脑膜瘤1基因表达与急性髓系白血病

脑膜瘤1基因（meningioma1,MN1）最初发现于脑膜瘤患者,但它与脑膜瘤的关系并不明确。后来研究发现MN1在多种组织和肿瘤中均有表达,但它与血液系统恶性肿瘤的关系,尤其是在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）中的作用日益突出。     

WT1基因肽诱导细胞毒性T淋巴细胞免疫治疗白血病的实验研究

目的探讨肾母细胞瘤基因(WT1)肽负载树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病细胞体外靶向免疫治疗作用。方法合成一段针对HLA-A0201锚位的WT1特异性九聚肽(CMTWNQMNL),体外负载来源于HLA-A0201阳性健康志愿者的DC后,诱导产生WT1肽特异性、HLA-A0201限制的CTL(A组),四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法观察其对白血病细胞株及原代白血病细胞体外杀伤效应。采用流式细胞术直接免疫荧光标记法,检测DC表面抗原CD83、CD1α、CD80、CD86、CD14、HLA-DR和T细胞表面的CD3、CD4、CD8、CD56等的表达。设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照组。结果K562细胞不表达HLA-A0201但高表达WT1基因(1.111±0.128);U937细胞表达HLA-A0201,但极低表达WT1基因(0.006±0.001);NB4细胞表达HLA-A0201,且高表达WT1基因,NB4/WT1D、NB4/WT1A及NB4细胞株中WT1表达水平分别为1.42±0.07、3.20±0.19和1.14±0.09,均显著高于U937细胞株(P均<0.01)。A组CTL能够通过HLA-A0201限制方式杀伤HLA-A0201阳性,WT1+NB4白血病细胞株和白血病患者原代骨髓单个核细胞,而不能特异性杀伤HLA-A0201阳性,WT1-U937细胞胞株及白血病细胞,HLA-A0201-,WT1+K562细胞株及白血病细胞,对HLA-A0201阳性或阴性正常骨髓细胞也无杀伤活性;A组CTL对NB4/WT1D、NB4/WT1A和NB4细胞株杀伤活性无统计学意义(P=0·065,P=0·621)。结论WT1肽特异性CTL能够以HLA-Ⅰ类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病细胞,而对正常骨髓细胞无杀伤作用,WT1基因的表达产物可以作为白血病免疫治疗靶点。     

急性髓细胞白血病病人骨髓geminin和cdt1基因表达及意义

目的 探讨急性髓细胞白血病(AML)病人骨髓细胞中geminin和cdt1基因表达水平及其与AML发病和预后关系.方法 采用SYBR Green实时定量逆转录聚合酶链反应(SYBR-RT-PCR)技术,检测47例不同病程AML病人(包括25例初治者,16例完全缓解者,6例未缓解或复发者)骨髓细胞中geminin和cdt1 mRNA的表达,并对25例初治病人进行6个月随访.结果 初治、未缓解或复发AML病人geminin和cdt1表达较对照组及完全缓解组高,差异有显著性(H=4.95、3.22,Z=2.67～4.95,P＜0.01);完全缓解组geminin和cdt1表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).AML病人骨髓细胞中geminin和cdt1的表达呈明显正相关(r=0.59,P＜0.01);且初治组、完全缓解组及未缓解或复发组两者的表达均呈明显正相关(r=0.49～0.87,P＜0.05).25例AML初治病人随访6个月,死亡6例,存活19例,死亡组geminin表达高于存活组,差异有统计学意义(t=2.16,P＜0.05),而两组cdt1表达差异无显著性(t=0.61,P＞0.05).结论 AML病人骨髓细胞中geminin和cdt1表达可能与AML的病程有关;geminin在初治病人中的高表达可能是AML病人的不良预后因子.     

WT1基因在髓细胞白血病中的表达

WT1基因(Wilms′tumorgene)是Wilms′瘤的易感基因,染色体定位于11p13。WT1基因长约50kb,含10个外显子;其中第5、9外显子是可随机组合的剪接外显子。由于剪接方式不同,WT1基因可转录4种转录本,编码相对分子质量为52000～54000的蛋白质。研究表明WT1基因并非一单纯的抑癌基...     

白血病WT1基因表达及其临床意义

目的 探讨ＷＴ１基因ｍＲＮＡ表达与白血病的关系及其意义。方法 应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定６８例不同类白血病及其处于不同疾病阶段的患者ＷＴ１基因的表达。结果 ６５％初治和复发急性白血病者ＷＴ１表达阳性,而治疗缓解期１２例中仅１例（８％）表达为阳性。１６例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中７例（４４％）ＷＴ１表达阳性,其中４例急变者全部为阳性,１０名正常人及１０例非血液病患者的ＷＴ１表达     

WT1基gl在髓细胞白血病中的表达

WT1基因(Wilms'tumor　gene)是Wilms'瘤的易感基因,染色体定位于11p13.WT1基因长约50kb,含10个外显子;其中第5、9外显子是可随机组合的剪接外显子.由于剪接方式不同,WT1基因可转录4种转录本,编码相对分子质量为52　000～54　000的蛋白质.研究表明WT1基因并非一单纯的抑癌基因,尤其在造血系统中其功能更似癌基因.本研究分析了急性髓系白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)患者WT1基因表达情况,探讨该基因和AML诊治及与AML、CML病情发展的关系.     

急性白血病患者WT1基因表达的研究

检测了48例急性白血病(AL)患者骨髓或外周血单个核细胞(MNC)的WT1基因表达,现报告如下.     

实时荧光定量PCR检测急性髓系白血病患者WT1基因表达及其临床意义

目的：应用实时荧光定量PCR（real time quantitative PCR,RQ-PCR）检测WT1基因表达水平,探讨其在监测白血病微小残留病（minimal residual disease,MRD）中的临床意义。方法：采用RQ-PCR检测70例急性髓系白血病（AML）患者、20例正常对照者骨髓细胞WTl基因拷贝数及内参基因（ABL）拷贝数,以NQ比值=WTl基因拷贝数/内参基因拷贝数计算基因表达水平。结果：初诊组与复发组WT1表达水平分别与完全缓解组及对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）,而对照组与完全缓解组之间比较及初诊与复发组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）,即初诊急性白血病患者WT1表达水平明显高于完全缓解组及对照组,复发时同样高于完全缓解组及对照组。在初诊的各种白血病亚型中,M3亚型WT1表达水平最高（平均值为3.44）,M5亚型WT1表达水平最低（平均值为0.25）。4例短期随访提示在达到完全缓解时WT1表达水平下降,而复发时再次升高。结论：用RQ-PCR测定WT1基因的表达,可以作为白血病MRD的一项监测指标。     

金钗石斛多糖的提取及部分理化性质分析

金钗石斛(Dendrobium nobile)为兰科石斛属多年生附生草本植物[1],是我国传统名贵中药,金钗石斛有益胃生津、延年益寿、抗衰老、抗肿瘤和增强机体免疫力等作用[2]。它被制成石斛夜光丸等成品药。金钗石斛的药用成分主要是石斛碱及多糖类物质。多糖类成分是石斛中具有免疫增强作     

急性白血病患者 W T1 基因m R N A 表达研究

用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 检测了２８ 例急性白血病患者 Ｗ Ｔ１ 表达水平。结果显示：１９ 例 Ｗ Ｔ１ 表达阳性,阳性率６７９ ％ ;其中１６ 例 Ａ Ｎ Ｌ Ｌ 中有１１ 例表达阳性,１２ 例 Ａ Ｌ Ｌ 有８ 例表达阳性。表明 Ｗ Ｔ１ 在急性白血病中有高度表达,可作为一种新的检测标记物,在白血病疗效观察、判定预后及 Ｍ Ｒ Ｄ 研究中有重要意义。     

过度表达LYL1的髓系白血病细胞基因表达谱分析

目的检测LYL1在髓系白血病细胞中所调控的可能靶基因。方法建立过度表达LYL1的白血病稳定细胞株,应用全基因组表达芯片测定其基因表达谱。结果初步筛选出可能受LYL1调控的靶基因或EST共444个,其中表达上调335个,表达下调109个。文中列出了表达明显上调和下调的部分转录因子、原癌基因、抑癌基因、细胞因子或受体、信号转导分子及细胞凋亡相关蛋白。值得注意的是,上调基因中包括与红系分化密切相关的转录因子LMO2与GATA1和许多原癌基因,包括RAS家族成员、EHM2、Pin1、PAX8、RAF-1、GRAP-2及WNT5A等;下调基因中包括抑癌基因p53等。结论研究可能受LYL1调控的靶顺序对于解释其在髓系白血病细胞的作用有重要意义。     

急性白血病患者Wilms肿瘤基因(WT1)表达及其临床意义

目的 检测急性白血病患者WT1 mRNA转录水平,探讨WT1基因与白血病病程的关系.方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法对57例白血病病人和10例正常健康人的外周血或骨髓标本进行WT1基因的检测.结果 45例初发急性白血病(AL)中35例WT1 mRNA阳性(阳性率77.8%),其中27例初发急性髓细胞白血病(AML)中24例阳性(88.9%),18例初发急性淋巴细胞白血病(ALL)中11例阳性(61.1%).10例正常人没有检测到WT1 mRNA.结论 急性白血病WT1 mRNA呈高表达.在缺乏特异性克隆标志白血病中监测WT1 mRNA是有价值的.     

金钗石斛对衰老模型大鼠术后认知功能的影响及机制研究

目的 探讨金钗石斛（DNL）对衰老模型大鼠术后认知功能的影响及机制。方法 选择4月龄SD雄性大鼠60只,连续42 d颈背部皮下注射10%D-半乳糖0.125 g/（kg·d）复制衰老模型大鼠,随机分为对照组、POCD+DNL组及POCD组,每组20只。对照组不作处理,POCD+DNL组及POCD组在七氟烷麻醉下行单侧肾切除术。大鼠于麻醉苏醒2 h后灌胃,POCD+DNL组以10 g/（kg·d） DNL水煎剂进行连续灌胃,POCD组与对照组给予相同体积生理盐水灌胃。依据术后不同灌胃时间每组再分为7 d、14 d两个亚组,每亚组10只。采用Morris水迷宫观察各组大鼠行为学表现;采用HE染色观察大鼠海马神经元细胞形态变化;采用ELISA法检测大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平;采用Western blotting检测大鼠海马NF-κB、IκBα蛋白表达。结果 与对照组及POCD+DNL组比较,POCD组大鼠的逃避潜伏期延长（P <0.05）;大鼠海马HE染色结果显示,与对照组及POCD+DNL组比较,POCD组海马神经元细胞排列松散,细胞形态不规则,细胞核固缩,染色较深...     

一步法实时荧光定量PCR检测白血病WT1基因mRNA

目的 构建RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因mRNA表达的方法,准确定量检测白血病患者微小残留病,指导临床判断预后和早期预测复发.方法 从K562细胞提取的RNA用特异性引物扩增WT1基因,pMD18-T载体克隆法构建荧光定量PCR标准模板,建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测wTl基因方法,并对该方法的灵敏度、重复性和稳定性进行检测.结果 构建的RT-PCR一步法实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平:以拷贝数为1.0x106～1.0×102 cps/ml的标准品,分别进行RT-PCR一步法实时荧光定量PCR扩增后,标准品的Ct值与该标准品模板起始浓度的对数存在线性关系,r值达0.998:管间和批间的变异系数均小于8%.结论 所建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因方法的灵敏度、重复性和特异性好;RT和PCR反应过程一步完成,更简便快捷,减少加样和污染机会,更适合临床检测.     

肾母细胞瘤1基因表达及其对急性髓系白血病患者预后的预测价值

分析急性髓系白血病（AML）患者肾母细胞瘤1（WT1）基因表达水平的差异,探讨WT1表达及其在核仁磷酸蛋白1（NPM1）或Fms样酪氨酸激酶3内部串联重复（FLT3-ITD）不同突变状态下与AML患者疗效和生存的相关性,评估其对于患者预后的预测价值。 以167例初发AML患者（除外M3亚型）为研究对象,根据初诊时WT1表达水平分为WT1高表达组和WT1低表达组,回顾性分析两组的临床及实验室检查资料,采用Kaplan-Meier法进行患者生存分析以明确WT1表达水平在预后评估中的价值,特别是在NPM1或FLT3-ITD不同突变状态AML患者中的预后评估价值。 WT1高表达组126例患者中治疗有效83例（65.9%）,低表达组41例患者中治疗有效39例（95.1%）,差异有统计学意义（P＜0.01）。WT1高表达组2年总存活率低于WT1低表达组（46.1%和75.2%,P＜0.05）,2年无病存活率也低于WT1低表达组（43.5%和68.5%,P＜0.05）。诱导化疗前后WT1表达量下降≥1 log患者总反应率和2年总存活率优于下降＜1 log患者（均P＜0.05）,但两者2年无病存活率差异无统计学意义（P＞0.05）。NPM1野生型患者中,WT1高表达组总反应率、2年总存活率较WT1低表达组低（均P＜0.05）;FLT3-ITD野生型患者中,WT1高表达组总反应率、2年总存活率和2年无病存活率均较WT1低表达组低（均P＜0.05）;而NPM1或FLT3-ITD突变患者中,不同WT1表达水平组疗效及生存分析结果差异无统计学意义（均P＞0.05）。 初发AML患者中WT1基因过表达提示预后不良;诱导治疗后WT1表达量下降≥1 log的患者预后优于下降＜1 log的患者;初诊WT1基因表达水平可以作为NPM1或FLT3-ITD野生型AML患者的预后判断指标。      

Wilms肿瘤基因反义寡苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的 了解Ｗｉｌｍｓ肿瘤基因（ＷＴ１）反义寡核苷酸（ＡＳＯ）对白血病细胞凋亡的作用。方法 应用ＷＴ１ＡＳＯ以及足叶乙甙（ＶＰ－１６）作用Ｋ５６２、ＨＬ－６０细胞系,然后应用流式细胞仪测定ＤＮＡ含量以确定白血病细胞的凋亡数。结果 Ｋ５６２细胞系经ＷＴ１ ＡＳＯ作用２４ｈ和６０ｈ后细胞凋亡数分别为１４．６％和２６．８％;而ＷＴ１有义寡核苷酸（ＳＯ）组分别为３．１％（２４ｈ）和３．９％（６０ｈ）;加入少     

SHP-1与c-kit基因在慢性髓系白血病中表达水平的研究

目的探讨造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因、c-kit基因在慢性髓系白血病患者中的表达及其与白血病转化和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测SHP-1 mRNA、c-kit mRNA分别在慢性髓系白血病慢性期、急变期及正常对照组中的表达。结果慢性期和急变期SHP-1 mRNA的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,慢性期和急变期比较差异无统计学意义（P〉0.05）。慢性期和急变期c-kit mRNA的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,急变期c-kit mRNA的表达均高于慢性期,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SHP-1基因与c-kit基因可作为判断慢性髓系白血病患者转归及预后的指标。