LC-MS/MS法测定骨肉瘤患者血清中甲氨蝶呤及其 代谢产物7-羟基甲氨蝶呤的浓度

目的:建立测定人血清中甲氨喋呤及其代谢产物7-羟基甲氨喋呤浓度的LC-MS/MS法,并应用于骨肉瘤患者大剂量甲氨蝶呤化疗后的治疗药物监测,为临床合理用药提供依据.方法:以氨基蝶呤作为内标,血清样品经含内标甲醇沉淀蛋白处理.色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C18;柱温35℃;流速0.4 mL· min-1;流动相为含0.1％甲酸的水溶液和含0.1％甲酸的乙腈溶液,梯度洗脱.质谱检测方式为电喷雾离子阱正离子模式,MRM扫描,监测甲氨蝶呤m/z 455.098→308.000,7-羟基甲氨喋呤m/z 471.187→324.100,氨基蝶呤m/z 441.198→294.100.结果:甲氨蝶呤浓度在2～1000 ng·mL-1 (r=0.9985),7-羟基甲氨蝶呤浓度在20～10000 ng·mL-1(r=0.9984)与峰面积线性关系良好.甲氨蝶呤、7-羟基甲氨蝶呤日内及日间RSD≤6.21％.甲氨蝶呤、7-羟基甲氨蝶呤的平均回收率分别为102.83％～119.34％、88.41％～95.37％.结论:本方法简便、准确、快速,适用于甲氨喋呤及其代谢产物7-羟基甲氨喋呤的血药浓度测定.     

7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体在大鼠体内的代谢和排泄

目的考察7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)脂质体经静脉注射后,在大鼠尿液、粪便中的代谢产物以及以SN-38原形药物排泄的量。方法大鼠尾静脉单次给予2.77 mg/kg SN-38脂质体,分别于0～6、6～12、12～24、24～48 h分段收集尿液、粪便,采用UPLC/Q-TOFMS法对SN-38脂质体在大鼠尿液、粪便中的代谢产物进行鉴定,并且建立HPLC法,用于大鼠尿液及粪便样品中SN-38原形药物的排泄量的测定。结果 SN-38脂质体的在大鼠体内的代谢产物经鉴定为SN-38G。48 h内脂质体组共有1.57%的原形药物经过尿液排出,共有12.94%的SN-38原形药物经过粪便排出。结论 SN-38脂质体只有少部分以原形药物经尿液和粪便排出体外。     

LC-MS/MS法测定人血清中甲氨蝶呤及其代谢产物7-羟基甲氨蝶呤的浓度

摘 要 目的:建立测定人血清中甲氨喋呤及其代谢产物7羟基甲氨喋呤的浓度的LC-MS/MS法,并应用于临床治疗药物监测。方法: 采用D3-甲氨蝶呤同位素内标,血清样品经含内标乙腈沉淀蛋白处理。HPLC色谱柱为Sepax GP-phenyl,柱温35℃,流速0.3 ml·min^-1,流动相为0.1%甲酸和乙腈,梯度洗脱。质谱检测方式为ESI正离子模式,MRM扫描,监测甲氨蝶呤m/z 455～308,7羟基甲氨蝶呤m/z 471～324,D3甲氨蝶呤（内标）m/z 458～311。结果:甲氨蝶呤浓度在5～4 000 ng·ml^-1范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）,7-羟基甲氨蝶呤浓度在1～800 ng·ml^-1范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 7）。甲氨蝶呤及7-羟基甲氨蝶呤日内及日间RSD＜9.0%。甲氨蝶呤平均回收率为94.34%～115.08%,7-羟基甲氨蝶呤平均回收率为96.41%～103.04%。结论:本方法简便、准确、快速,适用于甲氨喋呤及其代谢产物7-羟基甲氨喋呤的血药浓度测定。     

固相萃取高效液相色谱法检测生物样本中甲氨喋呤

目的：建立生物样品中甲氨喋呤（ＭＴＸ）浓度测定方法。方法：固相萃取净化和富集样品,高效液相色谱法测定血清和脑脊液中ＭＴＸ含量。色谱条件：以Ｃ１８柱为分析柱,流动相为甲醇－乙腈－磷酸盐缓冲液（２：７：９１）,流带０．８ｍＬ．ｍｉｎ＾－１,柱温２５℃,检测波长３１３ｎｍ。结果：在０．０５￣８０μｇ．ｍＬ＾－１范围内呈线性,回收率为９０％以上,血清中ＭＴＸ最低检测限为１０ｎｇ．ｍＬ＾－１,脑脊液中最低检     

高效液相-电喷雾质谱分析7-羟基黄酮在大鼠体内的代谢产物

目的:研究7-羟基黄酮在大鼠体内的代谢。方法:应用高效液相-电喷雾质谱检测大鼠灌胃7-羟基黄酮后血浆、尿液、胆汁和粪便中的代谢产物。实验采用Zorbax C18色谱柱,二元线性梯度洗脱进行色谱分离,并与电喷雾质谱联用,根据负离子模式的分子离子峰获得化合物相对分子质量信息,推测化合物的可能结构。结果:在大鼠尿液、粪便、血浆、胆汁中检测到原形成分7-羟基黄酮和7-羟基黄酮葡萄糖醛酸结合物,在胆汁或尿中尚检测到7-羟基黄酮硫酸结合物。结论:7-羟基黄酮在大鼠体内主要以Ⅱ相代谢产物葡萄糖醛酸结合物和硫酸结合物的形式存在。     

甲氧滴滴涕及其代谢产物2,2-二(4-羟基苯基)-1,1,1-三氯乙烷在大鼠体内的毒代动力学

目的探讨甲氧滴滴涕(MXC)及其代谢产物2,2-二(4-羟基苯基)-1,1,1-三氯乙烷(HPTE)在大鼠体内的毒代动力学。方法雄性SD大鼠单次ig给予MXC 500 mg.kg-1染毒后,于不同时间点收集血液样本。应用高效液相色谱-紫外法测定大鼠血浆中MXC和HPTE的含量,用DAS 2.0软件的房室模型进行拟合,计算代谢动力学参数。结果 MXC的毒代动力学参数血浆最大浓度(cmax)为(5.52±1.21)mg.L-1;分布半衰期(t1/2α)为(4.12±1.21)h;消除半衰期(t1/2β)为(22.54±6.31)h;曲线下面积〔AUC(0-t)〕为(65.97±17.94)mg.h.L-1;AUC(0-∞)为(69.06±18.61)mg.h.L-1;清除率(Cl)为(7.94±2.31)L.h-1.kg-1;和表观分布容积(V)为(66.16±20.21)L.kg-1。代谢产物HPTE的毒代动力学参数cmax为(1.32±0.37)mg.L-1,t1/2α为(3.13±0.91)h;t1/2β为(31.12±10.91)h,AUC(0-t)为(14.69±2.99)mg.h.L-1,AUC(0-∞)为(17.23±3.66)mg.h.L-1,Cl为(30.14±6.09)L.h-1.kg-1,V为(232.55±36.44)L.kg-1。结论 MXC及其代谢产物HPTE的毒代动力学均符合二室模型。MXC和HPTE的清除半衰期均较长,易发生体内蓄积。     

联苯双酯代谢产物的分离和鉴定

给大鼠灌胃联苯双酯后,用TLC法分离尿中代谢产物。发现尿中的主要代谢物为葡萄糖醛酸结合物,将此结合物水解后,用TLC法分离到一种极性较葡萄糖醛酸结合物为弱的代谢物,经光谱分析测定其结构为4-羟基-4′-甲氧基-5,6,5′,6′-二次甲二氧基-2,2′-二甲氧羰基联苯(简称4-去甲联苯双酯)。此外还证实,大鼠灌胃后在肝、肾组织中均以葡萄糖醛酸结合物为主,仪有少量非结合形代谢物和原形药物。     

HPLC法同时测定消瘤藤中茵芋苷、7-羟基香豆素、7-羟基-8-甲氧基香豆素的含量

摘要：目的:建立测定广西特色瑶药消瘤藤药材中茵芋苷、7-羟基香豆素、7-羟基-8-甲氧基香豆素含量的高效液相色谱的方法。方法:运用反相高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm, 5μm）,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为320 nm,柱温为25℃,进样量10μl,以外标法定量。结果:茵芋苷浓度在1.032～103.2μg·ml-1之间与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为99.78%（RSD=2.7%,n=6）;7-羟基香豆素浓度在1.022～102.200μg·ml-1之间与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为98.78%（RSD=3.8%,n=6）;7-羟基-8-甲氧基香豆素浓度在1.112～111.2μg·ml-1之间与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为97.56%（RSD=3.7%,n=6）。结论:该方法操作简便、结果准确、重复性好,提供了一种更好的控制消瘤藤药材质量的方法。     

高效液相色谱法快速检测7种生物胺和代谢产物

目的:建立高效液相色谱法快速测定肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、5'-羟色胺、5-羟吲哚已酸、高香草酸及多巴可7种生物胺和代谢产物的方法。方法:流动相选用柠檬酸-柠檬酸三钠-甲醇-离子对试剂-EDTA-Na2混合液(pH4.2);色谱柱采用30mm×3 mm C18柱,以电化学检测器检测。并以不同的标本预处理方法,分别用于大白鼠帕金森病模型的研究和嗜铬细胞瘤病人的实验诊断中。结果:线性范围在2-1000 ng·mL-1,最低检测限为2-30 ng·mL-1,平均回收率为80.1％-107.3％。并分别对12例正常及12例PD组大鼠的5种生物胺、24例正常及28例嗜铬细胞瘤病人的3种生物胺进行了测定和统计分析。结论:方法能满足对大白鼠帕金森病模型的研究和嗜铬细胞瘤病人实验诊断的需要。     

MCR-ALS应用于7-乙基-10羟基喜树碱中喜树碱含量的测定

目的：应用多元曲线分辨-交替最小二乘（MCR-AIS）法，对7-乙基-10-羟基喜树碱与喜树碱的色谱重叠峰进行分辨，并对杂质喜树碱进行定量。方法：以渐进因子分析（EFA）解析结果作为初始值对喜树碱与7-乙基-10-羟基喜树碱的色谱重叠峰进行ALS迭代优化，直至收敛。结果：采用此方法分辨所得光谱还原率高，定量结果的浓度值与真实值之间线性关系良好。结论：本方法用于药物色谱重叠峰分辨结果可靠。     

氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮在大鼠体液及组织中的检测及分布

目的:建立生物检材中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的检测方法,考察氯胺酮和去甲氯胺酮在大鼠体内的分布。方法:用高效液相色谱法(HPLC)检测生物检材中的氯胺酮及去甲氯胺酮;以10 mg·kg-1剂量给大鼠灌胃(ig),分别于给药后10 min,45 min,2 h和8 h处死,测定体液和组织中氯胺酮及去甲氯胺酮的含量。结果:建立起生物检材中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的HPLC法。所建方法在0.05-25.0μg.g-1浓度范围内线性关系良好,r2=0.999,萃取回收率大于75%;肝和肾中氯胺酮和去甲氯胺酮含量最高,其次为:脾、尿液、肺、脑、血液、心和肌肉。结论:所建方法准确、灵敏,适用于组织中氯胺酮及其代谢物去甲氯胺酮的分析鉴定;肝和肾可作为毒物分析的组织检材。     

甲氨蝶呤的卷积极谱法测定和电极还原机理的研究

用高阶导数卷积极谱法研究了针剂和尿液中抗肿瘤药物甲氨蝶呤的微量测定法。在9.0×10^-8～1.6×10^(-5)mol/L内波高与浓度有线性关系。最低检测限为1.8×10^-8mol/L。与英国药典(1980)的标准方法进行了比较,极谱法具有更高的灵敏度。研究了甲氨蝶呤的电极还原机理。在Britton—Robinson缓冲溶液中甲氨蝶呤产生两个还原波。第一个波为可逆的2e—2H⁺电极还原过程,可供定量测定。第二个波为不可逆波。     

高效液相色谱法同时测定盐酸维拉帕米及其主要代谢产物

建立了反相高效液相色谱法同时测定人血浆中维拉帕米及其主要代谢产物去甲维拉帕米血药浓度.以甲醇—水—三乙胺(67∶33∶0.4,pH6.7)为流动相,乙吗噻嗪(ethmosine)为内标,样品用正己烷—正丁醇混合液提取浓缩后进样,紫外检测器检测(279nm)。此法操作简便,精密度好,日内、日间误差:维拉帕米<8.6%,去甲维拉帕米<7.6%;方法回收率高,维拉帕米、去甲维拉帕米回收率均>92%。两者血药浓度在25～1000ng·ml-1范围内呈线性关系,最小检测浓度维拉帕米:2.5ng·ml^-1,去甲维拉帕米:5.0ng·ml^-1。应用该法测定了6名志愿者口服盐酸维拉帕米片剂后的血药浓度。     

反相高效液相色谱法测定血浆中丙吡胺及其代谢物

用反相高效液相色谱法测定血浆中丙吡胺(DP)及其代谢物单异丙吡胺(MND)。两者的检测限均小于0.02μg,最低检测浓度0.1μg/ml;回收率分别为101.4%和98.6%;日内及日间变异系数均小于5%;临床上可能与 DP 同时服用的一些药物对本测定均无干扰。     

人尿中右美沙芬及代谢物的高效液相色谱测定法

用反相高效液相色谱法测定人尿中右美沙芬(DM)及其代谢物去甲右美沙芬。尿样经酸、碱提取纯化,直接进样HPLC系统。样品经苯基柱分离后在荧光(激发波长280nm,发射波长310nm)下检测,以乙腈—含10mmol·L^-1 KH₂PO₄,10mmol·L^-1庚磺酸盐水溶液(35∶65,pH4.0)为流动相,外标法定量。DM的最低检测浓度为0.023mg·L^-1。DM和DX的日内和日间相对标准差均小于5%。平均回收率为104.90%。本法为临床筛选异喹胍羟化酶活性与合理用药提供了一种简便、安全的方法。     

高效液相色谱法同时测定动物血浆中萘哌地尔及其主要代谢产物浓度

为研究大鼠口服萘哌地尔的药代动力学规律,建立了同时测定萘哌地尔及其去甲基代谢产物浓度的高效液相色谱法。以甲醇、乙腈以及0.02mol·L^-1磷酸二氢钾溶液为流动相,RP-C₁₈为固定相,普萘洛尔作内标,紫外定量波长240nm。此条件下内标物、去甲基物和原药的保留时间分别为6.2,7.6和10.3min;绝对回收率分别为97.4%,86.6%和86.1%。去甲基物和原药在10～800ng·ml^-1血浆浓度范围内线性关系良好,γ=0.9998,最低检测浓度分别为8ng·ml^-1和5ng·ml^-1;日内和日间的相对标准偏差(RSD)均分别小于6.3%和11.6%(n=5)。并用此法研究了大鼠单次口服萘哌地尔后两者的药时规律。     

超快速液相色谱-串联质谱法同时测定尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮

目的:建立超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)定性定量检测人体尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮的分析方法。方法:尿液中的氯胺酮和去甲氯胺酮经液液萃取分离后,用UFLC-MS/MS进行定性定量分析,从线性、抗干扰性、精密度、回收率及稳定性等方面对方法进行验证。结果:氯胺酮、去甲氯胺酮在0.1 ng·m L-1-1000.0 ng·m L-1范围内线性良好(KET:r=99.848%、RSD=0.064%;NKET:r=99.254%、RSD=0.197%),方法的最低检出限为0.05 ng·m L-1;方法的回收率在100%±3.0%(n=3),KET、NKET的低、高浓度回收率在98.071%-100.197%、98.419%-102.873%范围内;日内、日间精密度RSD<5.0%(n=6,day=5)。结论:本方法检测快速、准确、灵敏、特异性好,可用于人体尿液中氯胺酮及去甲氯胺酮的定性定量分析。     

氨甲喋呤多相脂质体的制备及其动物抑瘤活性和临床前药理学实验研究

采用融熔法制备了氨甲喋吟(MTX)多相脂质体,并进行了抑瘤活性、小鼠急性毒性、家兔亚急性毒性和安全性实验。结果表明多相脂质体剂型显著提高了 MTX 对小鼠 EC 和 L615瘤株的抑瘤活性。急性毒性实验结果表明 MTX 多相脂质体和 MTX 水溶液的 ivLD_(50)值无显著性差异。亚急性毒性实验表明 MTX 多相脂质体大剂量给药时可出现肝细胞变性坏死。安全性实验未见异常反应。     

人肝微粒体中尼莫地平及其脱氢代谢物的HPLC测定法及代谢动力学

目的：建立人肝微粒体中尼莫地平及其代谢物的HPLC测定法,并用本法研究尼莫地平在肝微粒体中代谢的动力学。方法：采用HPLC法,色谱柱为Hypersil C₁₈柱,流动相为乙腈—水(62∶38)检测波长UV 238 nm,样品用乙醚—正己烷(1∶1)提取。结果：本法的回收率为94.3%～98.5%,日内和日间RSD为1.45%～9.68%,尼莫地平和其脱氢代谢物的浓度分别在1.31～20.92 μg.mL^-1和122.7～4908.0 ng.mL^-1范围内与峰面积呈良好线性关系。在本实验条件下尼莫地平呈线性消除,而其脱氢代谢物呈线性增加。结论：尼莫地平在人肝微粒体内被迅速代谢,肝微粒体P450酶参与了尼莫地平的脱氢氧化。     

氯唑沙宗及其代谢物的HPLC测定方法和药代动力学研究

目的旨在建立氯唑沙宗及其代谢物的方法。应用高效液相色谱法,内标物为5-fluorobenzoxazolone,经乙酸乙酯提取,紫外检测波长为287nm。结果表明,6-羟氯唑沙宗、内标物及氯唑沙宗的保留时间分别为6.12,10.47和18.65min。6-羟氯唑沙宗及氯唑沙宗在0.5～20μg·ml^-1血浆浓度范围内线性关系良好,回收率均在82.80%～100.76%之间,当日及日间相对标准差分别小于8%和11%。两药的最低检测浓度分别为0.2和0.5μg·ml^-1。多种常用药物对样品的色谱峰无干扰。曾对8名健康受试者单次口服氯唑沙宗400mg的药代动力学进行了观察。提示此方法可用于氯唑沙宗的体内氧化代谢研究。