法舒地尔对肝纤维化大鼠肝脏缺血再灌注损伤的有效剂量

目的探讨法舒地尔对肝纤维化大鼠肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)的影响及其有效剂量。方法以SD大鼠构建肝纤维化模型,80只大鼠分为假手术组、HIRI组、法舒地尔1组和法舒地尔2组,每组20只。开腹显露肝蒂,假手术组和HIRI组经腹腔注射生理盐水5 ml/kg,法舒地尔1组和法舒地尔2组分别注射20μg/kg和80μg/kg法舒地尔;HIRI组、法舒地尔1组和法舒地尔2组30 min后阻断肝门20 min,假手术组不阻断肝门,解除阻断并关腹。术毕4 h取各组6只大鼠血液和肝组织标本,检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和肿瘤坏死因子(TNF)-α。肝组织苏木素-伊红(HE)染色行组织病理检查。记录各组余14只大鼠96 h生存情况,统计生存率。结果与假手术组相比,HIRI组、法舒地尔1组和法舒地尔2组血清AST和ALT水平显著上升(P0. 05);法舒地尔1组和法舒地尔2组血清AST和ALT水平显著低于HIRI组(P0. 05),且法舒地尔2组显著低于法舒地尔1组(P0. 05)。与假手术组相比,HIRI组、法舒地尔1组和法舒地尔2组肝组织MDA含量显著上升,SOD含量显著下降(P0. 05);法舒地尔1组和法舒地尔2组肝组织MDA含量显著低于HIRI组(P0. 05),SOD含量显著高于HIRI组(P0. 05),且法舒地尔2组和法舒地尔1组比较差异有统计学意义(P0. 05)。与假手术组相比,HIRI组、法舒地尔1组和法舒地尔2组血清TNF-α水平显著上升(P0. 05);法舒地尔1组和法舒地尔2组血清TNF-α水平均显著低于HIRI组(P0. 05),且法舒地尔2组显著低于法舒地尔1组(P0. 05)。假手术组、HIRI组、法舒地尔1组和法舒地尔2组96 h生存率分别为78. 57%、28. 57%、50. 00%和64. 29%。法舒地尔1组和法舒地尔2组与HIRI组总体存活时间差异有统计学意义(P0. 05)。结论法舒地尔对肝纤维化大鼠HIRI后肝脏具有保护作用,且呈剂量依赖形式,可能通过提高机体的抗氧化能力,降低炎症细胞因子水平和脂质过氧化水平而发挥作用。     

过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

丹参对大鼠肝缺血再灌注损伤PI3K-AKT信号传导通路的影响

目的研究丹参注射液预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)中PI3K-AKT信号传导通路的影响。方法健康雄性SD大鼠80只,随机分为4组,即假手术组、缺血再灌注组(IR组)、丹参组(SI组)、丹参+阻断剂组(LY组),每组分别按再灌注时间(1、3、6、24 h)分为4个时相,每组各个时相均为5只。制作70%肝缺血再灌注模型,测血清ALT、AST及LDH水平;免疫印迹法测肝组织中PI3K、Akt及p-Akt(Ser308)蛋白的表达情况;TUNEL法观察各组的肝细胞凋亡;以及光镜下观察大鼠肝脏形态学变化。结果 ALT、AST、LDH含量:IR、SI、LY组的值明显高于假手术组(P<0.05);SI组、LY组各个时相的值较IR组均下降(P<0.05);与LY组比较,SI组各个时相的值均下降(P<0.05)。免疫印迹检测:各组PI3K、AKT的表达无显著差异(P>0.05);而在p-Akt的表达中,假手术、IR、LY组组间无显著差异(P>0.05),SI组各时相的表达都高于其余各组,且均有显著差异(P<0.05)。凋亡检测:IR组肝细胞有典型的凋亡特征,SI、LY及假手术组均优于IR组(P<0.05);其中SI组又优于LY组(P<0.05);假手术组正常,优于其余各组。在光镜下观察肝形态学变化,可见IR组损伤最为明显,SI组和LY组较IR组轻,其中SI组更轻,而假手术组肝组织形态正常。结论肝脏缺血再灌注造成了肝细胞显著损伤,丹参注射液预处理通过PI3K-Akt信号传导通路的调控发挥了对肝脏的保护作用。     

低铅对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型肝功能和血脂的影响

目的探讨低铅高脂饲料摄入对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型肝功能和血脂的影响,并从脂肪酸合成途径研究肝脏脂肪酸合成相关酶固醇调节原件结合蛋白(SREBP-1c)、脂肪酸合酶(FAS)和乙酰CoA羧化酶(ACCα)表达特点。方法清洁级雄性SD大鼠40只,适应性喂养14 d后随机分为正常组(A组)、低铅染毒组(B组)、高脂饲料组(C组)和低铅染毒高脂饲料组(D组),每组各10只,相应饲料喂养8周后处死大鼠,收集血清和肝脏检测血铅、肝功能、血脂、肝脏病理学,采用Western Blot和RTPCR检测脂肪酸合成相关蛋白酶SREBP-1c、FAS和ACCα蛋白及mRNA的表达特点。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法。结果肝脏组织病理学可见,A组和B组切片表面光滑,细胞核分布均匀且大小均一,没有明显脂肪细胞浸润和炎症反应,而C组和D组则出现明显的脂肪浸润,且有一定的炎症浸润,特别是D组,脂肪空泡更大。大鼠血铅和肝铅含量,多组间比较差异均有统计学意义(F值分别为37. 792、21. 458,P值均0. 001);相较于A组,B组和D组血铅和肝铅明显升高(P值均0. 05);相较于B组和C组,D组血铅和肝铅均明显升高(P值均0. 05)。大鼠肝功能指标AST、ALT、HDL-C、LDL-C,4组间比较差异均有统计学意义(F值分别为35. 791、24. 422、37. 287、42. 371,P值均0. 001);相较于A组,B、C和D 3组大鼠AST、ALT、HDL-C、LDL-C均升高(P值均0. 05),相较于B组,C组和D组4个指标明显升高(P值均0. 05);相较于C组,D组4个指标明显升高(P值均0. 05)。SREBP-1c、FAS和ACCα蛋白及mRNA表达特点基本一致,4组间比较差异均有统计学意义(蛋白:F值分别为21. 864、22. 358、57. 761,P值均0. 001; mRNA:F值分别为34. 652、22. 964、42. 384,P值均0. 001);相较于A组和B组,C组以及D组肝脏组织中SREBP-1c、FAS和ACCα蛋白及mRNA表达均明显升高(P值均0. 05),D组均明显高于C组(P值均0. 05))。结论低铅染毒可加重非酒精性脂肪性肝病大鼠模型肝功能和血脂异常,其原因可能与高脂和铅的长期摄入增加SREBP-1c、FAS和ACCα表达有关。     

HCV感染者直接抗病毒药物治疗前后CD8+T淋巴细胞衰老和功能相关指标的变化

目的观察HCV感染者DAA治疗前后CD8+T淋巴细胞衰老、功能相关指标变化,并探讨其临床意义。方法选取2017年1月-2018年12月于空军军医大学第二附属医院就诊的HCV感染者26例,患者接受索磷布韦联合达卡他韦片治疗。并纳入治愈者22例,健康对照者20例。采用流式细胞仪检测CD8+T淋巴细胞上SIRT1、CD57、PD-1、Tim-3等相关分子表达,并采用RT-PCR方法检测p21、p53表达水平,Luminex液相悬浮芯片检测样本外周血衰老相关分泌表型。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 SIRT1、PD-1、Tim-3在3组间表达差异均有统计学意义(F值分别为6. 712、4. 202、4. 575,P值均0. 05)。与健康对照组相比,HCV组CD8+T细胞上SIRT1、PD-1、Tim-3表达水平明显上升(P值均0. 05),HCV治愈组Tim-3表达水平明显上升(P 0. 05),HCV治愈组SIRT1、PD-1表达水平无明显变化(P值均 0. 05)。p53、p21在3组间表达差异有统计学意义(F值分别为11. 144、6. 594,P值均0. 05)。与健康对照组相比,HCV治愈组和HCV组p53表达水平明显下降(P值均0. 001),p21表达水平明显下降(P值均0. 05),HCV组和HCV治愈组比较差异均无统计学意义(P值均 0. 05)。IL-6、TNFα在3组间差异均有统计学意义(F值分别为3. 920、6. 337,P值均0. 05),与健康对照组相比,HCV组外周血的IL-6和TNFα表达水平明显升高(P值均0. 05),HCV治愈组IL-6和TNFα表达水平无明显变化(P值均 0. 05),与HCV组相比,HCV治愈组TNFα表达水平明显下降(P=0. 007)。结论 HCV感染者CD8+T淋巴细胞衰老,经DAA治疗后衰老缓解,CD8+T淋巴细胞功能部分恢复。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨肝康片对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝功能的保护机制

目的基于PI3K/Akt信号通路探讨肝康片对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝功能的保护机制。方法选取60只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为空白对照组、模型组、低剂量肝康片组和高剂量肝康片组,每组各15只。除空白组外各组大鼠采用四氯化碳制成肝纤维化模型;低剂量肝康片组和高剂量肝康片组分别使用8. 2 g/kg和16. 4 g/kg的肝康片灌胃处理,空白对照组和模型组使用等量生理盐水灌胃处理,共处理8 d。使用全自动生化仪检测各组大鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBiL)水平;使用TUNEL染色法分析大鼠肝细胞凋亡情况;使用流式细胞仪检测大鼠肝脏细胞凋亡情况;使用Western blot检测大鼠肝组织PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达情况。结果相比空白对照组,模型组大鼠ALT、AST、TBiL含量水平,肝细胞凋亡指数、肝细胞凋亡率均显著升高; ALB水平、PI3K、p-Akt、m TOR蛋白相对表达量均显著降低(P 0. 05),Akt蛋白相对表达量无显著改变(P 0. 05)。相比模型组,低剂量肝康片组和高剂量肝康片组大鼠ALT、AST、TBiL、肝细胞凋亡指数、肝细胞凋亡率均显著降低,且高剂量组低于低剂量组(P 0. 05); ALB含量水平、PI3K、p-Akt、m TOR蛋白相对表达量均明显升高,且高剂量组高于低剂量肝康片组(P 0. 05)。结论肝康片可以通过激活PI3K/Akt信号通路实现抑制下游相关凋亡基因的表达,同时缓解了肝脏内的脂质过氧化反应,保护四氯化碳致肝纤维化大鼠肝脏。     

舒芬太尼预处理对脑死亡大鼠肝细胞凋亡的影响

目的:观察舒芬太尼预处理对脑死亡大鼠导致的肝细胞凋亡的影响.方法:将18只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脑死亡组(BD组)、舒芬太尼预处理组(SUF组).采用缓慢颅内加压法建立大鼠脑死亡模型,诱导脑死亡前1 h皮下给予舒芬太尼10冚g/kg.利用免疫组织化学及Western blot检测细胞色素c(cytochrome c,Cyt-c)及Caspase3的表达,并且利用TUNEL检测肝细胞的凋亡.结果:通过实验发现:BD组与Sham组相比,Cyt-c与Caspase3表达明显增加,肝细胞凋亡增加,差异具有统计学意义(P0.05);SUF组与BD组相比,Cyt-c与Caspase3表达明显降低,肝细胞凋亡减少(P0.05).结论:舒芬太尼的预处理能显著减轻脑死亡大鼠肝细胞的凋亡.     

红景天苷对心肌缺血-再灌注大鼠心肌梗死面积及细胞凋亡的影响

目的观察红景天苷对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌梗死面积及心肌细胞凋亡的影响,探讨大株红景天抗MIRI的作用。方法将SD大鼠按照随机数字表法分为6组,每组6只:假手术组(Sham)、心肌缺血-再灌注模型组(I/R)、红景天苷预防组(红景天苷+缺血再灌注,S+I/R)、红景天苷治疗组(缺血再灌注+红景天苷,I/R+S)、红景天苷预防组+磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002组(S+I/R+LY组)、红景天苷治疗组+PI3K特异性抑制剂LY294002组(I/R+S+LY组)。红景天苷预防组和预防组+LY组造模前连续给药3 d;红景天苷治疗组和治疗组+LY组再灌注即刻加予红景天苷;Sham组和I/R组均给予等量生理盐水腹腔注射;预防+LY组和治疗+LY组于冠脉左前降支(LAD)结扎前30 min腹腔注射PI3K特异性抑制剂LY294002。心肌缺血30 min再灌注24 h后,迅速摘取大鼠心脏留取心室,运用Evans’blue及TTC法双重染色,确定心肌梗死区和缺血区面积;运用末端标记法(TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡并计算心肌细胞凋亡指数。结果与I/R组比较,红景天苷预防组和治疗组均能显著缩小MIRI大鼠的心肌梗死面积(P0.05),TUNEL法检测阳性细胞核显著减少,差异有统计学意义(P0.05);与预防组和治疗组比较,预防+LY组及治疗+LY组心肌梗死面积显著扩大,细胞凋亡指数显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论红景天苷能有效减少MIRI大鼠心肌梗死面积和心肌细胞凋亡指数。     

促红细胞生成素对脂肪肝大鼠模型肝脏缺血再灌注损伤凋亡基因bcl-2、bax mRNA表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对脂肪肝大鼠模型肝脏缺血再灌注损伤凋亡基因bcl-2、bax mRNA表达的影响。方法成年雄性SD大鼠100只,高脂饮食饲料喂养12周。造模成功后,软件法随机将脂肪肝大鼠平均分为5组,每组18只:假手术组(SHAM)组、缺血再灌注(IR)组、IR+EPO低剂量组(EPO-1组)、IR+EPO中剂量组(EPO-2组)、IR+EPO高剂量组(EPO-3组)。IR模型通过术中完全阻断肝中叶及左肝叶血流建立,造成70%大鼠肝脏缺血,缺血时间控制在80 min。各组于缺血80 min再灌注1、3、6 h三时相处死,RT-PCR法检测并比较肝组织中bcl-2、bax mRNA的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法。结果与IR组相比,EPO-1、EPO-2、EPO-3组肝脏中bcl-2 mRNA表达水平在各时相(1、3、6 h)的表达水平均明显升高(P值均0. 05); bax mRNA的表达水平均明显下降(P值均0. 05)。SHAM组、EPO组肝组织中bcl-2/bax mRNA的比值在各时相(1、3、6 h)均显著大于IR组(P值均0. 05)。结论 EPO对脂肪肝大鼠肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用。其可能是通过促进抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达和抑制促凋亡基因bax mRNA的表达实现。高剂量EPO的抗细胞凋亡作用效果优于中低剂量。     

氟西汀对慢性脑缺血大鼠工作记忆损伤的保护作用及其机制的研究

目的探讨氟西汀对大鼠慢性脑缺血所致工作记忆损伤的改善作用及其作用机制。方法选用Sprague Dawley雄性大鼠44只,采用双侧颈总动脉结扎术建立慢性脑缺血模型,将其分为假手术组(10只)、缺血模型组(12只)、缺血+氟西汀组(12只)、假手术+氟西汀组(10只)。氟西汀在缺血1周后经灌胃给药,持续给药4周。假手术组与缺血模型组给予相同体积的等渗盐水。采用改良的水迷宫实验检测各组大鼠的工作记忆表现,该实验持续4 d;采用免疫印迹法检测各组大鼠前额皮质中神经元标记物神经元核、星形胶质细胞标记物S-100β、G蛋白门控内向整流钾离子(GirK)通道蛋白(GirK1、GirK2、GirK3)以及分拣连接蛋白27(SNX27)的表达水平并进行组间比较。结果 (1) 4组大鼠游泳速度组间差异无统计学意义(P 0. 05)。在训练试验中,4组大鼠逃逸潜伏期及游泳距离的组间差异均无统计学意义(均P 0. 05)。在记忆保持试验中,与假手术组同时点比较,缺血模型组大鼠在实验第2、3、4天逃逸潜伏期明显延长[第2天:(48. 2±6. 3) s比(27. 4±4. 0) s,第3天:(53. 9±6. 4) s比(29. 4±6. 3) s,第4天:(41. 4±4. 9) s比(23. 8±3. 7) s;均P 0. 05];与缺血模型组同时点比较,缺血+氟西汀组大鼠在实验第3、4天逃逸潜伏期延长得到逆转[分别为(31. 0±6. 6)、(26. 2±3. 7) s,均P 0. 05]。在记忆保持试验中,与假手术组同时点比较,缺血模型组大鼠在实验第2、3、4天游泳距离明显增加[第2天:(553±76) cm比(313±51) cm,第3天:(619±81) cm比(329±65) cm,第4天:(433±48) cm比(282±47) cm;均P 0. 05];与缺血模型组同时点比较,缺血+氟西汀组大鼠在实验第2、3、4天游泳距离的增加得到逆转[分别为(373±54)、(321±70)、(279±44) cm,均P 0. 05]。(2) 4组大鼠神经元标记物神经元核抗体及星形胶质细胞标记物S-100β的相对灰度值差异均无统计学意义(均P 0. 05)。(3) 4组大鼠GirK1膜蛋白表达的差异无统计学意义(P 0. 05),假手术组为参照,缺血模型组、缺血+氟西汀组GirK2相对灰度值分别为(1. 27±0. 07)、(1. 06±0. 06),缺血模型组、缺血+氟西汀组GirK3相对灰度值分别为(1. 23±0. 08)、(1. 00±0. 06),缺血模型组GirK2及GirK3膜表达均高于假手术组,与缺血模型组比较,缺血+氟西汀组GirK2及GirK3膜表达上调均受到抑制,组间差异均有统计学意义(均P 0. 05)。(4)以假手术组SNX27相对灰度值为1,缺血模型组、缺血+氟西汀组、假手术+氟西汀组大鼠SNX27相对灰度值分别为0. 78±0. 09、0. 97±0. 04、0. 94±0. 05,缺血模型组大鼠SNX27的表达低于假手术组,给予氟西汀处理后,SNX27表达下调被逆转,组间的差异均有统计学意义(均P 0. 05)。结论氟西汀可改善大鼠慢性脑缺血所致的工作记忆损伤,其机制可能是作用于SNX27,从而抑制缺血后前额皮质中GirK2及GirK3的膜表达上调。     

支链siRNA多靶点对乳腺癌4T1细胞凋亡作用的影响

目的研究支链siRNA多靶点对乳腺癌4T1细胞凋亡作用的影响。方法采用MTT法检测支链siRNA多靶点在不同时间段(24 h、48 h及72 h)对乳腺癌细胞抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果细胞增殖活性:在24 h,Mixture组与正常对照组比较差异有统计学意义(P0. 05);与其余实验组比较差异无统计学意义(均P0. 05);在48 h,Mixture组分别与正常对照组及阴性对照组比较差异有统计学意义(P0. 05);与siRNA-STAT6组、siRNA-STAT5a及siRNA-STAT5b组比较差异有统计学意义(P0. 05); siRNA-STAT3组与正常对照组比较差异有统计学意义(P0. 05);在72 h,Mixture与正常对照组比较差异有统计学意义(P0. 05),与其余各实验组比较差异无统计学意义(均P0. 05);流式细胞仪检测不同组别细胞凋亡率,Mixture组细胞凋亡率明显高于其他组,差异有统计学意义(P0. 05)。结论支链siRNA多靶点可能通过抑制乳腺癌4T1细胞的增殖诱导细胞凋亡。     

调肝理脾法对大鼠非酒精性脂肪性肝病脂质代谢和自噬相关蛋白-1表达的影响

目的:观察调肝理脾法(MRLS)对实验性大鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的改善作用及对大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin1表达的影响,探讨调肝理脾法治疗非酒精性脂肪肝病的可能作用机制。方法:SD雄性大鼠(清洁级) 30只,随机分为对照组、模型组、调肝理脾组(各10只)。模型组、调肝理脾组大鼠皆予以高脂饮食共12周。调肝理脾法组大鼠造模同时给予调肝理脾方2ml/100g/d灌胃(相当于成人剂量的5倍),对照组大鼠给予正常饮食(普通饲料)及等量生理盐水灌胃。第12周末处死动物后,分别采集大鼠血液、肝脏标本,检测各组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,通过HE染色观察肝脏脂肪变性情况,免疫组化法检测Beclin1在肝组织中表达的变化。结果:(1)HE染色提示模型组大鼠肝细胞脂肪变性程度和炎症活动度计分与正常对照组相比,差异有统计学意义(P 0. 001);调肝理脾法组脂肪变性程度和炎症活动度计分明显减轻,与模型组相比差异有统计学意义(P 0. 01)。(2)与对照组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C的水平均升高,差异有统计学意义(P 0.001)。与模型组比较,除HDL-C外,调肝理脾法组大鼠血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C的水平均降低,差异有统计学意义(P 0.05)。(3)与对照组比较,模型组大鼠肝组织Beclin1蛋白表达水平略增高,差异无统计学意义(χ2=1. 250,P 0. 05);与模型组比较,调肝理脾法组肝组织Beclin1蛋白表达水平明显增高,差异有统计学意义(χ2=6. 121,P 0. 05)。结论:调肝理脾法对实验性大鼠非酒精性脂肪肝病的肝功能、血脂等指标有很好的改善作用,其作用机制可能与升高大鼠肝组织内的自噬水平有关。     

同种异体骨髓间充质干细胞移植对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的影响

目的:观察同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的修复作用并对其可能的治疗机制进行探讨.方法:将健康雌性清洁级SD大鼠的股骨骨髓进行分离、培养、鉴定获得BMSCs;选取60只SD大鼠建立大鼠HIRI模型.动物模型建立后,将90只SD大鼠随机分为BMSCs移植组(n=30,予以尾静脉注射BMSC悬液1 mL,1.0×10~7/mL),HIRI组(n=30,予以尾静脉注射L-DMEM 1 mL),另设空白对照组(n=30,予以尾静脉注射生理盐水1 mL).分别于移植后的1、2、3 wk于各组随机选取5只大鼠取血检测丙氨酸转氨酶(alanine transanminase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-18(interleukin-18,IL-18)水平;移植后2 wk对肝组织行HE染色,观察移植后肝组织的形态学变化;利用RT-PCR法及Western b l o t法检测肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)及α-平滑肌蛋白(alphasooth muscle actin,α-SMA)在肝组织中的表达水平.结果:移植后1 wk,BMSCs移植组、HIRI组的血清ALT、AST、MDA、TNF-α和IL-18水平明显高于对照组,SOD活性明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05);移植后2、3 wk,BMSCs移植组ALT、AST、MDA、TNF-α和IL-18水平与HIRI组比较明显下调,SOD活性明显升高(均P0.05),但与对照组相比SOD活性仍偏低(P0.05).HE染色后发现,BMSCs移植组大鼠肝细胞变性、坏死及纤维化程度较HIRI组均有明显减轻(P0.05).RT-PCR法检测得知,与HIRI组比较,BMSCs移植组中HGF基因表达水平明显升高,而α-SMA的基因表达水平明显下降(均P0.05).Western blot法检测得知,与HIRI组比较,BMSCs移植组中HGF蛋白表达水平明显升高,而α-SMA的蛋白表达水平明显下降(均P0.05).结论:同种异体BMSCs移植能有效减轻大鼠HIRI,其机制可能是通过降低血清TNF-α、IL-18水平和调节肝脏中HGF及α-SMA的表达水平.     

脑信号蛋白3A及其受体神经菌毛素-1在慢性肝性脑病大鼠模型中的表达及意义

目的探究肝性脑病(HE)大鼠大脑前额叶皮层、海马CA1、CA3、DG区中脑信号蛋白3A(Sema3A)及受体神经菌毛素(NRP-1)的表达变化及可能的意义。方法 SD大鼠40只随机分为4组:对照组、HE 1 d、15 d、30 d组,每组各10只。胆管结扎并辅以乙酸铵灌胃的方法制备慢性HE(C型)大鼠模型,进行行为学、神经病学改变的检测; ELISA检测大鼠血清中血氨及其他生化指标; HE染色观察大鼠肝脏和脑组织形态学变化; Real-time PCR检测各脑区Sema3A、NRP-1 mRNA的表达;免疫组化、Western Blot分别检测大脑皮层、海马CA1、CA3、DG区中Sema3A及NRP-1蛋白的表达变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 4组间神经反射等级、血氨、HE等级均有统计学差异(F值分别为76. 39、417. 07、71. 56,P值均0. 001),与对照组比较,HE 1 d、15 d、30 d组神经反射得分、血氨、HE等级均明显升高(P值均0. 05)。4组间TBA、Alb、TBil、AST、ALT、ALP比较差异均有统计学意义(F值分别为1022. 61、171. 56、685. 18、421. 01、675. 20、2405. 04,P值均0. 001),与对照组相比,HE 1 d、15 d、30 d组Alb水平明显降低(P 0. 05),其余指标明显升高(P值均0. 05)。病理学结果显示,与对照组相比,造模后大鼠肝脏出现不同程度的变性坏死,炎细胞浸润,大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区体等部位观察到神经细胞不同程度的肿胀、破裂、排列紊乱等病理征象。4组间Sema3A、NRP-1 mRNA比较差异均有统计学意义(Sema3A mRNA:F值分别为273. 83、158. 84、103. 59、128. 90,P值均0. 001; mRNA:F值分别为88. 78、173. 02、156. 44、289. 09,P值均0. 001);与对照组比较,HE 1 d、15 d、30 d组大脑前额叶皮层、海马CA1、CA3、DG区中Sema3A、NRP-1 mRNA相对表达量均较高(P值均0. 05)。建模后Sema3A、NRP-1蛋白表达水平上调,免疫组化显示,HE组大鼠前额叶皮层和海马CA1、CA3、DG区Sema3A及NRP-1呈阳性染色。Western Blot显示,4组间大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区Sema3A、NRP-1蛋白表达差异均有统计学意义(Sema3A:F值分别为835. 14、774. 16、282. 60、856. 29,P值均0. 001; NRP-1:F值分别为876. 59、472. 48、402. 36、207. 47,P值均0. 001);与对照组相比较,HE 1 d、15 d、30 d组大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区内Sema3A、NRP-1蛋白表达均明显升高(P值均0. 05)。结论 Sema3/NRP-1在慢性HE大鼠脑组织内表达上调,参与HE神经损伤的病理生理过程。     

异丙肾上腺素对心肌缺血大鼠氧化应激反应及caspase-9的影响

目的分析心肌缺血大鼠经异丙肾上腺素(ISO)预处理后对其氧化应激反应及caspase-9表达的影响。方法 40只SD大鼠,根据随机数表法分为假手术(Sham)组、缺血再灌注(I/R)组、ISO组及β2-肾上腺素能受体拮抗剂(ICI)组,每组10只。分别于大鼠左冠状动脉前降支(LAD)血流中断30 min后,给予再灌注120 min构建心肌I/R大鼠模型。检测并对比各组大鼠心肌组织病理形态、磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)蛋白表达、血清氧化应激反应相关指标,包括丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);同时检测并对比各组大鼠心肌凋亡相关成分caspase-9表达。结果 Sham组心肌纤维结构清晰、整齐排列,胞质无水肿,间质正常;I/R组心肌纤维发生变性、中断,可见细胞间质水肿;ISO组可见心肌纤维变性、排列紊乱,但程度较I/R组相对轻微,间质情况好;ICI组心肌纤维较ISO组变性严重且错乱排列,有大量核溶解与破裂,间质明显加宽,有大量炎性细胞侵入。I/R组心肌P-Akt蛋白表达较Sham组明显升高,ISO组心肌P-Akt蛋白表达较I/R组明显升高,ICI组心肌P-Akt表达较ISO组明显降低,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌细胞凋亡比例显著升高;与I/R组比较,ISO组凋亡比例明显降低;ICI组凋亡比例较ISO组升高;组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。I/R组血清SOD较Sham组明显降低,MDA表达较Sham组明显升高;ISO组血清SOD表达较I/R组明显升高,MDA表达明显降低;ICI组血清SOD表达较ISO组明显降低,MDA表达明显升高;组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌纤维内caspase-9呈高表达;与I/R组比较,ISO组心肌纤维内caspase-9呈低表达;与ISO组比较,ICI组心肌纤维内caspase-9呈高表达;组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 ISO对心肌缺血大鼠心肌I/R损伤有极佳的保护之效,可考虑将其作为心肌缺血预处理的主要用药。     

兔骨关节炎软骨细胞中bcl-2、bax mRNA及蛋白表达的意义

目的探讨bcl-2、bax基因在兔骨关节炎软骨细胞凋亡中的意义。方法新西兰白兔12只,随机分为模型组,按照石膏外固定兔后膝关节造模,以及空白对照组,6周后处死动物取得膝关节软骨。采用免疫组织化学和原位杂交检测bcl-2、bax mRNA及蛋白表达。结果模型组软骨细胞bcl-2、bax mRNA表达明显多于对照组(P＜0．05)。免疫组织化学模型组软骨细胞bcl-2、bax阳性表达灰度值明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．05)；阳性细胞比例明显提高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．01)。模型组bcl-2/bax阳性细胞率比值比对照组低,差异有统计学意义(P＜0．05)。结论bcl-2和bax共同参与了兔骨关节炎模型软骨细胞凋亡的调节,结果导致软骨细胞凋亡加快。     

血清胃蛋白酶原在慢性胃部病变中变化的临床研究

目的分析不同胃部病变发生情况下血清胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)表达水平,为消化系统疾病的临床诊断提供一定帮助。方法收集2015年7月至2017年4月武汉大学人民医院住院患者372例,包括312例胃部病变患者和60例无胃部病变者(对照组)。根据胃部病变不同可分为幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H. pylori)感染、胃炎、消化性溃疡、胃癌前病变、胃癌,其中胃炎包括浅表性胃炎组、糜烂性胃炎组、萎缩性胃炎组;消化性溃疡包括胃溃疡组、十二指肠球部溃疡组、复合溃疡组;胃癌前病变包括胃息肉组及残胃吻合口炎组。采用全自动生化分析仪检验血清PG(PGⅠ和PGⅡ)表达情况,并求PGⅠ与PGⅡ的比值(PGR),采用t检验及方差分析对各组的PG水平差异进行分析比较。结果 H. pylori感染组与对照组比较,PGⅠ、PGⅡ水平及PGR值明显升高,差异有统计学意义(P 0. 05)。在胃炎各组中,浅表性胃炎组PGⅠ、PGⅡ水平及PGR值与对照组相比,差异无统计学意义(P 0. 05);糜烂性胃炎组与对照组比较,PGⅠ水平、PGR值明显升高,差异有统计学意义(P 0. 05),PGⅡ水平升高,但差异无统计学意义(P 0. 05);萎缩性胃炎组PGⅠ、PGⅡ水平及PGR值与对照组相比均明显下降(P 0. 05)。在消化性溃疡各组中,胃溃疡组患者与对照组进行比较,PGⅠ、PGⅡ水平均明显升高(P 0. 05),PGR值变化不大差异无统计学意义(P 0. 05);与对照组比较,十二指肠球部溃疡组及复合溃疡组PGⅠ、PGⅡ水平及PGR值明显升高(P 0. 05)。在癌前病变中,胃息肉组与对照组相比,PGⅠ水平及PGR值均显著升高(P 0. 05),PGⅡ水平也升高,但差异无统计学意义(P 0. 05);残胃吻合口炎组PGⅠ、PGⅡ水平和PGR值与对照组相比均明显下降(P 0. 05)。胃癌组与对照组比较,PGⅠ水平、PGR值均明显下降(P 0. 05),PGⅡ水平升高,但差异无统计学意义(P 0. 05)。结论血清PGⅠ、PGⅡ水平和PGR值的联合运用可有助于慢性胃部疾病的筛查、诊断及鉴别,具有较为显著的临床意义。     

5-脂氧合酶激活蛋白选择性抑制剂MK886对酒精性肝病小鼠模型的影响

目的旨在探究5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)的选择性抑制剂MK886对小鼠酒精性肝病(ALD)的影响。方法 48只雄性昆明种小鼠随机分为4组,ALD组、ALD/MK886组给予Tipoe-Nanji酒精液体饲料,6周后酒精灌胃1次形成慢加急性ALD模型,对照组给予不含酒精的对照饲料,正常组给予普通饲料。小鼠开始摄入酒精2 d后,ALD/MK886组小鼠腹腔开始注射MK886(0. 01 mg/10 g,1次/d)。ALD组及ALD/MK886组酒精灌胃后9 h处死小鼠。检测血清中AST、ALT、乳酸脱氢酶(LDH)、TG及肝组织中TG和丙二醛(MDA)水平,肝组织行HE染色并进行病理评分,Western Blot法测定肝组织/Thp-1细胞中FLAP和5-脂氧合酶(5-LO)的表达水平,流式细胞法检测Thp-1细胞的凋亡水平。多组间比较采用单因素方差分析,方差齐时用LSD-t检验进行两两比较,方差不齐时采用Tamhane’T2进行检验。结果 ALD组、ALD/MK886组在造模第1周体质量减轻,随后逐渐增加,至造模结束时ALD组小鼠体质量和肝指数明显低于正常组和对照组(P值均0. 05),ALD/MK886组小鼠体质量和肝指数明显高于ALD组(P值均0. 05)。ALD组小鼠血清AST、ALT、LDH、TG及肝组织TG、MDA较正常组和对照组显著升高(P值均0. 05);与ALD组比较,ALD/MK886组小鼠相关血清及肝组织生化指标明显降低(P值均0. 05)。ALD组小鼠肝组织脂肪变评分明显高于正常组和对照组(P值均0. 05),与ALD组比较,ALD/MK886组小鼠肝组织脂肪变评分明显降低(P 0. 05)。ALD组肝脏5-LO、FLAP表达较正常组和对照组显著增加(P值均0. 05),ALD/MK886组较ALD组明显降低(P 0. 05)。脂多糖(LPS)上调Thp-1细胞FLAP和5-LO的表达,MK886减轻了LPS的作用(P值均0. 05)。MK886促进Thp-1细胞凋亡,LPS减轻MK886促进细胞凋亡的作用(P值均0. 01)。结论 MK886可通过抑制5-LO的表达从而诱发Kupffer细胞凋亡,发挥对小鼠ALD的治疗作用。     

大鼠肝纤维化肝组织中抗衰老标志蛋白和抗增殖蛋白的表达研究

目的 研究猪血清所致肝纤维化大鼠肝组织中抗衰老标志蛋白(RGN)、抗增殖蛋白(PHB)表达及谷胱甘肽复方注射液(CGII)对其的干预. 方法 健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常组、造模组.正常组予等渗盐水腹腔注射0.5 ml/只,造模组予腹腔注射无菌猪血清0.5ml/只,每周两次,连续8周,随机处死造模大鼠4只行病理学检查,验证造模成功后,停止注射猪血清,剩余造模组大鼠随机分为纤维化组和CGII干预组.CGII干预组大鼠给予浓度60 mg/mlCGII肌肉注射;正常组和纤维化组均予等单位体质量容积的等渗盐水肌肉注射,每日一次,连续6周.取大鼠肝组织行HE及Masson染色.RT-PCR和免疫组织化学检测肝组织中RGN、PHB mRNA及蛋白质表达. 计量资料采用单因素方差分析,两两比较采用LDS检验,病理学半定量结果采用秩和检验分析. 结果 纤维化组大鼠肝组织RGN、PHB mRNA相对表达量分别为75.99±12.8、64.54±12.35较正常组的182.09±17.84、192.20±17.12明显减低,F值分别为105.646、347.232,P值均＜0.001,差异均有统计学意义;RGN、PHB相对蛋白表达量分别为10.85±2.81、14.5±2.75较正常组的61.08±7.10、55.86±4.23表达均明显降低,F值分别为226.343、525.889,P值均＜ 0.001,差异均有统计学意义.CGII干预后大鼠肝纤维化程度较纤维化组明显减轻(P值均＜ 0.001),肝组织RGN、PHB的mRNA和蛋白表达均较纤维化组明显增高,差异有统计学意义(P值均＜ 0.001).结论 RGN及PHB在猪血清所致大鼠肝纤维化肝组织表达降低.     

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体-γ与转化生长因子-β1表达的影响

目的研究扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ与转化生长因子(TGF)-β1表达的影响及机制。方法 80只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组、扶正化瘀组、FRF大、中、小剂量组,采用四氯化碳加上乙醇复制大鼠HF模型,造模10 w成功后,给予对应药物干预,每日1次,连续4 w,正常对照组、模型组给予生理盐水。检测血清肝纤维化指标,采用苏木素-伊红(HE)染色观察HF程度,免疫组化法观察肝组织PPAR-γ的表达,q RTPCR、Western印迹方法检测肝组织PPAR-γ、TGF-β1 m RNA和蛋白表达水平。结果模型组的HF分期较其余组明显升高(P 0. 01),模型组大鼠肝纤维化指标较其余各组均明显升高(P0. 01),模型组肝组织PPAR-γm RNA和蛋白表达明显下调(P0. 01),TGF-β1表达明显升高(P0. 01);与模型组比较,各药物干预组肝组织PPAR-γm RNA和蛋白表达上调,TGF-β1 m RNA和蛋白表达下调,其中FRF大剂量组差异有统计学意义(P0. 01)。结论 FRF上调HF肝组织PPAR-γm RNA和蛋白表达水平,下调TGF-β1表达,可能是其抗HF作用机制之一。