细胞因子的多聚酶链反应检测

本文介绍用PCR技术检测细胞因子的原理、方法及其在基础和临床免疫学研究中的应用现状。其检测原则是,从受检细胞提取RNA,经逆转录合成cDNA作为模板,根据待测细胞因子外显子设计相应的引物进行PCR扩增。产物经凝胶电泳分离后用光密度计扫描、DNA印迹或斑点印迹法加以鉴定或定量。本法最低检出量为0.47～0.55amol(10~(-18)mol),是目前检测细胞因子最敏感的方法,尤其适用于量微、基因表达水平极低的受检标本。文中列举该技术在免疫学基础研究和临床上的应用。     

应用间接法原位PCR检测石蜡切片中HPV DNA

应用间接法原位ＰＣＲ检测石蜡切片中ＨＰＶＤＮＡ王剑波王伯马福成陈万录杨莉胡沛臻聚合酶链式反应（ＰＣＲ）是一种对特定的ＤＮＡ片段在体外经酶促反应进行快速扩增的技术。它是一种极其敏感的技术。间接法原位ＰＣＲ是先将待检基因在原位进行ＰＣＲ扩增，然后再用原...     

多聚酶链反应检测LT^＋大肠杆菌

本文报告了用多聚酶链反应检测ＬＴ＾＋大肠杆菌Ａ亚基基因。将粪便标本直接接种于ＬＢ培养液，使用两个寡核苷酸引物，对该毒素Ａ亚基基因一段高度保守区域的ＤＮＡ进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测。最低检测的靶细菌量为５０ＣＦＵ。用改良艾力克试验，ＥＬＩＳＡ试验进行对照，对３０株已知细菌和６８例婴幼儿腹泻的粪便标本进行检测。在３０株细菌中，仅ＬＴ＾＋大肠杆菌，ＬＴ＾＋／ＳＴ＾＋大肠杆菌为阳性，余均为阴性。６８例     

多聚酶链反应和寡核苷酸探针检测衣原体

本研究所用引物和探针序列选自衣原体１６Ｓ ｒＲＮＡ基因。以生物素末端标记制备探针。多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增物作琼脂糖凝胶电泳和ＤＮＡ斑点杂交，证实引物为衣原体属特异性。ＰＣＲ检测灵敏度达到相当于１个拷贝的衣原体ＤＮＡ分子。生物素化寡核苷酸探针ＤＮＡ斑点杂交的直接检测灵敏度为１００ｐｇ，结合ＰＣＲ扩增的检测灵敏度为１ｆｇ。本法高度敏感、特异，且方法简便，对于衣原体感染诊断和分子流行病学调查具有较好     

多聚酶链反应在登革病毒研究中的应用进展

本文综述了多聚酶链反应在登革病毒感染的检测、发病机制研究以及变异性分析方面的应用研究进展。     

多聚酶链反应技术在NHL基因诊断中的应用研究

收集非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）标本５９例。用全Ｔ（ＵＣＨＬ一１）与全Ｂ（Ｌ２６）ＭｃＡｂ作免疫组化分型。然后应用ｌｇＨ单轮和半重叠基因引物，Ｔ细胞受体β（ＴＣＲ＿β）基因引物进行多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增检测克隆性基因重排。检测阳性结果：新鲜组织ｌｇＨ７１．４％（１０．／１４），ＴＣＲ＿β８３．３％（１０／１２）。石蜡包埋组织ＩｇＨ（半重叠扩增）８０％（１２／１５），ＴＣＲ＿β７３．３％（１１／１５）。无假阳性。其中有６例有争议的疑难病例明确了诊断。结果表明ＰＣＲ技术是当前最特异、敏感而快速的ＮＨＬ克隆性基因重排检测方法。     

多聚酶链反应（PCR）检测不典型结核杆菌的DNA

本文采用ＰＣＲ技术检测结核杆菌的ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ），其中临床诊断为结核或可疑结核者９例，肿瘤６例，结节病３例，淋巴结炎４例，共２２例。病理诊断确诊为不典型结核者１４例，不能除外结核者４例，结节病２例，瘤样病变２例。所有病例经抗酸染色均未查到结核杆菌。ＰＣＲ检测结果表明，２２例中１８例呈阳性（占８１．８２％），４例呈阴性。ＰＣＲ技术敏感、特异，对于不典型结核病例检查ＴＢ－ＤＮＡ片段用于辅助诊断颇     

提高免疫组织化学敏感性的原位免疫聚合酶链反应技术

提高免疫组织化学敏感性的原位免疫聚合酶链反应技术张波，董葆，陆哲明，钟镐镐，李挺，崔文，高英堂，王秀清，吴秉铨聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）为近年来兴起的体外基因扩增技术，其特点是高度特异性和敏感性。最近，Ｓａ...     

多聚酶链反应检测XX男性和真两性畸形中SRY基因

采用多重聚合酶链反应技术（ＭＰＣＲ）对５例４６，ＸＸ男性和２例４６，ＸＸ真两性畸形患者进行ＳＲＹ基因筛查。结果显示，４例典型的４６，ＸＸ男性均具有ＳＲＹ基因，但无Ｙｑ重复ＤＮＡ序列，表明其性别反转与ＳＲＹ或ＳＲＹ所在的ＤＮＡ片段密切相关。此外，在１例伴有尿道下裂的４６，ＸＸ男性和２例４６，ＸＸ畸形中，均未发现有可检测的ＳＲＹ序列存在，说明这些病例具有不同的发病机制，很可能与Ｘ或常染色体上的性别决…     

黄病毒逆转录—聚合酶链反应检测技术的建立和应用

为了早期快速诊断黄病毒感染，在其ＮＳ１基因序列设计了一对通用引物，扩增序列长度为４１３ｂｐ；在登革病毒（ＤＥＮ）１，２，３，４型和乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）设计了各型的内引物，扩增序列长度分别是ＤＥＮ１型为２６２ｂｐ，ＤＥＮ２型为１８９ｂｐ，ＤＥＮ３型为３９２ｂｐ，ＤＥＮ４型为９７ｂｐ，ＪＥＶ为３２３ｂｐ。应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）成功地扩增了ＤＥＮ１－４型和ＪＥＶ基因部分片段，其扩增片段的大小与设计相符合。应用套式ＰＣＲ检测临床诊断为登革热的患者血清标本７８份，证实ＤＥＮ１型阳性１８份，ＤＥＮ２型阳性４８份，其中８份同时合并感染ＤＥＮ４型。采用套式ＰＣＲ检测临床诊断为乙型脑炎患者血标本４２份，证实乙型脑炎病毒感染者３５份。结果表明，该法能直接检测发病患者早期血标本中的病毒基因，并在２天内完成对黄病毒的鉴别诊断。     

免疫组织化学-激光显微切割-聚合酶链反应技术在胃癌石蜡切片中检测p53突变的应用

目的 探索在石蜡切片中应用免疫组织化学-激光显微切割-聚合酶链反应(PCR)技术,检测进展期胃癌p53蛋白表达阴性或阳性的p53基因外显子5～8的突变情况。方法 对41例进展期胃癌标本进行p53蛋白的免疫组织化学标记,再用激光显微切割(LMD)技术切取p53表达一致的癌组织及远离癌灶的正常胃黏膜腺体。经消化后直接进行p53基因外显子5～8的PCR扩增、单链构象多态性分析及直接测序。结果 41例进展期胃癌标本均扩增出特异的目的条带。其中有11例p53蛋白表达阳性,15例p53基因检测到突变。蛋白表达阳性者中有8例突变(8／11);表达阴性者中有7例突变(7／30,23．3％)。p53蛋白表达和p53基因突变具显著相关(P=0．004)。结论 免疫组织化学-LMD-PCR技术应用于石蜡切片可获得满意的结果,此技术可将细胞特定基因的结构状态和表达水平很好地结合起来检测分析。     

甲醛固定石蜡包埋切片经特殊染色后荧光定量聚合酶链反应检测的再利用

结核病是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis, MTB)感染引起的特异性炎症,在甲醛固定石蜡包埋组织切片中查见MTB是确诊结核的金标准.目前,结核病诊断的主要辅助检测方法是特殊染色和qRT-PCR检测.在临床病理诊断中,部分结核病患者由于获取标本困难,穿刺标本微小,病理组织多被用于H...     

用于PCR检测的临床标本和石蜡切片的简便处理法

本文以套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ为例研究了用于ＰＣＲ检测的全血和血清，口腔和宫颈粘液，羊水，新鲜组织及石蜡切片等标本的多种处理方法，并对各种方法的特点进行比较，这些方法的特点是简便快速，所需试剂和仪器低廉适合于基层医院推广使用。     

应用多聚酶链反应技术检测疟原虫的初步研究

根据编码恶性疟原虫(P．f)红细胞结合抗原(EBA-175)的部分DNA片段和间日疟原虫(P．v．)小亚基核糖体RNA基因序列设计合成恶性疟原虫和间日疟原虫的特异性引物各一对并进行多聚酶链反应(PCR)检测恶性疟和间日疟病人标本。扩增产物经琼脂糖电泳分析，可见在P．f.样本中扩增出特异的492bp大小的DNA片段，P．v．样本中扩增出特异的714bp大小的DNA片段。而在健康人血的白细胞、伯氏疟原虫样本和食触猴疟原虫样本中均不能扩增出以上片段。其结果与镜检符合率分别达95％和93.3％以上，表明该方法是一种特异、敏感的检测方法。     

应用逆转录-聚合酶链反应检测石蜡包埋腺泡状软组织肉瘤中ASPL-TFE3融合基因的表达

目的 探讨石蜡包埋腺泡状软组织肉瘤中t(X：17)(p11．2：q25)染色体易位融合基因ASPL-TFE3 mRNA表达的意义。方法 收集以4％甲醛固定、石蜡包埋腺泡状软组织肉瘤标本8例,运用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ASPL-TFE3融合基因mRNA表达,以管家基因β-肌动蛋白(actin)作为内对照检测mRNA质量。另以腺泡状横纹肌肉瘤6例,肾细胞癌6例,副神经节瘤2例,颗粒细胞瘤1例作为对照。结果8例腺泡状软组织肉瘤中4例检测到ASPL-TFE32型融合基因mRNA的表达,2例检测出ASPL-TFE31型融合基因mRNA的表达,余2例β-actin和ASPL-TFE3的检测均为阴性。对照组未检出ASPL-TFE3融合基因,其中6例腺泡型横纹肌肉瘤中4例有PAX3／7-FKHR融合基因的表达。结论 石蜡包埋组织中ASPL-TFE3融合基因表达可作为腺泡状软组织肉瘤诊断和鉴别诊断的分子指标,并有助于其分子发生机制的回顾性研究。     

TORCH与优生：Ⅳ逆转录─聚合酶链反应检测风疹病毒的方法

风疹病毒是引起先天异常的主要病原体之一，研究风疹的目的，就是要早期诊断风疹感染，以减少先天缺陷儿的出生。本实验采用反转录－聚合酶链反应，扩增风疹病毒不同野生株基因组中的一段保守序列，从而达到直接检测病原体的目的。实验用的引物经过基因库检索，与其它ＲＮＡ病毒及病原体没有同源性。３３Ｐ标记探针与扩增产物的杂交试验证实，该引物扩增的产物是风疹病毒所特异的。实验表明，该体系能够检测到ｐｇ水平的病毒ＲＮＡ。因而ＲＴ－ＰＣＲ作为一种灵敏度高、特异性强的风疹病毒检测方法。