反义PKCα对CNE-2Z细胞周期的影响

目的:观察蛋白激酶Cα亚型(PKCα)的反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞生长、细胞周期和cyclinE表达的影响。方法:脂质体法转染反义PKCα,MTT法测细胞生长,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学及点印迹法检测cyclinE表达。结果:①随着反义PKCα的浓度增加,细胞生长指数逐渐降低(P＜0.01)。②反义PKCα使细胞G₁期百分比增高(P＜0.05)。③反义PKCα使细胞cyclinE的表达减弱,扫描定量反义PKCα组为对照组的66.5％±18.4％(P＜0.05)。结论:反义PKCα可通过抑制cyclinE表达、阻滞细胞于G₁期从而抑制CNE-2Z的生长。     

非小细胞肺癌中P53表达的不同亚细胞定位及功能意义的研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中不同亚细胞定位P53蛋白及其可能的功能意义。方法:以免疫组化及流式细胞分析术研究了43例NSCLC病人肿瘤组织P53表达定位与G₁/S检查点功能及DNA含量的关系。结果:发现P53蛋白不同的亚细胞定位与病人的病程密切相关,同时,在P53核表达定位的病人肿瘤组织细胞S期比例明显增多而G₀－G₁期比例明显较胞浆表达病人减少,G₂－M期比例及DNA指数在两组间无明显差异。结论:不同亚细胞定 位的P53蛋白具有不同的G₁/S检查点调节功能,胞浆P53蛋白仍有部分G₁/S检查点调控功能,因此出现较少的SPF及较多的G₀－G₁细胞,代表了恶性度较低的细胞亚群;而核表达阳性P53蛋白具有更差的G₁/S检查点调控功能,代表了恶性度较高的肿瘤亚群,这与肿瘤进展可能有关。     

人着色性干皮病D组基因对白细胞介素-6促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的: 探讨人着色性干皮病D组基因(XPD)对白细胞介素-6(IL-6)促进人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖作用的影响。方法: 用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空质粒pEGFP-N2稳定转染VSMCs,然后给予1×10⁵ U/L IL-6孵育48 h。实验分为6组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组;(4)IL-6组;(5)IL-6 + pEGFP-N2组;(6)IL-6 + pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Bcl-2、Bax和野生型P53(wt-P53)表达量的变化。结果: 在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了细胞增殖活力(P<0.05),并能抑制IL-6促进VSMCs增殖的作用(P<0.05);流式细胞仪结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起了细胞G₀/G₁期增加(P<0.05)、S期减少(P<0.05)、凋亡率增加(P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMCs G₀/G₁期减少、S期增加、凋亡率降低的作用(P<0.01);RT-PCR和Western blotting检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高(P<0.05或P<0.01),同时Bcl-2表达降低,Bax和wt-P53表达增高(P<0.05或P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMCs的Bcl-2表达增高、Bax和wt-P53表达降低的作用(P<0.05或P<0.01)。结论: XPD能抑制VSMCs增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMCs增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。     

姜黄素衍生物B50对不同辐射抗拒的同源鼻咽癌细胞增殖及凋亡的作用

目的: 比较姜黄素衍生物(B50)抑制不同辐射抗拒的同源鼻咽癌细胞CNE-2与CNE-2R作用的差异。方法: 采用MTT法和克隆形成实验检测B50对细胞活力及增殖的影响,以流式细胞仪检测B50对细胞周期分布、细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。结果: B50可抑制CNE-2R细胞的活力 ,且呈时间浓度依赖性,其抑制作用明显优于对CNE-2细胞的作用 ,P<0.01; 同时B50抑制CNE-2R细胞增殖的作用明显优于对CNE-2的作用 vs (0.82±0.01)μmol/L],P<0.01;药物作用48 h后,B50使CNE-2R细胞G₂/M期的比例升高(7.1%→34.9%),明显优于CNE-2细胞 (12.4%→35.7%)(P<0.01);B50作用于CNE-2R细胞24 h后早期凋亡率升高(3.7%→19.5%),明显优于CNE-2细胞(4.4%→14.8%)(P<0.01);B50作用24 h后,CNE-2R细胞线粒体膜电位下降了(43.17±3.11)%,明显优于对CNE-2细胞的降低率 (P<0.01)。结论: 与CNE-2相比,B50能更显著地抑制辐射抗拒CNE-2R细胞的细胞活力及增殖能力,且更明显地调控细胞周期停滞于G₂/M期,诱导细胞凋亡及降低线粒体膜电位。这些结果提示B50具有逆转辐射抗拒的潜在价值。     

低氧-复氧对人鼻咽癌细胞增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响

目的: 研究细胞外微环境低氧-复氧对人鼻咽癌细胞(CNE-2Z)增殖、细胞周期、黏附和侵袭能力的影响。方法: 以混合气体(5% CO₂, 95% N₂, O₂<0.1%)置换法建立体外低氧培养模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期分布;同质黏附实验和细胞-基质黏附实验检测细胞黏附能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果: (1) 低氧24 h后抑制CNE-2Z细胞增殖(P<0.01),复氧后细胞快速增殖,在复氧第5 d A值与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(2) 低氧24 h后细胞阻滞于G₁期(P<0.01),复氧后G₁期阻滞得到快速解除,在复氧24 h细胞周期分布与常氧对照组相比无显著差异(P>0.05);(3)低氧24 h后细胞的同质黏附能力下降(P<0.01)而细胞-基质黏附能力无明显改变(P>0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01);复氧24 h细胞同质黏附能力恢复至常氧对照组水平(P>0.05),而细胞-基质黏附能力(P<0.01)和细胞侵袭能力较常氧对照组显著增加(P<0.01)。结论: 鼻咽癌细胞能耐受微环境低氧的不利影响;低氧环境下存活的鼻咽癌细胞产生的适应性变化赋予肿瘤更强的增殖和转移潜能,从而促进肿瘤细胞的恶性演进。     

HMBA对人舌癌Tca8113细胞增殖和KLF6及相关蛋白表达的影响

目的: 研究六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisacetamide, HMBA)对人舌癌Tca8113细胞增殖和Kruppel样因子6(Kruppel-like factor 6, KLF6)及相关蛋白表达的影响。方法: HMBA处理Tca8113细胞后,观察细胞生长和细胞形态;流式细胞术观察细胞周期;RT-PCR检测KLF6 mRNA的表达;免疫细胞化学技术检测KLF6、p53、cyclin D1及c-Jun的蛋白表达。结果: HMBA处理后贴壁细胞的数量随浓度增加明显减少;MTT实验显示其生长抑制作用呈浓度/时间-效应关系;镜下观察显示处理后Tca8113细胞出现向正常细胞形态逆转演变的特征。流式细胞术检测结果显示,对照组Tca8113细胞G₁期比例为(52.00±0.02)%,S期为(34.00±0.08)%,G期为(14.00±0.10)%;HMBA处理后,随作用时间增加,G₁期细胞显著增加,S期细胞显著减少,G₂期细胞也减少,细胞明显被阻滞于G₁期(P<0.05);出现凋亡峰。 RT-PCR结果显示HMBA处理后KLF6 mRNA的表达上调(P<0.05); 免疫组化检测显示HMBA处理后KLF6和p53蛋白表达上调(P<0.05),cyclin D1和c-Jun表达下调(P<0.05)。结论: HMBA对Tca8113细胞增殖具有抑制作用;其作用机制一方面可能通过p53上调p21的表达和活性,另一方面可能通过上调表达的KLF6解除c-Jun对p21的抑制作用,下调cyclin D1,抑制CDK4/6和cyclin D1复合物活性,将Tca8113细胞阻滞于G₀/G₁期,诱导Tca8113细胞向正常细胞分化,恢复正常细胞的表型和功能,并促进细胞凋亡。     

逆转录病毒载体介导的反义c-myc抗白血病作用的研究

目的：研究c-myc基因在L6565小鼠白血病发生中的作用以及抑制其表达所起的治疗作用。方法：用逆转录病毒载体pGNC构建一个含有小鼠反义c-myc基因的逆转录病毒表达系统pGNCas。用磷酸钙沉淀法将pGNCas导入包装细胞PA317,筛选获得病毒生产细胞。用pGNCas病毒感染L6565白血病克隆细胞,筛选后,获得抗G418阳性克隆细胞L6565as。PCR方法检测反义c-myc序列是否稳定整合入L6565as细胞中。最后从细胞生长、形态、周期、软琼脂集落形成能力以及c-myc基因表达方面观察其恶性和表型的改变。结果：L6565as细胞形态变圆,大小较一致。生长曲线显示:L6565as细胞生长被抑制;流式细胞仪检测细胞周期：L6565as阻滞于G₀/G₁期,S期细胞减少;软琼脂集落形成试验发现L6565as细胞形成克隆数明显减少。免疫组化检测：L6565as细胞c-myc蛋白表达呈弱阳性,而对照组细胞呈强阳性。结论：c-myc基因在L6565小鼠白血病的发生中起着重要的作用;抑制c-myc的表达,可部分逆转L6565白血病的恶性表型和恶性行为。     

人Gax基因转染对血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的: 探讨腺病毒介导人生长终止特异性同源异型盒基因(hGax基因)转染对血清刺激后兔血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和细胞周期的影响,为静脉桥再狭窄基因治疗新策略提供帮助。方法: 构建含 hGax 的重组腺病毒载体并感染兔VSMCs;应用RT-PCR、免疫荧光染色检测hGax mRNA和蛋白的表达; MTT法观察hGax基因过表达对血清刺激后VSMCs增殖的影响;划痕法测定细胞迁移;流式分析细胞周期。结果: 成功构建Ad5-hGax重组腺病毒载体。转染48 h后 RT-PCR和免疫荧光染色法示转染 hGax 基因的VSMCs中存在目的基因特异性片段(174 bp)和目的蛋白表达;MTT法示hGax蛋白显著抑制血清刺激后VSMCs增殖;划痕法示hGax基因过表达明显抑制血清刺激后VSMCs迁移;流式结果示血清刺激72 h后,Ad5-hGax转染组G₀/G₁期细胞比例明显增加,G₂/M+S期细胞减少。结论: 含hGax的重组腺病毒载体构建成功,并在细胞中过表达。hGax基因过表达能有效抑制血清刺激后兔VSMCs的增殖和迁移,并使细胞停滞于G₀/G₁期。     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞P53、COX-2和VEGF表达的影响

目的: 研究口虾蛄提取物(EOS)对人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)中P53、环氧化酶2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及意义。方法: 不同浓度EOS(0 mg/L、125 mg/L、250 mg/L和500 mg/L)作用CNE-2Z细胞24 h后,Western blotting检测P53蛋白表达,免疫细胞化学法及RT-PCR法分别检测COX-2 、VEGF蛋白和mRNA的表达。结果: CNE-2Z细胞中P53蛋白、COX-2和VEGF蛋白和mRNA表达均随EOS作用浓度增高而逐渐降低,呈量效关系(P<0.01);且COX-2 和VEGF表达量呈正相关(P<0.05),COX-2 和P53表达量亦呈正相关(P<0.05)。结论: EOS可能通过抑制CNE-2Z细胞中P53蛋白的表达,干扰COX-2和VEGF的表达而发挥其抗肿瘤作用的。     

食药用真菌粗提物促血管内皮活性的筛选及对高糖损伤内皮的保护作用

目的: 观察古尼虫草、花脸香菇、冬虫夏草和巴西革耳4种食药用真菌粗提物对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖活性的作用,筛选具有保护内皮细胞活性的有效菌菇并探讨其对HUVECs细胞周期及活性氧簇(ROS)水平的影响。方法: 体外培养HUVECs,分为对照组 (M199正常培养液)、高糖组(33 mmol/L高糖培养液)、4种食药用真菌(古尼虫草、花脸香菇、冬虫夏草和巴西革耳)粗提物干预组 (每种粗提物以终浓度12.5、25、50、100 mg/L+高糖培养液),以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期及细胞内ROS水平。结果: 与对照组相比,高糖组HUVECs 的MTT吸光度值显著下降,G₀/G₁期的细胞百分率明显增加,S+G₂/M期的细胞百分率明显下降,且ROS水平亦增加(均P<0.05)。与高糖组相比,花脸香菇和巴西革耳粗提物干预降低了细胞吸光度值(P<0.05),且抑制效应呈剂量依赖性增强,而古尼虫草粗提物对其无影响。冬虫夏草粗提物(12.5~50 mg/L)显著提高了HUVECs的增殖活性(P<0,05),减少了G₀/G₁期细胞百分率,提高了S+G₂/M期的细胞百分率(P<0.05),降低了细胞内ROS水平(均P<0.05),且效应呈剂量依赖性增强。结论: 4种食药用真菌粗提物经MTT比色法筛选后,仅冬虫夏草粗提物对高糖诱导的HUVECs有显著保护作用,其可能通过促进内皮细胞增殖、进入细胞周期及降低细胞内活性氧水平途径。     

Niflumic acid exhibits anti-tumor activity in nasopharyngeal carcinoma cells through affecting the expression of ERK1/2 and the activity of MMP2 and MMP9

Niflumic acid (NFA) was known to inhibit cell proliferation or migration in several types of cancer. However, the function of NFA in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells was not clarified. The proliferation of NPC cell line CNE-2Z cells with NFA treatment was detected using the cell counting kit-8 method and transwell assay was employed to assess the effect of NFA on the CNE-2Z cell migration and invasion. The activity of MMP2 and MMP9 was detected by Gelatin Zymography. Cell cycle distribution and apoptosis were detected using flow cytometry. In vitro pull-down assay, western blot, and computational technique were applied to investigate the NFA regulating signaling pathway. Our results indicated that the growth capacity and colony formation potential of CNE-2Z cells in soft agar were significantly suppressed by treatment with NFA. NFA inhibited the proliferation of CNE-2Z cells in a concentration and time-dependent manner. NFA exerted an S phase arrest on the CNE-2Z cells in a concentration-dependent manner, while promoting apoptosis in a dose-dependent manner. Migration and invasion potential of CNE-2Z cells were decreased by NFA treatment in vitro. In vitro pull-down assay and molecular modeling indicated that NFA directly bound with early respond kinase 1 (ERK1). Finally, the anti-tumor effect of NFA was suggested to be mediated by inhibiting early respond kinases (ERK) expression and the MMP2 and MMP9 activities. NFA has proliferation-inhibiting, invasion-suppressing, cell cycle-blocking and apoptosis-promoting effects on CNE-2Z cells through regulation of ERK/MAPK and our results indicates that NFA may serve as a candidate of anticancer drug for NPC.     

水飞蓟宾对非酒精性脂肪性肝病线粒体膜流动性的影响

目的:探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型中肝脏线粒体膜流动性的改变以及观察水飞蓟宾对NAFLD的防治作用。方法:采用高脂饮食建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,观察大鼠甘油三酸酯(TG)、胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肝组织HE染色、脂肪细胞染色的变化,以及肝脏线粒体膜的流动性的改变,并以水飞蓟宾抗氧化治疗,与已知有疗效的罗格列酮对比,观察其对上述指标的影响。结果:模型组血清ALT、AST、TG、TC显著升高,与空白对照组比较差异显著(P0.01)。HE染色提示肝组织呈弥散性脂质蓄积,模型组大鼠肝细胞线粒体微粘度明显高于空白对照组(P0.01)。罗格列酮治疗组TG、AST均得到明显改善(P0.05或P0.01);TC、ALT与模型组比较差异无显著(P0.05)。水飞蓟宾治疗后,TC、TG、ALT以及AST均得到明显改善(均P0.01)。两治疗组大鼠肝MDA含量、肝细胞线粒体微粘度均较模型对照组下降(P0.01),且水飞蓟宾的效果比罗格列酮显著,差异显著(P0.05)。结论:高脂饮食可诱导大鼠NAFLD发生,水飞蓟宾可以有效地防治NAFLD。稳定并维持适当的肝脏线粒体膜流动性、减轻肝脏脂质过氧化可能是水飞蓟宾肝脏保护功能的作用途径。     

结直肠癌原发灶、门静脉血和肝转移灶K-ras基因突变的研究

目的:观察结直肠癌患者门静脉血液、原发肿瘤组织及相应肝转移灶K-ras基因突变情况,分析三者的一致性,探讨结直肠癌患者门静脉血K-ras基因突变与肝转移关系。方法:实时荧光定量PCR技术和基因测序技术检测59例结直肠癌患者门静脉血液、原发肿瘤组织及15例肝转移灶K-ras基因突变,结合其临床资料分析。结果:59例结直肠癌组织中20例(33.9%)发现K-ras基因突变,18例(30.5%)结直肠癌患者的门静脉血中也发现K-ras基因突变,15例肝转移灶中8例(53.3%)发现K-ras基因突变,与原发癌组织的基因突变率差异不明显(P0.05)。18例门静脉血存在K-ras基因突变者,其相应的肿瘤组织中均发现K-ras突变。结直肠癌组织中无K-ras基因突变者,患者门静脉血未发现基因突变。8例肝转移灶发现K-ras基因突变者门静脉血亦均有K-ras基因突变,7例肝转移灶无K-ras突变者门静脉血也无K-ras突变。原发肿瘤组织、相应门静脉血和5例同时性、2例异时性肝转移灶的K-ras基因突变类型基本一致(即K-ras基因12密码子GGT突变为GAT或GTT),1例异时性肝转移灶K-ras基因突变类型为13密码子GGC突变为GAC。原发癌组织与门静脉血K-ras基因突变一致率为96.6%(57/59),肝转移灶与门静脉血K-ras基因突变情况基本一致,但突变类型有不同。结论:结直肠癌的原发灶、门静脉血及肝转移灶的K-ras基因突变较为一致,原发癌组织和门静脉血均有K-ras基因的突变,预示着肿瘤可能通过血行转移至肝脏。     

抑制Treg联合瘤内转染Ad.GM-CSF增强阿霉素治疗肝癌效果的实验研究

目的:探讨抑制调节性T细胞(Treg)联合瘤内转染Ad.GM-CSF增强阿霉素治疗肝癌效果的可行性,并对其机制进行探讨。方法:建立C57BL/6J小鼠皮下肝癌模型,待肿瘤长至100-150mm3时随机分为6组,每组12只:(1)对照组(PBS);(2)环磷酰胺组(CTX);(3)阿霉素组(DOX);(4)Ad.GM-CSF组;(5)CTX+DOX组;(6)CTX+DOX+Ad.GM-CSF组。末次治疗后第5d每组处死其中4只小鼠,取脾脏测定CTL活性;取肿瘤组织行病理检查;每组另外的8只小鼠用于观察皮下肿瘤生长和小鼠生存期。结果:CTX可以显著增强DOX对肿瘤生长的抑制作用(P0.05),延长小鼠生存期[(62.13±4.21)dvs(79.88±9.00)d,P0.05],而联合应用Ad.GM-CSF可显著增强该效果[(79.88±9.00)dvs(106.13±5.23)d,P0.01]。同其它组相比,CTX+DOX+Ad.GM-CSF组小鼠瘤体内可见大量肿瘤细胞坏死,CD8+T细胞浸润显著增加,而小鼠脾脏CTL杀瘤活性显著增强(P0.05)。结论:以阿霉素为治疗基础的化疗联合抑制Treg并瘤内转染Ad.GM-CSF的免疫治疗具有协同抗肝癌作用,免疫化疗治疗晚期肝癌具有一定的应用前景。     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过调控P53/miR-34a抑制鼻咽癌细胞的增殖

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖的影响,并以微小RNA-34a(miR-34a)为靶点探讨其作用机制。方法:不同浓度的EGCG处理CNE-2Z细胞,CCK-8法、Ed U染色法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期分布的改变;Western blot检测P53和Notch1蛋白水平的变化;real-time PCR检测miR-34a和Notch1 mRNA的表达。结果:EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖受到明显抑制,克隆形成能力降低,细胞周期阻滞于G0/G1期,呈剂量依赖关系;随着EGCG浓度增高,P53和miR-34a的表达水平明显上调,而其下游Notch1 mRNA和蛋白的表达水平则明显下降。结论:EGCG可能通过调控P53/miR-34a/Notch1通路诱导细胞周期阻滞,抑制鼻咽癌细胞增殖。     

败血症休克肝细胞线粒体损伤机制的实验研究

目的:探讨败血症休克肝细胞线粒体损伤的机制。方法:30只SD大鼠随机分为3组,假手术组,12h手术组,16h手术组。采用盲肠结扎穿孔术(cecalligationandpuncture)制作败血症休克模型,比较手术前后肝细胞线粒体呼吸功能和氧化磷酸化功能的变化及线粒体膜ATP酶的活性改变与大鼠死亡率和血压变化的关系。结果:12h手术组平均动脉压(9.54±1.26)kPa明显低于假手术组(14.58±1.32)kPa(P<0.05),死亡率明显高于假手术组(P<0.05),12h手术组肝细胞线粒体Ⅲ态(1.28±0.25)、P/O比值(1.67±0.34)、呼吸控制率(1.27±0.25)、线粒体膜Ca²⁺-ATP酶(58.00±2.43)、Na⁺-K⁺-ATP酶(40.80±3.45)、Mg²⁺-ATP酶(78.30±4.16)、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶(2.70±2.25)活性与假手术组相比较,具有显著差异(P<0.05)。术后16h组更低于12h组,与大鼠死亡率增加呈显著正相关。结论:肝细胞线粒体摄氧功能和氧化磷酸化功能减弱,膜流动性降低,能量代谢功能障碍,线粒体内钙镁平衡紊乱是败血症休克肝细胞线粒体损伤的主要机制。     

非兴奋性电刺激对正常及心肌梗死兔心功能的影响及其作用的局部性

目的:观察于绝对不应期发放电刺激对正常和心肌梗死(MI)兔在体心脏心功能的影响及其对心肌作用的局部性。方法:64只家兔随机分为正常组和MI组两大组,每组又分为前壁和后壁两组。复制MI模型,4周后每组开胸,窦性心律下,分别于前壁组和后壁组的左心室前壁和后壁,发放绝对不应期方波电刺激(CCM)。观察左心室收缩压(LVSP)左心室舒张末压(LVEDP)及其微分(±dp/dt_max)的变化。结果:正常组前壁和后壁CCM刺激时LVSP及+dp/dt_max均显著大于刺激前(P<0.05),LVEDP低于、-dp/dt_max负值大于刺激前(P<0.05),且不同部位的CCM刺激对心功能的影响不同,左心室前壁的上述作用大于后壁(P<0.05);MI组前壁和后壁CCM刺激时LVSP及+dp/dt_max亦大于刺激前(P<0.05),LVEDP低于、-dp/dt_max负值亦大于刺激前(P<0.05),但前后壁两组之间无显著差别(P＞0.05)。结论:于绝对不应期发放电刺激能明显增强正常和MI后心肌的收缩和舒张功能,CCM刺激对心肌的作用是局部性的。     

体外定量测定细胞迁移方法的建立及应用

目的 :在体外细胞划痕损伤模型中建立定量测定ECV - 30 4细胞迁移的方法。方法 :改良了体外细胞划痕损伤模型。用显微电视图像定量处理系统定量测定细胞迁移。在体外细胞划痕损伤模型中观察了肝素 (hep arin)和凝血酶敏感蛋白 - 1(thrombospondin - 1)对ECV - 30 4迁移的影响。结果 :12 0次划痕模型中划痕损伤的平均宽为 (0 95± 0 0 8)mm ,长 (5 1 2 0± 3 4 0 )mm ,迁移细胞可在 4 8h - 72h内完全覆盖划痕区。 2 4h左右细胞迁移达高峰。在体外损伤划痕损伤模型中与对照组比 ,肝素对ECV - 30 4迁移起明显促进作用 ,TSP - 1起明显抑制作用。结论 :建立了一种在体外细胞划痕损伤模型中进行细胞迁移的定量测定方法。用此方法证明 ,肝素能促进ECV - 30 4细胞迁移 ,TSP - 1抑制迁移。     

重组色素上皮衍生因子对人视网膜微血管内皮细胞迁移及凋亡的影响

目的: 构建rAAV2-PEDF腺相关病毒,研究色素上皮衍生因子(PEDF)基因高表达对人视网膜微血管内皮细胞的作用。方法: 将PEDF基因克隆、重组到腺相关病毒载体pSNAV,得到的pSNAV-PEDF后转染BHK细胞,用含G418的培养基进行筛选,得到稳定转染pSNAV-PEDF的生产细胞系,用重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/△UL2感染细胞进行病毒包装,纯化后得到高滴度rAAV2-PEDF 病毒颗粒。按照10⁵v.g./cell的剂量进行rAAV2-PEDF病毒转染,分别设空白和阴性对照,激光共聚焦显微镜下观察GFP阳性细胞,Western blotting检测PEDF蛋白表达。Boyden小室法观察细胞迁移情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果: 通过PCR、酶切及基因测序的方法,证实rAAV2-PEDF构建成功。转染病毒48 h后,激光共聚焦显微镜下观察可见GFP阳性细胞,Western blotting检测,实验组PEDF表达明显强于其它组。rAAV2-PEDF干预正常氧条件下人视网膜微血管内皮细胞,正常对照组凋亡细胞比例为2.10%±0.53%,rAAV2-GFP组为3.40%±0.62%,rAAV2-PEDF组为1.60%±0.47%,各组间无显著差异(P＞0.05)。rAAV2-PEDF干预低氧条件下人视网膜微血管内皮细胞,单纯CoCl₂组凋亡细胞比例为4.00%±0.55%,CoCl₂+rAAV2-GFP组为6.10%±0.71%,CoCl₂+rAAV2-PEDF组为40.00%±2.10%。rAAV2-PEDF组与其它2组相比,有显著差异(P<0.05)。细胞迁移计数显示,正常对照组为33.0±2.7,rAAV2-GFP组为35.0±3.6,rAAV2-PEDF组为12.0±2.1,rAAV2-PEDF组与其它2组相比,有显著差异(P<0.05)。结论: 成功构建了rAAV2-PEDF,转染人视网膜血管内皮细胞后PEDF可稳定表达。PEDF高表达可显著抑制人视网膜微血管内皮细胞迁移并可在低氧条件下诱导其凋亡。     

急性坏死性胰腺炎对心室肌细胞钠和钙离子电流的影响

目的:研究急性坏死性胰腺炎(ANP)后心室肌细胞钠通道电流(I_Na)、L-钙通道电流(I_Ca-L)活性的变化。方法:采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射建立鼠的ANP动物模型,应用膜片钳全细胞记录方法,观察ANP后1 h心肌细胞I_Na、I_Ca-L的变化。结果:I_Na和I_Ca-L电流-电压关系曲线在ANP组较对照组明显上移。ANP组I_Na电流密度峰值(-30 mV)为(12.45±2.26)pA／pF(n=16),明显低于假手术组(25.32±3.31)pA/pF(n=14),P<0.01;ANP组I_Ca-L电流密度峰值(+10 mV)为(3.63±0.65)pA／pF(n=16),显著低于假手术组(5.46±1.03)pA／pF(n=12),P<0.01。结论:ANP可导致心室肌细胞I_Na和I_Ca-L下降,引起心肌传导速度下降和动作电位时程缩短,可能是导致ANP后出现心律失常的原因。