美洛昔康对人鼻咽癌CNE-1细胞株的作用

目的探讨美洛昔康对鼻咽癌细胞株CNE-1生长抑制及诱导凋亡的作用。方法应用肿瘤细胞培养技术,随机分组和空白对照设计,培养不同时间后,用MTT法、AO＋EB染色法、流式细胞仪检测法,观察美洛昔康对CNE-1生长抑制的剂量和时间效应,分析细胞凋亡发生率,细胞免疫荧光法检测细胞内COX-2蛋白的表达。结果美洛昔康能抑制CNE-1细胞的生长。美洛昔康处理CNE-1细胞后,细胞呈凋亡特征性改变。流式细胞分析显示美洛昔康呈浓度依赖性诱导CNE-1细胞凋亡。细胞免疫荧光结果表明美洛昔康处理细胞后,随药物浓度的增加,COX-2蛋白表达下降。结论美洛昔康具有抑制CNE-1细胞生长,诱导CNE-1细胞凋亡的作用,其机制可能与COX-2蛋白有关。     

表达凋亡素基因的重组禽痘病毒对人喉癌细胞Hep-2的抑制效应研究

目的：探讨含鸡贫血病病毒（CAV）凋亡素（Apoptin）基因的重组禽痘病毒vFVApoptin诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的作用及其作用方式。方法：用vFVApoptin感染体外培养的人喉癌细胞Hep-2,运用MTT染色法检测重组质粒对肿瘤细胞的抑制作用;并运用流式细胞仪检测肿瘤细胞线粒体跨膜电位（△ψm）和细胞内活性氧（ROS）水平变化情况;通过免疫印迹检测细胞色素c（Cyto c）释放;应用底物显色法检测Caspase-3／9活性。结果：vFVApoptin感染可明显抑制Hep-2肿瘤细胞,并具有下调肿瘤细胞△ψm,上调其ROS水平,促进Cyto c释放和激活Caspase3／9的功能。结论：vFVApoptin通过上调Hep-2肿瘤细胞内线粒体ROS产生,造成Cyto c的释放,激活Caspase-9,进而激活Caspase-3等下游凋亡因子,最终通过线粒体途径诱导细胞凋亡抑制Hep-2肿瘤细胞。     

罗格列酮对Hep-2细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨罗格列酮(ROS)对体外培养的人喉癌Hep-2细胞的增殖抑制作用及其机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度ROS处理不同时间喉癌Hep-2细胞后细胞的增殖活性,制作生长抑制曲线。采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的变化。RT-PCR检测环氧化酶(COX-2)mRNA表达的变化。结果:ROS明显抑制人喉癌Hep-2的增殖,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01)。流式细胞仪检测发现:ROS阻滞Hep-2细胞于G0/G1期,并呈典型的凋亡特征性的亚G1峰,S期和G2/M期比例下降,其凋亡率呈时间依赖性上升(P<0.05)。RT-PCR检测发现人喉癌Hep-2细胞COX-2mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论:ROS对人喉癌Hep-2细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用,其作用机制与阻滞细胞于G0/G1期和下调COX-2表达有关。     

西妥昔单抗联合放化疗对喉鳞状细胞癌的协同杀伤效应

目的：观察西妥昔单抗诱导人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2凋亡的敏感性,并探讨西妥昔单抗与顺铂、放射线联合应用对Hep-2细胞的杀伤效应及机制。方法：采用CCK-8试剂盒分别检测西妥昔单抗、顺铂、放射线对Hep-2生长抑制率,流式细胞仪检测不同干预方案对Hep-2凋亡率及细胞周期分布情况。结果：不同浓度西妥昔单抗对Hep-2细胞均有抑制作用,并在一定浓度范围内呈时间一剂量依赖性,24h半数抑制浓度为1036．84μg／ml;顺铂,放射线分别与西妥昔单抗联合应用时,Hep-2凋亡率显著高于顺铂、放射线单独或联合应用（P〈0．01）,并产生Go／G1期阻滞。结论：Hep-2细胞对西妥昔单抗诱导的细胞凋亡敏感,顺铂和（或）放射线与西妥昔单抗联用对Hep-2细胞的增殖具有协同抑制效应;显著的凋亡诱导作用和对Hep-2细胞周期的影响为其机制之一,为临床喉鳞状细胞癌靶向EGFR并联合放化疗方案提供了理论依据。     

丙戊酸钠对Hep-2细胞增殖和凋亡的影响及机制的研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对体外培养的人喉癌Hep-2细胞凋亡的影响及其机制。方法:不同浓度VPA处理人喉癌Hep-2细胞不同时间后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测凋亡率,RT-PCR检测凋亡抑制蛋白Survivin mRNA表达的变化。结果:VPA对人喉癌Hep-2细胞的生长具有明显的增殖抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01)。流式细胞仪检测发现:以3 mmol/L的VPA处理Hep-2细胞后,其凋亡率呈时间依赖性上升(P<0.01)。RT-PCR检测发现人喉癌Hep-2细胞Survivin mRNA表达呈时间依赖性下调(P<0.01)。结论:VPA对人喉癌Hep-2细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用,其作用机制与下调Survivin表达比例有关。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导喉癌凋亡的实验研究

目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导喉鳞状细胞癌Hep-2细胞凋亡的作用机制。方法:应用不同浓度的TRAIL作用于喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,应用噻唑蓝比色法绘制细胞的生长曲线,计算生长抑制率;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;应用透射电镜观察细胞的微观形态学改变。结果:TRAIL能抑制体外培养的喉癌Hep-2细胞生长,其抑制作用存在着明显的浓度依赖性,随着TRAIL浓度的不断增加,喉癌Hep-2细胞的生长抑制率也增加,经TRAIL(100μg/L)处理24h,喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长抑制率达到(62.75±1.00)%。流式细胞仪检测结果显示喉鳞状细胞癌Hep-2细胞凋亡发生率随TRAIL浓度增加而明显增加,在TRAIL浓度为1、10、100μg/L时凋亡发生率分别为(11.49±0.36)%、(22.31±0.82)%和(59.64±1.10)%,与对照组凋亡发生率为(3.13±0.12)%相比,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。透射电镜观察发现,应用100μg/L TRAIL处理后的Hep-2细胞发生凋亡改变,可见细胞出现核碎裂,核仁消失,染色质固缩,电子密度增高,线粒体肿胀...     

榄香烯联合热疗对Hep-2细胞周期进程及凋亡率的实验观察

目的观察榄香烯联合热疗对体外培养的Hep-2细胞株（人喉癌细胞株）增殖抑制作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同组别对Hep-2细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测Hep-2细胞周期进程的变化及凋亡率,透射电子显微镜观察Hep-2细胞亚细胞水平变化。结果单纯榄香烯组、单纯热疗组及榄香烯联合热疗组,对Hep-2细胞增殖抑制率分别为28.8%、25.7%和47.1%,榄香烯联合热疗组能显著提高Hep-2细胞增殖抑制率。细胞周期进程发生明显改变：G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,凋亡率上升。透射电子显微镜下可见线粒体肿胀,核染色质趋边凝集及凋亡小体。结论榄香烯联合热疗能够抑制Hep-2细胞增殖,抑制Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导喉癌Hep-2耐药细胞凋亡的研究

目的观察三氧化二砷(As2O3)对喉癌Hep-2细胞株和长春新碱诱导的多药耐药Hep-2r细胞的作用和对细胞周期的影响.方法用长春新碱(VCR)递增药物浓度法筛选耐药细胞Hep-2r,体外培养的细胞与不同浓度的As2O3作用24、48、72h,通过MTT还原法检测细胞的生长抑制率,用光学显微镜、流式细胞仪、荧光显微镜研究细胞凋亡的形态学改变,检测细胞凋亡率并进行细胞周期分析.结果As2O3可有效抑制Hep-2细胞和Hep-2r细胞的生长,呈时间和浓度依赖性特点.形态学观察发现,As2O3诱导Hep-2和Hep-2r细胞凋亡,Hep-2和Hep-2r细胞对As2O3的敏感性无显著差异.2μmol/L As2O3作用24h时,S期细胞比例增高,72h后,S期细胞明显下降,细胞大量凋亡.As2O3在作用早期,阻滞细胞通过S期,随着时间的延长,诱导S期细胞凋亡.结论As2O3可诱导Hep-2细胞和Hep-2r细胞凋亡,与细胞周期阻滞有关.     

槲皮素对人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的作用

目的:探讨槲皮素对体外培养的人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2生长的影响及作用机制,研究槲皮素治疗喉癌的可行性.方法:采用MTT法、倒置相差显微镜及流式细胞仪观察槲皮素对人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的作用情况.结果:槲皮素呈时间和浓度依赖性抑制Hep-2细胞的增殖,使Hep-2细胞贴壁能力减弱,形态变小变圆,悬浮细胞和颗粒增加,引起Hep-2凋亡,细胞周期阻滞于S期.结论:槲皮索能够抑制喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的生长和增殖,其抑制作用与细胞凋亡有关.     

葫芦素B对喉癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:体内外观察葫芦素B对人喉癌细胞系Hep-2的抑制增殖和诱导凋亡作用并探讨其作用机制,为临床应用提供实验依据.方法:用0.1、1.0、10.0和100.0 μmol/L的葫芦素B作用于Hep-2细胞24、48和72 h, MTT法检测细胞增殖.用0.1、1.0和10.0 μmol/L的葫芦素B作用于Hep-2细胞24 h或10 μmol/L葫芦素B作用8、12和24 h,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞凋亡.Western blot检测p-STAT3、cyclin B1和Bcl-2的蛋白表达.建立喉癌裸鼠移植瘤模型,观察葫芦素B的体内抑瘤作用.结果:MTT结果显示葫芦素B对Hep-2 细胞的增殖抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测发现随着葫芦素B浓度增高或作用时间延长,处于G2/M期细胞的比例逐渐升高,同时伴有G0/G1期细胞减少,细胞凋亡率逐渐升高,经统计学分析,各实验组之间及其与对照组之间的均差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);荧光显微镜观察可见典型细胞凋亡;Western blot检测显示葫芦素B可剂量依赖性抑制p-STAT3、cyclin B1和Bcl-2的蛋白表达.体内实验发现低、中、高剂量组的抑瘤率分别是32.43%、43.24%和70.27%.结论:葫芦素B通过抑制STAT3活化,抑制cyclin B1和Bcl-2的蛋白表达,引起喉癌细胞G2/M期阻滞、增殖抑制和凋亡,发挥对喉癌的抗癌效应.     

RNA干扰细胞周期蛋白D1对Hep-2周期和凋亡的影响

目的研究小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)抑制细胞周期蛋白D1(cyclin D1)对喉鳞状细胞癌(简称喉癌)细胞生长和凋亡的影响。方法通过脂质体转染试剂将针对cyclin D1的特异小干扰RNA转入喉癌细胞,利用MTT法检测喉癌细胞生长抑制情况,流式细胞技术检测喉癌细胞周期变化和细胞凋亡。结果MTT结果表明喉癌细胞生长受到抑制,并具有时间依赖性。同时实验组喉癌细胞周期受到影响,并检测到喉癌细胞的凋亡。结论Cyclin D1基因沉默后,喉癌细胞生长受到了抑制,细胞周期受到影响,并能够最终导致喉癌细胞凋亡。     

三氧化二砷与紫杉醇联合诱导Hep-2细胞凋亡的体外研究

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)与紫杉醇联合应用对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株(简称Hep-2细胞)作用的影响及机制.方法 以不同浓度的As2O3与浓度为10 nmol/L紫杉醇共同作用于Hep-2细胞,利用瑞氏-吉姆萨(Wrighs-Gimesa)染色及流式细胞术,观察两者对细胞...     

RNAi沉默miRNA-224-5p对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术,来探讨沉默miRNA-224-5p对人喉鳞状细胞癌（简称喉鳞癌）Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-224-5p-RNAi-LV3转染喉鳞癌Hep-2。设为干扰组（miRNA-224-5p-siRNA,SI组）、阴性对照组（NC组）和空白对照组（BC组）,分别采用聚合酶链反应方法检测miRNA-224-5p的表达情况,用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况。结果 miRNA-224-5p-RNAi-LV3可显著降低miRNA-224-5p的表达,转染后Hep-2细胞增殖能力显著降低,细胞侵袭能力明显减弱,细胞周期及细胞凋亡均未见明显影响。结论 RNAi沉默miRNA-224-5p可以抑制Hep-2细胞增殖,并降低其侵袭能力。     

E1A基因对喉癌Hep-2细胞体外生长和增殖的影响

目的探讨E1A基因与喉癌Hep-2细胞生长和增殖的关系。方法将Ad-E1A和对照空载体组Ad-β-gal在293细胞中扩增后提取、纯化并滴定,将其转染至喉癌Hep-2细胞,转染后将Hep-2细胞分为空白组（PBS组）、对照组（Ad-β-gal）和实验组（Ad—E1A组）。经RT—PCR鉴定,采用胎盘兰染色并计算细胞数及MTT法绘制细胞生长曲线并计算倍增时间;采用流式细胞术计算分析细胞周期。结果RT—PCR结果显示E1A已整合到Ad—E1A转染的细胞基因组中并且稳定表达。实验组（E1A组）细胞生长减慢,倍增时间分别是空白组（PBS组）、对照组（Ad-β-gal组）的1．72倍和1．70倍。流式细胞术结果显示转染E1A的细胞出现S期减少和G2／M期被阻滞。结论①E1A基因可以抑制喉癌Hep-2细胞在体外的生长,延长其倍增时间。②E1A基因可以改变喉癌Hep-2细胞的细胞周期,使S期细胞减少,G2／M期被阻滞。     

喉癌干细胞在放化疗抵抗中的作用机制

目的：探讨喉癌干细胞的分选方法,分析顺铂、放射线联合应用对喉癌肿瘤干细胞的杀伤效应及机制。方法：应用流式细胞仪荧光活化细胞分选技术检测并分选出喉癌Hep-2细胞系中的CD133＋细胞和CD133-细胞,并检测CD133＋细胞亚群的干细胞特性;采用CCK-8试剂盒分别检测顺铂、放射线对两组细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测不同干预方案对2组细胞凋亡率及细胞周期分布情况的影响。结果：CD133＋细胞在喉癌Hep-2细胞系中占（2．43±0．77）％,在细胞增殖、分化及体内成瘤试验中CD133＋细胞均表现出肿瘤干细胞特性;不同浓度剂量的顺铂、放射线对Hep-2细胞均有抑制作用,并在一定浓度范围内呈剂量依赖性;顺铂、放射线单独或联合应用时,CD133-细胞凋亡率显著高于CD133＋细胞（P〈0．01）,并产生G0／G1期阻滞。结论：CD133＋细胞较CD133-细胞更具有明显的肿瘤干细胞特性,对放化疗具有明显的抵抗作用,对凋亡诱导作用不敏感和细胞周期改变为其机制之一。     

白花蛇舌草多糖提取物诱导Hep-2细胞凋亡与抑制侵袭机制

目的 研究白花蛇舌草多糖提取物(HDP)对人喉癌Hep-2细胞的抗瘤作用。 方法 采用MTT测量细胞活性,流式细胞仪进行凋亡分析。Transwell培养小室进行细胞侵袭实验,Western blotting测量多糖提取物诱导凋亡和抗侵袭活性的机制。 结果 HDP对喉癌细胞的抑制呈时间和浓度依赖性,浓度越高,时间越长抑制率越高。细胞周期分析发现HDP(400 μg/mL)使细胞滞留于G₀/G₁期,同时发现药物作用24 h后细胞凋亡率明显升高,Western blotting结果分析发现相关凋亡蛋白caspase-3, caspase-8和caspase-9表达升高,而Bcl-2表达下降。同时细胞侵袭实验还发现HDP抑制喉癌细胞的侵袭,抑制MMP-2和uPA相关蛋白的表达。 结论 研究发现 HDP 抑制喉癌细胞的凋亡和侵袭,对恶性肿瘤的治疗有潜在的应用价值。     

RNA干扰DJ-1基因抑制喉癌细胞的增殖

目的 探讨RNA干扰(RNAi)抑制喉癌Hep-2细胞DJ-1基因的表达及观察其细胞效应.方法 设计合成3对特异性针对人DJ-1基因的小干扰RNA(siRNA),脂质体法转染Hep-2细胞,实验分为4组:瞬时转染非特异性siRNA对照组及转染特异性siRNA 3组(siRNA1、siRNA2、siRNA3).采用RT-PCR检测DJ-1 mRNA,蛋白免疫印迹法检测DJ-1蛋白,流式细胞仪检测细胞凋亡及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测特异性siRNA1组对Hep-2细胞效应.结果 本实验设计合成的3对特异性siRNA均不同程度地抑制DJ-1基因表达,其中特异性siRNA1组抑制效果最佳.M1Tr比色法结果显示特异性siRNAl组(终浓度50 nmo~L、100 nmolZL)对Hep-2细胞增殖具有抑制作用.流式细胞仪检测结果最示特异性siRNA1组能诱导Hep-2细胞凋亡,转染特异性siRNA1组凋亡率为(15.7±4.8)%,非特异性siRNA对照组凋亡率为(4.5±0.4)%,非特异性siRNA对照组与特异性siRNA1组凋亡率比较差异有统计学意义(t=4.736,P<0.01).结论 转染特异性siRNA组能有效抑制Hep-2细胞增殖,诱导Hep-2细胞凋亡.