共表达HPV16L1、L2、E6、E7蛋白的重组非复制型痘苗病毒构建及鉴定

目的构建共表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1、L2、E6、E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法以痘苗病毒为载体、利用同源重组技术筛选共表达HPV16L1、L2、E6、E7蛋白的重组痘苗病毒并对其进行鉴定。结果该病毒在CEF细胞上连续传至第15代,经斑点杂交结果表明重组病毒基因组中有L1、L2、E6、E7基因插入;经WesternBlot检测,重组病毒能稳定表达HPV16L1、L2、E6、E7蛋白。结论非复制型重组痘苗病毒NTVJE6E7CKL1L2可作为预防和治疗HPV16相关肿瘤及其癌前病变候选疫苗。     

人乳头状瘤病毒DNA疫苗

人乳头瘤病毒(HPV)，尤其是HPVl6型，是子宫颈癌的主要病原体。因此，通过引起病人适当的病毒特异性免疫反应可以预防或治疗HPV相关的子宫颈恶性肿瘤。在已经进行预防接种的个体中．包括L1和L2在内的HPV衣壳蛋白已经显示出能够产生对抗HPV颗粒抗体的抑制。此外，HPV致     

人乳头状瘤病毒16型不同基因疫苗联合免疫的实验研究

目的 探索联合免疫策略在预防和治疗人乳头状瘤病毒16型（HPV16）相关肿瘤中的作用。方法 在C57BL／6动物模型中，观察了表达HPV16基因的融合蛋白L2E7疫苗和重组痘苗病毒mE67疫苗的不同联合免疫方式在预防和治疗HPV16相关肿瘤中的作用。用酶联免疫斑点（ELISPOT）和细胞毒T淋巴细胞（CTL）反应评价它们在诱发机体产生细胞免疫应答中的作用。结果 我们发现以HPV16 L2E7融合蛋白＋佐剂（CpG）初免，用重组痘苗病毒rVVmE67加强免疫的联合免疫方式在C57BL／6小鼠实验中可以有效预防和治疗HPV16相关肿瘤的攻击。ELISPOT可以检测到高水平的E749-57肽特异性，分泌IFN-γ的效应T细胞。CTL检测同样反应出这种联合免疫方式所诱发的CTL细胞可以有效识别并杀伤含HPV16E6／E7的靶细胞。结论 以HPV16L2E7融合蛋白＋CpG初免，用重组痘苗病毒rVVmE67加强的联合免疫策略可以有效防治HPV16相关肿瘤，为进一步研究提供了科学基础。     

治疗性HPV疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)引起包括宫颈癌等在内的多种疾病,如何预防和治疗已为人们所关注.已上市的疫苗主要用于预防HPV的感染,对已感染HPV人群的治疗效果未做进一步研究,而目前临床治疗效果不够理想,因此利用治疗性疫苗通过免疫学方法治疗HPV引起的疾病逐渐成为研究的热点.以HPV E6和E7为靶抗原的治疗性疫苗研究开始较早,研究最为深入,已经取得了一定的进展.同时近年来的研究发现,HPV其他的蛋白如E2、E5、L1和L2等也可作为治疗性疫苗的候选靶抗原,并显示出较好的应用前景.     

人乳头瘤病毒11型L1/CD80嵌合真核表达质粒的构建和鉴定

生殖道尖锐湿疣主要是由人乳头瘤病毒6型(HPV6)和11型(HPV11)感染引起。HPV病毒仅存在终末分化的复层鳞状上皮组织中，含量很少。HPV病毒的晚期表达基因L1所表达的外壳蛋白不仅是主要的外壳蛋白，还是主要的病毒抗原蛋白，在宿主细胞表面有其蛋白受体，可成为预防性疫苗最理想的靶抗原。我们构建了含有完整的HPV11型L1基因的真核表达质粒，为增强其作为治疗性疫苗的免疫效果，并进一步将HPV11L1基因和共刺激分子CD80进行连接重组，构建HPV11 L17／CD80嵌合基因的DNA疫苗，为下一步研究其免疫原性提供试验数据。     

HPV与宫颈癌关系及疫苗研究进展

流行病学和病原学研究表明,人乳头瘤病毒（HV）感染是妇女发生宫颈癌重要的原因之一.HPV是无包膜的小型双链环状DNA病毒,不同基因型病毒对细胞的转化能力不同,其中HPV-16、18与子宫颈癌关系最密切.HPV诱发官颈癌的主要机制,是其E6和E7蛋白基因在宫颈细胞中的表达增加,产生的E6和E7蛋白两个癌蛋白分别与抑癌蛋白p53和pRb结合而诱导后两者降解.HPV疫苗包括预防性疫苗和治疗性疫苗两大类.本文对HPV感染与宫颈癌发生的关系、疫苗研究进展进行了系统的阐述.     

HPV与宫颈癌关系及疫苗研究进展

流行病学和病原学研究表明,人乳头瘤病毒(HV)感染是妇女发生宫颈癌重要的原因之一.HPV是无包膜的小型双链环状DNA病毒,不同基因型病毒对细胞的转化能力不同,其中HPV-16、18与子宫颈癌关系最密切.HPV诱发官颈癌的主要机制,是其E6和E7蛋白基因在宫颈细胞中的表达增加,产生的E6和E7蛋白两个癌蛋白分别与抑癌蛋白p53和pRb结合而诱导后两者降解.HPV疫苗包括预防性疫苗和治疗性疫苗两大类.本文对HPV感染与宫颈癌发生的关系、疫苗研究进展进行了系统的阐述.     

人乳头瘤病毒16型L1-E7c嵌合基因的构建表达及免疫学效应的研究

目的 构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1-ETc嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗.方法 以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a( ),获得pET28a( )-L1-E7c表达质粒.以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16 L1和E7抗体的特异性结合.应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构.纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况.结果 经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白.此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性.结论 构建的嵌合基因HPV16L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP.此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础.     

滴鼻接种HPV16 L1-E7 DNA初始引发及HPV16 L1 VLP强化免疫可增强小鼠黏膜和细胞免疫

目的探讨HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发及HPV16L1病毒样颗粒(VLP)强化接种小鼠诱发免疫反应的效应,为进一步用于HPV16相关恶性肿瘤的防治提供实验依据。方法以HPV16 L1-E7嵌合蛋白、HPV16 L1 VLP以及HPV16 L1-E7 DNA单独或联合滴鼻免疫雌性BALB/c小鼠,连续使用3周。免疫后采血及收集阴道分泌物,检测特异性抗体。在末次免疫2周后,取小鼠脾细胞,用HPV 16 L1-E7蛋白刺激,检测T细胞增殖反应及IFN-γ水平。结果HPV16 L1-E7嵌合蛋白滴鼻接种可诱导小鼠产生血清HPV16 L1特异性IgG,强化免疫后抗体水平明显增高(P<0.01);阴道局部产生HPV16 L1特异性IgA;在HPV16 L1-E7抗原刺激下,脾细胞上清液中IFN-γ水平升高。HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发和HPV16 L1蛋白加强免疫可增高阴道分泌液中HPV16 L1特异性IgA水平,增高脾淋巴细胞中特异性T细胞产生IFN-γ的水平。结论嵌合病毒样颗粒HPV16 L1-E7和HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发及HPV16 L1蛋白强化滴鼻接种适用于预防HPV原发性黏膜感染和治疗HPV16相关肿瘤。     

人乳头瘤病毒16型L1基因真核表达质粒的构建及鉴定

研究表明 ,高危型人乳头瘤病毒 1 6型 (Humanpapillo mavirustype 1 6 ,HPV1 6 )的感染与宫颈癌及人类许多肿瘤的发生密切相关。HPV1 6晚期基因L1 (Latergene ,L)编码病毒主要衣壳蛋白 ,能刺激机体产生抗体[1 ] ,保护机体不受同型别HPV的感染 ,体外实验也证明L1蛋白上存在有T细胞和B细胞免疫识别表位 ,是研制HPV预防性疫苗的重要靶抗原之一。自然感染的HPV1 6免疫原性低下 ,不能有效激发机体产生特异性抗肿瘤免疫效应。通过DNA疫苗介导的免疫可望达到增强免疫、防治HPV相关肿瘤的目的 ,具有良好的应用前景[2 ] 。本实验拟构建并…     

中国妇女宫颈癌中HPV16E6基因序列分析及分子克隆

人乳头瘤病毒16型（Humanpapillomavirustype16,HPV16）感染与宫颈癌的发生有密切关系。研究发现,HPVI6早期蛋白E6是肿瘤相关抗原,可在HI,V相关肿瘤中持续表达,为肿瘤治疗性疫苗的研制及免疫治疗提供了靶位。但也有文献报道,宫颈癌中HPVI6E6基因可有一定的变异性,...     

子宫颈癌治疗性疫苗研究进展

子宫颈癌为妇女最常见的恶性肿瘤之一,其与人乳头瘤病毒(HPV)密切相关.HPV早期基因E6、E7的持续表达是维持癌细胞转化状态所必须的.因此,E6、E7可作为宫颈癌治疗的靶点.目前,针对HPV E66、E7的治疗性疫苗已取得了较大进展.本文就近年来子宫颈癌治疗性疫苗的最新进展进行了综述.     

共表达HPV16型E6和E7突变基因重组痘苗病毒的构建及其抗肿瘤免疫效果的观察

目的：构建用于子宫颈癌治疗的HPV16型E6和E7重组痘苗病毒实验性疫苗株，并对其抗肿瘤免疫效果进行初步评价。方法：以痘苗病毒为载体、利用同源重组技术构建共表达HPV16 E6和E7基因的重组痘苗病毒。该病毒免疫C57BL／6小鼠后，检测其免疫原性和抗移植瘤生长情况。结果：PCR结果显示，重组病毒VmE6E7的TK基因内插入了分别由痘苗病毒早晚期启动子H6和7．5K表达的ME6和ME7－1基因。动物实验结果表明，rVmE6E7在C57BL／6小鼠体内可诱发E6和E7特异性抗体产生，被免疫小鼠能够抵抗HPV16 E6E7转化的同系肿瘤细胞的攻击。结论：获得1株用于宫颈癌治疗的HPV16型实验疫苗株，为进一步研制人用HPV16型疫苗株奠定了基础。     

HPV16 L1-E7c嵌合基因的重组杆状病毒在昆虫细胞中表达及免疫小鼠的效应研究

目前,关于人乳头瘤病毒疫苗的研究主要集中在嵌合型病毒样颗粒(cVLP)上。本研究制备了昆虫细胞表达的HPV16L1E7cCVLP,并将该蛋白疫苗接种动物,探讨其诱发体液免疫应答和细胞因子的效应。1材料和方法酶切pUC19L1E7c获得L1E7c基因,与杆状病毒转移载体pFastBac1连接,转化DH10Bac菌。PCR扩增L1E7c鉴定重组质粒。BacmidDNA与Cellfectin混合,转染SF9细胞,培养3～6d。进行15%SDS PAGE电泳和WesternBlot,兔抗HPV16L1和E7抗体由美国Galloway教授惠赠。HPV16L1-E7cVLP纯化后做为疫苗。选择6～8周龄BALB/c小鼠,每组6只。第1组…     

人乳头瘤病毒6b L1/16E7嵌合蛋白的基因克隆和表达

目的 研究HPV6bL1/16E7嵌合蛋白的基因克隆及其在昆虫细胞的表达,为防治尖锐湿疣和宫颈癌的基因工程疫苗研究作准备。方法 用PCR扩增出HPV6bL1/16E7嵌合蛋白基因,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393,制备重组杆状病毒并感染昆虫细胞表达HPV6bL1/16E7嵌合蛋白。结果 HPV6bL1/16E7嵌合蛋白基因在昆虫细胞中得到了表达,并可自组装形成病毒样颗粒。结果 昆虫细胞表达的HPV6bL1/16E7嵌合病毒样颗粒可进一步用于HPV感染的免疫机理及基因工程疫苗研究。     

人乳头瘤病毒58型L1壳蛋白在原核细胞中的高效表达及抗体制备

目的 人乳头瘤病毒58型（HPV58）是重要的高度致瘤性病毒之一。用原核细胞表达HPV58L1主要壳蛋白（McP）,并制备相应抗体血清,为基因工程疫苗研制打下基础。方法 用聚合酶链反应(PCR）扩增HPV58L1完整编码区基因,并克隆、测序。构建原核表达载体pRSETB58L1,表达的L1蛋白经SDS－PAGE纯化,免疫BALB／c小鼠。结果 在原核细胞中表达了HPV58L1壳蛋白,该壳蛋白的相对分子质量为60000,此蛋白与HPV16L1抗有交叉反应。获得抗HPV58L1壳蛋白特异性抗体,抗体滴度为1：80,并用该抗体屯昆虫细胞中表达的HPV58L1壳蛋白。结论 HPV58壳蛋白在原核细胞中获得的有效表达,纯化免疫小鼠后能产生抗HPV58L1特异性抗体,此抗体可用于鉴定真核细胞表达的HPV58L1壳蛋白。     

E6-p53和E7-pRb模式在人乳头瘤病毒致癌过程中的作用

在全球范围特别是发展中国家，宫颈癌的发病率居女性恶性肿瘤的第二位。目前认为人乳头瘤病毒（HPV）是宫颈癌的主要致病因子，而早期基因E6、E7是HPV致癌机制研究中的重点。体内体外实验均表明E6、E7是细胞转化所必需的，尤其是在高危型HPV感染机体时，E6结合并灭活肿瘤抑制因子p53、E7结合并降解抑制蛋白pRb，最终导致细胞无限分裂而不发生凋亡。E6、E7分别与抑癌蛋白p53、pRb相互作用的模式为人乳头瘤病毒致癌机制的进一步研究提供了基本的理论基础。     

人乳头瘤病毒疫苗研究进展

某些型别的乳头瘤病毒(HPV)是肛生殖道癌及恶性疾病的主要病因,特别是子宫颈癌.虽然HPV免疫原性差,但已证实免疫系统能控制HPV的扩散及所致疾病的进展,癌细胞不断表达的病毒致癌蛋白E6、E7是淋巴细胞攻击靶子.几种治疗性疫苗在实验动物中已成功触发细胞介导的免疫应答,人的I期临床试验也取得相似效果.     

表达HPV 16型结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的 构建表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法 采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增并克隆HPV16主要结构蛋白L1和次要结构蛋白L2基因;将经过结构修饰的L1和L2基因插入痘苗病毒表达载体,通过与痘苗病毒在宿主细胞中同源重组后,筛选共表达L1／L2蛋白的重组痘苗病毒并对其进行鉴定。结果 DNA序列分析证实PCR扩增所获L1和L2克隆基因是正确的;斑点杂交结果表明重组病毒基因组中有L1和L2基因插入;该重组病毒在人源细胞中不复制或低水平复制,但可稳定表达相对分子质量为57000的L1蛋白和相对分子质量为90000的L2蛋白。结论 获得1株稳定表达HPV16 L1／L2蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。     

人乳头瘤病毒疫苗研究进展

某些型别的乳头瘤病毒(HPV)是肛生殖道癌及恶性疾病的主要病因，特别是子宫颈癌。虽然HPV免疫原性差，但已证实免疫系统能控制HPV的扩散及所致疾病的进展，癌细胞不断表达的病毒致癌蛋白E6、E7是淋巴细胞攻击靶子。几种治疗性疫苗在实验动物中已成功触发细胞介导的免疫应答，人的Ⅰ期临床试验也取得相似效果。