人血清中小分子蛋白质分离电泳方法改进

目的建立一种灵敏易行分离分子量〈10000 Da低丰度蛋白质的电泳方法。方法用Hitrap Blue层析柱去除血清中白蛋白,用U9对血清样品进行变性处理,采用改进后的方法（0.1%甲醇,0.5%三氯乙酸,0.1%考马斯亮蓝G250）进行染色。结果经去除血清中的白蛋白、对样品进行变性处理及改进染色方法后,分辨率和灵敏度明显提高,可有效分离10000 Da以下的小分子蛋白质。结论改进后的电泳方法,不仅简便灵敏,而且还有利于蛋白质的洗脱回收。     

SELDI技术检测反义寡核苷酸作用前后肝癌细胞培养液的差异蛋白

目的利用针对人端粒酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸(ASODN)和正义寡核苷酸(NODN)作用于人肝癌细胞SMMC-7721,比较ASODN和NODN作用后细胞培养液蛋白的变化。方法利用SELDI技术检测差异蛋白的表达变化。对照组为未加任何处理因素的SMMC-7721细胞。结果SELDI技术检测发现,ASODN作用组有40个差异蛋白分子低表达,3个差异蛋白分子高表达。NODN作用组有37个差异蛋白分子低表达,6个差异蛋白分子高表达。所有差异蛋白分子量均小于10 000 Da。ASODN作用组中有3个低表达蛋白在NODN作用组高表达,分子量分别为3 011.99 Da、3 048.28 Da和3 248.75 Da。结论ASODN和NODN作用SMMC-7721细胞后细胞培养液中所表达的差异蛋白十分相似。     

铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药相关差异蛋白质组学研究

目的筛选铜绿假单胞菌野生型菌株PAO1对左氧氟沙星耐药前后的差异蛋白质,探讨这些蛋白质与铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药的关系。方法采用亚抑菌浓度梯度递增法体外诱导PAO1对左氧氟沙星耐药,并设置同步对照组,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI)技术和CM10蛋白质芯片检测PAO1对左氧氟沙星耐药株和同步对照菌株的菌体蛋白,采用Biomarker Wizard软件进行分析。结果左氧氟沙星耐药株与同步对照菌株间有8个差异蛋白(P<0.05),5个差异蛋白高表达,分子量分别为1 004、1 007、1 918、5 175Da和5 454Da;有3个蛋白质低表达,分子量分别为1 012、1 629、2 004Da。结论用蛋白质芯片和SELDI技术对PAO1的左氧氟沙星耐药菌株与同步对照菌株进行蛋白质组学研究,可以筛选出与PAO1对左氧氟沙星耐药可能相关的差异蛋白质。     

铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药相关差异蛋白质组学研究北大核心CSCD

目的筛选铜绿假单胞菌野生型菌株PAO1对左氧氟沙星耐药前后的差异蛋白质,探讨这些蛋白质与铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药的关系。方法采用亚抑菌浓度梯度递增法体外诱导PAO1对左氧氟沙星耐药,并设置同步对照组,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI)技术和CM10蛋白质芯片检测PAO1对左氧氟沙星耐药株和同步对照菌株的菌体蛋白,采用Biomarker Wizard软件进行分析。结果左氧氟沙星耐药株与同步对照菌株间有8个差异蛋白(P<0.05),5个差异蛋白高表达,分子量分别为1 004、1 007、1 918、5 175Da和5 454Da;有3个蛋白质低表达,分子量分别为1 012、1 629、2 004Da。结论用蛋白质芯片和SELDI技术对PAO1的左氧氟沙星耐药菌株与同步对照菌株进行蛋白质组学研究,可以筛选出与PAO1对左氧氟沙星耐药可能相关的差异蛋白质。     

SELDI—TOF—MS技术筛选Paget病患者血清特异性蛋白质的研究

目的探讨表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术在Paget病的诊断价值。方法用弱阳离子蛋白芯片（WCx2）及表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术（SELDI—TOF—MS）检测15例健康者、15例慢性湿疹和20例Paget病患者血清中蛋白的相对含量。结果Paget病患者与健康人相比,质荷比为3868Da和8876Da的2个蛋白峰差异有统计学意义（P〈0．01）;与慢性湿疹相比,质荷比为2911、3868、5097Da的3个蛋白质峰差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SELDI—TOS—MS的特异性肿瘤标记物对Paget病的早期诊断和鉴别慢性湿疹具有诊断价值,无创安全。     

金黄色葡萄球菌的蛋白组学研究

目的 通过表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI)技术比较甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的蛋白质组学特点及差异.方法 首先采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,然后SPA法分别鉴定出MSSA与MRSA同源性菌株,通过利用SELDI技术对其蛋白进行检测,并采用Biomarker Wizard软件分析其蛋白质谱特点.结果 菌株型为t030的同源性菌株17085及16982有3个蛋白质表达有差异,分子量分别为3057、5867、11 511Da;菌株型为t037的同源性菌株18565及68也仅有3个蛋白表达有差异,分子量分别为4304、7492、8354 Da;非同源性菌株18565、16982(均为MRSA)有6个蛋白质表达有差异,分子量分别为3057、5521、6416、7340、8877、11 459 Da;非同源性菌株17085、68(均为MSSA)有7个蛋白质表达有差异,分别为3100、5520、6416、6888、8079、8876、12 366Da.结论 同源性菌株SELDI蛋白质谱具有高度相似性,非同源的MRSA或MSSA蛋白质谱表达均有较大差异.     

口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白谱差异

目的 探讨人口腔鳞癌体外培养亲本细胞株KB与耐药细胞株KBV200的蛋白质表达差异.方法 在体外培养KB及KBV200细胞株,采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI)及蛋白质芯片技术检测KB及KBV200蛋白质谱.结果 体外培养的口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株的蛋白质存在差异表达,CM-10芯片共捕获102个蛋白,发现差异峰19个,其中15个差异蛋白在KBV200细胞中高表达,4个差异蛋白在KBV200细胞中低表达.结论 SELDI蛋白芯片技术检测口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白质的差异表达方法 简便、敏感、重复性好.     

表面等离子体共振技术快速筛检人血清蛋白质表达的方法应用

[目的]建立用表面等离子体共振（surface plasmon resonance,SPR）技术快速筛检大样本人群血清蛋白质表达的方法,并用该法检测塑料垃圾拆解回收工人血清蛋白质是否存在异常表达。[方法]选取国内某地区从事塑料垃圾拆解回收的208名职业工人为暴露人群,生活水平和生活习惯相近且无已知污染源的197名农业人口为对照人群。用SPR技术检测研究对象血清中HSP90、HSP70、HSP60、CYP1A1和XPA蛋白质含量。[结果]人血清HSP90、HSP70、HSP60、CYPIAl和XPA蛋白质均可检出;用磷酸盐蛋白缓冲液（phosphate buffer solution,PBST）以1：100体积比稀释血清后即可进行检测,检测流速为25μL／min。暴露人群的血清中HSP60、HSP70、CYP1A1蛋白质含量均高于对照人群（P〈0．05）。[结论]SPR技术可用于检测大样本人群血清蛋白质的表达,且具有用样量少、高通量、快速、灵敏的优势;从事塑料垃圾拆解回收的工人血清HSP60、HSP70、CYP1A1蛋白质表达量较高,可能与其职业环境中污染物暴露有关。     

多种芯片检测和多元分析法在肝纤维化患者血浆蛋白表达谱分析中的初步应用

[目的]运用多种表面增强激光解吸-离子化飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS）蛋白质芯片及多元分析方法寻找由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染引起的肝纤维化病程相关的血浆生物标志物。[方法]选用多种SELDI化学表面芯片,比较分析肝纤维化病人和正常血浆样本,筛选和确定3种最佳芯片类型。用这3种芯片分析无肝纤维化、轻度肝纤维化、重度肝纤维化和肝硬化4组共110例患者的血浆样本。运用主成分分析（PCA）、偏最小二乘回归（PLSR）、软独立建模分类法（SIMCA）等数据分析技术寻找差异蛋白。用聚类分析法研究差异蛋白的表达相似性。[结果]3种最适芯片类型分别是弱阳离子交换芯片（WCX2）、强阴离子交换芯片（SAX2）、固定化镍金属螯合亲和层析芯片（IMAC-Ni）。这3种芯片吸附的蛋白质种类互不相同,所发现的差异蛋白质峰也不同。经t检验分析,3种芯片共发现了20个差异蛋白峰。运用PCA、PLSR、SIMCA等数据分析技术,分别发现了105、98、62个差异峰,并对差异峰的重要性的可信度进行衡量。运用聚类分析技术,将差异蛋白的表达模式分组。[结论]联用多种SELDI芯片检测,结合多元分析方法,使SELDI技术成为筛选疾病相关的生物学标志物的有力工具。     

运用SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达

目的 运用SELDI（Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization）蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制奠定基础.方法 常规培养Vero细胞,感染HSV-1,孵育12 h、24 h、48 h后用细胞裂解液裂解细胞.裂解上清经蛋白定量后应用IMAC3（固定金属亲和）和WCX2（弱阳离子交换）芯片,SELDI-TOF-MS技术检测细胞感染HSV-1前后蛋白质表达的差异.结果 感染24 h细胞出现明显细胞病变效应（CPE）,感染12 h质谱分析即可见蛋白的差异表达.共19个蛋白表达水平发生变化,其中IMAC3芯片发现差异峰9个, WCX2芯片发现差异峰10个.结论 SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制,HSV-1与宿主细胞的相互作用,及抗感染治疗靶位的寻找奠定了一定的基础.     

2005—2008年北京市西城区麻疹流行病学分析

目的了解北京市西城区麻疹的流行病学特征,为消除麻疹采取针对性措施提供依据。方法采用流行病学方法对2005—2008年北京市西城区麻疹发病资料进行分析。结果2005—2008年西城区累计发生麻疹251例,年平均发病率为6.71/10万,流动人口发病率明显高于本市人口。麻疹全市均有发病,以3—5月为多。1岁儿童麻疹病例数占病例总数的16.33%,≥15岁组麻疹病例数占病例总数的73.71%。结论流动人口的发病已成为全区麻疹流行的重要影响因素。开展育龄妇女的疫苗接种,提高流动人口麻疹苗免疫覆盖率是控制、消除该区麻疹发病的有效手段。     

Evaluation of numerical analysis of SDS-PAGE of protein patterns for typing Enterobacter cloacae

Twenty cultures comprising 13 clinical isolates of Enterobacter cloacae from two hospitals, the type and another reference stain of E. cloacae and the type strains of four other Enterobacter sp. and of Escherichia coli, were characterized by one-dimensional sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) of whole-cell proteins. The protein patterns were highly reproducible and were used as the basis of a numerical analysis which divided the clinical isolates into nine clearly defined protein types. Comparison with established typing methods indicated that the discrimination of SDS-PAGE was similar to that achieved with conventional typing methods and all strain groups recognized by combined sero/phage typing were also found by SDS-PAGE. In addition, protein typing sub-divided a group of four serotype O3 isolates that were difficult to distinguish by phage typing. We conclude that high-resolution SDS-PAGE of proteins provides an effective method of typing isolates of E. cloacae.     

2005年济南市细菌性痢疾发病状况分析

[目的]了解济南市细菌性痢疾的发病情况,为制定防治措施提供依据。[方法]应用描述性流行病学方法,对2005年济南市菌痢发病资料、菌群检测及药敏试验结果进行分析。[结果]2005年济南市菌痢发病率为45.86/10万,死亡率为0.02/10万。市区发病高于农村,发病以10岁以下儿童为主,其次是15-29岁的青壮年学生、农民,男性高于女性。发病高峰为7月。流行菌株主要为福志贺菌,药敏试验显示所有实验药物均有不同程度耐药,其中氨卞青霉素、复方新诺明及红霉素100.00%耐药。[结论]应加强医务人员培训,提高菌痢的疫情报告,规范治疗菌痢病人,以减少细菌耐药性的产生;采取综合性防治措施,才能有效控制菌痢的发病。     

低血糖昏迷患者的急诊救治方案分析

[目的]研究低血糖昏迷急诊救治的有效方案。[方法]随机选取某院2000年1月~2010年9月收治的165例低血糖昏迷病人,急诊救治措施均为及时检查血糖,证实血糖值均低于2.8mmol/L,立即静脉注射25%~50%葡萄糖40~60ml,未恢复者加以10%葡萄糖持续静滴治疗。[结果]122例患者的症状缓解迅速,意识明显好转;39例患者接受后续静脉滴注足量葡萄糖后,症状逐渐缓解,意识逐渐清醒;4例患者因并发脑水肿,加用糖皮质激素和甘露醇,意识转为清醒。无死亡病例。[结论]对低血糖昏迷的诊断及治疗必须迅速、及时、正确,早期诊断、早期治疗是抢救成功的关键。     

简阳市疟疾防治措施与效果研究

[目的]总结简阳市疟疾防治策略、措施和经验,评价防治效果。[方法]将简阳市1950～2006年疟疾发病资料、流行病学调查、媒介调查、防治、监测资料进行全面分析。[结果]1950年简阳市疟疾发病率为104.9/万,通过采取综合性抗疟措施,从1993年至2006年发病率控制在1/万以下,并且所有乡镇发病率均低于5/万。[结论]简阳市已经达到国家卫生部颁布的《基本消灭疟疾标准》,该市57年来的防治策略和综合抗疟措施是有效的。     

工作场所空气中镍和钴同时分离测定的方法研究

目的建立同时分离测定工作场所中镍和钴的方法。方法利用超声波浸取直接火焰原子分光光度法测定。结果该方法加标回收率范围镍为94.7%～106.4%,钴为92.8%～107.6%,相对标准偏差两者都小于10%。结论该方法具有简单、环保、准确等优点,可用于工作场所中镍和钴的测定。     

澄江县1998-2007年伤寒流行趋势分析

目的探讨澄江县伤寒流行趋势，为今后防制工作提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法，对澄江县1998-2007年期间疾病监测信息报告管理系统报告的伤寒疫情资料进行分析。结果从1953-2000年期间低于20／10万有11次（最低为无病例报告），超过90／10万有9次（最高464.5／10万），2000年后发病率均超过90／10万，疫情呈快速上升趋势，且间隔一二年出现高强度的流行；流行季节集中出现在4-8月之间；城区附近乡镇发病高于偏远乡镇；女性发病高于男性；发病职业以农民和学生为主（近80％）；发病以10-50岁年龄组为主（70％以上）；病原菌以伤寒沙门菌为主，发病危险因素与食用生冷食物和喝生水有关。结论澄江县2000年后属于伤寒高流行区，流行因素主要与该地居民饮食和喝生水习惯有关，加强传染源的管理及饮食行为干预和生冷食物的监测，是控制当前澄江县伤寒高发的主要措施。