河南汉族人群线粒体DNA(CA)n重复子的多态性及法医学应用

目的:探讨河南汉族人群线粒体(mt)DNA 514～523位置(CA)n重复子的遗传多态性及应用.方法:应用PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、银染技术,对河南汉族214例无关个体血样进行mtDNA(CA)n重复子分型.并对5例腐败肌肉及5例角化组织用Chelex-100、二硫苏糖醇(DTT)联合Chelex-100法和PCR缓冲液法分型技术效果进行比较.结果:河南汉族214例无关个体中检出4种等位基因,重复5～8次,基因差异度0.5013.腐败肌肉及角化组织用DTT联合Chelex-100法和PCR缓冲液法均分型成功.结论:mtDNA(CA)n重复子多态性在河南汉族人群具有一定的法医学应用价值,尤其对于腐败肌肉及角化组织.     

用Chelex-100方法提取肋软骨DNA105例

目的研究尸体所处环境、死亡时间的条件下,用Chelex-100方法提取肋软骨DNA。方法对案件中不同条件腐败尸体，采用Chelex-100方法提取肋软骨DNA，进行PCR扩增及STR分型。结果提取肋软骨均可获得STR分型。结论肋软骨是法医检案中的一类具有实用价值的检材。     

PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法

目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法.方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100 NP40、Chelex-100 TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度.结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100 NP40 法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度.结论:Chelex-100 NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR.     

用差异消化二氧化硅膜纯化技术提取和纯化疑难混合斑DNA效果观察

目的:建立疑难混合斑DNA提取和纯化的新方法.方法:从日常司法鉴定检案中收集现场严重污染的疑难混合斑12份,分别采用差异消化Chelex-100法、差异消化酚/氯仿法和差异消化二氧化硅膜纯化法提取DNA,对D19S253、FGA和CSF1PO 3个STR基因座进行PCR-STR分型.结果:用差异消化Chelex-100法提取模板DNA,12份分型均失败;用差异消化酚/氯仿法提取模板DNA,5份分型成功,1份FGA和CSF1PO基因座分型成功,2份CSF1PO基因座分型成功,4份分型失败;差异消化二氧化硅膜纯化法提取的模板DNA,12份分型均成功.结论:差异消化二氧化硅膜纯化法提取DNA 可有效用于疑难混合斑的个体识别.     

高温处置后人体组织DNA提取研究

目的：研究高温后人体组织DNA的提取方法对DNA-STR分型的影响。方法：用不同浓度TritonX-100处理高温后的人体组织样本,采用Chelex-100提取DNA的方法,经DNA-STR复合扩增,用ABI-3130序列分析仪电泳分离并运用Gene mapper ID V3.2基因分析软件对基因进行分型。结果：用1% TritonX-100+Chelex-100处理样本后提取DNA,再经QIA quick PCR纯化后可检出全部基因座且基因座能较平衡地扩增。结论：该方法简便易行,实验效果好,是法科学领域中一种值得推荐的方法,尤其适合检案。     

接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的 建立提取接触性生物检材DNA的新方法.方法 用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50 μL,用Identifiler Plus复合扩增,并对检验结果分析比较.结果 对于接触性生物检材,采用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用.结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验.     

Chelex-100法快速提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA

目的探索一种快速、高效提取革兰氏阳性杆菌基因组DNA的方法。方法采用Chelex-100法提取14株革兰氏阳性杆菌的基因组DNA,利用PCR技术扩增16SrRNA基因及4个单拷贝管家基因以评价提取核酸的质量。结果 Chelex-100法能够在20min内从革兰氏阳性杆菌中提取出基因组DNA,所提取的DNA可直接用于PCR扩增。所有菌株的16SrRNA基因及棒状乳杆菌的4个单拷贝管家基因均扩增成功,PCR产物经电泳检测目的条带清晰特异,与预期目的片段长度相符。结论 Chelex-100法具有快速、高效、安全、经济的特点,采用这种方法提取的革兰氏阳性杆菌的基因组DNA可直接作为PCR扩增的模板。     

Chelex-100法从颊粘膜拭子提取DNA 进行基因型分析的研究

目的：探讨采用Chelex-100法从颊粘膜拭子提取DNA这一方法的有效性和可靠性。方法：用棉签刮取130例个体口腔颊粘膜脱落细胞，采用Chelex-100法从颊粘膜拭子中提取DNA，采用SSP—PCR及PCR—PFL，P法对其进行检测，观察结果的有效性和可靠性。结果：所有样本中都获得成功。电泳结果显示，PCR扩增及酶切的靶带清晰，无非特异性杂带，扩增结果重复性好。结论：采用Chelex-100法从颊粘膜拭子提取DNA，方法稳定可靠，可以用于基因型检测。     

几种单头螨线粒体基因组提取方法的比较

目的:比较几种单头螨线粒体基因组提取方法。方法:参考文献的方法,分别用酚氯仿抽提法、Chelex-100抽提法和蛋白酶K法提取单头螨的总DNA,用COⅠ引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳,比较不同抽提方法的结果。结果:酚氯仿抽提法未能扩增出目的基因,而Chelex-100抽提法和蛋白酶K法均成功扩增出了目的基因。结论:Chelex-100抽提法和蛋白酶K法均可用于单头螨线粒体基因的提取,前者获得的模板量大于后者,但是提取效率小于后者。     

四种微量石蜡组织DNA提取方法的比较

目的:探讨从微量福尔马林固定石蜡包埋组织(formalinfixation and paraffin embeddedtissues,FFPET)中提取DNA的简单而高效的方法。方法:采用Chelex-100提取法、酚氯仿抽提法、单纯消化法、水煮法4种方法提取组织DNA;应用聚合酶链反应扩增100~500bp长度DNA片段,然后进行电泳分析,1年后重复PCR电泳分析。结果:小于200bp长度DNA片段扩增,Chelex-100提取法、单纯消化法阳性率分别为88.8%、78.8%,明显优于酚氯仿抽提法(15.0%)(P<0.01)及水煮法(21.3%)(P<0.01)。随着扩增长度的增加,PCR扩增效率逐渐降低,Chelex-100提取法PCR反应总阳性率为82.5%,单纯消化法为66.5%,水煮法为13.4%,酚氯仿抽提法为13.4%。1年后重复PCR总阳性率分别为80.1%、31.7%、2.5%、9.2%。结论:Chelex-100提取法方便简单,适用于微量石蜡组织DNA扩增分析;单纯消化法及水煮法在一定条件下适用于微量石蜡组织短片段DNA的扩增。     

有机酚法和Chelex-100法提取不同组织微量DNA效果比较

目的：比较有机酚法和Chelex-100法提取不同组织微量DNA的效果。方法：分别用有机酚法和chelex-100法从外周血、脐带血、绒毛、羊水、胎盘、血斑、口腔分泌物、发根毛囊中提取微量基因组DNA，进行D12S391、D5S818基因座扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析。结果：外周血、脐带血、绒毛、胎盘、口腔分泌物、发根毛囊均适于用Chelex-100法提取DNA，效果与有机酚法相似。结论：Chelex法是一种高效而快速的微量DNA提取方法，适用于产前诊断和法医鉴定微量组织的检测。     

醛糖还原酶基因(AC)n二核苷酸串联重复序列不同等位基因的筛选

研究了醛糖还原酶基因转录起始点上游 - 2 1kb处的微卫星DNA标记--- (AC)n二核苷酸串联重复序列 7种等位基因 (Z + 6,Z + 4,Z + 2 ,Z ,Z 2 ,Z 4和Z 6)的筛选方法。首先自人外周血提取基因组DNA后设计一对引物进行PCR扩增 ,获得长度为 13 2～ 14 4bp的DNA片段。选取等位基因为纯合子的个体DNA标本的PCR扩增产物 ,经纯化后直接测序以确定等位基因的种类 ;并以确定的等位基因为标准 ,用尿素 /甲酰胺聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显色法对各种等位基因进行筛选。该法操作简便、快速、准确度高 ,利于大量标本的筛选 ,也适用于其它二核苷酸重复序列等位基因的筛选。     

糖还原酶基因（AC）n二核苷酸串联重复序列不同等位基因的筛选

研究了醛糖还原酶基因转当起始点上游－２．１ｋｂ处的微卫星ＤＮＡ标记－（ＡＣ）ｎ二核苷酸串联重复序列７种等位基因（Ｚ＋６，Ｚ＋４，Ｚ＋２，Ｚ，Ｘ－２，Ｚ－４和 Ｚ－６）的筛选方法。首先自人外周血提取基因组ＤＮＡ后设计一对引物进行ＰＣＲ扩增，获得长度为１３２－１４４ｂｐ的ＤＮＡ片段。选取等位基因为纯合子的个体ＤＮＡ标本的ＰＣＲ扩增产物，经纯化后直接测序以确定等位基因的种类；并以确定的等位基因为标准，用     

线粒体单核苷酸多态性复合扩增体系在疑难检材中的法医学应用研究

目的应用线粒体单核苷酸多态性(SNPs)的复合PCR扩增体系应用于法医检验案件中的陈旧血痕、脱落细胞检材、腐败降解检材及骨组织等疑难检材,为解决法医学检验疑难检材的难题提供一种新的方法。方法用IdentifilerTM试剂盒进行目前使用的STR分型及已建立的18个线粒体SNPs(16个位于编码区和2个控制区)位点复合扩增毛细管电泳荧光检测体系,并行对照检验案件中的陈旧血痕、脱落细胞、腐败肌肉、软骨以及牙齿、骨等各种疑难检材。结果对于上述检材,STR与线粒体SNPs的检验成功率均达到80%以上,线粒体SNPs高于STR。对于高度腐败的肌肉及软骨、骨骼检材,线粒体SNPs的检验成功率明显高于STR。结论所建立的线粒体SNPs复合PCR扩增体系在疑难检材检验中具有良好的应用前景。     

两种获取牙龈卟啉单胞菌基因组DNA方法比较

目的：筛选方便、快捷、有效地获取细菌基因组DNA的方法。方法：采用UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒法和Chelex-100法获取患者龈下菌斑DNA，比较作为PCR扩增模板检测牙龈卟啉单胞菌感染位点的检出率差异，并对2种方法进行比较。结果：试剂盒法与Chelex-100法对牙龈卟啉单胞菌的感染位点检出率差异无统计学意义，但Chelex-100法提取DNA更简单、快速。结论：Chelex-100法抽提细菌基因组DNA适用于对大样本牙周炎患者作细菌学检测分析。     

Rapid preparation of animal mitochondrial DNA by nuclei/cytoplasm isolation

The mitochondrial DNA (mtDNA) possessesseveral special features, which have made it the subjectof intensive study in recent years. It is a comparativelysmall, circular DNA molecule located within the cytoplasmic compaltment away from the great majority Ofcellular DNA, which is localized within the nucleus.mtDNA is maternally inherited and exhibits a highmutation rate. Because of its special genetics, mtDNAmolecules of animal cells are used extensively in studies Of evolutionary genetic…     

口腔粘膜脱落细胞DNA多态性分型检测在法医学应用的初步研究

目的研究各类口腔粘膜脱落细胞的微量生物性捡材中DNA提取和检验的方法,初步论证牙刷等载体作为法医物证检材的可能性。方法分别采用Chelex-100法、有机萃取法、联合抽提法三种方法提取口腔粘膜脱落细胞载体的样本DNA,进行CTTv四个STR位点单步复合扩增和两步级联扩增两种STR-PCR方式的扩增及各位点的等位基因检测。结果实验样本中,除了1例牙刷和2例牙签未能STR位点的正确分型外,其余各无关个体口腔粘膜脱落细胞载体均可以得到与标准血痕阳性相同的STR基因型。结论根据检材的PCR相对模板DNA量,选择适宜的DNA多态性检测分型方法,各类常见的含有口腔粘膜脱落细胞检材可以进行DNA检测分型,这类检材在法医检案中具有应用价值。