwell小室分别检测各组细胞增殖和细胞迁移能力的变化;最后采用蛋白质印迹分析法检测三组胃癌细胞中cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结果 转染I2PP2A siRNA后胃癌BGC-823细胞的I2PP2A mRNA及蛋白表达明显受抑制;I2PP2AmRNA和蛋白表达下调抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和迁移,并降低cyclin D1和MMP-9蛋白的表达。结论 I2PP2A表达下调介导的胃癌细胞增殖抑制和迁移降低可能与cyclin D1和MMP-9表达下调密切相关,I2PP2A可能成为胃癌治疗的新靶点之一。     

NFATc1可能通过调节RhoA/ROCK信号通路影响乳腺癌细胞的增殖与凋亡

目的:检测NFATc1在乳腺癌患者癌及癌旁组织的表达,并探讨其表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:收集于我院就诊的39例乳腺癌患者癌及癌旁组织,采用RT-PCR技术、免疫印迹及免疫组化染色技术检测NFATc1在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达状况。利用小干扰RNA（siRNA）构建NFATc1稳定敲除的MCF7及MDA-MB-231细胞系。利用CCK-8试剂盒及克隆形成实验检测NFATc1敲除对乳腺癌细胞增殖的影响,同时利用Ki67染色检测对照组和NFATc1敲除组乳腺癌细胞中Ki67阳性细胞的比例。此外,采用流式细胞学技术检测NFATc1基因敲除对乳腺癌细胞凋亡的影响,最后利用免疫印迹技术分析各组细胞RhoA/ROCK信号通路的表达状况。结果:NFATc1在乳腺癌患者癌组织中的mRNA及蛋白表达显著增高（P＜0.05）。流式细胞学结果表明NFATc1 siRNA干预能够显著促进两组乳腺癌细胞系的凋亡（P＜0.05）。此外,Ki67染色、CCK-8实验及克隆形成实验结果表明NFATc1敲除后两种乳腺癌细胞系的增殖能力明显下降（P＜0.05）。免疫印迹结果揭示,NFATc1敲除能够明显抑制癌细胞中RhoA/ROCK信号通路的激活（P＜0.05）。结论:NFATc1可能通过调控RhoA/ROCK信号通路进而促进乳腺癌细胞增殖,有望成为治疗乳腺癌的新靶点。     

LINC02163靶向miR-338-3p影响乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移

背景与目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)已被发现在乳腺癌中失调,与肿瘤恶性行为密切相关。本研究旨在探究LINC02163靶向miR-338-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:收集郑州人民医院2020年1月—2021年9月收治的9例乳腺癌患者的乳腺癌组织及距其2 cm外的癌旁组织样本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测组织样本、人正常乳腺上皮细胞系(MCF-10A)和乳腺癌细胞系(MCF-7、BT-20、MDA-MB-231、T47D)中LINC02163的表达。将MDA-MB-231分为control组、sh-NC组、sh-LINC02163组、sh-LINC02163+inhibitor-NC组和sh-LINC02163+miR-338-3p inhibitor组。采用MTT法、transwell实验及划痕实验分别检测MDA-MB-231细胞活力、侵袭及迁移能力。采用蛋白质印迹法(West...     

TGF-beta-induced upregulation of MMP-2 and MMP-9 depends on p38 MAPK, but not ERK signaling in MCF10A human breast epithelial cells

Transforming growth factor (TGF)-beta has been reported to exert growth inhibitory activity in normal epithelial cells whereas it induces cell proliferation and invasive phenotypes in advanced carcinomas. Our previous study showed that MCF10A, a spontaneously immortalized "normal" breast epithelial cell line, is resistant to TGF-beta-induced growth inhibition, suggesting that conversion of TGF-beta growth inhibitory signaling into an oncogenic pathway may occur at the early stage of tumor development/progression. To address this issue, we investigated the TGF-beta signaling pathway and its role in phenotypic transformation of MCF10A cells. TGF-beta treatment induced changes in the MCF10A cell morphology from cuboidal to an elongated spindle-like shape, accompanied with down-regulation of epithelial cell marker E-cadherin. TGF-beta treatment was sufficient to induce migrative and invasive phenotypes in these cells, an important phenotypic conversion during tumor progression. We also showed that TGF-beta treatment rapidly activated ERK-1/2 and p38 MAPK leading to upregulation of matrix metalloproteinase (MMP)-2 and MMP-9. Using chemical inhibitors and dominant negative mutants of MAPKs, we provide evidence that while both p38 MAPK and ERKs are required for TGF-beta-induced MCF10A cell migration and invasion, TGF-beta-induced MMP-2 and MMP-9 expression depends on p38 MAPK signaling, but is independent of ERK activity. This study demonstrates the roles of TGF-beta signaling pathways for induction of oncogenic signaling in preneoplastic human breast epithelial cells and will deepen our understanding of TGF-beta signaling in the progress of breast cancer.     

FRY蛋白在乳腺癌中的表达和临床意义及对癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响

目的:探讨FRY蛋白在乳腺癌中的表达和临床意义及对癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。方法:收集2017年6月-2018年6月于我院接受手术治疗的87例乳腺癌患者癌组织及其距离癌组织超过2.5 cm处的癌旁组织,另收集同期因良性乳腺肿瘤接受手术的34例患者的病变组织,免疫组化检测FRY蛋白的表达情况。将FRY的表达与乳腺癌的相关临床病理指标进行相关性分析。构建rAAV9-FRY过表达载体和对照rAAV9-FRY-NC,转染人乳腺癌细胞株MCF7,实验分为正常组（细胞常规培养,不进行干预）、对照组（细胞转染rAAV9-FRY-NC后,常规培养）、实验组（细胞转染rAAV9-FRY后,常规培养）;EdU标记实验、 吖啶橙（acridine orange,AO）/溴化乙锭（ethidium bromide,EB）双染法、Transwell小室、裸鼠肿瘤异种移植模型、Western blot检测各组MCF细胞的增殖、凋亡、迁移、在裸鼠体内增殖与肺转移的情况、FRY和神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1,NRP1）表达的水平。结果:免疫组化结果显示,FRY在癌旁组织中阳性率最高,FRY的阳性表达在良性肿瘤中明显高于恶性乳腺癌组织（P<0.05）。FRY的阳性表达在乳腺癌的不同分级具有统计学差异（P<0.05）,不同年龄以及TNM分期的FRY表达比较差异无统计学意义（P>0.05）;而肿瘤直径和浸润深度与FRY的阳性表达相关（P<0.05）。与正常组和对照组相比,实验组MCF7细胞的EdU阳性细胞比例、迁移能力、移植瘤的瘤体重量、瘤体肺脏转移的病灶比例及NRP1的表达明显下降;细胞凋亡率、FRY的表达明显上升;差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:FRY在乳腺癌组织中表达下调,在乳腺癌细胞中FRY特异性结合NRP1来抑制细胞的增殖、迁移,并促进其凋亡。     

萝卜硫素对小鼠乳腺癌4T1细胞上皮-间质转化、增殖和迁移的影响研究

背景与目的:组蛋白去乙酰化酶5(histone deacetylase 5,HDAC5)在乳腺癌组织中异常高表达,其与赖氨酸特异性去甲基化酶1(lysine specific demethylase,LSD1)协同促进乳腺癌细胞增殖和迁移.通过萝卜硫素(sulforaphane,SFN)下调HDAC5表达,观察其对小鼠...     

lncRNA SNHG14在甲状腺乳头状癌组织中的表达及对其癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:观察长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）核内小RNA宿主基因14（small nucleolar RNA host gene 14,SNHG14）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）组织中的表达情况及对PTC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:选取2019年10月至2020年01月期间于我院甲状腺外科行手术切除的37例患者的PTC组织及配对癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测SNHG14在PTC组织和癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征的相关性,同时检测SNHG14在PTC细胞TPC-1及人正常甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori3-1中的表达。采用si-RNA技术下调PTC细胞TPC-1中SNHG14的表达,通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞划痕实验和Transwell实验研究SNHG14在TPC-1细胞中的生物学功能。结果:SNHG14在PTC组织中的表达高于癌旁组织（P＜0.05）,并与淋巴结转移、病灶数有关（P均<0.05）,而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期无关（P均>0.05）,同时,SNHG14在TPC-1细胞中的表达高于Nthy-ori3-1细胞（P＜0.05）。下调SNHG14后,相较于空白对照组、阴性对照组,si-SNHG14组细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低（P均<0.05）。结论:SNHG14可能参与PTC的发生发展,有望成为PTC患者新的诊断标记物及治疗靶点。     

PPAPDC1A在体内外对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的:通过构建稳定过表达和干扰PPAPDC1A的乳腺癌细胞株,探讨PPAPDC1A对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。方法:利用CCK-8和Transwell实验检测PPAPDC1A稳定过表达和干扰后对乳腺癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验检测PPAPDC1A对乳腺癌细胞体内增殖和裸鼠致瘤性的作用。利用免疫组织化学染色法检测各组肿瘤组织中Ki-67的表达。通过裸鼠尾静脉注射实验检测PPAPDC1A对乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞体内转移能力的影响。结果:成功建立稳定过表达PPAPDC1A的乳腺癌MCF-7细胞株和稳定干扰PPAPDC1A的乳腺癌MDA-MB-231细胞株;CCK-8和Transwell实验结果显示,与MCF-7和MCF-7-Vector细胞株相比,MCF-7-PPAPDC1A细胞株的生长速度显著增快,穿膜细胞数量多（P＜0.05）;与此相反,MDA-MB-231-shPPAPDC1A组细胞的生长速度和穿膜细胞数明显少于MDA-MB-231-shNC和MDA-MB-231 细胞株（P＜0.05）。动物实验结果显示,与MCF-7-Vector组相比,MCF-7-PPAPDC1A组的肿瘤生长速度较快,肿瘤的体积较大,Ki-67的阳性率高,肺转移灶的数目增多（P＜0.05）;与此相反,与MDA-MB-231-shNC组相比MDA-MB-231-shPPAPDC1A组的肿瘤生长速度较慢,肿瘤的体积较小,Ki-67的阳性率低,肺转移灶的数目减少（P＜0.05）。结论:PPAPDC1A对乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移有促进作用。