日本血吸虫SIEA 26-28 ku抗原组分的紫外吸收光谱分析

目的了解SIEA 26-28 ku抗原分子的结构和功能以及生物学特性. 方法采用梯度聚丙烯酰胺凝胶制备电泳和高效液相色谱方法,分离纯化SIEA26-28 ku分子,并对其进行紫外吸收光谱分析鉴定. 结果通过紫外吸收光谱分析表明,SIEA26-28 ku抗原组分的紫外吸收光谱共有6个特征性蛋白吸收峰,分别在258、260、264.5、268、269.5和272 nm,部分吸收峰符合苯丙氨酸的吸收光谱. 结论高效液相色谱技术结合紫外吸收光谱分析,可为日本血吸虫SIEA 26-28 ku抗原组分结构和功能的进一步研究以及生物学特性分析提供重要信息.     

日本血吸虫SIEA28kDa分子抗原的二维凝胶电泳分析

目的分析鉴定日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)28kDa抗原组分.方法用高效液相离子交换法对电泳纯SIEA28kDa抗原组分进一步分离纯化,对获得的色谱纯SIEA28kDa抗原组分进行二维凝胶电泳分析.结果SIEA经双向凝胶电泳分离、银染后获得的SIEA-2D图谱蛋白斑点以pI 3～7和Mw14～66 kDa范围最多.进一步经图象采集、PDQuest 2D软件分析SIEA双向电泳图谱,计算在相同的设定值条件下获取的蛋白质斑点数,测得SIEA-2D电泳图谱平均为(948±89)个蛋白质斑点数.电泳纯SIEA28kDa抗原组分用高效液相离子交换法纯化后,280、220 nm波长色谱图均为一个两侧对称、光滑的高峰曲线,色谱洗脱液对其活性光密度图也为一个两侧对称、光滑的高峰曲线.二维凝胶电泳银染色可见一个显色饱和度高的蛋白质圆斑,免疫印迹分析为一个显色饱和度高的单一圆斑.结论色谱纯SIEA28kDa抗原组分为单一分子,其等电点为5.7.     

日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用--HGPRT是否是主要的靶抗原

目的观察日本血吸虫SIEA26—28kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA26—28kDa成分。并以此纯化产物免疫BALB／c小鼠。将小鼠分为三组，分别用SIEA、SIEA26—28kDa和免疫佐剂免疫动物，然后进行尾蚴攻击感染。46天后剖杀动物，冲虫，然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果SIEA26—28kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为54．8％。与对照组比较有极显著性差异；该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了48.07％和77.41％，且以成熟虫卵数的下降较为显著，分别降低了83．6％和93．3％；粪卵数的下降幅度最为显著，达87．26％。结论SIEA26—28kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。     

抗日本血吸虫生殖抗原SIEA 26-28 ku组分的质谱分析

目的 筛选确定抗日本血吸虫生殖功能抗原SIEA26-28 ku的编码基因. 方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA),选择SIEA 26-28 ku免疫血清识别信号较强的SIEA-2D蛋白质斑点(65～73号)采样,消化处理后进行质谱与生物学信息分析. 结果 从SIEA-2D图谱上共获得1 037个蛋白质斑点;通过MALDI-TOF-MS对其进行肽指纹图谱分析后获得了7张肽指纹图谱.通过PeptIdent软件检索SWISS-PROT数据库,发现有意义的血吸虫同源蛋白质11个,这些同源蛋白质部分与细胞代谢或蛋白质合成代谢相关,部分与核苷酸代谢有关,其中编号为SIEA-2D66为日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT),SIEA-2D71为琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SDISP),SIEA-2D73为谷胱甘肽-S-转移酶(GST),其同源程度分别为37.2%、18.7%和22.9%. 结论 初步获得与抗日本血吸虫生殖功能抗原SIEA 26～28 ku相关的编码基因HGPRT、SDISP和GST.     

日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.     

日本血吸虫未成熟虫卵糖蛋白抗原生物学特性的初步分析

目的 分析日本血吸虫未成熟卵糖蛋白抗原的生物学特性。方法 利用SDS－PAEG、银染色、PAS及脂类染色对SIEA组分进行分析，并根据标准分子量迁移率Rf值，用半对数坐标纸绘图，测算各区带的分子量。结果 SIEA有10种糖蛋白分子，其分子量为101、97、91、87、77、74、66、62、56、50kDa；1条37kDa脂蛋白区带。结论 SIEA含有蛋白、糖蛋白、脂蛋白等抗原分子，可能在宿主的免疫应答中发挥不同的作用。     

华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原的免疫印迹分析

目的 寻找华支睾吸虫成虫抗原中具有特异性诊断价值的抗原组分。方法 应用SDS—PAGE和Westernblot分析华支睾吸虫成虫未脱脂、脱脂的可溶性抗原蛋白组分的血清学反应特征。结果 未脱脂成虫抗原有14条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、170、100、67、41、37、35、32、26ku是主带，180、170、37、35ku条带还可与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应。脱脂成虫抗原有10条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、100、67、37、35、24、20ku是主带，此外，180ku带可与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应，78ku带可以与血吸虫病病人血清发生交叉反应。结论 华支睾吸虫成虫抗原经脱脂处理后可减少与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清交叉反应的蛋白组分数量。华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原中主要的特异性抗原组分分别是100、67、41、32、26ku和100、67、37、35、24、20ku，这些组分抗原可用于华支睾吸虫病的免疫诊断。     

抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26-28kDa单链抗体与EGFP的融合表达及靶向性研究

目的 体外观察抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26～28kDa单链抗体与日本血吸虫各阶段的靶向部位,探讨单链抗体在抗血吸虫病疫苗研究中的应用价值.方法 扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,克隆至PET32a/SIEA26～28kDa-scFv质粒,构建PET32a/EGFP-scFv质粒.转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,并诱导表达单链抗体融合蛋白,分析单链抗体融合蛋白与SIEA26～28kDa的结合特异性.单链抗体融合蛋白与日本血吸虫成虫、虫卵切片孵育,荧光显微镜下观测GFP信号,确定特异性单链抗体的靶向性.结果 重组质粒PET32a/EGFP-scFv构建成功,Trx-EGFP-scFv融合蛋白高效表达,与SIEA26～28kDa特异性结合.GFP信号主要集中在未成熟卵卵胚,雌虫卵巢、卵黄腺及与生殖系统邻近的肠腔组织.结论 SIEA26～28kDa单链抗体与血吸虫未成熟卵胚胎及雌虫生殖系统具有较强的靶向性,具有潜在抗卵胚发育、抗雌虫生殖作用,为SIEA26～28kDa单链抗体在抗日本血吸虫病疫苗免疫靶向方面的研究奠定了基础.     

斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白质分析

目的分析和检测斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原的特异抗原组分。为建立特异、敏感的免疫学诊断方法、研制抗斯氏狸殖吸虫药物和疫苗提供理论基础。方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、双向电泳（Two—dimensional gel eleetrophoresis，2-DE）和免疫印迹（Western blot）等方法，对斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原进行分析。结果SDS-PAGE分离出22条蛋白带，其中主带8条，分子质量单位为13～64ku，未见65ku以上条带。Western blot显示20条显色带，主带6条，分子质量单位分别为13、18、22、28、35和64ku。2-DE电泳分离出斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原48个多肽斑点，分子质量单位为14～70ku，绝大部分分布于pI3．10～7．14，少数分布于pI8．78～9．85，在pI7．14～8．78之间几乎未见多肽斑点。Western blot分析出其中的10个主要多肽斑点能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别，大部分为集中在酸性区域的小分子多肽。结论斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原经SDS-PAGE电泳分离出的22条蛋白带中，有6条蛋白含量较高，能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别。2-DE电泳分离出的48个多肽斑点中，有10个含量较高，能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别，大部分为偏酸性的小分子多肽。     

弓形虫速殖子细胞质、细胞膜、排泄-分泌抗原蛋白分子测定及特异性免疫反应的试验分析

目的　研究弓形虫速殖子各类抗原的蛋白组分 ,主要蛋白分子的抗原性和用于血清学诊断的价值。　方法　用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析弓形虫速殖子各类抗原的蛋白组分和主要蛋白分子 ,用免疫印渍技术以弓形虫患者血清识别弓形虫各类抗原的免疫反应靶位。　结果　弓形虫速殖子细胞质抗原、细胞膜抗原和分泌代谢抗原的主要蛋白分子分别为 85、5 2、38ku;4 8、35、16、14 ku和 15 8、95、2 7、15、13ku及弓形虫患者特异性血清识别速殖子各类抗原的免疫反应靶位分别是 32、4 0和 2 7ku。　结论　弓形虫速殖子各类抗原间存在各自独特的抗原决定簇和可被特异性记忆抗体识别的免疫反应受体。此对于提高弓形虫感染的免疫学诊断及免疫学预防均具有一定的实用价值。     

氟化钠与小牛胸腺DNA直接结合作用的研究

目的 探讨氟化钠与DNA的直接结合作用。方法 应用自动程序升温紫外分光光度计和高效液相LC-VP离子色谱分析仪对氟化钠与小牛胸腺DNA的直接结合作用进行了研究。结果 6.3,483.0,987.0mg/L氟化钠对5.0,10.0,22.5mg/L小牛胸腺DNA在260nm的吸收光谱未造成任何影响，在205nm处吸收峰虽有随氟化钠浓度升高而逐渐降低的倾向，但结果的可重复性较差：1.0mg/L的溴化乙锭可使10.0mg/L浓度的小牛胸腺DNA融点温度显著升高，而210.0mg/L的氟化钠对其无明显影响；不同浓度小牛胸腺DNA与氟化钠作用后，冰乙醇变性洗涤，经高效液相色谱分析仪检测，DNA水溶液中无氟离子检出。结论 氟化钠未与小牛胸腺DNA发生稳定结合。     

弓形虫速殖子细胞质、细胞膜、排泄—分泌抗原蛋白分子测定及特异性免疫反应的试验分析

目的 研究弓形虫速殖子各类抗原的蛋白组分，主要蛋白分子的抗原性和用于血清学诊断的价值。方法 用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析弓形虫速殖子各类抗原的蛋白组分和主要蛋白分子，用免疫印渍技术以弓形虫患者血清识别弓形虫各类抗原的免疫反应靶位。结果 弓形虫速殖子细胞质抗原、细胞膜抗原和分泌代谢抗原的主要蛋白分子分别为85、52、38ku；48、35、16、14ku和158、95、27、15、13ku及弓形虫患者特异性血清识别速殖子各类抗原的免疫反应靶位分别是32、40和27ku。结论 弓形虫速殖子各类抗原间存在各自独特的抗原决定簇和可被特异性记忆抗体识别的免疫反应受体。此对于提高弓形虫感染的免疫学诊断及免疫学预防均具有一定的实用价值。     

弓形虫GRA1基因在毕赤酵母菌中的表达、纯化与鉴定

目的研究弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)在毕赤酵母菌中的表达,获得高效表达的具有生物学活性的目的蛋白。方法将已构建重组的pPIC9K-GRA1质粒转化入酵母菌GS115,筛选His Muts表型转化子,摇瓶培养,1%甲醇诱导表达。表达产物经高效液相色谱法纯化后,测定其生物学活性。结果诱导4d的蛋白表达量达到2.5g/L。SDS-PAGE显示表达蛋白的分子质量单位为24ku,Westernblot鉴定表达产物具有抗原性。表达蛋白经高效液相色谱纯化产物后纯度达到90%以上。结论弓形虫GRA1基因在毕赤酵母中成功分泌表达目的蛋白,表达产物具有抗原性。     

日本血吸虫未成熟虫卵67kDa分子抗原诊断血吸虫病的研究

本文通过SDS－PAGE和电渗方法，从日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（SIEA）中分离纯化出67kDa蛋白分子，以该分子包被微板进行ELISA，检测了急、慢性日本血吸虫病人血清，其阳性检出率达100％和94．6％，与60例正常人血清、30例肝吸虫和31例肺吸虫病人血清均未出现明显交叉反应，慢性血吸虫病人治疗后3个月、半年和1年的阴转率分别为58．1％，75．4％和84．6％。提示SIEA67kDa分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

约氏疟原虫保护性抗原快速蛋白液相色谱法纯化及鉴定

目的：建立制备级纯化约氏疟原虫（Ｐ．ｙ．）保护性抗原的新方法。方法：应用快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ），将重度感染Ｐ．ｙ．的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠血液中提取的粗抗原，首先用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶色谱柱进行分离，收集活性组分，再用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱进一步纯化。结果：一次上样量约２００ｍｇ，可得到纯化抗原１４ｍｇ。经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）测定抗原纯度＞９０％，抗原分子量为５３ｋＤａ。结论：动物实验证明，该抗原具有很好的保护作用。该法操作比亲和色谱法简单，制备量大于亲和色谱法和高效液相色谱法（ＨＰＬＣ），纯化效率和纯度与ＨＰＬＣ法相似，一次纯化周期仅需３ｈ，是Ｐ．ｙ．抗原纯化的高效方法。     

曼氏迭宫绦虫裂头蚴感染早期诊断抗原的研究

目的寻找曼氏迭宫绦虫裂头蚴感染早期诊断抗原。方法从野蛙体内收集曼氏迭宫绦虫裂头蚴,经口接种感染20只昆明小鼠,每只小鼠接种2条裂头蚴,感染后6～28d隔天尾静脉采血,采用ELISA检测抗裂头蚴抗体;应用双向电泳（two—dimensionalelectrophoresis,2-DE）与Westernblot对裂头蚴可溶性抗原进行分析。结果裂头蚴感染后8d,小鼠血清特异抗体阳性率为10％（2／20）,感染后14d特异抗体阳性率达100％。2-DE显示,裂头蚴可溶性抗原有255±6个蛋白点,分子质量主要集中在25～117ku,其中〉44ku的蛋白点有171±9个,占总蛋白点数的67．1％;等电点（pI）范围为4～7,其中227个蛋白点集中在pI5～6．5,占蛋白点总数的89．1％。Westernblot检测有14个蛋白点可被感染曼氏迭宫绦虫裂头蚴14d的小鼠血清识别,其分子质量集中在82、45、36、34及25ku;1～14号蛋白点所对应的pI值分别为5．93、6．06、6．17、6．30、6．39、5．82、6．01、6．17、5．69、5．46、5．63、6．1、5．71、6．19。结论曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性抗原分子质量主要集中在25～117ku,pI值集中在5．0～6．5。感染14d的小鼠血清识别的裂头蚴蛋白可作为裂头蚴感染早期诊断候选抗原。     

曼氏迭宫绦虫裂头蚴感染早期诊断抗原的研究北大核心CSCD

目的寻找曼氏迭宫绦虫裂头蚴感染早期诊断抗原。方法从野蛙体内收集曼氏迭宫绦虫裂头蚴,经口接种感染20只昆明小鼠,每只小鼠接种2条裂头蚴,感染后6～28d隔天尾静脉采血,采用ELISA检测抗裂头蚴抗体;应用双向电泳（two—dimensionalelectrophoresis,2-DE）与Westernblot对裂头蚴可溶性抗原进行分析。结果裂头蚴感染后8d,小鼠血清特异抗体阳性率为10％（2／20）,感染后14d特异抗体阳性率达100％。2-DE显示,裂头蚴可溶性抗原有255±6个蛋白点,分子质量主要集中在25～117ku,其中〉44ku的蛋白点有171±9个,占总蛋白点数的67．1％;等电点（pI）范围为4～7,其中227个蛋白点集中在pI5～6．5,占蛋白点总数的89．1％。Westernblot检测有14个蛋白点可被感染曼氏迭宫绦虫裂头蚴14d的小鼠血清识别,其分子质量集中在82、45、36、34及25ku;1～14号蛋白点所对应的pI值分别为5．93、6．06、6．17、6．30、6．39、5．82、6．01、6．17、5．69、5．46、5．63、6．1、5．71、6．19。结论曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性抗原分子质量主要集中在25～117ku,pI值集中在5．0～6．5。感染14d的小鼠血清识别的裂头蚴蛋白可作为裂头蚴感染早期诊断候选抗原。     

复方增效氯硝柳胺悬浮剂的研究Ⅰ复方悬浮剂的研制及特性分析

目的研制复方增效氯硝柳胺悬浮剂,并分析其性能。方法将氯硝柳胺和氯辛硫磷与润湿剂、分散助悬剂和黏度调节剂等助剂混合,经球磨机研磨,制成复方增效氯硝柳胺悬浮剂。并对该制剂的黏度、粒径等进行分析,根据测定的氯硝柳胺和氯辛硫磷最大吸收峰波长,用高效液相法测定制剂中氯硝柳胺和氯辛硫磷的含量,并进行水溶液悬浮稳定性测定。结果复方增效氯硝柳胺悬浮剂是一种灰白色流动性黏稠液体,进入水体极易分散,可与水以任意比例混合。pH8．65,黏度137 mpa·s,药物颗粒粒径0．138-19．953μm,其中95．6％粒径<10 μm,82．24％粒径<5μm。氯硝柳胺的紫外吸收有3个峰值,分别为210、234 nm和332 nm,氯辛硫磷的吸收峰为269 nm。高效液相法测得复方增效剂氯硝柳胺含量为20．64％(W／W),氯辛硫磷含量为5．26％(W/W)。复方水溶液悬浮性2 h内中段氯硝柳胺含量均>100％,4 h仍为89．14％。结论新研制的复方增效氯硝柳胺悬浮剂是一种性能稳定,符合质量标准的制剂。     

日本血吸虫未成熟卵抗血清对日本血吸虫cDNA文库的免疫筛选

目的为了获得抗雌虫生殖和卵胚发育相关抗原的血吸虫基因。方法通过采用抗日本血吸虫未成熟卵SIEA26—28kDa免疫血清对日本血吸虫成虫cDNA文库进行筛选。结果共获得阳性克隆23个,经重复筛选之后,随机挑取其中的5个阳性克隆,分别进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳显示获得单一扩增条带,其大小位于150bp～1.5kb之间。结论从SjcDNA文库中筛选出抗卵相关阳性克隆,有关分析鉴定在进一步进行中。     

血吸虫照射疫苗特异性抗原分子的研究进展

血吸虫照射尾蚴疫苗能诱导宿主产生高效的免疫保护力，其中一种或数种特异性的抗原分子可能起重要作用。本就已知的数种血吸虫照射尾蚴疫苗特异性抗原分子的结构、功能及免疫学特性进行综述。