南海,渤海鱼类简单异尖线虫幼虫感染的调查

目的：为了解我国南海、渤海各种鱼类中人体异尖线虫病的主要致病原——简单异尖线虫幼虫的感染状况而进行本调查。方法：取南海８８个鱼种３８９尾、渤海２０个鱼种４７１尾，分别测定体长及体重后解剖鱼体进行检查。检获的虫体清洁后用７０％酒精固定，用甘油酒精透明，在显微镜下鉴定。结果：南海部分检获幼虫的鱼种占被检鱼种数的６０．２％（５３／８８），阳性鱼种检得幼虫者占阳性鱼种的５３．６％（１４２／２６５），占所检鱼总尾数的３６．５％（１４２／３８９）；渤海部分检出幼虫的１１个鱼种占所检鱼种的５５％（１１／２０），阳性鱼种总检鱼数３７８尾中，检得幼虫者占阳性鱼种５０．５％（１９１／３７８），占所检鱼总尾数的４０．５％（１９１／４７１）。结论：两个海域中鱼类简单异尖线虫幼虫的感染率都相当高，因此凡生食本文所列的阳性海鱼时，不应疏忽对异尖线虫病的预防。以上在流行病学和食品卫生方面均有重要意义。     

2021年烟台市近海海鱼异尖线虫感染率及居民异尖线虫病防治知识知晓率调查

目的 了解2021年山东省烟台市近海海鱼异尖线虫感染率和当地居民异尖线虫病相关知识知晓情况,为制定异尖线虫病防控措施提供参考依据。方法 2021年11月,于山东省烟台市顺鑫港口购买海鱼,检测海鱼异尖线虫感染情况,并分析不同鱼种、不同部位异尖线虫感染率。采用Spearman秩相关分析海鱼体长和体质量与异尖线虫感染度间的相关性,对当地居民饮食习惯和异尖线虫病防治知识知晓率进行问卷调查。结果 共解剖海鱼20种201尾,其中11种77尾检出异尖线虫,鱼种异尖线虫感染检出率为55.00%(11/20)、海鱼总感染率为38.31%(77/201);异尖线虫感染阳性海鱼中累计检出异尖线虫3 468条,平均感染度为45.04条/尾。Spearman秩相关结果显示,鮟鱇鱼体长(r_s=0.74,P <0.05)和体质量(r_s=0.79,P <0.01)与异尖线虫感染度呈正相关,比目鱼体长与感染度呈正相关(r_s=0.68,P <0.05),其他种类海鱼体长、体质量与异尖线虫感染度均无相关性。问卷调查结果显示,53.38%男性...     

荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体

目的运用荧光定量PCR法检测异尖线虫类病原体。方法于鱼类内脏中检获6种异尖线虫类幼虫:抹香鲸异尖线虫、简单异尖线虫、内弯对盲囊线虫、带鱼针蛔线虫、灰海鳗对盲囊线虫和台湾海峡鱼类中一优势种对盲囊线虫。提取各虫体DNA,PCR扩增ITS-2序列,测序并进行数据库比对。依据测序结果设计特异引物,常规PCR检验引物特异性。将ITS-2序列扩增产物回收、纯化后经T克隆转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性和重复性试验。结果构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数均在0.998以上。重复性实验中,6种虫体对应的变异系数(cv)最小值为0.18%,最大值为2.80%,试验间平均cv最小值为0.55%,最大值为1.94%,无非特异性扩增,溶解曲线的特异性和重复性良好。灵敏度实验中,可检出的最低模板浓度为1×102拷贝/μl,比常规PCR灵敏度高100倍。结论初步建立了SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体的方法 。     

上海市市售海鱼异尖线虫幼虫感染情况调查

为了解上海市市售海鱼异尖线虫幼虫感染情况,2022年在上海市农贸市场、超市和海鲜市场中采集自东海海域捕捞的新鲜海鱼,解剖后分别在内脏和鱼肉中查找疑似异尖线虫的虫体,分别置于光学显微镜和扫描电子显微镜下进行观察,分析海鱼的异尖线虫感染情况。共采集海鱼16种338尾,从6种116尾体内检出异尖线虫1 065条,总感染率为34.3%(116/338),平均感染度为9.2条/尾。其中鮟鱇鱼的感染率最高（11/12）,小黄鱼的感染度最高（13.0条/尾）。海鱼异尖线虫感染率从春季到冬季逐渐升高,冬季的感染率和感染度最高,分别为51.1%(46/90)和12.3条/尾。异尖线虫寄生的主要部位是海鱼的肠道和腹腔,分别占检出异尖线虫总数的54.6%(582/1 065)和40.7%(433/1 065)。本研究结果提示,上海市市售海鱼存在异尖线虫幼虫感染,感染率较高的鱼种有鮟鱇鱼、小黄鱼等常见食用海鱼。     

异尖属线虫研究进展

本文主要从异尖属线虫的分类学、地理分布、以及异类线虫病3个方面论述了国内外异尖属线虫的研究进展，希望能够为防范异尖线虫病奠定基础。     

摄食海鱼与异尖线虫病

异尖线虫病是误吃了海鱼体内的异尖线虫科（Anisakidae）某些种的Ⅲ期幼虫而引起的急腹症。由于虫体钻入消化道及其他组织器官造成机械性损伤，或因重复感染引起过敏性反应［1，2］，患者腹痛剧烈。本病易与其他原因的急腹症相混淆。在日本，每年发生病例数百以至千余, 1989 年达2 000 余例[3 ]。至1990 年止, 日本已报道16 090 例, 其他国家和地区共559 例[4 ]。本科幼虫以多种海鱼为第二中间宿主, 分布于全球各大水域, 某些鱼种感染率高达90% - 100%; 感染度视鱼种不同, 少则十余条, 多则百余条。作者在法国曾从一条欧洲无须鳕(M erluccis m erluccius) 鱼肉内找出954 条[5 ]。因此, 80年代中期此病在欧洲曾引起一时恐慌, 使鱼市销量下降, 甚至引起进出口商业纠纷。待了解其病原及致病条件后, 才有了正确的对待。我国对此病报道较少, 缺乏防治经验。为此, 作者特将有关报道及本人所做的研究予以综述。     

深圳市市售海鱼异尖线虫幼虫感染调查

异尖线虫幼虫的致病性及其海鱼的感染率、进食海鱼与异尖线虫病的研究已日益引起关注^[1～3]。深圳市海产品丰富,居民有生食或食未熟透鱼类的习俗。为了解当地市场所售海鱼的异尖线虫感染情况,为评估人群感染的危险性提供依据。我们于1999年1～12月进行调查,现将结果报告如下。     

近海鱼类异尖科幼线虫形态分类学研究——Ⅱ.北部湾部分

在对从北部湾捕获海鱼的异尖科(Anisakidae)幼线虫感染状况进行初步调查的基础上,作了形态分类学研究。共检海鱼29种,134只标本,其中简单异尖线虫3期幼虫的感染率达30.6％,且大部分阳性鱼种的感染率在50％以上。此外尚检获宫脂线虫(Hysterothylacium)属3期幼虫2型:C_1型和C_5型,其中C_1型为初次报告。另检出伪新地蛔线虫(Pseudoterranova)属幼虫1型。     

16s rDNA序列分析在腹泻粪便标本菌群分析应用

目的应用16s rDNA序列分析方法,对临床实验室没有分离到已知病原菌的腹泻病人粪便标本进行菌群分析,为腹泻病人的病原学诊断提供线索。方法根据细菌16s rDNA保守区序列设计通用引物,以腹泻病人粪便标本中的总DNA为模板,PCR扩增16s rDNA片段。将获得的片段克隆入T载体进行测序,与数据库中发表序列的进行比对,判断标本中细菌的种类和比例;PCR扩增常见的五类致病性大肠杆菌的特征基因应用于排除诊断。结果在3份粪便标本中,大肠杆菌为优势菌群(所占比例分别为84%、65%和81%);其他种群细菌为拟杆菌属(Bacteroides)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)和普雷沃氏菌属(Prevotella)等;实验室常规培养方法没有分离到常见的五类致病性大肠杆菌;PCR扩增没有发现常见的五类致病性大肠杆菌的特征基因。结论引起三例病人腹泻的病原菌可能是一种新的大肠杆菌;16s rDNA序列分析方法可应用于腹泻粪便标本菌群分析,为常规的病原培养方法提供补充,对疾病的诊断提供线索。     

广西两地旋毛虫分离株5S rDNA序列分析

目的 应用5S rDNA序列分析，鉴定广西德保、南丹两地旋毛虫分离株。 方法 PCR扩增2个分离株5S rDNA片段，并对扩增产物进行测序；用相关软件分析序列的同源性、遗传距离，同时构建系统发生树，并与GenBank中旋毛虫相应基因序列进行比较。 结果 广西德保、南丹2地旋毛虫分离株和GenBank中Trichinella spiralis的5S rDNA碱基序列长度相同，为695 bp；变异位点4个，与T. spiralis的相似度分别为99.0%和99.1%，与GenBank中其他相应基因的相似度低于94.2%，2个分离株之间的相似度为98.8%。2个分离株之间及与T. spiralis间的遗传距离最小，均为0.014；而与其他旋毛虫的遗传距离均大于0.056；用邻接法（N-J法）和最大简约法（MP法）构建的2个系统发生树中，2个分离株与T.spiralis位于同一分支，自引导值分别为96及99。 结论 初步鉴定广西德保和南丹旋毛虫分离株均为T.spiralis。     

16S rDNA序列分析方法研究儿童口内细菌菌群变化

目的分析龋齿儿童和无龋健康儿童口内微生物群落的异同,找出与儿童龋齿发病相关的菌群,及无龋齿儿童的优势菌群。方法提取7例龋齿及7例无龋齿儿童唾液样本中的总DNA,利用16SrDNA序列分析技术分析克隆群中细菌种类和比例。结果 1)嗜血菌属、奈瑟菌属及链球菌属在两组检出率均高;2)龋齿组检出32个属类,78个种型;无龋齿组检出34个属类,82个种型;龋齿和无龋齿均检出29个属类和58个种型;3)嗜血菌属、梭形杆菌属的检出率在无龋组高于龋齿组,罗氏菌属、孪生球菌属、纤毛菌属及巨型球菌属在龋齿组的检出率高于无龋组,其差异均具有统计学意义(P0.05);4)莫拉菌属、沃氏葡萄球菌及棒状杆菌属只在龋齿组检出,坦纳菌属、互氧菌属、梭目菌菌属、桑肠杆菌及鞘氨醇单胞菌属只在无龋组检出。结论奈瑟菌属、链球菌属及嗜血菌属为无龋儿童的优势菌属,龋齿组与无龋齿组相比,口内微生物多样性减少且差异大,与龋齿发生相关的菌群比例增高。     

咽部标本16s rDNA序列分析方法的建立及应用

目的建立一种非培养的、以16s rDNA序列分析为基础的咽喉标本细菌筛查技术。方法提取标本中的总DNA,针对细菌16s rDNA保守区设计通用引物进行PCR扩增、克隆、测序,将获得的16s rDNA序列与数据库中的发表序列进行比对,分析克隆群中细菌的种类和比例。结果16s rDNA序列分析方法,能够对正常成人的咽部标本进行分析;在咽部标本中发现了不动杆菌、真杆菌、流感嗜血杆菌等;在这些细菌中,既有能够常规分离培养的细菌,也有常规难以分离培养的细菌。结论成功建立了咽部标本的16s rDNA序列分析方法;通过分析正常成人咽部标本,得到正常人体咽部菌群的种类和比例,发现了多种不能常规分离培养的细菌。     

棘阿米巴土壤分离株CB/S1内共生细菌的16S rDNA序列分析

用地衣红-卡红染色进行共生菌的形态观察,鉴定棘阿米巴CB/S1内共生细菌。克隆内共生细菌的16S rDNA基因,进行基因序列分析。结果表明,经地衣红-卡红染色棘阿米巴CB/S1内共生细菌呈黑色和棒状,在胞质内不规则分布。棘阿米巴CB/S1内共生细菌的16S rDNA基因长1534bp,与类亚洲嗜阿米巴杆菌(Candidatus Amoebophilus asiaticus 5a2)和韩国棘阿米巴分离株KA/E21内共生细菌的16S rDNA基因的同源性均为98%。进化树分析表明,棘阿米巴CB/S1内共生细菌与韩国棘阿米巴KA/E21内共生细菌、类亚洲嗜阿米巴杆菌、黑脚硬蜱内共生细菌和伯恩蚜小蜂内共生细菌等细菌构成单系。     

中国大陆两种东毕吸虫rDNA-LSU基因的序列分析

目的　测定程氏东毕吸虫、土耳其斯坦东毕吸虫结节变种rDNA LSU基因序列 ,并对照已发表的土耳其斯坦东毕吸虫同一基因序列 ,比较三者的差异 ,探讨东毕吸虫虫种分类问题。　方法　收集两虫种成虫 ,GNT K法抽提基因组DNA ,PCR扩增目的基因 ,并将其产物克隆入质粒再次扩增 ,提取质粒DNA ,以M 13(F/R)作为测序引物进行测序。从GenBank获得土耳其斯坦东毕吸虫rDNA LSU基因序列 ,用BioEdit软件将 3种血吸虫基因序列排序并比较分析。　结果　程氏东毕吸虫、土耳其斯坦东毕吸虫结节变种的LSU序列完全一致 ,与土耳其斯坦东毕吸虫rDNA LSU基因序列仅相差一个碱基 ,同源性高达 99.99%。　结论　γDNA LSU基因序列分析结果不支持程氏东毕吸虫为独立种 ,土耳其斯坦东毕吸虫结节变种可能是土耳其斯坦东毕吸虫的同种异名。     

Identification of Dominant Bacteria in Feces and Colonic Mucosa from Healthy Spanish Adults by Culturing and by 16S rDNA Sequence Analysis

The aim of this work was to examine by culturing the changes in the total and indicator populations of the feces of two individuals over 1 year and to identify the dominant microbial components of a single sample of feces from each donor. Populations and dominant bacteria from a sample of colonic mucosa from a further individual were also assessed. The culture results were then compared to those obtained with the same samples by 16S rDNA cloning and sequencing. High interindividual variation in representative microbial populations of the gastrointestinal tract (GIT) was revealed by both the culture and the culture-independent techniques. Species belonging to Clostridium clusters (XIVa, IV, and XVIII) predominated in both the fecal and the mucosal samples (except in the mucose cultured isolates), members of Clostridium coccoides cluster XIVa being the most numerous microorganisms. Species of γ -proteobacteria (Escherichia coli and Shigella spp.), bifidobacteria, and actinobacteria appeared in lower numbers than those of clostridia. From the mucosal cultured sample, only facultative anaerobes and bifidobacteria were recovered, suggesting destruction of the anaerobe population during processing. In accordance with this, the microbial diversity revealed by 16S rDNA sequence analysis was greater than that revealed by culturing. Despite large interindividual differences, distinct human communities may have group-associated GIT microbiota characteristics, such as the low number of Bacteroides seen in the subjects in this study.     

Five subgroups of Blastocystis hominis isolates from symptomatic and asymptomatic patients revealed by restriction site analysis of PCR-amplified 16S-like rDNA

DNA polymorphism of Blastocystis hominis isolates was examined by the amplification of a gene fragment coding for the 16S-like rRNA. Using identical primers, fragments of approximately 850 bp were amplified from 110 B. hominis isolates and fragments of 1.1kbp were amplified from 48 isolates. Digestion of the amplification products with the restriction enzymes Hin fI, Rsa I, and Alu I revealed different profiles for each fragment length. Subgroup I and II, resulting from digestion of the smaller 850 bp fragment, have identical Hin fI and Alu I restriction bands, subgroup III and IV have identical Rsa I fragments after digestion of the 1.1kbp DNA. Subgroup V resembles subgroup III in a few bands after the Rsa I and Alu I restriction, respectively. Ninety (54%) of the isolates studied were assigned to subgroup I, 20 (12%) to subgroup II, 35 (21%) to subgroup III, 12 (7%) to subgroup IV, and 1 (1%) to subgroup V. Five (3%) of the examined people were coinfected with B. hominis of subgroup I and III, 3 (2%) carried B. hominis of subgroup I and II. These results show that there are 5 B. hominis subgroups none of which was found to be significantly correlated with the reported disease.     

福建省狂犬病毒的N基因序列分析

目的了解福建省狂犬病毒流行毒株的基因分型和遗传进化关系,以及流行毒株与疫苗株在N基因核苷酸和氨基酸水平的差异。方法采集福建省不同时间、不同地区的犬脑组织标本共89份,通过RT-nested-PCR扩增、纯化、克隆、测序,获得19条包含N基因全长的序列,采用生物学软件进行序列整理分析。结果根据N基因核苷酸和推导的氨基酸的同源性,把福建省已知狂犬病毒分为3个群组,群组间具有显著的地域分布特征,各群组内部N基因核苷酸和氨基酸同源性分别在99.7%～100%和98.9%～100%之间,群组间N基因核苷酸和氨基酸同源性在86.4%～89.3%和95.3%～98.4%之间。福建省狂犬病毒的流行毒株与目前使用的各种疫苗株N基因序列同源性在86.5%～98.9%之间。结论福建省境内存在表观健康犬携带狂犬病毒现象,福建省已知狂犬病毒流行毒株均属于基因I型,可分为3个群组。从N基因序列的分析上看,我省目前使用疫苗能有效地保护流行毒株的感染。