喉鳞状细胞癌与端粒酶亚单位表达

目的 检测喉鳞状细胞癌（简称喉鳞癌）相关组织中端粒酶亚单位（端粒酶逆转录酶、端粒酶相关蛋白1和端粒酶RNA组分hTR）mRNA的表达,研究不同的端粒酶亚单位的表达与喉鳞癌发生的关系。方法 对34例喉鳞癌病例,采用逆转录聚合酶链（RT-PCR）技术检测上述三种端粒酶亚单位在喉癌组织、对应的癌旁组织和转移淋巴结中的mRNA表达。结果 喉癌组织、对应癌旁组织和转移淋巴结中端粒酶逆转录酶mRNA的阳性率分别为88．2％（30／34）、5．9％（2／34）和90．0％（9／10）,三种组织的阳性率间存在显著性差异（P〈0．05）,喉癌组织和转移淋巴结组织的阳性率显著高于癌旁组织（P〈0．05）。端粒酶相关蛋白1和端粒酶RNA组分mRNA在喉癌组织、对应癌旁组织和转移淋巴结中的阳性率均为100％。结论 本研究结果提示端粒酶依赖途径是喉鳞癌发生的方式之一。与端粒酶相关蛋白1和端粒酶RNA组分比较,端粒酶逆转录酶表达的上调在端粒酶依赖途径的喉鳞癌的发生中占有更重要的地位。     

基于miRNAs芯片的喉鳞状细胞癌致癌机制的初步分析

目的　miRNA芯片筛选与喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）形成相关的差异miRNAs,结合生物信息学分析确定并进一步验证具有诊疗价值的目标miRNAs 。方法  AffymetrixGeneChipmiRNAArray3.0芯片对5对LSCC组织及相应的癌旁组织行差异miRNAs的筛选,原始数据上传Gene Expression Omnibus数据库。采用Mev软件中配对方式t检验进行芯片探针的差异分析,经Affymetrix Analysis Center分析后将差异探针转换为差异表达的miRNAs;选择我们前期工作确定的微小染色体维持蛋 白4（mini chromosome maintenance protein4,MCM4）作为核心基因,采用Mirfocus数据库生物信息学分析MCM4的调控miRNAs并结合相关文献确定目标miRNAs;采用 RT-PCR在另外21对LSCC组织及相应的癌旁组织中验证目标miRNAs。结果　经差异筛选分析,有127个差异表达的miRNAs,其中78个miRNAs在肿瘤组织中高表达,49个 miRNAs在肿瘤组织中低表达;采用Mirfocus数据库生物信息学分析参与核心基因MCM4的调控miRNAs并结合相关文献,确定高表达的hsa-miR-183-5p、hsa-miR-24-3p为与MCM4调控作用相关的目标miRNAs;hsa-miR-30a-5p为另一个潜在的目标miRNA,且在肿瘤组织中低表达;通过RTPCR验证这3个差异表达的目标miRNAs与芯片筛选结果一致。结论　基于miRNAs芯片筛选分析得到的hsa-miR-183-5p、hsa-miR-24-3p及hsa-miR-30a-5p对LSCC的发生发展具有重要调控作用,可作为潜在的诊疗靶点。     

中期舌体鳞状细胞癌的预后及诱导化疗在治疗中的价值

目的 探讨诱导化疗在中期舌体鳞癌治疗中的价值,以及影响中期舌体鳞癌预后的因素.方法 回顾性分析1990年1月-1999年12月间首次在中山大学肿瘤防治中心头颈科住院治疗的符合条件的cTNM中期(Ⅱ、Ⅲ期,T2-3NO或T1-3N1)舌体鳞癌患者122例.单纯手术69例,诱导化疗后手术治疗53例,其中顺铂+5-氟尿嘧啶+博来霉素A5(简称PBF方案)诱导化疗17例,博来霉素A5单药诱导化疗36例.Kaplan-Meier法计算累积生存率,Cox比例风险模型进行多因素分析.结果 全组随访时间为7～177个月,平均随访(79.9±49.8)个月(-x±s),死亡45例(包括5例失访),失访率4.1%,存活77例中66例随访5年以上.全组3年、5年生存率分别为79.4%、69.0%,无瘤生存率分别为71.7%、66.3%;单纯手术组的3年、5年生存率分别为82.5%、73.1%,PBF方案组的3年、5年生存率分别为82.4%、70.1%,博来霉素单药诱导化疗后手术的3年、5年生存率分别为72.2%、61.1%,各组间比较差异无统计学意义(χ2=0.42,P=0.8106);单纯手术、PBF诱导化疗后手术、博来霉素诱导化疗后手术组的复发率分别为30.4%、41.2%和38.9%;单因素分析显示诱导化疗未见提高患者生存率、降低局部区域复发率(χ2=1.148,P=0.563)和远处转移率(χ2=2.305,P=0.316);多因素分析显示舌癌复发是影响预后的独立因素.结论 舌癌复发是影响中期舌体鳞癌预后的独立因素.诱导化疗未见提高患者生存率,降低复发率和远处转移率,PBF方案和博来霉素单药方案对舌体鳞癌的诱导化疗疗效差异无统计学意义.     

D型细胞周期蛋白在喉咽癌中的表达及临床意义

目的 探讨D型细胞周期蛋白(Cyclin D)与喉咽癌临床生物学行为之间的关系.方法 取喉咽鳞状细胞癌组织标本56例,正常喉黏膜14例,应用免疫组化方法检测Cyclin D在喉咽癌组织和正常黏膜中的表达,RT-PCR检测其mRNA表达.结果 CyclinD1在喉咽癌组织中的阳性表达率78.57％,显著高于正常黏膜,与T...     

喉、喉咽癌患者外周血播散肿瘤细胞检测的初步研究

目的探讨RT-PCR以CK19mRNA作为标记物在检测喉癌、喉咽癌患者外周血播散肿瘤细胞(disseminatedtumorcell,DTC)的意义。方法采用套式RT-PCR,以CK19mRNA为指标,检测32例喉癌、喉咽癌患者外周血中的DTC。结果CK19mRNA总阳性率为46.9%(15/32);其中喉癌阳性率为40%(10/25);喉咽癌阳性率为71.4%(5/7)。20例正常对照组全部阴性。淋巴结转移组阳性率75%(9/12),非淋巴结转移组阳性率30%(6/20),两者之间有显著性差异(P<0.05)。阳性组患者的无瘤生存期(20.29±5.16月)比阴性组(37.13±3.23月)明显缩短,经Log-rank检验有统计学差异(P=0.046,<0.05),阳性组的复发率(66.7%)比阴性组(18.8%)增高(P<0.05)。并且做了生存分析,有统计学差异(P=0.015,<0.05)。结论以CK19mRNA肿瘤标记物,用精确设计的RT-PCR技术对外周血DTC的检测有助于喉癌、喉咽癌转移的早期发现;随访初步发现用DTC的检测有望作为肿瘤复发和远处转移的早期预示手段。     

热休克蛋白27与NF-κBp65在喉鳞状细胞癌中的基因表达及临床意义

目的研究热休克蛋白27（heat shock protein27,HSP27）及核因子NF-κBp65（NF-κBp65）在喉癌及癌旁组织中基因表达水平,并探讨两者与喉癌临床病理因素的相关性。方法采用RT-PCR方法分别检测HSP27 mRNA和NF-κBp65 mRNA在喉癌组织及癌旁组织中的表达水平,并统计两者与喉癌不同临床病理因素的关系。结果 HSP27 mRNA和NF-κBp65 mRNA分别在喉癌组织中的表达高于癌旁组织,两基因与喉癌不同病理分型有相关性,与临床分期及有无淋巴结转移无关,且NF-κBp65 mRNA和HSP27 mRNA在喉癌中呈负相关性（r=-0.4367,P〈0.05）。结论 HSP27 mRNA和NF-κBp65mRNA表达水平随喉癌恶性程度的增高HSP27 mRNA表达量逐渐下降,而NF-κBp65 mRNA表达量逐渐升高,推测HSP27在人喉癌中可能负性调节NF-κB信号传导通路,HSP27有望成为喉鳞癌基因治疗新的作用靶点。     

幽门螺杆菌感染和喉鳞状细胞癌致病因素的研究

目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)在喉鳞状细胞癌患者中的感染情况,分析HP感染是否为喉鳞癌的致病因素.方法 采用巢式聚合酶链反应(nested PCR,nPCR)技术和Hp培养、鉴定对30例喉癌患者和15例喉良性疾病(声带息肉和会厌囊肿)患者的喉黏膜进行Hp检测.结果 采用nPCR法检测Hp,喉癌患者肿瘤组织Hp阳性22例(73.3%)高于对照组3例(20.0%),两者差异有统计学意义(x2=11.520,P=0.010).在22例Hp(+)的喉癌患者的44份肿瘤和癌旁组织中,有19份癌旁正常组织检出Hp(86.4%),而10份肿瘤组织检出Hp(45.4%),两者差异有统计学意义(x2=4.697,P=0.030).所有标本Hp培养均为阴性.结论 Hp在喉癌患者中的感染率明显高于实验人群,可能是喉癌的致病因素之一.     

Tribbles相关蛋白3及磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶在舌体鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的研究Tribbles相关蛋白3（tribblesrelated protein 3,TRB3）及磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶（phospho-AKT,p-AKT）在人舌体鳞状细胞癌（oraltongue squamous cell carcinoma OTSCC）中的表达及临床意义。方法采用RT-PCR及Western blot方法检测18例OTSCC及对应癌旁黏膜组织中TRB3及p-AKT的表达,免疫组化方法检测128例OTSCC及30例癌旁黏膜石蜡标本中TRB3及p-AKT的表达,分析其表达与OTSCC预后的关系。结果 RT-PCR显示TRB3 mRNA在15例OTSCC组织表达较癌旁黏膜组织中升高（83.3%,15/18）;Westernblot显示TRB3蛋白及p-AKT蛋白在13例OTSCC组织中的表达均较癌旁黏膜组织中升高（72.2%,13/18）：免疫组化显示128例OTSCC标本中,TRB3蛋白高表达率为49.2%（63/128）,p-AKT蛋白高表达率为68.8%（88/128）,均较癌旁黏膜表达增高（P均≤0.001）,且均与OTSCC的T分级、N分级及复发相关,p-AKT蛋白及TRB3蛋白的表达呈负相关（r=-0.27,P〈0.01）。结论 TRB3及p-AKT在OTSCC中高表达并且与肿瘤预后相关。     

17-AAG联合EGCG对人鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究

目的　研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）单药或联合使用对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法　MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果　①17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关（P＜0.01）;两者联合抑制作用显著增 加,且表现出时间、剂量依赖性（P＜0.01）。②RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论　17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。     

基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4在喉鳞状细胞癌组织中的表达

目的 检测基质细胞衍生因子-1（stromal cell derived factor-1,SDF-1）及其受体CXCR4 ( CXC chemokine receptor 4 ) 在喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）中的表达情况,并分析两者与喉鳞癌临床病理特征的关系,探讨SDF-1/CXCR4在喉鳞癌发生发展中的作用。方法　采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学法检测40例喉鳞癌组织和25例癌旁组织中SDF-1和CXCR4的表达情况。结果　①SDF-1、CXCR4 mRNA在喉鳞癌组织中的表达量（0.079±0.018、0.161±0.0 41）,高于在癌旁组织（0.0 21±0 . 0 05、0.035±0.007）中的表达量。SDF-1 mRNA的表达与淋巴结转移有关,CXCR4 mRNA的表达与肿瘤病理分级、临床分期和淋巴结转移有关。②免疫组化结果显示,SDF-1和CXCR4蛋白在喉鳞癌组织中的阳性表达率分别为52.5%和57.5%,高于对照组的20.0%和28.0%。SDF-1蛋白的表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移有关,CXCR4蛋白的表达与肿瘤病理分级、临床分期和淋巴结转移有关。结论　SDF-1/CXCR4生物学轴在喉鳞癌的发生发展及转移过程中起促进作用。     

酪氨酸激酶受体B与脑源性神经营养因子mRNA在鼻咽癌中的定量表达

目的研究酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptors B,TrkB）及其配体脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophin factor,BDNF）在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌生物学行为的关系。方法采用实时荧光PCR的方法对57例鼻咽癌组织、20例鼻咽炎性黏膜组织中的TrkB、BDNF进行检测。结果实时荧光PCR结果为TrkB、BDNF在鼻咽癌组织中表达显著高于鼻咽炎性黏膜组织（P〈0．05）。TrkB表达随鼻咽癌临床浸润程度的升高,淋巴结转移的发生而上调（P〈0．05）。BDNF在有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者（P〈0．05）。TrkB的表达强度与BDNF有正相关的关系（rs=0．281,P〈0．05）。结论表明TrkB和BDNF在鼻咽癌的浸润和转移机制中起着重要作用,特异性阻断TrkB／BDNF信号传导通路,将为临床治疗鼻咽癌找到新的突破点。