急性髓细胞白血病NPM1和FLT3-ITD突变检测临床意义分析

目的:研究核仁磷酸蛋白1(NPM1)FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)突变在急性髓细胞白血病(AML)中发生的情况,并了解其临床特征及预后意义.方法:分别应用高分辨熔解曲线(HRM)和变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测103例初诊AML患者NPM1和FLT3-ITD突变情况,并结合临床资料进行分析.结果:103例初诊AML患者中,31例发现NPM1基因突变,20例发现FLT3-ITD突变,阳性率分别为30.1％和19.4％,而在核型正常组中所占的比例分别为47.6％(20/42)和26.2％(11/42).FLT3-ITD突变型外周血白细胞计数高,t=2.21,P=0.037;骨髓原始细胞比例高,t=2.44,P=0.023;NPM1突变型亦表现为高外周血白细胞计数,t=2.24,P=0.034.在非M3患者中,NPM1突变型的CR与野生型差异无统计学意义,但第1次化疗的CR(76.9％)明显高于野生型患者(35.0％),x2=12.78,P=0.000 35;FLT3-ITD突变型患者的CR为58.8％,野生型患者为82.6％,两者比较,x2=4.48,P=0.034;FLT3-ITD突变型患者第1次化疗的CR为17.6％,而野生型患者为55.1％,两者比较,x2=6.23,P=0.012.31例NPM1基因突变中有6例合并FLT3-ITD突变,NPM1+/FLT3-ITD-组的CR最高(85.0％),1年内RR率最低(17.6％);NPM1-/FLT3-ITD+组的CR最低(54.5％),1年内RR率最高(50.0％).结论:NPM1和FLT3-ITD突变是AML患者常见的分子遗传学异常,与预后密切相关,可成为目前细胞遗传学预后分组的重要补充,对于指导AML患者的个体化治疗具有重要的临床价值.     

成人急性淋巴细胞白血病患者中FLT3基因突变特点及其意义

目的 分析成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者FLT3基因突变特点与其意义。方法 选取123例成人ALL患者。运用聚合酶链式反应(PCR)扩增产物,以限制性酶切产物分析法了解成人ALL患者FLT3基因突变现象,探究FLT3基因与患者临床病理特征的关系;随访3年,探究该基因突变与此类患者预后的关系。结果 123例成人ALL患者内,FLT3基因突变的有14例,突变率为11.38%(14/123),突变类型内,FLT3-ITD突变3例(21.43%),FLT3-TKD突变11例(78.57%);FLT3基因突变与FLT3基因无突变患者的年龄、性别、血小板计数(PLT)、白细胞计数(WBC)、血红蛋白(Hb)、乳酸脱氢酶(LDH)、骨髓原始细胞比率、淋巴细胞绝对值(LYM)、外周血原始细胞比率相比,无统计学差异(P>0.05);FLT3基因突变71.43%(10/14)与FLT3基因无突变83.74%(103/123)患者的3年生存率相比,无统计学差异(P>0.05)。结论 FLT3基因突变在成人ALL患者中较为少见,且与患者的生存率无明显关系。     

急性髓系白血病患者外周血细胞中FLT3基因表达与FLT3／ITD突变的关系及其意义

背景与目的：研究表明FLT3／ITD突变的急性髓性白血病（acutemyeloid leukemia,AML）患者预后差,但关于AML患者FLT3基因的表达水平在预后中的作用及其与FLT3／ITD突变关系的研究尚不充分。本研究探讨初治AML患者FLT3基因的表达水平与FLT3／ITD突变的关系及其临床意义。方法：建立实时荧光定量PCR检测FLT3基因表达水平及PCR检测FLT3／ITD突变的方法。分析79例初治AML患者FLT3基因水平、FLT3／ITD突变及与预后的关系。结果：22．7％（18／79）的AML患者存在FLT3／ITD突变。92．4％（73／79）的患者标本中可检测到FLT3基因表达,FLT3基因表达水平为0-7320,中位数为312,正常对照组未检测到FLT3基因的表达。FLT3基因高表达及FLT3／ITD突变AML组的白细胞计数及骨髓白血病细胞均显著高于低表达和无突变AML组（P〈0．05）。FLT3基因高表达的AML组FLT3／ITD突变率（25．6％）同低表达的AML组（20．0％）相比,差异无统计学意义（P〉0．05）,FLT3／ITD突变AML患者FLT3基因表达中位数与无突变组比较差异也无统计学意义。FLT3／ITD突变组的完全缓解率（58．8％）显著低于无FLT3／ITD突变组（82．1％）（P〈0．05）;FLT3基因高表达AML组FLT3／ITD的完全缓解率（68．6％）同低表达AML组（84．2％）相比差异无统计学意义（P〉0．05）,但无FLT3／ITD突变组中,FLT3基因高表达组完全缓解率（69．2％）显著低于低表达组（93-3％）（P〈0．05）。结论：FLT3高表达与FLT3／ITD突变之间无明显相关性,FLT3高表达对于无FLT3／ITD突变AML患者可能是一个预后不良的指标。     

FLT3基因内部串联重复突变在急性早幼粒细胞白血病中的临床意义

目的 研究FLT3基因内部串联重复(ITD)突变在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的临床意义.方法 采用PCR方法检测30例初发APL患者FLT3基因外显子14、15中ITD突变,并比较分析ITD突变型和野生型患者的临床特征及疗效.结果 30例初发APL患者中,8例(26.7％)FLT3-ITD突变阳性.与野生型患者相比,FLT3-ITD突变患者白细胞计数(WBC)高[20.48×109/L(0.74×109 ～74.3×109/L)比1.75×109/L(0.78×109 ～ 35.3×109/L)]、乳酸脱氢酶水平(LDH)高[447.5 U/L(191～1 533U/L)比205.0U/L(118～743U/L)]、血小板计数(Plt)低[14×109/L(6×109 ～59× 109/L)比30×109/L(9× 109～ 124× 109/L)],差异均有统计学意义(均P＜0.05).而在性别、年龄、血红蛋白、纤维蛋白原含量、骨髓原始细胞+早幼粒细胞比例及危险度分层等方面,二者差异均无统计学意义(均P＞0.05).FLT3-ITD突变患者的完全缓解(CR)率、达CR的时间、维甲酸综合征(RAS)和弥散性血管内凝血(DIC)发生率与野生型患者相比,差异均无统计学意义(均P＞0.05).中位随访时间为17个月,FLT3-ITD突变患者与野生型患者总生存率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 FLT3-ITD是APL患者常见的基因突变类型,其发生与患者初诊时高WBC、高LDH及低Plt相关,而对近期疗效无影响.     

索拉非尼联合AS2 O3对 FLT3-ITD 突变白血病细胞MV-4-11的抑制作用

目的：观察FLT3抑制剂索拉非尼(sorafenib)联合三氧化二砷(AS2O3)对FLT3-ITD突变的人类急性双表型（B、单核）髓细胞白血病MV-4-11细胞增殖、细胞周期和凋亡的作用,为该联合用药方案的临床应用提供实验依据。方法：将对数生长期的MV-4-11细胞分为4组：空白对照组（不加药）,索拉非尼单药（1、10、100、1 000、5 000、10 000 nmol/L）组,AS2O3单药（0.125、025、0.5、1.0、2.0 μmol/L）组,索拉非尼+AS2O3联合用药（10 nmol/L+1.0 μmol/L）组。CCK-8法检测索拉非尼和AS2O3单用或联用对MV-4-11细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测MV-4-11细胞的凋亡及细胞周期。结果：索拉非尼和AS2O3单用对MV-4-11细胞的增殖均有抑制作用,且均呈浓度依赖性;两药联用对MV-4-11细胞增殖的抑制率显著高于两药的单用\[（70.72±1.03）% vs（47.24±1.27）%、（20.28±0.70）%;均P<0.01）,两药相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)为0.696,表现出协同作用。索拉非尼可使MV-4-11细胞周期阻滞于G0/G1期,两药联用阻滞得更严重。两药联合作用于MV-4-11细胞48 h后,MV-4-11细胞早期凋亡率显著高于两药单用（89.06% vs 68.27%、78.71%;均P<0.05）。结论：索拉非尼联合AS2O3能够协同抑制MV-4-11细胞的增殖,并且比单药作用更有效地阻滞细胞周期于G0/G1,更明显地促进细胞凋亡。     

FLT3基因突变在急性早幼粒细胞白血病中的表达及临床意义

目的:检测急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia,APL）患者FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）基因内部串联重复（ITD）突变和酪氨酸激酶结构域（TKD）突变的表达,并探讨临床意义。方法:提取APL患者骨髓单个核细胞DNA,采用聚合酶链反应及测序技术检测FLT3-ITD和FLT3-TKD,分析临床资料及预后。结果:在77例APL患者中,23例（29.9%）检出 FLT3-ITD,7例（9.1%）检出FLT3-TKD点突变,具体包括5例D835Y、1例N841I、1例D835Y和D835H复合杂合子。FLT3-ITD与高白细胞计数相关（P=0.033）,而FLT3-TKD并无此相关性。与无FLT3基因突变患者相比,尽管FLT3-ITD和TKD突变患者的完全缓解率（CR）、总生存期（OS）、无事件生存期（EFS）均相对更差,除FLT3-TKD与缩短EFS显著相关（P=0.043）外,差异均无统计学意义。值得注意的是,无论是FLT3-ITD（P=0.011）还是FLT3-TKD（P= 0.034）均提示高复发风险。多因素分析表明FLT3-ITD（HR=6.381,P=0.037）、FLT3-TKD（HR=5.198,P=0.009）、骨髓早幼粒细胞比例（HR=1.174,P=0.020）、高白细胞计数（WBC>10×109/L）（HR=9.067,P=0.011)可作为独立预后因素提示高复发风险。结论:FLT3-ITD和TKD在APL中均有表达,FLT3-ITD患者的白细胞计数高。虽然FLT3基因突变对APL患者的CR率和OS无显著影响,但可作为一个有价值的指标用于评估复发风险。     

慢性粒细胞性白血病FLT3基因及FLT3/ITD基因突变的检测及意义

背景与目的:大部分急性髓细胞性白血病(acutemyeloidleukemia,AML)患者出现FLT3基因异常表达,20%～30%AML患者会出现FLT3/ITD基因突变并与临床预后相关。本研究旨在了解慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变情况。方法:采用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)检测53例CML慢性期和34例CML加速期或急变期患者DNA水平FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果:53例CML慢性期患者3例(5.7%)出现FLT3基因阳性,34例加速期或急变期患者有19例(55.9%)出现FLT3基因阳性,CML加速期和急变期患者FLT3基因阳性率显著高于慢性期患者(P<0.001),87例CML患者,仅2例(2.3%)出现FLT3/ITD基因突变。结论:在CML患者中,FLT3基因表达主要见于加速期或急变期患者;CML很少发生FLT3/ITD基因突变;FLT3基因及FLT3/ITD基因突变阳性CML患者可能提示预后不佳,此方面研究尚需深入。     

儿童pro-B急性淋巴细胞白血病的临床特点及预后分析

目的 探讨儿童pro-B急性淋巴细胞白血病(pro-B-ALL)的临床特点及预后。方法 选择ALL患儿696例,统计pro-B-ALL发生率,并分析其临床特点、治疗和预后。结果 ALL患儿中pro-B-ALL发生率为6.18%(43/696),其中男性24例,女性19例;年龄<1岁3例,1～9岁23例,≥10岁17例;初诊白细胞(WBC)计数≥50×10⁹/L 15例,<50×10⁹/L 28例;免疫表型中B系抗原CD20阳性5例、CD22阳性30例;T系抗原CD7阳性5例;干/祖细胞抗原CD34阳性31例,CD58阳性22例、CD15阳性5例;髓系抗原CD33阳性13例,CD13阳性10例;融合基因中混合谱系白血病基因重排(MLL-r)阳性15例,E2A-PBX1阳性1例,BCR-ABL1阳性1例,MLL-AF4阳性8例;MLL-r、MLL-AF4阳性者初诊WBC≥50×10⁹/L比例均较阴性者高,CD13、CD22阳性率均较阴性者低,差异有统计学意义(P<0.05)。诱导缓解治疗1个月后完全缓解(C...     

急性淋巴细胞白血病真菌感染临床特点分析

目的探讨分析成年人急性白血病真菌感染的临床特点,并提供较好的治疗方法。方法回顾性分析94例急性淋巴细胞白血病患者的临床资料,对合并侵袭性真菌感染的患者真菌感染率、病原学监测、真菌感染易感因素、抗真菌药物使用等进行分析。采用两性霉素B进行抗侵入性真菌治疗。结果 94例患者中有46例合并侵袭性真菌感染,感染率为48.9%。通过其血液等标本培养出菌株38株,其中感染曲霉菌属占47.4%,明显大于白色假丝酵母菌的34.2%和热带假死酵母菌的18.4%,差异具有统计学意义(P<0.05)。患者年龄、中性粒细胞<0.5×109/L持续时间及广谱抗菌药物的使用时间与急性白血病患者并发真菌感染率呈正相关,而中心静脉置管并不影响感染的发生率。经两性霉素B治疗后21例痊愈,17例显效。结论成人急性白血病在进行化疗期间真菌感染发生率较高,且患者年龄大,使用广谱抗菌药时间长和持续中性粒细胞减少都是发生感染的因素,需要重点预防此类患者。治疗上可以选用两性霉素B,效果较好。     

儿童急性淋巴细胞性白血病并发中枢神经系统白血病的临床治疗研究

目的：探讨儿童中枢神经系统白血病复发再治疗的安全有效方法。方法：应用国产^60Co，对27例曾接受全颅、全脊髓放射治疗和(或)鞘内注射后CNSL复发的儿童急性淋巴细胞性白血病进行全颅、全脊髓间歇性放射治疗，并联合鞘内注射。治疗方案为：全颅1.5Gy／次 全脊髓0．75Gy／次，1次／d照射3d。第1天鞘内注射甲氨蝶呤(MTX)8～12mg/m^2，阿糖胞苷(Ara—C)25mg/m^2．地塞米松(DXM)2～5mg/次，以后每8周全颅1．5Gy 全脊髓0．75Gy照射1次，当天鞘内注射，用药剂量同前。总疗程为2年2个月。结果：27例患者中，3年内死于骨髓复发4例、CNSL复发2例；3～5年内死于骨髓复发5例、CNSL复发8例．3、5年生存率分别为77．8％(21/27)、25．9％(7/27)。间歇性放射治疗过程中未发现明显急性毒副反应。随访期间发现5例记忆力差、注意力不易集中现象。结论：间歇性放射治疗联合鞘内注药对于曾接受全中枢神经系统放射治疗和(或)鞘内注射后CNSL复发的儿童急性淋巴细胞性白血病安全而有效。     

FLT3/ITD基因突变在不同血液肿瘤患者的表达及其临床意义

Objective:To analyze Fms-like tyrosine kinase 3(FLT3)/intemal-tandem duplications(ITD)murations in various kinds of hematologic malignancy patients.Methods:FLT3/ITD gene mutations were detected by polymerase chain reaction (PCR)in 103 acute myeloid leukemia(AML)cases,63 acute lymphocytic leukemia(ALL)cases,53 chronic myelogenous leukemia(CML)cases in chronic phase(CML-CP),34 CML cases in biast crisis(CML-BC),11 chronic lymphatic leukemia(CLL)cases,36 myelodysplastic syndrome (MDS)cases,9 multiple myeloma(MM)cases and 13 non-hodgkin's lymphoma (NHL)cases with marrow infiltration.Results:The expressions of FLT3/ITD gene mutations were detected in 22.3% AML cases.in 6.5%CML-BC cases.in 5.6%MDS cases and in 2.6%ALL cases.The two ALL cases with FLT3/ITD mutation were diagnosed as ALL-L2 with morphology and both with myeloid antigen expression,but finally were diagnosed as acute mixed-lineage leukemia after immunology examination.FLT3/ITD gene muIations were not detected in CML-CP,MM.NHL and CLL cases.In the 23 AML patients with FLT3/ITD gene mutation,including 2 of 8 M1(2.5%),8 of 33 M2(24-2%),7 of 24 M3(29.3%),2 of 11 M4(18.2%).3 of 21 M5(14.3%),1 of 5 M6(20%),and 0 of 1 M7 cases,and there were no significant differences in the positive rates of FLT3/ITD mutations between the FAB subtypes(P＞0.05).Statistical analyses showed that in AML patients,FLT3/ITD was associated with a higher pefipheral blood white cell(WBC)counts[(41.23±32.56)x 100/L vs (11.36±9.89)x109/L(P＜0.01)],higher percentage of bone marrow blast cells[(72.78±21.79)%vs(51.26±20.78)%(P＜0.05)],and higher cumulative relapse rates(63.6%vs 27.7%,P＜0.025)than those negative.Conclusion:FLT3/ITD gene mutation mainly pccurred in AML patients.and might be a strong prognostic factor which was associated with high peripheral WBC counts.bone marrow blast cell proportion and a increased relapse risk in AML.Detection of FLT3/ITD gene mutation might provide insights to explore a more accurate genotyping of leukemia,differential diagnosis between AML and ALL.subdivide risk level in AML and estimate prognosis of leukemia.     

Concomitant ABCG2 overexpression and FLT3-ITD mutation identify a subset of acute myeloid leukemia patients at high risk of relapse

BACKGROUND:

ABCG2 protein overexpression and FLT3 internal tandem duplication (ITD) correlate with higher relapse rate and shorter disease‐free survival (DFS) in acute myeloid leukemia (AML), but no data are available on the possible effect of concomitant presence of these 2 factors.

METHODS:

The authors analyzed the outcome of 166 cases of adult AML patients who were homogeneously treated with a fludarabine‐based induction therapy.

RESULTS:

ABCG2 overexpression and FLT3‐ITD were detected in 83 (50%) and 47 (28%) patients, respectively. A significant correlation was found between ABCG2 positivity and FLT3 mutation, with 33 (40%) ITD in 83 ABCG2‐positive patients compared with 14 (17%) ITD in 83 ABCG2‐negative patients (P = .002). Complete remission (CR) after induction therapy was achieved in 95 (57%) patients. Neither ABCG2 overexpression nor FLT3‐ITD had any impact on achievement of CR. Relapse occurred in 42 of 95 (44%) patients at a median time of 28 months. Time to relapse was shortened in patients overexpressing ABCG2 (P = .0004). DFS was not affected by FLT3‐ITD alone, but FLT3 mutation significantly worsened long‐term outcome of ABCG2‐positive patients. DFS at 1 and 3 years in patients with overexpression of both ABCG2 and FLT3‐ITD was only 36% and 28%, respectively; in ABCG2‐positive/FLT3‐negative patients, DFS at 1 and 3 years was 65% and 48%, respectively; and in ABCG2‐negative cases (regardless of FLT3 status), DFS at 1 and 3 years was greater than 85% and 75%.

CONCLUSIONS:

Concomitant overexpression of ABCG2 and FLT3‐ITD is relatively frequent and identifies a subgroup of AML patients with a significantly worse prognosis. The possible interactions between these 2 prognostic factors need to be defined. Cancer 2011. © 2010 American Cancer Society.     

FLT3 inhibitors in the treatment of acute myeloid leukemia

Despite recent modest improvements in the chemotherapy regimens used to treat acute myeloid leukemia (AML), many patients diagnosed with AML ultimately die of the disease. Commonly occurring genetic alterations have been identified that strongly affect the prognosis for patients with AML. These alterations represent possible targets for investigational therapies that could act to specifically halt the aberrant growth of AML cells while limiting damage to normal cells. One such gene is the Fms-like tyrosine kinase 3 (FLT3) gene, which is mutated in approximately 30% of adult patients with AML and has a significant impact on prognosis. In particular, internal tandem duplications in FLT3 confer a poor prognosis to this large subgroup of patients with AML. Agents that target FLT3 are in development for the treatment of patients who have AML and offer a potential paradigm change in the current standard treatment of AML. For this report, the authors reviewed the prognostic significance of genetic alterations observed in AML with a focus on the therapeutic implications of targeting FLT3. The introduction of such agents may be the next major step toward the era of personalized therapy in AML.     

急性淋巴细胞白血病患者DNA拓扑异构酶的表达及临床意义

 目的 探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）患者DNA拓扑异构酶（Topo）mRNA水平的表达及其临床意义。方法 用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测了90例ALL患者DNA Topo的表达。结果 DNA Topo各亚型（Topo-Ⅰ,Topo-Ⅱa,Topo-Ⅱb）的表达阳性率初治组（58.1 %,51.2 %,81.5 %）高于复发难治组（33.3 %,44.4 %,77.9 %）和完全缓解（CR）组（14.9 %,23.4 %,34.1 %）,各组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。表达量各组间比较,CR组与初治组差异有统计学意义（P＜0.005）;CR组与复发难治组Topo-Ⅱb差异有统计学意义（P＜0.05）,DNA To各亚型表达量之间有显著相关性（P＜0.001）,且各亚型表达量与WBC数之间亦有显著相关性（P＜0.01）。结论 ALL患者DNA Topo各亚型mRNA水平的表达量可能与WBC数共同作为Topo抑制剂药物个体化合理用药的参考指标,但不宜作为判断患者是否对Topo抑制剂耐药的参考指标。     

急性髓系白血病患者FLT3表达及TKD点突变的研究

  目的 研究急性髓系白血病（AML）患者与正常人FMS样酷氨酸激酶3（FLT3）基因在骨髓中表达的差异以及FLT3基因酪氨酸激酶结构域（TKD）点突变与AML的关系。方法 将AML初治患者和正常人的骨髓分别用CD135抗体标记后，应用三色流式细胞术检测并分析；采用RT-PCR结合限制性内切酶酶切，检测30例AML初治患者FLT3基因的TKD点突变。结果 AML患者骨髓中CD135阳性率均＞20 ％，而正常人＜2 ％，二者差异有统计学意义（P＜0.05）；另外，30例AML患者中3例存在FLT3-TKD点突变，阳性率为10 ％，其中2例化疗后完全缓解（CR），缓解率66.7 ％，其他27例非点突变患者化疗后完全缓解率为84 ％，二者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 AML患者骨髓中FLT3基因表达显著高于正常人。AML患者FLT3-TKD点突变的阳性率为10 ％左右，FLT3-TKD点突变对患者化疗后CR率的影响有待进一步研究。     

急性白血病患者黑色素瘤特异性抗原基因的表达及其与FLT3基因比较的临床意义

 目的　探讨黑色素瘤优先表达抗原（PRAME）基因在急性白血病（AL）患者中的表达及其临床意义。方法　应用基于TaqMan探针的RT-PCR技术检测119例AL患者骨髓中PRAME mRNA的表达,包括急性髓细胞性白血病（AML）97例,急性淋巴细胞性白血病（ALL）22例,并与FLT3 mRNA的表达相比较。结果　AML患者PRAME阳性表达为50例（51.5 %）,ALL患者PRAME阳性表达为8例（36.4 %）。11例健康对照及17例非血液病患者骨髓细胞中有5 例PRAME mRNA 呈微量表达。AL患者中AML 33例和ALL 5例患者PRAME和FLT3均阳性,AML 17例和ALL 3例患者PRAME阳性而FLT3阴性。短期观察,9例PRAME、FLT3均阳性的患者经化疗达完全缓解后,PRAME表达均有不同程度地下降。结论　PRAME基因在AL中阳性表达,其有望成为AL微小残留监测的标志性基因。