Western印迹法和免疫组化对肺癌神径内分泌分化标记物检测的比较

免疫组化在检测非小细胞肺癌(NSCLC)中神经内分泌(NE)分化的阳性率各家报道不一,如NSE从11%～100%.出现这种差别方法学是主要原因之一.Western印迹法(Western blot)在分子生物学研究中广泛用于微量蛋白水平的测定,但在肺癌组织中检测NE分化,文献报道不多.本文比较了Western印迹法及免疫组化法对肺癌组织中神经烯醇化酶(NSE)、嗜铬粒素A(CgA)和突触素(SYN)检测的优缺点.     

非小细胞肺癌神经内分泌分化与其生物学特性及预后关系的研究

背景与目的近年来研究发现非小细胞肺癌(non-Small cell lung cancer,NSCLC)具有神经内分泌(neu-roendocrine,NE)分化的特性.本研究旨在探讨NSCLC的神经内分泌分化情况及其生物学行为和预后的相关性.方法随机收集2005年1月-2007年12日、随访资料满3年的206例NSCLC术后患者的病例及石蜡标本,所有患者术前均未经放化疗.石蜡标本采用EnVision免疫组化二步法检测NSCLC神经内分泌标记物神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、嗜铬素A(chromogranin A,CgA)及突触素(synaptophysin,Syn)的表达.所有数据均采用SPSS统计软件进行处理,同时采用Kaplan-Meier曲线描述生存率.并行Log-rank检验.结果所有NSCLC病例中,82例伴有神经内分泌分化,阳性率为39.8%.CgA、NSE及Syn的阳性率分别为53例(25.7%)、104例(50.s%)和91例(44.2%).统计学分析表明,非小细胞肺癌伴NE分化与癌细胞的分化程度相关,且Syn的阳性表达与癌细胞的分化程度及淋巴结转移情况相关.单因素生存分析结果经Log-rank检验示:Syn的阳性表达与患者术后生存率有关,而NE分化与患者术后生存率无明显相关性.结论NSCLC是否伴有NE分化是判断其生物学行为的重要指标,而Syn可作为NSCLC伴NE分化的诊断标志物,Syn阳性表达提示患者预后不良.     

乳腺癌伴神经内分泌分化及其与nm23、pS2等预后因素的关系

目的　研究乳腺癌中神经内分泌分化情况 ,及其与nm 2 3、pS2基因及淋巴结转移的关系。 方法　采用免疫组化S P法 ,对 5 8例乳腺癌手术标本用神经内分泌抗体NSE、Sy、CgA进行测定 ,观察其表达情况 ;同时进行nm 2 3、pS2基因检测并与淋巴结转移情况共同分析。结果　 5 8例乳腺癌患者中NSE、Sy、CgA 3种抗体同时表达阳性者 14例 ,占 2 4% ,电镜下观察发现肿瘤细胞中有神经内分泌颗粒。NE阳性者nm 2 3、pS2表达水平均低于NE阴性者 ,而NSE阳性者淋巴结转移率 ( 5 7% ,8/14 )较NE阴性者 ( 2 7% ,12 /4 4)高 (P <0 .0 5 )。结论　乳腺癌伴神经内分泌分化是肿瘤异质性的表现 ,是乳腺癌的 1种特殊类型 ,具有与一般类型乳腺癌不完全一致的生物学行为 ,在乳腺癌术后治疗方案的决策上应重视     

伴神经内分泌分化非小细胞肺癌中p53、bcl-2及c-myc的表达

目的 研究伴神经内分泌（neuroendocrine,NE)分化的非小细胞肺癌（NSCLC）中p53、bcl-2和c-myc的特异性表达。方法 随机搜集60例手术切除的NSCLC石蜡标本，采用免疫组化S－P法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、嗜铬颗粒蛋白A(CgA)、突触素（Syn)及p53,bcl-2,c-myc基因蛋白的表达。结果 NSCLC中NSE、CgA、Syn的阳性表达率分别为45．00％（27／60）、13．33％（8／60）、31．67％（19／60）。结合三者的表达确定伴有NE分化的占41．67％（25／60）；NE分化与肺癌的分化程度有密切关系（P＜0．05）；伴神经内分泌分化非小细胞肺癌（NSCLC－NE）的转移率较高，临床分期较高。NSCLC－NE中bcl-2、p53和c-myc的阳性表达率分别为68．00％（17／25）、80．00％（20／25）和68．00％（17／25），其中bcl-2,p53的表达与NE分化有密切关系（P＜0．05）。结论 NSCLC中有相当一部分伴有NE分化，NSCLC－NE具有与其它NSCLC不同的生物学特性。NSCLC－NE中可以检测到高表达的bcl-2蛋白、突变型p53蛋白，p53突变导致的bcl-2／Bax的失衡在NSCLC－NE的发生和发展中可能起重要作用。     

Western印迹法和免疫组化对肺癌神经内分泌分化标记物检测的比较

免疫组化在检测非小细胞肺癌（NSCLC）中神经内分泌（NE）分化的阳性率各家报道不一，如NSE从１１％～１００％。出现这种差别方法学是主要原因之一。Western印迹法（Westernblot）在分子生物学研究中广泛用于微量蛋白水平的测定，但在肺癌组织中检测NE分化，文献报道不多。本文比较了Western印迹法及免疫组化法对肺癌组织中神经烯醇化酶（NSE）、嗜铬粒素A（CgA）和突触素（SYN）检测的优缺点。１材料与方法１．１取材本院１９９８～１９９９年４２例NSCLC患者（鳞癌１８例、腺癌１７例、大细胞癌４例、肺泡细胞癌３例），男３…     

多药耐药基因与细胞凋亡基因产物在非小细胞肺癌中的表达及其意义

 目的　检测非小细胞肺癌 (NSCLC)多药耐药相关基因及细胞凋亡基因的表达 ,探讨其表达的相关性及临床病理意义。方法　采用SP免疫组化法检测 113例NSCLC中多药耐药相关蛋白 (MRP)、谷胱甘肽巯基转移酶π(GST π)、肺耐药相关蛋白 (LRP)、突变型 p5 3和bcl 2的表达。 结果　NSCLC中MRP、GST π、LRP、p5 3和bcl 2的检出率分别为79.6 5 %、75 .2 2 %、80 .5 3%、6 1.95 %、5 9.2 9%。MRP、LRP和bcl 2的表达与组织学类型有关 (P <0 .0 5 )。p5 3与肿瘤细胞的分化程度有关 (P <0 .0 5 ) ,随着肿瘤细胞分化的恶性程度增加呈递增趋势。MRP与GST π、LRP表达之间 ,p5 3和bcl 2表达之间相关性有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论　不同组织学类型NSCLC的多药耐药性各不相同 ,且其耐药性之间还存在一定的相关性。检测NSCLC的多药耐药性有助于指导肺癌的化疗。     

肺鳞状细胞癌伴神经内分泌分化与生物学特性及预后关系探讨

目的:初步探讨肺鳞状细胞癌的神经内分泌分化(neuroendocrine-like differentiation,ND)情况与生物学行为和预后的关系.方法:收集手术后经病理证实为肺原发鳞癌患者120例瘤组织石蜡标本,术前均未接受放化疗.采用免疫组化二步法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE),突触素(SYN)和嗜铬素A(CGA)的表达,采用X2检验分析ND与肺鳞癌生物学行为之间的关系,分别采用kaplan-meier生存曲线和COX风险比例模型进行单因素和多因素生存分析.结果:120例肺鳞癌中,CGA阳性率46.7%,NSE阳性率60.8%,SYN阳性率36.7%.鳞癌伴ND阳性率为40.8%.相关性分析结果示3种标志物之间无明显相关性.肺鳞状细胞癌伴ND与肿瘤细胞分化程度及瘤体分期(T分期)有关,肿瘤细胞分化越差,瘤体分期越高,ND阳性率越高.SYN的阳性表达与患者的年龄、性别及肿瘤细胞的分化程度有关,年龄越高,女性,肿瘤细胞分化越差,SYN阳性表达率越高.单因素生存分析结果经Log-Rank检验示SYN(X2=3.961,P=0.047)及术后化疗(X2=4.447,P=0.035)与患者的术后生存率有关,而ND与患者术后生存率无明显相关性(X2=0.524,P=0.469).Cox多因素生存分析结果示患者的年龄(OR=0.459,P=0.029),SYN阳性表达(OR=2.114,P=0.036),CGA阳性表达(OR=0.558,P=-0.066)和术后化疗(OR=1.866,P=0.091)与患者预后相关,可作为可切除肺鳞癌患者的独立预后因素.结论:肺鳞癌伴神经内分泌分化与肿瘤细胞分化程度及瘤体分期有关,SYN和术后化疗是评价可手术患者预后的两个重要指标.     

非小细胞肺癌组织中血管内皮生长因子的表达与微血管密度的关系

 目的　探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)组织中血管内皮生长因子 (VEGF)表达和微血管密度(MVD)的关系。方法　采用免疫组化S P法对 76例NSCLC标本中VEGF表达和MVD进行了检测。结果　在NSCLC中鳞癌的VEGF表达阳性率显著高于腺癌 (P <0 .0 5 ) ;VEGF表达阳性率和MVD值与肿瘤组织学分化程度有关 ,低分化癌VEGF表达阳性率和MVD值显著高于中、高分化癌 (P <0 .0 5 ) ;淋巴结转移阳性组NSCLC的VEGF表达阳性率和MVD值显著高于阴性组 (P <0 .0 5 )。结论　VEGF可引起瘤内MVD增多 ,促进肿瘤的生长和转移 ;检测VEGF表达强度 ,可作为判定NSCLC转移潜能和评价预后的指标     

肺腺癌神经内分泌分化与其生物学行为及预后的相关性研究*

目的:探讨肺腺癌的神经内分泌（neuroendocrine,NE）分化的情况及与肺腺癌生物学行为和预后的相关性。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2005~2006年间,随访资料满3 年的86例肺原发性腺癌患者的病例,术前所有患者均未经化放疗处理。石蜡标本采用EnVision 免疫组织化学二步法检测肺腺癌神经内分泌标记物神经元特异性烯醇化酶（NSE）、嗜铬素A（CgA）及突触素（Syn）的表达,同时采用Kaplan-Meier 曲线描述生存率,并行Log-rank 检验。结果:所有肺腺癌患者中,35例伴有NE分化（占40.7%）。 统计学分析表明,肺腺癌伴NE分化与术后复发及癌细胞分化程度相关;另外,CgA 、NSE 及Syn 的阳性率分别为27.9% 、50.0% 、43.0% ,且Syn 的阳性表达与病理分型、肿瘤分化程度、淋巴结转移、术后复发及3 年生存率相关（P=0.001）。 结论:肺腺癌患者是否伴有NE分化可以作为判断肿瘤转移潜能的指标,而联合检测NSE 及Syn 标记物是判断神经内分泌分化较为可靠的指标,Syn 阳性表达提示患者预后不良。      

乳腺癌肿瘤干细胞标记物CD44+ESA+CD24-Λlow在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义

背景与目的:人体各种组织都存在干细胞,肿瘤组织也存在肿瘤干细胞(tumor stem cell,TSC).乳腺癌TSC已经被分离出来,其标记物也已被确定,但肺癌的TSC仍未被分离出来.本研究旨在探讨乳腺癌肿瘤干细胞标记物(CD44 ESA CD24/low)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其意义.方法:应用免疫组织化学法检测77例NSCLC组织中CD44、ESA与CD24的表达.分析其与患者吸烟、肿瘤的大小、癌的组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移和预后的关系.结果:77例NSCLC组织中CD44、ESA与CD24的阳性率分别为63.6%、66.2%和7.8%.低分化及未分化组CD44的阳性率明显高于高分化组,高分化组ESA的阳性率明显高于中度分化组和低分化及未分化组;腺癌组ESA的阳性率明显高于鳞癌组(p<0.05).(CD44 ESA CD24/low标记的阳性率为36.4%,与患者吸烟、肿瘤的大小、癌的组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移和预后无关(P>0.05).结论:乳腺癌肿瘤干细胞标记物((CD44 ESA CD24/low)表达与NSCLC肿瘤的大小、癌的组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移和预后等临床病理学指标无关.     

CD56在小细胞癌组织中的表达及其对诊断的作用

背景与目的:小细胞癌(smallcellcarcinoma,SCC)是恶性度及死亡率高的少见恶性肿瘤,临床病理目前常用神经特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE),触突素(synaptophysin,SYN),嗜铬蛋白(chromograninA,CgA)标记协助诊断,本项目拟研究CD56在小细胞癌组织中的表达并探讨把CD56作为临床病理诊断小细胞癌的标记分子的可能性。方法:收集小细胞癌病例标本共80例,包括肺原发病例42例,其中伴淋巴结转移20例;食管原发病例21例,结直肠原发病例17例。另外随机选取肺非小细胞癌38例作为对照(肺鳞癌26例,肺腺111癌12例),其中淋巴结转移28例。所有标本用CD56,NSE,Syn,CgA,CK和EMA进行免疫组化染色。结果:CD56在肺小细胞癌肿瘤组织及其淋巴结转移灶组织中阳性率显著高于在肺非小细胞癌中阳性率,其在肺小细胞癌原发灶阳性率为90.5%(38/42),转移灶为90.0%(18/20),其在肺非小细胞癌原发灶阳性率为7.8%(3/38),转移灶为3.5%(1/28)(H=85.731,P<0.001),它在小细胞癌肿瘤组织中阳性率明显高于NSE,CgA,CK与EMA的阳性率,其阳性率分别为:CD5686.3%(69/80),Syn78.8%(63/80),CgA73.8%(59/80),EMA66.3%(53/80),CK61.3%(49/80),NSE56.3%(45/80)(H=38.871,P<0.001)。CD56在肺、食管及结直肠小细胞癌中阳性率比较无显著差异,其阳性率分别为肺90.5%(38/42),食管81.0%(17/21),结直肠82.4%(14/17)(H=1.651,P=0.438)。结论:CD56在小细胞癌组织中无论是原发灶还是淋巴结转移灶的阳性率均高,且无器官特异性;CD56可作为临床病理诊断小细胞癌的阳性标记物。     

NSCLC中DNA-PKcs的表达及其与凋亡相关蛋白关系的研究

目的　检测非小细胞肺癌 (NSCLC)中DNA依赖蛋白激酶催化亚基 (DNA PKcs)的表达 ,探讨其与凋亡相关蛋白表达之间的关系。方法　采用免疫组化SP法检测 113例NSCLC患者肿瘤组织中DNA PKcs、p5 3和bcl 2的表达。 结果　NSCLC中DNA PKcs、p5 3和bcl 2的检出率分别为 89.3 8%、61.95 %及5 9.2 9% ;DNA PKcs的表达顺序依次为细支气管肺泡癌 >腺癌 >腺鳞癌 >鳞癌 ,而且DNA PKcs表达水平随肿瘤分化程度的增高亦逐渐增高 ,差异均具有高度显著性 (P <0 .0 5 ) ,但其表达与淋巴结转移无明显关系 ;p5 3在不同临床病理类型NSCLC中的表达无明显差别 ;bcl 2在不同组织学类型NSCLC中的表达顺序依次为鳞癌 >腺鳞癌 >腺癌 >细支气管肺泡癌 ,差异具有高度显著性 (P <0 .0 1) ,但其表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移无关 ;DNA PKcs与 p5 3 (P <0 .0 1)、p5 3和bcl 2 (P <0 .0 5 )的表达之间有显著相关性。 结论　DNA PKcs高表达导致的DNA损伤修复系统活性增高以及突变型p5 3和bcl 2过表达导致的凋亡抑制相互影响、共同作用 ,可能是形成NSCLC放疗抗拒性的重要因素     

神经内分泌分化与p53对非小细胞肺癌预后的影响

目的探讨神经内分泌(neuroendocrine,NE)分化标志物嗜铬蛋白A(CgA)、突触素(Syn)、神经内分泌颗粒和p53对非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)预后的影响。方法62例NSCLC进行含铂类方案新辅助化疗1~2个周期,然后手术治疗,以免疫组化法检测术后标本中NE分化标志物CgA、Syn及p53,以电镜观察标本中神经内分泌颗粒,随访3年,结果采用SPSS11.0统计软件,进行生存率分析。结果p53及NE分化标志物联合p53对非小细胞肺癌患者的无病生存期在统计学上均有显著性差异(P<0.05),NE( )p53(-)患者生存率较高。说明p53和NE分化联合p53与非小细胞肺癌患者的预后有关。结论神经内分泌分化和p53两者联合,用于非小细胞肺癌患者无进展生存期评价具有一定的临床价值。     

乳腺癌伴神经内分泌分化及与预后的关系

目的　探讨乳腺癌中神经内分泌细胞的存在及与预后的关系。方法　采用免疫组化S P法对 5 8例乳腺癌手术标本进行神经内分泌抗体NSE ,Sy ,CgA的测定 ,并用电镜检查证实之 ,同时进行淋巴结转移情况分析。结果　 5 8例乳腺癌病人中NSE ,Sy ,CgA三种抗体表达阳性者 14例 ,占 2 4% ,电镜检查找见肿瘤细胞中存在神经内分泌颗粒。NE+ 者淋巴结转移率 (5 7% )较NE-者淋巴结转移率为高 (2 7% ) ,P <0 0 5。结论　乳腺癌伴有神经内分泌分化是肿瘤异质性的表现 ,是乳腺癌的一种特殊类型 ,具有与一般类型乳腺癌不完全一致的生物学行为 ,在乳腺癌术后治疗方案的决策上需引起应有的重视。     

Expression of neuroendocrine cell markers L-dopa decarboxylase, chromogranin A, and dense core granules in human tumors of endocrine and nonendocrine origin

We evaluated the usefulness of L-dopa decarboxylase (DDC) as a tumor marker of neuroendocrine (NE) cell differentiation by measuring its expression in 432 human tumors of diverse types and origins. A subset of these tumors and cell lines derived from them also were studied for expression of two other general NE cell markers, chromogranin A (CgA) and dense core granules (DCG). High concentrations of DDC were present in 96 of 117 (82%) tumors recognized to be of NE or neural origin. As expected, endocrine tumors not recognized to be of NE cell origin, as well as leukemias, lymphomas, sarcomas, melanomas, and germ cell tumors, lacked DDC expression. Of interest, modest concentrations of DDC were present in 46 of 220 (21%) nonendocrine carcinomas, especially non-small cell lung and colorectal carcinomas. We studied concordant expression of the three NE cell markers in lung and colorectal tumors and cell lines. In both tumor types there was nearly 100% concordance between CgA and DCG expression. There was an excellent correlation between DDC and CgA expression in lung cancers, both small cell and non-small cell, but DDC positive colorectal carcinomas usually lacked CgA expression. We conclude: (a) DDC is an excellent cellular marker for tumors of the NE cell system; (b) about 20% of carcinomas not of NE cell origin, especially non-small cell lung and colorectal carcinomas, express DDC, suggesting a common endodermal origin of all of the respiratory and gastrointestinal mucosal cells; and (c) CgA and DCG are expressed concordantly, indicating that CgA expression may be used as a substitute for ultrastructural examination of tumors for DCG expression.     

肺癌神经内分泌分化与术后生存关系探讨

目的探讨非小细胞肺癌神经内分泌(NSCLC-NE)分化与患者手术后生存关系。方法收集1997年4月-1999年4月98例肺癌手术切除病理标本,采用免疫组化标记特异性烯醇化酶(NSE)及突触素(SY),并按强弱区分为“ 、 、 ”。对同一手术病例标本采用电镜观察特异性NE颗粒。术后病例随访36例,最长60月。采用Cox多因素风险模型分析NSCLC-NE分化与患者术后生存的关系。结果91例为非小细胞肺癌。非小细胞肺癌NE阳性表达率为63.7%(58/91),其中NSE阳性表达54例(59.3%),SY阳性表达22例(24.1%),电镜观察NE特异性颗粒30例(33.0%)。结合免疫组化和电镜观察NSCLC-NE分化44例(48.4%)。Cox模型多因素分析结果表明NSCLC-NE分化者术后生存时间明显缩短(P=0.048)。术后生存与肺癌细胞分化程度(P=0.006)、病理分期(P=0.001)、NE表达强弱(P=0.054)有密切关系。结论NSCLC-NE分化与肿瘤细胞分化和患者术后生存有关。采用NE标志特标记肿瘤,并观察其强弱改变,对术后评估具有较重要的参考意义,可作为临床判断患者预后指标之一。     

乳腺癌肿瘤干细胞标记物CD44^＋ESA^＋CD24^∧ow在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义

背景与目的：人体各种组织都存在干细胞,肿瘤组织也存在肿瘤干细胞（tumor stem cell,TSC）。乳腺癌TSC已经被分离出来,其标记物也已被确定,但肺癌的TSC仍未被分离出来。本研究旨在探讨乳腺癌肿瘤干细胞标记物（CD44^＋ESA^＋CD24^∧ow）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其意义。方法：应用免疫组织化学法检测77例NSCLC组织中CD44、ESA与CD24的表达,分析其与患者吸烟、肿瘤的大小、癌的组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移和预后的关系。结果：77例NSCLC组织中CD44、ESA与CD24的阳性率分别为63．6％、66．2％和7,8％。低分化及未分化组CD44的阳性率明显高于高分化组,高分化组ESA的阳性率明显高于中度分化组和低分化及未分化组;腺癌组ESA的阳性率明显高于鳞癌组（P〈0．05）。CD44^＋ESA^＋CD24^∧ow标记的阳性率为36．4％,与患者吸烟、肿瘤的大小、癌的组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移和预后无关（P〉0．05）。结论：乳腺癌肿瘤干细胞标记物（CD44^＋ESA^＋CD24^∧ow）表达与NSCLC肿瘤的大小、癌的组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移和预后等临床病理学指标无关。