血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠保护性免疫力的影响因素

目的 探讨血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗对小鼠保护性免疫力的影响因素。方法 将实验动物随机分为 ,以免疫后不同攻击感染时间,不同免疫途径和不同免疫粢九为主要参数,。结果 各实验组经为２９．６９％～３９．７４％,各实验组减虫率和减卵率与对照组相比,差异均有显著意义（Ｐ〈０．０５）或极显著意义（Ｐ〈０．０１）。结论 ８周,ＳＣＩ组可诱导最佳的保护性免疫效果。     

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠保护力的观察

目的探讨日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护作用。方法采用10^6和10^8CFU疫苗皮下接种免疫BALB／C鼠，免疫后8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染，感染后6周剖杀小鼠，计算减虫率和减卵率，观察肝脏病理变化，测量虫卵肉芽肿周长和面积，测定血清中CAg、IgG及其亚类水平，同时设有PBS和BCG对照。结果疫苗接种组的减虫率为16．64％-46．20％，减卵率为55．75％-60．50％，肝组织病变明显减轻，虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积显著减少，血清IgG和IgG2a水平明显升高，10^8CFU组CAg升高。结论日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗是一种新型比较理想的疫苗，值得进一步深入研究。     

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠T淋巴细胞亚群变化的研究

目的研究血吸虫重组BCG－Sj26GST疫苗对小鼠T淋巴细胞亚群的影响。方法实验一采用106和108CFU疫苗皮下接种BALB／c小鼠,接种后8WK用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染6wk剖杀小鼠,取脾制备脾细胞,同时设有PBS对照组。实验二分别用106CFU疫苗皮下和静脉注射免疫小鼠,分别于免疫后0、4、8、10、14和16wk各剖杀4只,分离脾脏,用FACsort流式细胞仪分析T细胞CD4＋和CD8＋亚群百分比。结果实验一疫苗免疫络小鼠经尾蚴攻击后脾T细胞CD4＋亚群明显升高,CD8＋亚群缓慢增加。实验二动态观察发现在皮下和静脉注射组,CD4＋亚群分别于免疫后10和18WK显著增加;皮下注射组CD8＋亚群在整个观察期间均无明显变化,静脉注射组则于免疫后4～16wk有轻度增加。结论T细胞CD4＋亚群可能在疫苗保护性免疫中起重要作用。     

血吸虫重组BCG—Sj26GST疫苗接种BALB／c鼠后肝脏病？…

血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗是一种新型疫苗。本文用１０＾６克隆形成单位（Ｃｏｌｏｎｙ－ｆｒｏｍｉｎｇ ｕｎｉｔ,ＣＦＵ）和１０＾８ＣＦＵ疫苗皮下接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠,接种后８ｗｋ用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后６ｗｋ剖杀小鼠,分离肝脏,观察其病理学变化,同时设ＰＢＳ对照组。光镜下观察发现肝脏病变明显减轻,肉芽肿数目少,体积小;电镜观察发现肝组织病变轻微,大部分肝细胞变性,肝纤维组织增生,     

日本血吸虫重组BCG—Sj26GST疫苗诱导小鼠血清IgG及其亚类免疫应答的研究

目的 研究日本血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗接种小鼠,尾蚴攻击后诱导的血清ＩｇＧ及其亚类变化。方法 采用１０＾６ＣＦＵ和１０＾８ＣＦＵ疫苗皮下接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠,接种后８周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后６周扑杀小鼠,收集血清,用常规ＥＬＩＳＡ法检测ＩｇＧ及其亚类。结果 疫苗免疫后８周血清ＩｇＧ水平明显升高;疫苗免疫,尾蚴攻击后６周血清ＩｇＧ２ａ显著培养,但ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ｂ无明显变化。结论 日本血吸虫重组ＢＣＧ－Ｓｊ２６ＧＳＴ疫苗可能诱导宿 主产生高水平的ＩｇＧ和ＩｇＧ２ａ,从而提高其抗血吸虫感染的保护性免疫力。     

日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠脾细胞动态观察

目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜接种（IN组）免疫BALB／c鼠,在免疫后O～22周每2周每组随机剖杀4只小鼠,无菌取脾,制成单个悬浮脾细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测脾细胞增殖水平、用流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡状况。结果未刺激及sjAWA刺激时SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后4～20周明显升高,ConA刺激时于4～18周显著升高,均于免疫后8周达最高水平;IN组脾细胞增殖水平原液组、SjAwA组和ConA组分别于2～18周、2～10周及14～18周、2～8周和12～18周显著升高,均于免疫后4周达最大值（P〈0．01或P〈0．05）。SC组和IN组CD＋T细胞分别于免疫后2～14周、2周及6～16周升高,并于8周达峰值（P〈0．01或P〈0．05）;两组CD＋T细胞均于2～20周轻微升高,分别于8周和6周达较高值（P〉0．05）。未刺激和ConA刺激时SC组脾细胞凋亡水平分别于免疫后2～4周、2～6周升高显著,均于免疫后2周达最大值（P〈O．01或P〈O．05）;IN组均于4周显著升高并达峰值（P〈O．01）。结论日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj26GST）疫苗可诱导脾细胞的增殖,增加cD＋T细胞的数目,抑制脾细胞的凋亡而发挥保护性免疫应答。     

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗接种BALB/c鼠后肝脏病理学变化

血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗是一种新型疫苗。本文用 10 6克隆形成单位 ( Colony- froming unit,CFU)和10 8CFU疫苗皮下接种 BAL B/ c鼠 ,接种后 8wk用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6 wk剖杀小鼠 ,分离肝脏 ,观察其病理学变化 ,同时设 PBS对照组。光镜下观察发现肝脏病变明显减轻 ,肉芽肿数目少 ,体积小 ;电镜观察发现肝组织病变轻微 ,大部分肝细胞变性 ,肝纤维组织增生 ,有嗜酸粒细胞和淋巴细胞浸润。这些结果为阐明血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗的免疫机制提供了形态学资料     

日本血吸虫Sj26GST疫苗研究进展

血吸虫病（schistosomiasis）是由日本血吸虫（Schistosoma japonicum,SJ）引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,是国家卫生部规划防治的五大寄生虫病之一。该病在我国主要流行于湖南、湖北、江西、江苏和安徽的江湖洲滩地区及四川和云南的大山区,郝阳等（2007）报道我国现症患者67．12万人,病牛2．48万头,钉螺面积38．01亿平方米,受威胁人口4000万以上。随着三峡建坝、南水北调、农田水利建设、退田还湖、平垸行洪和移民建镇等水利工程的实施,导致钉螺的迁移扩散,有可能引起血吸虫病的潜在流行。     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S—转移酶DNA疫苗的研究及其保 …

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注     

日本血吸虫混合DNA疫苗pBK-CMV-Sj26/Sj32诱导小鼠的免疫应答

目的　观察含日本血吸虫候选疫苗分子谷胱甘肽S -转移酶 (Sj2 6 )和天冬酰胺肽链酶 (Sj32 )的真核载体 pBK-CMV -Sj2 6 /Sj32诱导小鼠的免疫应答情况。 方法　将质粒按 5 0 μg/只在 0w ,3w ,5w免疫小鼠股四头肌 ,第一次免疫后取小鼠脾细胞作T淋巴细胞转化实验 ;在 0w、3w和 6w经小鼠尾静脉取血 ,ELISA检测血清中抗体效价及阳性反应率。结果　淋巴细胞转化实验示血吸虫成虫抗原能特异性刺激免疫鼠脾细胞 ;第一次免疫后特异性抗体效价开始升高。抗体最高效价为 1∶2 0 ,3次免疫后有 91.7%小鼠血清呈阳性反应。结论　真核载体 pBK -CMV -Sj2 6 /Sj32可诱导小鼠体液及细胞免疫应答     

日本血吸虫混合DNA疫苗pBK-CMV-Sj26/Sj32诱导小鼠的免疫应答

目的　观察含日本血吸虫候选疫苗分子谷胱甘肽S -转移酶 (Sj2 6 )和天冬酰胺肽链酶 (Sj32 )的真核载体 pBK-CMV -Sj2 6 /Sj32诱导小鼠的免疫应答情况。 方法　将质粒按 5 0 μg/只在 0w ,3w ,5w免疫小鼠股四头肌 ,第一次免疫后取小鼠脾细胞作T淋巴细胞转化实验 ;在 0w、3w和 6w经小鼠尾静脉取血 ,ELISA检测血清中抗体效价及阳性反应率。结果　淋巴细胞转化实验示血吸虫成虫抗原能特异性刺激免疫鼠脾细胞 ;第一次免疫后特异性抗体效价开始升高。抗体最高效价为 1∶2 0 ,3次免疫后有 91.7%小鼠血清呈阳性反应。结论　真核载体 pBK -CMV -Sj2 6 /Sj32可诱导小鼠体液及细胞免疫应答     

重组IL-2、IL-6、TNF-α作为血吸虫病疫苗佐剂的研究

目的：观察重组IL－2、IL－6和TNF－α（rIL-2,rIL-6,rTNF-α）作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的可行性，并探讨其作用机制。方法：日本血吸虫抗独特型抗体NP30主动免疫BALB／c小鼠，分别联用rIL-2,rIL-6和rTNF-α，观察其对小鼠的保护性免疫作用，以及对宿主体液免疫和细胞免疫的影响。结果：rIL-2和rIL-6能明显提高NP30疫苗对小鼠宿主的保护性作用，减虫率和减卵率均明显提高，减虫率从单用NP30的40．6％分别提高到53．5％和55．7％，减卵率从46．5％分别提高到68．7％和69．8％；二者均使血清特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体明显升高；另外，足垫试验结果显示NP30加用rIL-2可引发迟发型变态反应。rTNF-α无增强NP30的保护性免疫作用。结论：rIL-2和rIL-6可作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗的佐剂，其作用机制与同时增强Th1和Th2免疫应答有关。     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因真核表达载体的构建及序列测定

目的 扩增日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因片段,构建其重组真核表达载体,以研制ＳｊＧＳＴ核酸疫苗。方法 根据已知基因序列设计一对引物,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增Ｓｊ２６ＧＳＴ目的基因片段,将其克隆到ｐｃＤＮＡ３质粒中,并经酶切、ＰＣＲ鉴定,测序证实。结果 获得ＧＳＴ－ｐｃＤＮＡ３重组克隆。结论：本实验获得Ｓｊ２６ＧＳＴ重组克隆,为进一步研制核酸疫苗创造了条件。     

日本血吸虫Sj28GST重组抗原的摇瓶发酵条件研究

目的探索应用重组E.coliTB1摇瓶生产日本血吸虫Sj28GST重组抗原的最适工艺条件。方法用2YT培养基进行发酵,观察培养温度、种子液接种量、诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）浓度、IPTG诱导时间等培养条件。结果培养温度为37℃,种子液接种量为10%,转速为200 r/m in,用0.8 mmol/L IPTG在开始发酵4 h后进行诱导,为最佳发酵条件。在此条件下,振荡培养17 h后,细菌密度达到吸光度（A600）值2.5,重组日本血吸虫Sj28GST产量达到21.6mg/L发酵液。结论成功探索了日本血吸虫Sj28GST重组抗原的摇瓶发酵条件。     

日本血吸虫24-26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究

本文报告从日本血吸虫大陆株成虫抽提的24—26kDa抗原与源于日本血吸虫菲律宾株的重组Sj26抗原之间在抗原性和免疫原性上所进行的一系列比较研究。ELISA、IFA和Westernblotting等方法观察结果均表明,24—26kDa和rSj26抗原免疫后所诱导的特异性抗体与其对应的抗原之间具有明显的抗原交叉反应,而与其它血吸虫抗原如可溶性虫卵抗原也有交叉反应。若以两种抗原加福氏佐剂分别免疫小鼠,以日本血吸虫大陆株尾蚴攻击感染,减虫率相似(26～32％),表明两种抗原存在一定程度的交叉免疫保护性。这些研究结果为开发rSj26抗原,或是根据已知Sj26 cDNA核苷酸序列制备DNA探针,从已构建的日本血吸虫(大陆株)cDNA库筛选相关目的基因,加速血吸虫疫苗的研制起着重要作用。     

重组血吸虫GST-Sj31蛋白对小鼠的免疫保护性研究

目的 在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫组织蛋白酶B（Sj31）b、c片段蛋白，并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法 分别将重组质粒pGEX-Sj31b、pGEX-Sj31c转化感受态大肠杆菌ER2566，在IPTG诱导下进行表达，表达产物GST-Sj31b、GST-Sj31c蛋白分别免疫小鼠，免疫第3次后进行攻击感染，观察其免疫保护效果。结果 在IPTG诱导下，表达载体中的SjGST基因与重组Sj31b和Sj31c基因获得了高产融合表达，用这两种融合蛋白免疫小鼠，分别诱导产生了22.71%和13.6%的减虫率；减卵率分别为54.21%和45.01%。结论 重组质粒pGEX-Sj31b，pGEX-Sj31c可在大肠杆菌中高效表达，表达的融合蛋白GST-Sj31b能诱导小鼠产生一定程度的抗Sj保护性免疫力，而GST-Sj31c的减虫率为13.6%。     

日本血吸虫（中国大陆株）26kDa基因重组蛋白（rSjc26GST）对虫卵？…

用日本血吸虫虫卵肉芽肿的小鼠肺模型进行研究。ＩＣＲ雄性小鼠３２只,分成免疫组和佐剂对照组各１６只,免疫组小鼠经rＳjc２６ＧＳＴ免疫。免疫结束后第５天两组小鼠均由 尾静脉注射新鲜日本血吸虫虫卵悬液０．２ml（内含活卵１５００－２０００个）,于注卵后第８天、１６天和２１天分批剖杀小鼠,观察肺部形成的虫卵肉芽肿病变。结果发现免疫鼠肺内肉芽肿大小受到明显抑制,免疫后第８天、１６天、２１天肺肉芽肿平均直径分别为     

日本血吸虫Sj26gst mRNA候选疫苗的免疫原性研究

目的 制备日本血吸虫谷胱甘肽S?转移酶相对分子质量（Mr） 26 000亚基（Sj26gst） mRNA并评价其免疫原性。方法 根据Sj26gst编码区序列（NC＿002544.1）,用人类常用的密码子优化Sj26gst编码序列,两端加β球蛋白3′和5′非编码区（UTR）,合成后连接至pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1/Sj26gst质粒,以线性化的pcDNA3.1/Sj26gst质粒为模版,体外转录Sj26gst mRNA。用脂质体将Sj26gst mRNA转染至HeLa细胞中,转染后2、6、12、24、48 h取HeLa细胞,免疫荧光定量PCR (qRT?PCR)检测Sj26gst mRNA的相对水平,蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测Sj26GST蛋白的表达水平。雌性BALB/c小鼠随机均分为Sj26gst mRNA组、pcDNA3.1/Sj26gst组、pcDNA3.1组和PBS组（每组6只）,分别于小鼠左后腿股四头肌肌内注射100μg的Sj26gst mRNA、pcDNA3.1/Sj26gst质粒、pcDNA3.1质粒和PBS (100μl),共...