^60Co—γ照射对肺癌A549细胞VEGF表达的影响

目的：探讨^60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后血管内皮生长因子（vascula endothelial growth factor,VEGF）表达变化。方法：2Gy剂量^60Co-γ射线照射肺癌A549细胞,以荧光定量PCR法检测照射后4、12、24、48、72h VEGF mRNA表达改变,以ELISA法检测各组培养液上清中VEGF蛋白表达量变化。结果：以对照组（未照射组）VEGF mRNA表达量为1,照射后4h VEGF mRNA表达开始升高,12、24小时达到高峰（8．83±3．01,P〈0．05;14．67±7．18,P〈0．01）,48—72h随后降至接近对照组水平。ELISA检测培养液上清中VEGF蛋白表达量,在照射后4h降低,随后开始升高,24、48h达到高峰（600．86±20．87,P〈0．05;594．75±2．52,P〈0．05）,72h降至对照组水平。结论：2Gy剂量^60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后早期VEGF表达升高,我们推测此时可能是联合抗VEGF药物抑制肺癌转移的最佳时机。     

60Co-γ照射对肺癌A549细胞VEGF表达的影响

目的:探讨60Co -γ射线照射肺癌A549细胞后血管内皮生长因子(vascula endothelial growth factor ,VEGF)表达变化.方法:2 Gy剂量60 Co-γ射线照射肺癌A549细胞,以荧光定量PCR法检测照射后4、12、24、48、72 h VEGF mRNA表达改变, 以ELISA法检测各组培养液上清中VEGF蛋白表达量变化.结果:以对照组(未照射组)VEGF mRNA表达量为1,照射后4 h VEGF mRNA表达开始升高,12、24小时达到高峰(8.83±3.01,P＜0.05 ;14.67±7.18,P＜0.01),48-72 h随后降至接近对照组水平.ELISA检测培养液上清中VEGF蛋白表达量,在照射后4 h 降低,随后开始升高,24、48 h达到高峰(600.86±20.87,P＜0.05;594.75± 2.52,P＜0.05),72 h降至对照组水平.结论:2 Gy剂量60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后早期VEGF表达升高,我们推测此时可能是联合抗VEGF药物抑制肺癌转移的最佳时机.     

X射线对人肺癌细胞Pokemon表达影响

目的 研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对体外培养的人肺癌A₅₄₉细胞系Pokemon基因和蛋白表达的影响。方法 用X射线2、4、6、8 Gy吸收剂量照射体外培养的A₅₄₉细胞系,分别采用荧光实时定量PCR技术和蛋白印记法检测A₅₄₉细胞照射后2、4、8、12、24、48 h的Pokemon mRNA和蛋白表达水平,以未照射组为对照。采用二苯基四氮唑溴盐法分别检测2 Gy照射1、2、3、4、5 d后A₅₄₉细胞增殖能力变化,以未照射组为对照。结果 Pokemon mRNA的表达在2、4、6、8 Gy照射后早期呈降低趋势,但晚期呈升高趋势,大部分时间点差异有统计学意义(t=3.40~154.76,P=0.000~0.041);Pokemon 蛋白的表达较对照组均升高,且各剂量组均在照射后8 h达峰值,在大部分时间点实验组与对照组差异有统计学意义(t=4.18~89.64,P=0.000~0.039)。照射组细胞接种后第3~5天细胞增殖能力显著低于对照组(t=2.34~18.19,P=0.000~0.040)。结论 一定剂量X射线在特定条件下可诱导人肺癌A₅₄₉细胞Pokemon mRNA和蛋白表达升高,可能与A₅₄₉细胞辐射抗性有关。     

γ射线对人肺癌A549细胞和人淋巴细胞Cx43基因转录表达的影响

目的:研究γ射线对人肺癌A549细胞和淋巴细胞Cx43基因转录表达的影响.方法:对数生长期的肺癌A549细胞和外周血淋巴细胞,分别给予1、2、3、5和6 Gy的60Co γ射线照射,并于照射前(对照组)和照射后4、8、12、24、36、48和72 h分别提取总RNA,反转录成cDNA.应用实时荧光定量PCR技术,检测各时相点Cx43基因表达改变.结果:低剂量1～6 Gy照射后12 h,人外周血淋巴细胞Cx43 mRNA表达水平明显增高,P<0.05.肺癌A549细胞照射后Cx43 mRNA表达水平(在1、3和6 Gy照射12 h后分别为0.06、0.12和0.09)与对照组(1.00)相比明显降低,P<0.05.结论:γ射线照射后能上调人淋巴细胞Cx43 mRNA表达和下调肺癌A549 Cx43 mRNA表达,其机制可能与细胞类型及对γ射线的反应性有关.     

A549细胞经2、4 Gy X线照射后miR-505表达变化的实验研究

目的:初步探讨2、4 Gy X射线照射后人肺腺癌A549细胞miR-505体内、外表达的变化及意义.方法:2、4 Gy X射线分别照射体外培养的A549细胞,以实时定量PCR(RT-qPCR)法检测A549细胞中miR-505表达水平.分别将0、2与4 Gy X射线照射后的A549细胞经尾静脉注射裸鼠制备裸鼠肺转移动物模型,检测裸鼠肺组织及血清中miR-505的表达水平.统计分析采用SPSS 19.0软件.结果:2 Gy X射线照射A549细胞后1、2、12、及24 h,miR-505表达均显著升高(升高倍数分别为:3.09、1.82、2.19及1.24倍,P<0.01);4 Gy X射线照射A549细胞后1、2、12 h,miR-505表达亦均显著升高(升高倍数分别为:2.99、2.06、1.86倍,P<0.01).0、2、4 Gy X线照射组裸鼠肺组织中均可检测到miR-505表达显著升高(升高倍数分别为:9.28、16.55及6.84倍,P<0.05);miR-505在血清中表达水平0 Gy和2 Gy组分别为5.33和3.78,与对照组相比显著升高(P<0.05).结论:2、4 Gy X射线照射可增加A549细胞miR-505的体内、外表达水平,可能与增强A549细胞体内、外侵袭转移能力相关.     

X线照射后肺癌细胞肿瘤坏死因子mRNA的表达

目的探讨X线诱导和调节肺癌细胞株NCI-H596和A549肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的表达作用及其临床意义。方法应用实时荧光定量RT-PCR技术,定量检测NCI-H596和A549细胞株照射前和接受不同剂量(2,5,10,20,30和40Gy)的X线照射后,以及受照30Gy后不同时间TNF-αmRNA的表达。同时进行集落形成试验,检测NCI-H596和A549细胞株的放射敏感性。结果集落形成试验结果显示,未照射的NCI-H596细胞株集落形成率为0.12～0.24;A549细胞株集落形成率为0.37～0.45。照射后,A549细胞的存活分数(SF)在2Gy时为47.3%±9.0%,4Gy时为18.0%±3.0%,6Gy时为6.0%±2.0%,8Gy时为1.4%±0.3%;NCI-H596细胞的SF在2Gy时为55.2%±51.0%,4Gy时为15.9%±9.2%,6Gy时为3.5%±1.7%;8Gy时为0.9%±0.6%;二者SF差异无统计学意义,二者的D0值和Dq值差异亦无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量RT-PCR检测显示,NCI2H596细胞受照后TNF-αmRNA表达逐渐升高,照射剂量达40Gy时,TNF-αmRNA表达水平达高峰,为对照组的83倍;受照后,1hTNF-αmRNA表达逐渐升高,6h达高峰,为对照组的568倍。A549细胞受照后,1hTNF-αmRNA表达即达高峰,为对照组的136倍。结论X线可诱导肺癌细胞株A549和NCI2H596产生TNF-α,且呈剂量、时间依赖性,可提高肺癌放射治疗的疗效,也可对正常组织和     

X线照射后对乳腺癌细胞凋亡的影响及CDKN1A表达的变化

目的探讨乳腺癌细胞系（MCF-7）X线照射后CDKN1A基因（p21）表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法用流式细胞方法检测MCF-7细胞在接受不同剂量X射线照射后CDKN1A基因表达的改变和用RNAi技术抑制CDKN1A基因表达并检测细胞凋亡的变化。结果MCF-7细胞在接受不同剂量（1、2和4 Gy） X射线照射后CDKN1A蛋白表达有不同程度升高,其中 4 Gy照射后升高水平最明显（P<0.05）。在接受4 Gy剂量照射后,CDKN1A蛋白水平在8、12、24、48、72 h 均有不同程度增加,其中24 h时较对照组升高3倍(P<0.05)。抑制CDKN1A基因表达后MCF-7细胞凋亡率增加183.9%（P<0.05）。结论乳腺癌细胞在接受4 Gy照射后24 h的CDKN1A表达水平增加最为明显,抑制CDKN1A基因表达可促进细胞凋亡。     

X射线对肺癌细胞系p57kip2转录表达的影响

目的:研究X射线对肺癌细胞系NCI-H226和A549的印记基因p57kip2转录表达的影响。方法:对数生长期的肺癌细胞系NCI-H226和A549,分别予以2、4、8和12GyX射线照射,并于照射前和照射后6、12、24、36和48h分别提取RNA,采用RT-PCR技术检测各时相p57kip2mRNA的含量,分析不同剂量X射线照射后对其转录水平的影响。结果:两组肺癌细胞p57的转录表达在不同照射剂量和不同时间水平间差异有统计学意义,P<0·05,A549经过X射线照射后,p57kip2的mRNA含量明显升高,且与照射剂量呈线性依赖关系;NCI-H226虽然未见明显规律,但在X射线照射后的峰值mR-NA含量均明显升高。结论:X射线照射后能够上调肺癌细胞p57kip2的mRNA的表达,预示着p57可能参与了放射线所致细胞周期重新分布和细胞凋亡的过程,并且可能预测肺癌细胞的放射敏感性,但其表达与时间剂量的关系尚需要进一步研究。     

SIRT6调控细胞糖代谢对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响#br# #br#

目的 探讨沉默信息调节蛋白6（SIRT6）调控细胞糖代谢对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法 构建过表达SIRT6的腺病毒载体Ad SIRT6,采用荧光实时定量PCR（QPCR）检测经不同转染强度（0、25、50、100、200 pfu／细胞）Ad SIRT6转染24 h后的SIRT6 mRNA水平;根据实验设计分为对照组、空载体（Ad-null）组及过表达（Ad-SIRT6）组,Ad-null组和Ad SIRT6组的病毒浓度均为200 pfu／细胞;采用克隆形成实验检测3组经0、2、4、6、8和10 Gy X线照射后的存活分数（SF）,根据多靶单击模型绘制细胞存活曲线并计算增敏比（SER）;流式细胞术检测3组经4 Gy X线照射48 h的细胞周期和凋亡情况;采用QPCR检测经4 Gy X线照射48 h各组丙酮酸激2（PKM2）、乳酸脱氢酶A（LDHA）和己糖激酶（HK）的表达水平;葡萄糖试剂盒检测转染12、24、36、48 h后的培养基葡萄糖消耗水平。结果QPCR检测显示,在25～200 pfu／细胞的范围内,随转染强度的增加,A549细胞的SIRT6 mRNA水平升高（P＜0001）,0、25、50、100、200 pfu／细胞对应的SIRT6 mRNA水平依次为1.012±0.016、1.356±0.185、2.243±0.695、4.887±1.169和7.241±1.425,50、100、200 pfu／细胞对应的SIRT6 mRNA水平均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。后续实验选择过表达效果最强的200 pfu／细胞转染量。克隆形成实验显示,Ad null组和对照组经0、2、4、6、8、10 Gy X线照射后SF的差异无统计学意义（P＞0.05）;而Ad SIRT6组经4～10 Gy X线照射后的SF均低于Ad null组和对照组（P＜005）。多靶单击模型拟合细胞存活曲线提示SER为1.76。与对照组和Ad null组比较,Ad SIRT6组的G0／G1期细胞比例和凋亡率升高,S期细胞比例及PKM2、LDHA和HK mRNA水平均降低,差异有统计学意义（P＜005）;Ad SIRT6组转染12、24、36、48 h的葡萄糖消耗量降低,低于对照组和Ad null组（P＜0.05）。结论 SIRT6过表达可抑制A549细胞糖酵解过程中关键酶生成来抑制糖酵解过程,同时具有放射增敏作用,并可导致G0／G1期阻滞和细胞凋亡。     

Celecoxib对放射所致DNA损伤修复与凋亡的影响

目的探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib影响肺腺癌A549细胞凋亡及DNA损伤修复的放疗增敏机制。方法 A549细胞分为对照组(相同体积的DMSO)、药物组(celecoxib)、照射组(6MV X射线6 Gy)、联合组(celecoxib+6Gy X射线(药物作用24 h后))。CCK-8法检测celecoxib对肺腺癌A549细胞的IC50。RT-PCR、Western blot法检测细胞DNA-PKcs、Ku80基因mRNA及蛋白表达。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果 Celecoxib抑制A549细胞增殖作用呈剂量和时间依赖性,48 h的IC50值为58.74μmol/L。联合组DNA-PKcs、Ku80基因mRNA及蛋白表达量明显低于对照组、药物组、照射组(P<0.01)。联合组细胞凋亡率明显高于对照组、药物组和照射组(P<0.01)。结论 Celecoxib通过抑制放射所致DNA损伤修复及促进凋亡,从而达到放疗增敏作用。     

X线照射对人结直肠癌细胞株SW480中Kiss-1基因表达的影响

目的探讨X线照射对体外培养人结直肠癌细胞株SW480中肿瘤转移抑制基因Kiss-1表达的影响。方法应用SYBRGreen实时定量PCR检测、相对定量法分析不同剂量X线照射后24、48 h SW480中Kiss-1 mRNA的表达水平。结果与对照组相比,照射后24 h,各照射组Kiss-1 mRNA表达的差异均无统计学意义(P>0.05);照射后48 h,2、4、6 Gy组Kiss-1 mRNA表达上调(P<0.05),8 Gy组Kiss-1 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 X线照射不会导致结直肠癌细胞Kiss-1基因表达下调,放疗可能不会增加结直肠癌转移的风险。     

辐射诱发大鼠体内旁效应中肺及肾组织凋亡相关基因mRNA的表达变化

目的：探讨不同剂量X射线辐射诱发大鼠体内旁效应中肺和肾组织凋亡相关基因的表达变化。方法：70只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组和不同剂量、不同时间的辐射组,共10组,每组7只。除正常对照组外,其余各组大鼠分别给予2、4、8 Gy X射线单次照射右肺部,铅皮屏蔽身体其余部位。分别于照射后6、24、48 h处死辐射各组大鼠,实时荧光定量PCR检测大鼠右肺、左肺、左肾组织中Cytc、Caspase-9、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA表达的变化。结果：与正常对照组比较,2、4、8 Gy辐射各组大鼠右肺、左肺、左肾中Cytc、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达量在照射后均明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。除右肺8 Gy辐射后48 h组和左肾2 Gy辐射后6 h组之外,其余辐射组Bax mRNA表达量均明显升高,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。除左肾8 Gy辐射后6 h组之外,其余辐射组Bcl-2 mRNA表达量均降低,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。结论：不同剂量X射线照射大鼠右肺部后,右肺组织中Cytc、Caspase-9、Caspase-3、Bax表达均显著上调,Bcl-2明显下调。左肺和左肾中未直接受照射组织也对X射线辐射产生了响应,辐射诱导了体内旁效应的产生。各辐射剂量之间、各时间点之间尚未发现明显的效应差异。     

EGFR和TGF-α在肺癌细胞放疗增敏中的作用

目的 研究表皮生长因子受体（EGFR）、转化生长因子-α（TGF-α）与肺癌细胞不同放疗分割剂量的关系及可能作用机制。方法 对A549细胞采用常规分割（2 Gy／天）和大分割（4、8 Gy／天）照射，DT=8 Gy，采用实时荧光定量 PCR （QPCR）、酶联免疫吸附测定（ELISA）法、Western blotting分别检测A549细胞中EGFR、TGF-α基因和蛋白表达，另采用免疫荧光法测定γ-H2AX表达。结果 4 Gy／天和 8 Gy／天分割组A549细胞中EGFR、TGF-α mRNA表达水平均显著低于2 Gy／天组（P＜0.05）；4 Gy／天和 8 Gy／天分割组A549细胞中EGFR、TGF-α 蛋白表达均显著低于2 Gy／天组（P＜0.05）。免疫荧光法结果显示，4 Gy／天和 8 Gy／天分割组A549细胞中γ-H2AX表达明显高于对照组和2 Gy／天分割组。结论  大剂量分割放疗后EGFR、TGF-α 表达明显下调，增加A549细胞对放射线的敏感性，其机制可能与DNA损伤修复组蛋白γ-H2AX表达上调有关。     

MLN4924通过抑制类泛素化通路上调人肺腺癌A549细胞中PD-L1的表达

目的:探究MLN4924对肺腺癌A549细胞中程序性死亡-配体1(PD-L1)表达的影响及其可能的内在机制。方法:体外培养A549细胞,按(0、0.25、0.5、0.75、1、5、10μmol/L)MLN4924分组分别处理24、48、72 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,作图并计算各组半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞术检测PD-L1的表达,选择最适时间72 h及其IC₅₀用于后续实验。后续实验按(0、0.469μmol/L)MLN4924分组培养72 h, Western blot法检测FBXW2蛋白、肌段同源盒2(MSX2)蛋白、Y-染色体性别决定基因盒2(SOX2)蛋白、PD-L1蛋白表达,qPCR法测定PD-L1 mRNA表达。结果:MLN4924在24、48、72 h的IC₅₀值分别为(1.976、 0.647、0.469)μmol/L;与对照组相比,实验组A549细胞PD-L1表达均上调,呈时间-浓度依赖性。与对照组相比,实验组A549细胞FBXW2、SOX2蛋白表达降低,MSX2蛋白、PD-L1 m...     

Responses of mouse lung to irradiation. 2. Levels of alveolar protein in lung lavage fluid following neutrons or X-rays

Alveolar protein exudate is shown to exhibit a biphasic increase after irradiation. During the first 6 weeks after doses of between 5 and 28 Gy X-rays or 3.5 and 14 Gy neutrons, mean alveolar protein levels increase to about 4 times control levels. Over this period there was no suggestion of any dose-response nor of an RBE greater than 1. It seems probable that this response is unrelated to cell killing by radiation. After sublethal doses there was recovery from this first phase of leakage. However, although after 5 Gy X-rays this recovery was complete, after higher doses a second and greater increase in alveolar protein took place. After 10 Gy X-rays and 8 Gy neutrons this peaked at about 15 weeks post-irradiation and 20-30 times control levels. This second dose-dependent response corresponded with the times of animal death after doses close to the LD50. A comparison of these changes in alveolar protein exudate with previously published data on surfactant level suggests that the surfactant and protein responses are largely unrelated.     

siRNA干扰MT1H基因对A549/DDP细胞耐药性的逆转

目的：探讨siRNA干扰金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因逆转A549/DDP细胞耐药的可行性。方法：采用RT-PCR方法检测MT1H基因在A549和其顺铂耐药株A549/DDP细胞中的表达;将针对MT1H的siRNA导入A549/DDP细胞;用RT-PCR和斑点印迹方法分析MT1H基因表达情况;MTT法观察细胞顺铂耐药性;TUNEL、流式细胞术检测顺铂诱导细胞凋亡率;免疫细胞化学分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：MT1H在A549/DDP细胞中高表达但不在A549细胞中表达;A549/DDP细胞转染48 h后,与对照组比较,MT1HsiRNA转染组MT1H mRNA和蛋白表达均明显下调,细胞对DDP的药物敏感性明显提高,DDP诱导凋亡率明显增加,Bcl-2表达明显下降,Bax表达无变化。结论：MT1H基因沉默能降低Bcl-2表达,增强顺铂对A549/DDP细胞凋亡诱导作用,有效逆转A549/DDP细胞耐药。