人细胞色素P450 2E1 cDNA在鼻咽癌细胞系CNE—2的稳定表达

目的：为进一步研究人细胞色素P450E1（cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白对相关化学致癌物的体外代谢功能及其在化学物质鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC)变中的作用机制提供体外模型，方法：应用基因重组技术构建人CYP2E1，cDNA真核表达载体pcDNA3.1-2E1，并经脂质体介导转入CNE2细胞，通过G418筛选后挑选若干抗性细胞克隆扩大培养，结果：经Southern blot和Western blot对一系列抗性克隆细胞进行检测，获得2个具有外源CYP2E1 cDNA基因稳定整合和表达的细胞克隆CNE2－2E1－1及CNE2－2E1－2，结论：建立了可供CYP2E1代谢相关的化学致癌物筛选及CYP2E1在NPC癌变中作用机制的体外模型。     

人细胞色素P450 2E1 cDNA在鼻咽癌细胞系CNE-2的稳定表达

目的 :为进一步研究人细胞色素P45 0E1 (cytochromeP45 0 2E1 ,CYP2E1 )蛋白对相关化学致癌物的体外代谢功能及其在化学物质鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)变中的作用机制提供体外模型。方法 :应用基因重组技术构建人CYP2E1cDNA真核表达载体pcDNA3 .1 - 2E1 ,并经脂质体介导转入CNE2细胞 ,通过G41 8筛选后挑选若干抗性细胞克隆扩大培养。结果 :经Southernblot和Westernblot对一系列抗性克隆细胞进行检测 ,获得 2个具有外源CYP2E1cDNA基因稳定整合和表达的细胞克隆CNE2 - 2E1 - 1及CNE2 - 2E1 - 2。结论 :建立了可供CYP2E1代谢相关的化学致癌物筛选及CYP2E1在NPC癌变中作用机制研究的体外模型。     

汉族人群酒精性肝病ALDH2和CYP2E1基因多态性研究

目的:研究乙醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase,ALDH)和细胞色素P4502E1(Cytochrome P4502E1,CYP2E1)基因多态性与汉族人群酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法检测汉族人群中对照组(45例)、ALD组(48例)、嗜酒无肝病组(38例)和非酒精性肝病组(42例)中ALDH和CYP2E1各基因型及等位基因的频率并进行比较.结果:ALDH2*1、ALDH2*2 2种等位基因在对照组与ALD组和非洒精性肝病组与ALD组之间的分布差异有显著性(P＜0.05),在嗜酒组和ALD组中以ALDH2*1/1基因型为主.CYP2EI的cl、c2两种等位基因在ALD组与其他3组比较分布均有显著性筹异(P＜0.05).结论:ALDH与CYP2EI基因多态性与ALD的发生关系密切.等位基因ALDH2*2可能是汉族人群中嗜酒和ALD的负性危险因素.B(c1/c2)型基因型在ALD发生中起着重要的作用,c2等位基因与ALD的发生有关.     

CYP2E1遗传型与饮酒习惯对广西肝癌易感性的影响

目的:研究细胞色素P450 2E1(CYP2E1)基因多态性与饮酒因素交互作用在广西原发性肝细胞癌(肝癌)发生中的作用.方法:对广西壮族自治区300例肝癌和292例正常对照进行流行病学调查研究,并用PCR-RFLP方法检测CYP2E1基因型.结果:病例组和对照组中变异基因CYP2E1 者分别占32.3%和32.9%(P>0.05).饮酒频度每周≥3次(高频饮酒)且携带野生基因和变异基因CYP2E1 者发生肝癌的危险度分别是饮酒频度每周<3次(低频饮酒)且携带野生基因型者的1.299倍和1.803倍.结论:单一易感基因CYP2E1变异基因型与肝癌易感性无关;频繁饮酒可能提高CYP2E1变异基因型携带者患肝癌的危险性.提示对于CYP2E1变异基因型携带者,高频饮酒是一个重要的危险因子.     

肝细胞色素P450 2E1在大鼠非酒精性脂肪肝发生中的作用

目的研究大鼠非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达变化及其在脂质过氧化反应中的作用.方法Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组和高脂饮食诱导脂肪肝组,用免疫组织化学和Western blot方法测定肝细胞色素P450 2E1表达变化,酶学测定丙二醛含量.结果脂肪肝大鼠丙二醛含量较正常对照组增高,以高脂饮食8、12周为甚(P＜0.05),肝细胞色素P450 2E1表达亦明显增强(P＜0.01).结论肝细胞色素P450 2E1表达变化与脂肪肝引起的肝脏损害以及脂质过氧化反应程度密切相关.     

金钗石斛多糖通过下调CYP2E1表达改善非酒精性脂肪肝病大鼠症状

目的 建立非酒精性脂肪肝病（NAFLD）大鼠模型,观察金钗石斛多糖对肝细胞色素P4502E1蛋白及mRNA表达的影响。方法 选用SPF级,雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、多烯磷脂酰胆碱组、金钗石斛多糖低、中和高剂量组6组,每组10只。高脂高糖饮食构建非酒精性脂肪肝病大鼠模型,给予相应治疗6周后,观察大鼠一般情况,提取肝脏检测肝脏病理学、肝组织CYP2E1蛋白和mRNA表达,收集血液检测天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）活力。 结果 模型组出现一定的脂肪样变性,部分肝细胞有炎性因子浸润;与模型组相比,各治疗组均有改善。与正常组相比,模型组肝指数、AST、ALT、TG、TC、CYP2E1蛋白及mRNA明显升高,CAT和SOD明显降低（各P＜0.05）;与模型组相比,金钗石斛多糖三个剂量组和多烯磷脂酰胆碱组AST、ALT、TG、TC、CYP2E1蛋白及mRNA均明显降低（P＜0.05）,CAT和SOD明显升高（P＜0.05）,且金钗石斛多糖高剂量组TG和TC明显低于多烯磷脂酰胆碱组（P＜0.05）,金钗石斛多糖三个剂量组CYP2E1蛋白及mRNA明显低于多烯磷脂酰胆碱组（P＜0.05）。结论 金钗石斛多糖可明显降低NAFLD大鼠肝脏中CYP2E1蛋白及mRNA表达,进而改善肝功能和血脂水平,提高CAT和SOD活力,最终有效缓解NAFLD大鼠症状。     

乙醇依赖综合征与ADH2、CYP4502E1基因多态性的相关研究

目的对云南汉族酒依赖综合征与ADH2、CYP4502E1基因多态性进行相关性研究;方法采用PCR—RFLP方法,对来自云南地区的44例乙醇依赖综合征患者以及与其配比的30例对照个体的ADH2基因第3外显子处G143A单核苷酸多态位点等位基因频率和基因型频率、CYP2E1基因5’端非编码区的RsaL／PstI酶切位点多态性等位基因频率和基因型频率以及是否与乙醇依赖综合征相关进行分析。结果（1）在患者组ADH2基因3种基因型ADH2^＊1／^＊1、ADH2^＊1／^＊2、ADH2^＊2／^＊2分别为36％、43％、21％,患者组和对照组相比较无显著差异（P〉0．05）;等位基因ADH2^＊1和ADH2^＊2在患者组中的基因频率为0．58和0．42,患者组和对照组相比较分布有差异（P〈0．05）,患者组ADH2^＊2等位基因频率降低;（2）CYP2E1基因在患者组中A、B型基因分布为59％、41％,患者组和健康对照组两种基因型的分布有差异（P〈0．05）,B型基因在乙醇依赖组升高;等位基因C1和C2在患者组中的频率为0．80和0．20,患者组和对照组两种等位基因分布有差异（P〈0．05）,患者组C2等位基因频率升高。结论CYP2E1基因多态性与乙醇依赖综合征发生有关,ADH2^＊2等位基因对于乙醇依赖综合征发病有保护作用,而C2等位基因在乙醇依赖综合征的发生中起一定的作用。     

细胞色素P4502E1基因多态性与胃癌的关系

目的 探讨人体代谢亚硝胺的重要同功酶细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１（ＣＰＹ２Ｅ１）基因多态性与胃癌危险性的关系。方法 应用病例对照分子流动病学研究方法，采用聚合酶链和限制性片段长度多态性技术，对福建省胃癌主 长乐市９１例原发性胃癌病例和９４例人群对照的ＤＮＡ进行ＣＰＹ２Ｅ１基因型检测和分析。结果ＣＰＹ２Ｅ１的Ｃ１／Ｃ２和Ｃ２／Ｃ３基因型在胃癌病例和对照中分别为３６．２６％和２４．４７％，Ｆｉｓｈｅｒ‘ｓ精     

Cloning and sequence analysis of human embryonic nasopharyngeal epithelial CYP2E1 cDNA]

OBJECTIVES: To investigate the role of CYP2E1 gene in chemical carcinogen-induced nasopharyngeal carcinogenesis and to provide new evidence about etiology and pathogenesis of nasopharyngeal carcinoma. METHODS: RT-PCR was used to clone the CYP2E1 gene in human embryonic nasopharyngeal epithelial (HENE) cell, the transformed nasopharyngeal epithelial cell line (7,429), and the nasopharyngeal carcinoma cell line (HNE1). The cloned segments were inserted into pGEM-T Easy vector to sequence by DNA recombination technique. RESULTS: In comparison with HENE-2E1 cDNA, there were two point mutations at positions 846 (A to T) and 901 (A to G) in 7,429-2E1 cDNA as well as only one point mutation at position 901 (A to G) in HNE1-2E1 cDNA. In comparison with human (adult, ethanol-inducible) liver CYP2E1 gene (GenBank NO. J02843), HENE-2E1 cDNA had one point mutation at position 901 (G to A). All these point mutations didn't affect the amino acid sequence. But no base change was found in HNE1-2E1 cDNA. CONCLUSION: There are a few of base substitutions among HENE-2E1 cDNA, 7,429-2E1 cDNA, and HNE1 cDNA sequences. All these point mutations are synonymous mutation. The study reconfirms that the human CYP2E1 gene is relatively well conserved.     

人源细胞色素P450 2E1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的: 人源细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1, CYP2E1)基因的克隆及其表达?方法:采用RT-PCR方法对我国汉族人CYP2E1基因进行了克隆,并利用pET-32a(+)原核表达载体进行了表达?结果:经过酶切与测序鉴定表明扩增的CYP2E1基因含有完整的编码序列,除该基因编码区第1 263位核苷酸发生C→T的突变(未引起氨基酸发生突变)外,其他核苷酸与氨基酸序列与GenBank中登录发表的人CYP2E1基因完全相同?SDS-PAGE分析结果显示该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)后在BL21(DE3)大肠杆菌中成功表达?结论:该基因的成功表达为开展临床前药物安全性评价与药物代谢分析的后续工作打下了基础?     

注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响

目的 研究注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响。方法 将SD大鼠分成盐酸头孢他美给药组和生理盐水空白组,每组6只,雌雄各半,给药组尾静脉注射盐酸头孢他美50 mg/(kg·d),连续给药7 d,每天2次。HPLC法同时测定CYP450的3种同工酶特异性探针底物在SD大鼠肝微粒体内代谢产物生成量和原型探针底物降解量,判断酶亚型活性变化。分析柱Diamonsil C₁₈ (150 mm×4.6 mm,5 μm),流速1.0 mL/min。CYP1A2代谢样品测定条件为甲醇(0.1%甲酸)(A)-水(0.1%甲酸)(B),0~5 min: 18%A,5~10 min: 18%~60%A,10~15 min: 60%A,检测波长为247 nm;CYP3A4代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(0.02%甲酸)(B),0~11 min: 40%~60%A,检测波长为223 nm;CYP2E1代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(B),0~10 min: 37%~75%A,检测波长为287 nm。结果 探针底物及其代谢产物在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 7),精密度RSD<6％(n=5),提取回收率83.2%～97.5%。SD大鼠连续注射给予盐酸头孢他美后,CYP3A4的活性与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),可能存在诱导作用;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05)。结论 静注给予盐酸头孢他美能诱导SD大鼠肝微粒体CYP3A4,对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用。提示经CYP3A4 代谢的药物在临床上与注射用盐酸头孢他美合用时,可能存在潜在药物-药物相互作用。     

IRM-2小鼠cDNA文库的全长cDNA序列分析

目的分析IRM-2小鼠全长cDNA文库的cDNA序列。方法根据IRM-2小鼠的21条EST,从IRM-2小鼠全长cDNA文库测定基于该21条EST序列PCR扩增的全长cDNA序列,通过与GenBank基因库同源序列信息比对,分析全长cDNA序列和性质。结果根据21对引物PCR产物的拼接,获得5条全长cDNA序列,与小鼠已知基因不同源,而且得到了可能编码蛋白质的氨基酸序列和蛋白质的性质。结论 5条全长cDNA序列提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因,为进一步分离和鉴定辐射抗性相关基因奠定了基础。     

中药对细胞色素P450 2E1影响的研究进展

细胞色素P450 2E1(CYP2E1)不仅参与药物代谢，还能催化许多前毒物和前致癌物的活化过程。近年发现许多中药能抑制或诱导CYP2E1活性，从而导致有益的和不利的药物相互作用。以近年国内外文献报道以及相关研究为依据，综述了中药有效成分、提取物和单复方对CYP2E1的影响，以及CYP2E1介导的中药药物相互作用，并对其影响机制进行简要介绍。以期为中药的临床合理使用，提高其有效性和安全性提供参考。     

Cytotoxicity of acrylamide and its epoxide glycidamide in CHO cells expressing human cytochrome P450 2E1

Objective： To investigate whether CYP2E1 is responsible for the acrylamide metabolic activation in FIp-In CHO cell system. Methods： CYP2E1 cDNA was subcloned from the human liver full-length cDNA library and subsequently transfected into the FIp-In CHO cells to generate the stable transfectant of CYP2E1. The CYP2E1 mRNA expression was determined by RT-PCR. Acrylamide and its epoxide glycidamide induced cytotoxicity and cell cycle arrest in G2/M were conducted using MTS assay and flow cytometry, respectively. Results： In the CHO cell stably expressing CYP2E1 （CHO-2E1）, a -1.5 kb size of band was detected from the mRNA in the cells while no corresponding band in the CHO-vector cells, which indicated that CYP2E1 was successfully transfected in the CHO cells. Compared with the CHO-vector cells, acrylamide showed a concentration dependent loss of viability in the CHO-2E1 cells but no significant change of G2/M arrest was found. As expected, glycidamide induced similar profile of cytotoxicity in both of the cells, and G2/M arrest presented a concentration-dependent increased in the CHO-2E1 cells. Conclusion： The result suggested that CYP2E1 might be responsible for the acrylamide metabolism, and its metabolite glycidamide was a direct cytotoxic and genotoxic agent. It should be further considered whether acrylamide-induced toxicity is through its epoxide glycidamide in the presence of CYP2E1.