单眼视觉剥夺性幼猫视网膜中一氧化氮合成酶变化的组织化学研究

目的 观察一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase，NOS)在正常和单眼视觉剥夺性幼猫视网膜中的变化，探讨一氧化氮(nitric oxide，NO)在弱视形成过程中的作用。方法 用尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase,NADP-diaphorase)组织化学染色法观察正常组和单眼视觉剥夺组幼猫视网膜中NOS的变化。结果 (1)显微镜下观察：正常组和单眼剥夺组幼猫视网膜平铺片可见NOS阳性细胞，并可见细小的NOS阳性纤维；(2)计算机图位分析系统测量：正常组：视网膜NOS阳性细胞平均密度左右眼比较，差异无显著意义(P＞0．05)；单眼视觉剥夺组：非剥夺眼与剥夺眼比较，NOS阳性细胞平均密度差异有非常显著意义(P＜0．001)，剥夺眼与正常眼比较，有非常显著意义(P＜0．001)，非剥夺眼与正常眼比较，NOS阳性细胞平均密度差异无显著意义(P＞0．05)。结论 NO可能作为一种重要的神经递质参与幼猫弱视的形成。     

大鼠视网膜一氧化氮合酶神经元分布及缺血性损伤的改变

目的用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（ＮＡＤＰＨ）－黄递酶（ＮＤＰ）组化染色法研究大鼠视网膜一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）神经元的分布及缺血性损伤ＮＯＳ神经元的变化。方法动物模型采用升高眼内压的方法造成视网膜缺血。摘除眼球后，剥离视网膜，进行ＮＡＤＰＨ－ＮＤＰ反应。结果正常大鼠视网膜ＮＯＳ阳性神经元仅分布于内核层内侧，呈散在分布，具有较长的串株样突起。视网膜缺血１０、３０、６０ｍｉｎ组ＮＯＳ阳性神经元同对照组相比形态学改变及计数均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；而缺血９０ｍｉｎ组，ＮＯＳ阳性神经元数量减少，与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论正常大鼠视网膜ＮＯＳ阳性神经元散在分布于内核层内侧，可能是无长突细胞；视网膜缺血早期ＮＯＳ阳性神经元无明显变化，提示一氧化氮（ＮＯ）可能不介导ＮＭＤＡ受体激活所致的细胞毒性，缺血晚期数量减少则可能由于ＮＯＳ阳性神经元死亡。     

Wistar鼠和RCS鼠视网膜内一氧化氮合酶的分布

目的 观察正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠和患遗传性视网膜病变的ＲＣＳ鼠视网膜内一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的分布。方法 ７４天Ｗｉｓｔａｒ鼠和７４天ＲＣＳ鼠各６眼分为２组,冰冻切片,用ＮＡＤＰＨ黄递酶组织染色法（ＮＤＰ）,光镜下观察。结果 一氧化氮合酶主要存在于Ｗｉｓｔａｒ鼠,ＲＣＳ鼠的无长突细胞内,在双侧锯齿缘、赤道部和后极部内丛层均有分布,二者间的数量有差异。结论 一氧化氮合酶分布在Ｗｉｓｔａｒ鼠,ＲＣＳ鼠的无长突细胞,但视细胞萎缩对含一氧化氮合酶的阳性无长突细胞数量有影响。     

单眼视觉剥夺幼猫外侧膝状体中一氧化氮合酶变化的组织化学研究

目的　观察一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)在正常和单眼视觉剥夺幼猫外侧膝状体中的变化 ,探讨一氧化氮 (nitricoxide ,NO)在弱视形成过程中的作用。方法　用尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶 (nicotinamidadeninedinucleotidephosphate diaphorase,NADPH diaphorase)组织化学染色法观察正常组和单眼视觉剥夺组幼猫外侧膝状体中NOS的变化。结果　 (1)正常组幼猫外侧膝状体各层中无NOS阳性细胞 ,但可见NOS阳性纤维 (轴突和末梢 ) ;(2 )单眼视觉剥夺组幼猫外侧膝状体各层中可见NOS阳性纤维 (轴突和末梢 )。两组幼猫外侧膝状体各层NOS阳性纤维 (轴突和末梢 )NADPH diaphorase染色无明显差别。 (3)单眼视觉剥夺组幼猫外侧膝状体的非剥夺层中可见条状分布的NOS阳性细胞 ,平均密度为 (16 80± 2 6 4 )个 /mm2 ,平均面积为 (44 5± 96 ) μm2 /个 ,无长树突 ,胞浆染色重而细胞核无染色 ;剥夺层偶见NOS阳性细胞 ,平均密度为 (1 80± 1 4 7)个 /mm2 ,平均面积为 (30 7± 75 )μm2 /个。结论　NO可能作为一种重要的神经递质参与幼猫弱视的形成     

不同时限单眼斜视和剥夺猫视觉系统的神经生长因子表达研究

目的：研究和探讨敏感期内、期末不同时限单眼斜视和剥夺猫模型视觉系统神经生长因子（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ）可塑性变化规律,可望能为临床寻找有效预防和治疗斜视和剥夺性弱视提供参考依据。方法：用免疫细胞化学ＳＡＢＣ技术染色和计算机图像分析检测ＮＧＦ在正常（Ｎ）、敏感期内单眼斜视和剥夺（ＭＳ１和ＭＤ１）及敏感期末单眼斜视和剥夺（ＭＳ２和ＭＤ２）幼猫同侧视皮质、外侧膝状体组织切片下的     

NOS神经元在人胎小梁及视网膜的存在和意义

目的在人胎视网膜及小梁定位一氧化氮合酶（ＮＯＳ），并探讨一氧化氮（ＮＯ）作为神经递质在青光眼发病机理中可能的作用。方法用还原型辅酶Ⅱ硫辛酰胺脱氢酶（ＮＡＤＰＨｄ）组织化学方法对１２例１６～２１周胎儿的小梁网及视网膜的ＮＯＳ进行染色。结果胎儿小梁网和视网膜内存在ＮＡＤＰＨｄ反应阳性神经元；Ｓｃｈｌｅｍｍ氏管内皮ＮＯＳ阳性着色，并受ＮＡＤＰＨｄ阳性神经元支配。结论视网膜上的ＮＯＳ神经元在青光眼发病中对由于缺血所致神经纤维退行性变推测有保护性作用。小梁网和Ｓｃｈｌｅｍｍ氏管上的ＮＯＳ神经元可能参与舒张小梁网和Ｓｃｈｌｅｍｍ氏管，调节房水外流，影响眼内压，并为其它的ＮＯＳ神经元降低眼内压实验提供了解剖学上的依据     

氧化应力对晶状体一氧化氮和一氧化氮合酶活性的影响

探讨氧化应力、５种抗白内障药物对晶状体一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性及一氧化氮（ＮＯ）水平的影响,方法建立晶状体温育模型：培养液分７组：（１）对照组含ＤＭＥＭ １０ｍｌ;（２）－（７）ｘｅｇ ｗｙｎｋＤＭＥＭ１０ｍｌ外尚有３０％Ｈ２Ｏ２０．２ｍｌ,ＦｅＣＬ３２ｍｇ并于（３）－（７）组中分别加入海珠视、麝珠明目、益视安、晶福及视明露滴眼液各１．０ｍｌ,晶状体制备均浆上清,测ＮＯＳ,ＮＯ,ＭＤＡ。结果１．     

不同时限单眼斜视和剥夺猫视觉系统神经元的凋亡抑制基因表达机？…

目的：研究和探讨敏感期内、末不同时限单眼斜视和剥夺动物模型视觉系统凋亡调节抑制基因Ｂｃｌ－２塑性变化的规律。方法：应用免疫细胞化学ＳＡＢＣ技术染色和计算机图像分析了Ｂｃｌ－２蛋白在Ｎ、ＭＳ１、ＭＤ１、ＭＳ２和ＭＤ２猫同侧视皮质１７区Ⅳ层及外侧膝状体相应层的表达。结果：在正常发育幼猫的视皮质和外侧膝状体主要是在 经元核浆，顺深棕黑色免疫阳性反应，胞浆淡染。在ＭＳ１和ＭＤ１眼输入的同侧视皮质１７区Ⅳ层     

不同时限单眼斜视和剥夺猫视觉系统神经元的凋亡抑制基因表达机理研究

目的：研究和探讨敏感期内、末不同时限单眼斜视和剥夺动物模型视觉系统凋亡调节抑制基因Ｂｃｌ－２ 塑性变化的规律。方法：应用免疫细胞化学ＳＡＢＣ技术染色和计算机图像分析了Ｂｃｌ－ ２ 蛋白在Ｎ、ＭＳ１、ＭＤ１ 、ＭＳ２ 和ＭＤ２ 猫同侧视皮质１７ 区Ⅳ层及外侧膝状体相应层的表达。结果：在正常发育幼猫的视皮质和外侧膝状体主要是在神经元核浆,呈深棕黑色免疫阳性反应,胞浆淡染。在ＭＳ１ 和ＭＤ１ 眼输入的同侧视皮质１７区Ⅳ层及外侧膝状体相应层（Ａ１）表现为Ｂｃｌ－２ 蛋白表达的免疫阳性神经元数目减少,核浆染色淡,表明Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ表达水平降低。在同侧视皮质１７ 区Ⅳ层表达浓度和数密度：Ｎ组与ＭＳ１ 和ＭＤ１ 组比较差异具有非常显著性（Ｐ＜０．００１）;Ｎ组与ＭＳ２ 和ＭＤ２ 组比较差异无显著性（ Ｐ＞ ０．０５）。结论：ＭＳ１ 和ＭＤ１ 组幼猫实验眼同侧视皮质１７ 区Ⅳ层及同侧外侧膝状体Ａｌ 层神经元在视觉发育敏感期内,由于长期的斜视及形觉剥夺效应以致功能低下,对Ｂｃｌ－２ 调节的敏感性降低,以及对ＮＴｓ 的营养保护及上调Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ表达水平应答能力降低,在双眼竞争的神经元发育及突触连接中处于劣势,使对侧眼形成优势循环。这也可能     

一氧化氮与眼部疾病

本文叙述一氧化氮（ＮＯ）的生物合成及其调节、作用机理、生物检测、供体及抑制剂和一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）分类等，重点讨论ＮＯ与眼部疾病的关系，旨在通过ＮＯ通道 部疾病开辟新的治疗途径。     

急性高眼压大鼠外侧膝状体一氧化氮合酶的表达

目的:探讨高眼压视神经损伤中NO的作用。方法:SD大鼠20只,随机分为空白对照组4只,另16只大鼠右眼为实验组,施行高压前房灌注维持时间60min,按照高眼压后再灌注时间不同又随机分为4小组,每组4只,即高眼压后0.5,1,3和7d组。各组应用NADPH-黄递酶法检测外侧膝状体一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达及分布情况。结果:空白对照组及实验各组外侧膝状体均有NOS表达,NOS阳性细胞在外侧膝状体主要分布于腹外侧核。各实验组外侧膝状体的NOS阳性细胞数明显高于空白对照组(P<0.01);实验各组中高眼压后1d组的NOS阳性细胞数明显高于其它3组实验组(P<0.01);其它3组实验组之间比较无显著性差异。结论:NO既参与眼正常生理功能的调节,也在高眼压视神经及其上行视觉通路的损伤中发挥重要作用。     

视网膜光损伤机制中NOS作用的实验研究

目的　探讨一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase ,NOS)活性异常变化在视网膜光损伤发生机制中的作用。方法　60只SD大鼠随机分为5组,1组为正常对照,其它4组以持续强光照射6小时造成视网膜光损伤,并按光照后1天和6天两个观察点各分为实验组与空白对照组,实验组大鼠给予左旋硝基精氨酸治疗,并分别测定比较各组大鼠视网膜外核层厚度以及NOS和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase ,SOD)的活性。结果　光损伤后第1天和第6天空白对照组大鼠视网膜内NOS的活性均异常升高,SOD活性均显著下降,视网膜外核层厚度进行性减小;实验组大鼠视网膜内NOS的活性低于正常水平,SOD活性和视网膜外核层厚度均显著高于相应的空白对照组。结论　过度光照后视网膜内NOS活性持续异常升高是视网膜氧化损伤的重要原因并与感光细胞退行性变性的发生密切相关。     

大鼠角膜重度碱烧伤后视网膜一氧化氮合酶变化与细胞凋亡的研究

目的研究大鼠角膜重度碱烧伤后视网膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)变化与细胞凋亡的关系。方法制作SD大鼠角膜重度碱烧伤模型76只(152眼)。在烧伤后不同时间点以免疫组化检测iNOS在视网膜的表达,以酶法检测视网膜组织中iNOS含量的变化,并以末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜凋亡细胞,并与正常大鼠相对照。结果正常组视网膜中未测到iNOS的表达和含量,重度碱烧伤后大鼠视网膜中iNOS的表达和含量从伤后1d开始升高,于7d达最高,30d恢复正常,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。伤后3d、7d、15d在视网膜神经节细胞可见不同程度的TUNEL阳性细胞,7d组凋亡阳性表达最强,与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论角膜重度碱烧伤后视网膜组织细胞存在凋亡,凋亡可能与iNOS表达有关。     

应用DiI染色晶体对人胚胎视神经发育过程的初步研究

目的：应用Dil(1,1′-dioctadecyl-3,3′,3′-tertamethylin-docarbocyanine perchlorate,一种羰花青染料)染色晶体研究人胚胎视网膜、外侧膝状体、上丘及视皮质间连接的形态学特征和动态发育过程。方法：对不同胎龄的7个胎儿眼球标本进行灌注固定后,分别于标本的视束、上丘臂和视皮质下板层植入Dil染色晶体,以标记来自视网膜和外侧膝状体的轴突。于室温下放置4-10周,等待Dil染色晶体扩散,再根据神经走向切片,通过激光共焦扫描显微镜观察并记录植入Dil染色晶体12-28周的结果。结果：植入Dil染色晶体12周时,胎儿标本的视网膜神经纤维投射已经到达外侧膝状体,但尚未出现分层现象;视网膜神经投射也已达到上丘,纤维位于上丘臂的背侧;视皮质下已出现板层结构。植入22周时视皮质下仍存在板层结构。结论：植入Dil染色晶体12周前,视网膜神经纤维投射已达到外侧膝状体和上丘,视皮质下的板层也已经形成,22周后消失。Dil染色技术能有效地用于研究胚胎期视神经的连续发育过程。     

两种病因弱视幼猫视网膜中NOS和GABA的表达

目的：分别利用单眼睑缝合法和外直肌离断法建立两种不同病因的幼猫弱视模型,探讨一氧化氮( NO )和γ-氨基丁酸( GABA)这两种神经递质在两种弱视形成过程中的作用。
　　方法：3周龄幼猫18只,随机分为正常组、形觉剥夺组、斜视组,利用单眼睑缝合法和外直肌离断法建立两种病因的幼猫弱视模型,12 wk后行图形视觉诱发电位检测。摘取眼球做病理切片,使用免疫组化染色法检测两组弱视眼和正常组视网膜中NOS和GABA的表达。
　　结果：形觉剥夺组、斜视组12 wk与同龄正常组图形视觉诱发电位( P-VEP)比较,均可见P1波潜伏期延长、振幅下降,差异有统计学意义(P<0.05)。弱视组视网膜内的NOS和GABA免疫阳性神经元染色淡,平均阳性面积减少,与同龄正常组相比差异有统计学意义(P<0.05)。弱视组间视网膜中的NOS和GABA平均阳性面积差异无统计学意义(P>0.05)。
　　结论：NO和GABA的水平降低可能导致弱视眼视网膜内神经兴奋性的改变,二者在弱视形成过程中起着重要作用。     

青光眼患者视乳头特异细胞中二型一氧化氮合酶的表达

目的 探讨原发性开角型青光眼患者视乳头特异细胞中二型一氧化氮合酶（nitric oxide synthase-2，NOS-2)的表达。方法 采用免疫组织化学双荧光标记，标记NOS-2和特异细胞抗原。结果 NOS-2主要位于星形胶质细胞中，NOS-2阳性星形胶质细胞主要位于神经细胞损害区。少量动脉血管内皮细胞有NOS-2阳性染色。小胶质细胞，血管肌细胞、血管周细胞中无明显NOS-2阳性染色。结论 青光眼患者的视乳头病变中，NOS-2主要由星形胶质细胞合成，星形胶质细胞可能通过合成大量一氧化氮，对视神经节细胞轴突产生局部神经毒害作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠视神经钳夹伤后外侧膝状体神经元保护作用的研究

背景研究证实绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）全身应用可到达视神经及视网膜组织,对视网膜缺血一再灌注和视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞（RGCs）具有保护作用,但EGCG对视神经损伤后RGCs上位神经元的影响目前尚未见报道。目的探讨EGCG对大鼠视神经钳夹伤后外侧膝状体（LGN）神经元的保护作用。方法48只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术＋EGCG组、视神经钳夹＋生理盐水组、视神经钳夹＋EGCG组,每组12只。用40g微型视神经夹于大鼠右眼球后约2mm处夹持视神经60S建立视神经钳夹伤模型,假手术＋EGCG组、视神经钳夹＋EGCG组大鼠于造模前2d始每日腹腔内注射EGCG（25mg／kg）共5d,后改为口服（2mg／kg）,视神经钳夹＋生理盐水组大鼠以同样的方法注射生理盐水。于造模4周后处死大鼠并取脑组织,用Nissl染色法计数外侧膝状体背侧核（dLGN）神经元数目,用免疫组织化学染色法和Westernblot法观察神经丝蛋白（NF-L）在LGN的表达,比较各组大鼠dLGN中神经型一氧化氮合酶（nNOS）免疫组织化学染色阳性细胞数量。结果视神经钳夹伤后4周,假手术＋EGCG组左侧、右侧dLGN神经元数量与正常对照组相比差异无统计学意义（P=0．906、P=0．561）;视神经钳夹＋生理盐水组、视神经钳夹＋EGCG组钳夹同侧dLGN神经元数量与正常对照组相比,差异无统计学意义（P=0．794、P=0．646）,对侧dLGN神经元数量均低于正常对照组（P=0．000、P=0．015）,而视神经钳夹＋EGCG组钳夹对侧dLGN神经元数量高于视神经钳夹＋生理盐水组（P=0．007）;NF－L检测可见视神经钳夹＋EGCG组钳夹对侧LGN的NF－L表达量高于视神经钳夹＋生理盐水组（P=0．002）;dLGN的nNOS阳性细胞计数在正常对照组、假手术＋EGCG组、视神经钳夹＋EGCG组之间差异无统计学意义（P〉0．05）,而视神经钳夹＋生理盐水组钳夹对侧dLGN的nNOS阳性细胞高于视神经钳夹＋EGCG组（P=0．000）。结论EGCG对大鼠视神经钳夹伤后LGN的神经元可能具有一定的保护作用,这种保护作用可能与EGCG抑制了nNOS的表达有关。     

Nitric oxide-producing cells project from retinal grafts to the inner plexiform layer of the host retina.

PURPOSE: Amacrine cells expressing nitric oxide synthase (NOS) are seen in normal retinas and retinal grafts to extend long processes, which can be followed for long distances. Taking advantage of the morphologic features of these cells, the present study examined whether graft-host connections involve cells capable of producing nitric oxide, a recognized retinal neuromodulatory compound. METHODS: Embryonic day 15 rabbit retinas were transplanted to the subretinal space of adult rabbits. The localization of the neuronal form of NOS was assessed by immunocytochemistry in grafts that had reached the equivalent ages of postnatal days 5, 12, 20, 45, 90, and 102. RESULTS: NOS-containing cells and processes were seen in all the transplants. Processes were found to project mainly toward areas within the graft. Yet, at all survival times examined, single immunolabeled fibers could be seen to cross the graft- host border. In fortuitous cases, it was possible to establish that the bridging fiber originated in the graft. Further, bridging fibers were seen to reach the NOS-immunolabeled host inner plexiform layer. CONCLUSIONS: Graft NOS-containing cells are not only capable of projecting into the host but also of reaching the appropriate target for NOS-containing fibers within the host retina. This indicates that at least some graft-host connections are established by graft cells that retain their ability to synthesize a modulatory compound and which potentially could contact their partner cells in the host retina.     

应用神经轴突示踪技术研究人类视觉神经通路胚胎发育

目的 :应用神经轴突示踪方法 ,研究人类视觉神经通路在胚胎期 12w时的发育情况。方法 :取 12w胎龄的胚胎 ,浸泡在 4 %的甲醛缓冲液中固定后 ,分别在视束、上丘臂和视皮质下植入DiI染料 (DiI,1,1’ dioctadecyl 3,3,3’ ,3’ tetramethylin docarbocyanineperchlorate)。于室温下放置 4w ,待DiI晶体充分扩散后 ,根据神经轴突方向切片 ,通过共焦激光扫描显微镜观察并记录结果。结果 :大体标本观察可见到 ,视网膜神经纤维投射已到达外侧膝状体、上丘。切片观察发现 :外侧膝状体处尚未出现分层现象 ;上丘处 ,来自视网膜的神经纤维位于上丘臂的背侧 ;视皮质下已存在板层结构 ,板层内神经元呈多种形态。结论 :通过神经轴突示踪技术发现 ,12w时视网膜的神经纤维投射已经到达外侧膝状体和上丘 ,视皮质下存在板层结构。这说明人类视觉神经通路发育存在“等待期”。