Artesunate对K562细胞增殖作用及细胞周期的影响

目的:观察Artesunate对人白血病细胞株K562细胞增殖及细胞周期的影响.方法:用Artesunate处理K562细胞,细胞计数法绘制生长曲线;MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果;倒置光显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行细胞周期分析.结果:Artesunate的浓度为1×10-4、1×10-5、1×10-6mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;对K562细胞的半数抑制浓度为3.75×10-5mol/L;倒置光显微镜观察细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,内可见空泡,培养基中可见较多分泌颗粒;流式细胞仪检测G2期细胞比例增高.结论:Artesunate对K562细胞生长及增殖有抑制作用,其作用机制可能是通过抑制DNA合成,使细胞增殖停留在G2/M期来实现的.     

青蒿素对K562细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨青蒿素对急性白血病K562细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:以不同浓度的青蒿素作用于体外培养的K562细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果:青蒿素可显著降低K562细胞端粒酶活性,抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系.结论:青蒿素能抑制K562细胞的生长并诱导细胞发生调亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.     

西洋参有效部位对K562细胞凋亡诱导的实验研究

目的利用人的白血病细胞K562对西洋参有效部位(Panaxquinquefolium’effectiveparts,PQEP)的抗癌作用机制进行研究。方法K562细胞进行常规培养后,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法进行PQEP(6.25～400mg·L-1)的细胞毒性测试;利用倒置相差显微镜和荧光显微镜(DAPI染色)来观察细胞形态学改变;凝胶电泳法观察细胞凋亡;通过流式细胞仪分析DNA含量和细胞周期分布。结果PQEP对K562细胞有明显细胞毒性,呈时间和剂量依赖关系;PQEP能明显诱导细胞皱缩,膜膨胀和核染色质固缩和碎裂,形成大约为180～200bp或其多聚体组成的寡核苷酸片断;流式细胞仪观察显示PQEP剂量依赖性地提高凋亡细胞DNA含量,阻止细胞在G1期。结论PQEP能够诱导K562细胞发生凋亡。     

色胺酮对人白血病细胞株K562细胞增殖抑制、凋亡诱导的影响

目的探讨色胺酮(Tryptanthrin,Try)对人白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响。方法K562细胞进行常规培养后,利用MTT方法进行Try(1.56～50)mg.L-1的细胞增殖影响;Hoechst33258荧光染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡情况等指标;综合评价Try对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果Try在3.12～50mg.L-1浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;Hoechst33258荧光染色及流式细胞仪结果显示,不同浓度Try作用48h后,K562细胞可发生明显的凋亡;同时Try也可影响K562的细胞周期,将细胞阻滞于G0/G1期,随Try剂量增大G0/G1期细胞比例也逐渐增高,并出现明显的亚二倍体凋亡峰;同时,S期细胞比例随剂量增大而逐渐降低。结论色胺酮能明显抑制K562细胞增殖并具有诱导K562细胞发生凋亡的作用。     

艰难梭菌毒素A对白血病细胞株K562增殖、凋亡及相关基因调控的研究

目的探讨艰难梭菌毒素A（TcdA）对白血病细胞株K562增殖、凋亡的作用及其机制。方法采用四唑蓝比色试验（MTT）检测TcdA对K562细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测TcdA作用后细胞Bcl-2/Bax,Egr-1mRNA表达的变化。结果 TcdA能抑制K562细胞的增殖,作用48h后的抑制率（IR）为47.67%,流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰（凋亡峰）。TcdA作用后K562细胞Bcl-2基因表达下调,Bax基因表达上调,而Egr-1基因表达上调,并呈量效关系。结论艰难梭菌毒素A可诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax,上调Egr-1基因表达水平有关。     

东亚钳蝎毒诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 研究东亚钳蝎毒（BMK）在体外诱导白血病细胞株K562凋亡的作用。方法 流式细胞仪检测细胞凋亡率，应用RT．PCR检测野生型p53基因的表达。结果 经BMK作用于细胞后，细胞的总凋亡率均有升高；RT—PCR检测提示经BMK作用后的K562细胞p53基因的表达上调。结论 BMK能诱导K562细胞凋亡，可能促进P53基因表达上调是其机制之一。     

新型青蒿素-苯丁酸氮芥酯的合成及抗肿瘤活性研究

根据药效团拼合原理,设计并合成了结构新颖的青蒿素-苯丁酸氮芥酯,其结构由1H NMR、13C NMR和HRMS-ESI表征确定。体外抗增殖测试显示,青蒿素-苯丁酸氮芥酯对人白血病细胞K562和人白血病耐阿霉素细胞K562/ADR均具有较强的抑制活性,IC50值分别为3.065±0.568和15.173±1.297μmol/L。流式细胞术结果表明,青蒿素-苯丁酸氮芥酯能够阻滞K562和K562/ADR的细胞周期,并诱导细胞凋亡。     

环氧合酶-2抑制剂对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的:体外观察非甾体药物选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡影响。方法:采用噻唑蓝法观察NS-398对K562细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,DNA梯状电泳检测凋亡的发生。Western印迹法检测K562细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶Caspa-se-3和COX-2的表达。结果:NS-398呈剂量依赖性的方式抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡。并呈浓度依赖性改变细胞周期的分布,一方面增高Go/G1期细胞比例,另一方面降低S期和G2/M期细胞比例,与对照组相比差异具显著性(P<0.05)。NS-398干预的K562细胞Caspase-3的蛋白表达均显著升高,而COX-2的蛋白表达降低,并呈浓度依赖性。结论:体外NS-398能有效的发挥抗K562细胞白血病效应,对白血病细胞增殖有抑制作用并诱导其凋亡,这可能与抑制COX-2表达及上调Caspase有关。     

酸性丝氨酸蛋白酶ASP_(NJ)对K562白血病细胞的抑制与损伤作用研究

目的研究酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ单独用药及与多柔比星联合用药对体外培养的人慢性髓系白血病细胞株K562的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法应用MTT比色法、台盼蓝拒染法检测细胞增殖和细胞活力,倒置显微镜下观察细胞的动态变化,瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞的形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡。结果沙蚕丝氨酸蛋白酶ASPNJ有效抑制K562细胞的增殖和活力并呈浓度和时间依赖性,联合用药显示ASPNJ显著增加多柔比星的杀伤作用;K562细胞出现凋亡所具有的形态学变化,ASPNJ明显诱导K562细胞的凋亡。结论沙蚕丝氨酸蛋白酶ASPNJ对体外培养的K562细胞具有明显的抑制作用并能增强多柔比星的效应,其作用机制可能与直接的细胞毒性作用及诱导凋亡有关。     

RNA干扰靶向cyclin D1基因对K562细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的 利用RNA干扰（RNAi）技术体外观测其对K562细胞cyclin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 通过壳聚糖介导转染K562细胞、Westernblot分析检测转染前后CyclinD1蛋白表达变化；集落形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率的影响。结果 构建靶向cyclin D1基因的shRNA表达质粒（pshRNA-419和pshtNA-575）经壳聚糖转染后．能显著抑制cyclin D1基因表达；抑制K562细胞增殖，影响其集落形成能力；影响K562细胞周期分布，诱导细胞凋亡。而设计一碱基突变的序列所构建的质粒并无上述生物学效应。结论 cyclin D1基因表达下调可抑制K562细胞生长，并诱导细胞凋亡。提示cyclin D1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点的。     

氨基葡萄糖硫酸盐对白血病细胞K562增殖的影响

目的　研究氨基葡萄糖硫酸盐对白血病细胞K5 6 2增殖的影响 ,并探讨分子机制。方法　采用MTT(四唑氮蓝 )法检测不同浓度的氨基葡萄糖硫酸盐对K5 6 2细胞生长的影响 ;吉姆萨 -瑞氏染色、电镜观察药物作用后形态的改变 ;流式细胞仪检测药物对K5 6 2细胞细胞周期的影响和细胞表面分化抗原CD11b、CD14、CD33和CD13的表达变化 ;WesternBlot检测药物作用前后K5 6 2细胞组织蛋白酶D(CathepsinD)表达的改变。结果　氨基葡萄糖硫酸盐能明显抑制K5 6 2细胞的生长 ,且存在剂量依赖性。与未加药的对照相比 ,在 5mmol·L-1浓度作用 2d后形态学观察 ,易见早、中、晚期凋亡的K5 6 2细胞 ;胞质空泡化明显 ,大泡很多。 1、5mmol·L-1浓度作用 2d后出现G1期K5 6 2细胞增加 ,而S期的减少 ,在 5mmol·L-1浓度时 ,出现凋亡峰与对照相比 ,CD11b和CD14的表达轻度增加 ,CD33表达轻度减低 ,而CD13表达无明显变化。同时还发现药物作用后出现CathepsinD蛋白前体的蓄积现象。结论　氨基葡萄糖硫酸盐能抑制K5 6 2细胞增殖 ,诱导其凋亡 ,其分子机制可能与细胞周期受阻、CathepsinD蛋白前体蓄积有关     

分枝石蕊多糖诱导人白血病K562细胞凋亡

目的：研究分枝石蕊多糖（CFP-1）是否能诱导K562细胞凋亡。方法：抑制细胞增殖的测定采用MTT法;用荧光显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化;采用琼脂糖凝胶电泳法观测DNA碎片;用流式细胞仪检测凋亡细胞数。结果：CFP-1（50-800mg/L）明显抑制K562细胞增殖,并且呈浓度依赖性,K562细胞与CFP-1300mg/L共同培养5d后,观察到典型的凋亡形态变化,电泳呈现梯形条带。结论：CFP-1诱导人白血病K562细胞凋亡。     

水溶性紫杉醇衍生物PLT抗肿瘤活性的实验研究

目的观察水溶性紫杉醇衍生物(Peg-Leu-Taxol,PLT)的抗肿瘤活性及机制.方法以MTT还原法检测PLT对肿瘤细胞生长的抑制作用,以相差显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变,免疫组化方法检测细胞生长相关基因p21wafl表达.结果PLT能明显抑制乳腺癌(MCF-7)、非小细胞肺癌(PG-49)和红白血病(K562)细胞的生长.细胞形态呈凋亡特征性改变,细胞皱缩,核染色质凝缩、碎裂、亮珠状浓染.细胞p21wafl蛋白表达显著增高.结论PLT具有明显的抗肿瘤活性,其诱导肿瘤细胞凋亡与p21wafl基因表达上调有关.     

金雀异黄素对K562细胞的生长抑制和诱导凋亡作用

目的探讨金雀异黄素对人红白血病细胞系K562细胞的生长抑制、诱导凋亡作用。方法不同浓度的金雀异黄素处理K562细胞后,用MTT比色法检测细胞生长增殖作用,Wright-Gimesa法观察细胞的形态学变化,FCM检测K562细胞凋亡峰。结果金雀异黄素对K562细胞具有与时间、浓度呈正相关的生长抑制作用。形态学显示金雀异黄素高浓度组细胞发生核固缩、核碎裂,并有凋亡小体出现。细胞周期显示对照组K562G2／M期细胞8．9％,金雀异黄素75gmol·L^-1时升高到60．6％（P〈0．05）;金雀异黄素75gmol·L^-1时K562细胞亚G1期细胞为27．3％,对照组为0．4％（P〈0．05）。结论金雀异黄素对K562细胞具有很强的生长抑制作用,K562细胞可发生明显G2／M期阻滞,金雀异黄素诱导了K562细胞发生凋亡。     

Synthesis and biological evaluation of 1-cyano-2-amino-benzimidazole derivatives as a novel class of antitumor agents

A series of 1-cyano-2-amino-benzimidazole derivatives were synthesized and evaluated for their cytotoxic activities in vitro against three human cancer cell lines (human lung carcinoma cell line: A549, human leukemia cell line: K562, and human prostate cancer cell line: PC-3). Most of these compounds showed potent activities against these tumor cell lines, especially against A549 and K562 cell lines. The preliminary structure–activity relationships of 1-cyano-2-amino-benzimidazole derivatives were also discussed. The cell cycle analysis was carried out in K562 cells and the results showed that compound 4d caused a marked increase of cells in G ₂/M phase.     

DuP-697对K562白血病细胞凋亡诱导作用观察及机制研究

目的：观察选择性COX-2抑制剂DuP697对慢粒白血病K562细胞的凋亡诱导效应,并探讨其作用机制。方法：细胞培养加入DuP-697作用后,透射电镜观察细胞凋亡的形态,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western印迹检测K562细胞Caspase-8蛋白表达;用Z—IETD—FMK阻断Caspase8活性,以证实Caspase-8蛋白表达和细胞凋亡的关系。结果：DuP-697能诱导K562细胞凋亡,其作用呈浓度依赖性,这-效应与Caspase-8蛋白表达上调和裂解激活有关;用Z-IETD—FMK阻断Caspase-8的活性,细胞凋亡明显受抑。结论：DuP-697能诱导K562细胞凋亡,其机制涉及Caspase-8活化的信号转导途径。     

Sorcin过表达——白血病多药耐药的一种新机制

目的研究sorcin基因与白血病多药耐药的相关性。方法用NorthernBlot和WesternBlot方法,检测人白血病耐药细胞株K562/A02及其野生型细胞株K562中sorcin基因和蛋白表达水平的差异。设计针对sorcin基因的反义寡核苷酸,通过脂质体将其导入K562/A02细胞,通过WesternBlot方法检测转染前后细胞内sorcin蛋白表达的变化,运用MTT方法检测转染反义寡核苷酸后细胞对阿霉素敏感性的变化。结果NorthernBlot和WesternBlot结果表明,K562/A02细胞中sorcin表达水平明显高于K562敏感细胞。将sorcin基因反义寡核苷酸转入K562/A02细胞后,细胞内sorcin蛋白表达明显下降,对阿霉素的敏感性提高。结论作为一种耐药相关基因,sorcin参与了白血病多药耐药细胞耐药表型的形成,有望成为今后白血病耐药诊断和治疗的新靶点。     

黄芩苷元选择性诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究黄芩苷元诱导人白血病细胞凋亡的作用及机理。方法MTT法测细胞毒活性，Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡小体形成，流式细胞仪Annexin V FITC-PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测凋亡峰及细胞周期，同时流式细胞仪检测细胞Bcl-2，Fas和Caspase 3蛋白表达情况。结果黄芩苷元能选择性抑制人白血病K562细胞生长且呈浓度依赖关系，并能诱导细胞凋亡，细胞增殖被阻滞于S期；同时细胞Fas和Caspase 3蛋白表达增高，而Bcl-2蛋白表达不变。结论黄芩苷元能激活Caspase 3蛋白表达，诱导人白血病K562细胞凋亡且呈时效量效关系，此作用与Fas蛋白表达上调有关，与Bcl-2蛋白表达无关。     

RNA干扰靶向cyclin D1基因对K562细胞化疗增敏的研究

目的 cyclin D1基因在细胞周期调控中起关键性作用.研究表明其过表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关;并且与肿瘤细胞对化疗药物抗拒性有关.抑制Cyclin D1蛋白表达可达到化疗增敏作用.本研究利用RNA干扰(RNAi)技术体外观测其对K562细胞cyclin D1基因的沉默效应及增强阿霉素(ADM)对K562细胞毒性作用.方法 体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒,通过壳聚糖介导转染K562细胞,Western blot分析检测转染前后Cyclin DI蛋白表达变化,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率的影响以及MTT法检测K562细胞对ADM敏感性的变化.结果 构建靶向cyclin D1基因的shRNA表达质粒(pshRNA-419和pshRNA-575)经壳聚糖转染后,能显著抑制cyclin D1基因表达;影响K562细胞周期分布,诱导细胞凋亡,并降低ADM半数抑制浓度,提高了化疗敏感性.而设计一碱基突变的序列所构建的质粒并无上述生物学效应.结论 沉默K562细胞cyclin D1基因表达可达到有效的化疗增敏目的.