OHAP-1对大鼠C6胶质瘤细胞bcl-2/bax基因表达和氧化应激的影响

目的：探讨冲绳巴布蛇毒蛋白-1（OHAP-1）对大鼠C6胶质瘤细胞的增殖抑制作用及其机制。方法：MTT法检测2.5、5.0和10.0 mg•L^-1 OHAP-1对C6胶质瘤细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测OHAP-1对C6胶质瘤细胞bcl-2和bax基因表达的影响;分光光度法检测胶质瘤细胞中丙二醛 (MDA）的含量和超氧化物歧化酶(SOD）的活性。结果：2.5、5.0和10.0 mg•L^-1OHAP-1对C6胶质瘤细胞生长抑制率（49.77％、67.65％和76.42％）高于对照组（P<0.001）。随着OHAP-1剂量的增加,bcl-2 mRNA的表达逐渐下降,bax mRNA的表达逐渐升高,bcl-2/bax亦逐渐减小。2.5、5.0和10.0 mg•L^-1组MDA含量高于对照组(P<0.01),且SOD活性低于对照组(P<0.01);5.0和10.0 mg•L^-1组MDA含量高于2.5 mg•L-1 组和对照组(P<0.001),10.0 mg•L^-1组SOD活性低于2.5 mg•L^-1 组和对照组(P<0.001);10.0 mg•L^-1组SOD活性低于5.0、2.5 mg•L^-1组和对照组(P<0.01)。结论：OHAP-1通过氧化应激使bcl-2/bax mRNA表达降低可能是抑制C6胶质瘤细胞增殖的重要原因之一。     

海洛因对C6细胞增殖细胞核抗原基因表达的影响

目的：检测海洛因对大鼠神经胶质瘤C6细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）基因表达的影 响,为探索海洛因成瘾的分子生物学机制提供依据。方法：大鼠神经胶质瘤C6细胞加入浓度为0～100 mg•L^-1的海洛因进行细胞培养,24 h后用MTT法检测海洛因对C6细胞存活率的影响。RT-PCR法检测海洛因作用下C6细胞PCNA mRNA的表达。结果：MTT结果显示海洛因浓度为10、20和100 mg•L^-1时C6细胞存活率分别为90.62%、80.97% 和62.73%,与对照组比较明显下降 (P<0.05)。在转录物水平,浓度为20 mg•L^-1的海洛因作用于C6细胞48 h时,PCNA基因的转录产物PCNA mRNA明显减少,与对照组比值为0.297（P<0.01）。结论：海洛因浓度为20 mg•L^-1时对C6细胞的增殖抑制作用接近30%,可能与海洛因成瘾形成有关。     

褪黑素对小鼠胸腺细胞电离辐射损伤的防护作用

目的：探讨外源性褪黑素（MLT）对电离辐射所致小鼠胸腺细胞损伤的影响及其机制。 方法：通过腹腔注射方式给予昆明系小鼠外源性MLT,分别建立单次给药和连续给药两种动物模型。对于单次给药动物模型,腹腔注射不同浓度MLT后60 min给予1 Gy X射线全身照射,12 h后采用流式细胞术和荧光分光光度法分别检测胸腺细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率的变化;对于连续给药动物模型,连续1周腹腔注射不同浓度MLT后给予1 Gy X射线全身照射,24 h后检测胸腺细胞数量及³H-TdR掺入率的变化。 结果：单次给药动物模型,小鼠受1 Gy X射线全身照射后12 h,胸腺细胞数显著低于假照组（P<0.001）,凋亡小体百分率和DNA裂解率显著高于假照组（P<0.001）。照射前预先给予外源性MLT,与0 mg•kg^-1 MLT组（单纯照射组）比较,胸腺细胞数增多,以0.5 mg•kg^-1 MLT组增多最明显（P<0.01）;凋亡小体百分率和DNA裂解率降低,在0.1~2.5 mg•kg^-1 MLT浓度范围内差异均具有显著性（P<0.001）。连续给药动物模型,小鼠受1 Gy X射线全身照射后24 h,胸腺细胞数及³H-TdR掺入率均显著低于假照组（P<0.001）。照射前预先给予外源性MLT,与单纯照射组相比,胸腺细胞数和³H-TdR掺入率均显著增多,前者在0.01~0.10 mg•kg^-1 MLT浓度范围内差异具有显著性（P<0.01）,后者在0.1~1.0 mg•kg^-1 MLT浓度范围内差异均有显著性（P<0.05）。 结论：照射前预先给予外源性MLT可减轻电离辐射所致小鼠胸腺细胞损伤,对小鼠免疫功能具有保护作用。     

薯蓣皂苷元对人低分化胃腺癌细胞株生长的抑制作用

目的：观察薯蓣皂苷元（diosgenin, Dio）对人低分化胃腺癌细胞株（MGC-803）的细胞分裂和集落形成的影响,初步探讨其杀伤肿瘤细胞的机制。 方法：采用四唑蓝（MTT）比色法、平板集落形成实验以及［³H］-TdR掺入实验。结果：MTT法检测Dio作用24、48、72 h的半数抑制浓度(IC₅₀)为56.290、27.837、17.723 mg•L^-1;平板集落形成实验显示Dio半数集落形成抑制浓度为5.486 mg•L^-1;Dio在较低浓度（3.750和7.500 mg•L^-1）下,可直接抑制MGC-803细胞DNA的合成。结论：Dio能够明显抑制MGC-803的细胞分裂和集落形成。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对体外C6胶质瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠C6胶质瘤细胞体外增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：分别以不同浓度（10、20和50 μmol•L^-1）的MG-132培养C6胶质瘤细胞,通过MTT法检测不同培养时间细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,HE染色、AO/EB染色以及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：MTT法检测显示10 μmol•L^-1MG-132作用于C6胶质瘤细胞24、48和72 h后,细胞增殖A值(0.46±0.03、0.48±0.03和0.45±0.02)均显著低于正常对照组（P<0.01）,且随浓度增加其抑制作用逐渐增强;10μmol•L^-1 MG-132作用C6胶质瘤细胞12 h后即可经流式细胞仪检测到明显的凋亡亚二倍体峰,以不同药物浓度（10、20和50 μmol•L^-1）处理C6胶质瘤细胞12 、24 和48 h后其细胞凋亡率均显著高于正常对照组（P<0.01）;形态学检查呈现凋亡细胞的特征。结论：蛋白酶体抑制剂MG-132在体外可显著抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖并诱导其发生凋亡。     

尾加压素Ⅱ对大鼠肾小管上皮细胞的促丝裂作用

目的：研究尾加压素Ⅱ（UⅡ）对大鼠肾小管上皮细胞的促丝裂作用。方法：采用机械分离和酶消化法获取肾小管上皮细胞进行培养、鉴定;用免疫细胞化学法定位溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入到肾小管上皮细胞DNA内;用MTT和BrdU掺入法观察不同浓度UⅡ（0、10^-10、10^-9、10^-8、10^-7和10^-6mol•L^-1）对肾小管上皮细胞增殖和DNA合成的影响,以确定其促丝裂作用。结果：培养的细胞经Cytokeratin-18免疫细胞化学染色后,强度不一和不均匀分布的棕黄色颗粒定位于大部分细胞的胞核周围和胞浆内。培养的肾小管上皮细胞经BrdU掺入和免疫细胞化学显色后,细胞核内有棕黄色颗粒沉着。10^-10 mol •L^-1 UⅡ组的MTT值、 BrdU掺入量与对照组（0 mol•L^-1 UⅡ）比较差异无显著性（P>0.05）;10^-9和10^-8mol•L^-1 UⅡ组的MTT值、BrdU掺入量高于对照组（P<0.01或P<0.05）;与对照组比较,10^-7和10^-6 mol•L^-1 UⅡ组的MTT值明显增加（P<0.05）,但增加的幅度较10^-9 和10^-8mol•L^-1 UⅡ组低,而BrdU掺入量无明显改变。结论：UⅡ对体外培养的大鼠肾小管上皮细胞具有促丝裂作用。     

蝎毒组分Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的：观察蝎毒组分Ⅰ(SV-Ⅰ)对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用。方法：卵巢癌细胞SKOV3分为空白对照组和SV-Ⅰ处理组(终浓度分别为200、400、800 mg•L^-1)，采用MTT法检测SV-Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长抑制率，集落形成法检测肿瘤细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化。结果：200、400和800 mg•L^-1-1组, SKOV3细胞集落数分别为57.00±6.16和48.00±4.11，明显低于对照组（84.00±5.29）(P<0.01)；与空白对照组比较，400 mg•L^-1组SKOV3细胞S期细胞数明显减少（P<0.01），G₂+M期细胞明显增多 (P<0.01)， 800 mg•L^-1组SKOV3细胞G₂+M期细胞数明显减少（P<0.01），G₁期细胞数有增多趋势；与空白对照组比较，400 和800 mg•L^-1组SKOV3凋亡细胞数明显增加（P<0.01）。结论：在一定浓度范围内蝎SV-Ⅰ可明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的生长，其机制与SV-Ⅰ抑制SKOV3细胞DNA合成、诱导SKOV3细胞发生G₂+M和G₁期阻滞及诱导SKOV3细胞凋亡有关。     

槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用

目的：研究类黄酮化合物槲皮素（quercetin,QUE）对体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用。方法：按QUE浓度分成10、25、50、75及100 μmol·L^-15个处理组和空白对照组（生理盐水）及溶剂对照组（二甲亚砜）,大鼠脑胶质瘤C6细胞在RPMI 1640培养基中生长达1×10⁶·mL^-1后,在96孔板中分别加入上述浓度的QUE继续培养,每组设3复孔,作用24、48及72 h,采用MTT比色法检测QUE对大鼠脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制情况,流式细胞术（FCM）对50及100 μmol·L^-1的QUE作用48 h的大鼠脑胶质瘤C6细胞进行周期分析,免疫组化法检测50 μmol·L^-1的QUE作用48 h 的p53和bcl-2基因产物。结果：与空白对照组比较,QUE处理组随药物浓度增加和作用时间的延长,A值减小(P<0.05),对C6细胞的增殖抑制作用增强,使停滞在G₀／G₁期的细胞增加(P<0.01),而S和G₂/M期细胞减少(P<0.05)。P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论：QUE对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,通过P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少诱导细胞凋亡来实现。     

地塞米松对体外培养人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的：研究地塞米松（DEX）对体外培养人牙周膜成纤维（PDLF）细胞增殖的影响,寻找体外培养人PDLF(hPDLF)细胞的优化条件,为牙周组织再生的研究工作奠定基础。方法：体外分离培养的hPDLF细胞随机分为5组,分别用5种含10%胎牛血清的DMEM细胞培养基培养5～8代:①空白对照组（无DEX）;②含5 mg•L^-1DEX;③含10 mg•L^-1 DEX;④含20 mg•L^-1 DEX;⑤含50 mg•L^-1 DEX。以MTT法测定DEX对hPDLF细胞增殖率的影响;采用倒置相差显微镜观察hPDLF细胞在添加不同浓度DEX的胎牛血清培养基中培养后的细胞形态学改变。结果：将hPDLF细胞接种于24孔板后的第3天,细胞出现汇合现象。细胞在孔底呈鳞片状。采用DEX条件DMEM细胞培养液培养,可见 细胞逐渐变成多层,细胞形态变小,突起变钝。MTT法检测结果表明含不同浓度DEX的DMEM培养基中培养的hPDLF细胞数均高于对照组（P<0.05）;不同浓度的DEX对hPDLF细胞增殖均有影响(P<0.05）,且随着浓度增加,hPDLF细胞增殖能力逐渐增高。结论：DEX能使体外培养的hPDLF细胞表现很强的增殖活性。     

氯丙嗪协同紫杉醇对Hep-2细胞的增殖抑制作用

目的：观察盐酸氯丙嗪与紫杉醇联合应用对人喉癌细胞株（Hep-2细胞）的增殖抑制作用及其对细胞周期各时相的影响。方法：对数生长期Hep-2细胞分为单纯紫杉醇组（3.0、6.0和12.0 mg•L^-1）、氯丙嗪4.0 mg•L^-1）加紫杉醇（12.0 mg•L^-1）联合组和空白对照组（100 mL培养液）,应用MTT比色法和流式细胞术检测各组Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析单独及联合用药后Hep-2细胞的周期进程及凋亡率。结果：3.0、6.0和12.0 mg•L^-1单纯紫杉醇组Hep-2细胞增殖抑制率分别为14.0%、23.9%和36.7%,随紫杉醇浓度增加细胞增殖抑制率升高,三组间及组间两两比较差异均具有显著性（P<0.05）;联合组Hep-2细胞增殖抑制率为46.3%,明显高于相同剂量单纯紫杉醇组（P<0.05）;单纯紫杉醇组随其用药浓度的增加G₁期细胞减少,S期和G₂期细胞增多,与空白对照组比较凋亡率升高（P<0.05）。结论：在一定浓度下,盐酸氯丙嗪能够增强紫杉醇诱导Hep-2细胞增殖抑制率及细胞周期进程各时相变化和凋亡率,氯丙嗪与紫杉醇联合应用具有明显的协同效应。     

吗啡对培养大鼠胶质细胞瘤C6细胞增殖的抑制作用

目的:探讨吗啡对神经系统细胞的影响及作用机理.方法:应用基因克隆技术克隆大鼠增殖细胞核抗原(PCNA)的cDNA基因片段,并应用逆转录PCR技术研究了吗啡对大鼠胶质细胞瘤C6细胞PCNA基因表达的影响.结果:0.1、1.0 mg.L-1 吗啡作用于大鼠C6细胞24 h后,PCNA mRNA相对含量明显下降,且剂量越高PCNA mRNA相对含量越低.结论:吗啡对正常生长的大鼠C6细胞的增殖具有一定的抑制作用,其机理可能是通过抑制大鼠C6细胞PCNA的转录过程,使PCNA转录水平降低,从而抑制细胞核酸合成代谢.     

P16功能性短肽对C6和U251细胞增殖的抑制作用

目的：探讨P16功能性短肽对体外培养的小鼠脑胶质瘤C6细胞和人神经胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用。方法：以不同剂量的P16功能性短肽(12.5、25.0、50.0和100.0 mg·L^-1）分别作用于小鼠脑胶质瘤C6细胞和人神经胶质瘤U251细胞24、48和72 h,同时设不加药的阴性对照组,应用MTT比色法检测细胞增殖抑制率。结果：12.5、25.0、50.0和100.0 mg·L^-1的P16功能性短肽均可抑制C6和U251细胞的增殖,其细胞增殖抑制率高于阴性对照组(P<0.01);随着剂量的增加及作用时间的延长,C6和U251细胞增殖抑制率增加。结论：P16功能性短肽能抑制小鼠脑胶质瘤C6细胞和人神经胶质瘤U251细胞的生长。     

西兰花多肽对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用

目的：研究西兰花多肽对大鼠C6胶质瘤细胞生长的影响,初步探讨西兰花多肽对肿瘤细胞的诱导凋亡作用。方法：提取、分离及纯化西兰花多肽;培养大鼠C6胶质瘤细胞,用不同剂量（0、0.01、0.10、1.00和10.00 mg•L^-1）西兰花多肽作用24 、48和72 h后,应用倒置显微镜观察细胞凋亡情况,MTT方法检测药物作用后细胞的生长情况。结果：西兰花粗多肽有4个主要洗脱峰,其中第2峰收集液多肽（组分Ⅱ）含量最高,用于后续活性研究。西兰花多肽作用大鼠C6胶质瘤细胞后,倒置显微镜下观察到明显的凋亡小体,尤其以西兰花多肽10.00 mg•L^-1组最为明显。MTT结果,药物作用48 h时,西兰花多肽10 mg•L^-1组细胞增殖活性（0.127±0.011）明显降低,与对照组（0.501±0.035）比较差异有统计学意义（P<0.01）。药物作用72 h时,西兰花多肽各剂量组均表现为对细胞的抑制作用,与对照组（0.753±0.022）比较,细胞增殖活性西兰花多肽1.00 mg•L-1组（0.583±0.082）和10.00 mg•L^-1组（0.073±0.001）明显降低（P<0.01）。结论：西兰花多肽可诱导C6胶质瘤细胞发生凋亡反应,并且随着药物剂量升高和作用时间延长,凋亡效应增强,提示西兰花多肽具有良好的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

五味子乙素对脑胶质瘤SHG-44细胞VEGF表达水平的影响及其细胞生长抑制作用

目的：探讨五味子乙素（Sch B）作用于脑胶质瘤SHG-44细胞后对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及细胞生长抑制作用,阐明其可能机制。方法：培养脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组和Sch B　50、100、200 mg•L^-1组,MTT法检测不同剂量Sch B作用SHG-44细胞后其生长情况;酶联免疫吸附实验和细胞免疫组织化学方法观察Sch B作用后SHG-44细胞VEGF蛋白表达情况。结果：与对照组比较,200 mg•L^-1Sch B作用SHG-44细胞24 h,细胞增殖活性轻度增加（P<0.05）;Sch B （50、100 和200 mg•L^-1）作用48或72 h,细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）;200 mg•L^-1Sch B作用SHG-44细胞72 h,培养上清中VEGF蛋白表达水平明显降低(P<0.01）。与对照组比较,Sch B作用SHG-44细胞72 h后,Sch B 50、100和200 mg•L^-1组VEGF蛋白阳性表达率均明显降低（P<0.01）。结论：Sch B能明显抑制SHG-44细胞VEGF蛋白表达及细胞生长,提示Sch B可能通过抑制脑胶质瘤血管生成而发挥抗肿瘤作用。     

氯化甲基汞抗大鼠C6胶质瘤细胞的体外研究

目的：通过体外实验探讨氯化甲基汞（MMC）抗大鼠C6胶质瘤细胞的作用。方法：体 外培养C6胶质瘤细胞,分为空白对照组和MMC给药实验组（将0.08～10.00 μmol•L MMC按浓度梯度分为8组）。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度MMC对体外养C6胶质瘤细胞的增殖抑制和杀伤作用,采用流式细胞仪测定MMC对C6胶质瘤细胞凋亡和细胞周期的影响。结果：1.25、2.50、5.00和10.00 μmol•L^-1的MMC在体外均可抑制C6胶质瘤细胞的增殖,C6胶质瘤细胞存活率明显低于对照组（P<0.05）,增殖抑制作用随浓度的增加而增强。2.50、5.00和10.00 μmol•L^-1 MMC 作用于C6胶质瘤细胞4、8、16和32 h后细胞存活率明显低于对照组（P<0.05）,细胞杀伤作用随浓度的增加和时间的延长而增强。0.31、0.63、2.50、5.00和10.00 μmol•L^-1 MMC作用于C6胶质瘤细胞24h后细胞凋亡/坏死率明显高于对照组（P<0.05）。1.25、2.50和5.00 μmol•L^-1 MMC 作用于C6胶质瘤细胞72 h后,G₀/G₁期细胞百分率明显高于对照组（P<0.05）,S期细胞百分率明显低于对照组（P<0.05）。结论：MMC能够杀伤大鼠C6胶质瘤细胞,抑制增殖,诱导凋亡,具有应用于胶质瘤治疗 的潜在价值。     

氯化三乙基锡对大鼠C6胶质瘤细胞增殖抑制作用

目的：探讨氯化三乙基锡（TETC）对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法及倒置显微镜观察方法检测0.5、1.0和2.0 μmol·L^-1 TETC对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞作用48 h增殖抑制作用,采用电镜方法观察给予0.5、1.0和2.0 μmol·L^-1 TETC 48 h后C6胶质瘤细胞超微结构变化。结果：0.5、1.0和2.0 μmol·L^-1 TETC在体外均可抑制C6胶质瘤细胞增殖,抑制率分别为15.62%、36.16%和41.92%,存在着剂量依赖性上升趋势,抑制率在不同浓度组间以及不同浓度组与对照组间比较,差异均有显著性（P<0.05）。电镜观察0.5、1.0和2.0 μmol·L^-1 TETC作用于C6胶质瘤细胞48 h后其超微结构变化,可见到核内染色质趋边凝聚,排列于核膜内侧,呈早期凋亡改变细胞。结论：TETC可抑制体外培养大鼠C6胶质瘤细胞增殖。     

二乙酰二脱水卫矛醇抗脑白血病的作用及机制

目的　研究二乙酰二脱水卫矛醇 (1,2 :5 ,6 -dianhydro - 3,4-diacetylgalactitol,DADAG)的抗脑白血病作用及机制。方法　用小鼠脑内移植瘤模型、MTT法和DNA掺入法 ,观察DADAG对小鼠脑内移植瘤和体外白血病L12 10细胞的作用 ,并探讨作用机制。结果　DADAG对DBA/ 2小鼠脑内移植白血病L12 10细胞有明显的抑制作用 ;对体外白血病L12 10细胞同样有很强的抗增殖作用 ,其IC50 值为 2 4.6mg·L-1。DADAG不可逆地抑制L12 10细胞内DNA的生物合成。结论　DADAG的抗脑白血病作用与其抑制白血病细胞的增殖及DNA合成密切相关