白藜芦醇对人前列腺癌细胞株PC-3增殖及TGF-β1/Smad2信号通路影响研究

目的  探讨白藜芦醇对前列腺癌细胞株PC-3增殖及转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad2信号通路的影响。方法  不同浓度白藜芦醇干预体外培养前列腺癌细胞株PC-3白藜芦醇不同时间。MTT检测白藜芦醇对PC-3细胞生长情况的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测细胞内TGF-β1和Smad2 mRNA和蛋白表达水平的变化情况。  结果  MTT结果显示白藜芦醇显著抑制了前列腺癌细胞的生长。流式细胞结果表明白藜芦醇明显降低了前列腺癌细胞S期含量而增加了G0/G1期含量。而TGF-β1和其下游因子Smad2的mRNA和蛋白水平的表达也明显受到白藜芦醇的抑制,且这种抑制作用呈浓度一时间依赖性。结论  白藜芦醇可能够通过阻断TGF-β1/Smad2信号通路抑制前列腺癌细胞生长前列腺癌。

     

转化生长因子β/Smad信号通路对肝癌的影响研究进展

<正>肝癌是全世界高发的恶性肿瘤,是进展性恶性肿瘤之一~([1]).美国SEER数据库中的资料显示,2008—2012年间肝癌的发病率每年升高3.1%,男性发病率是女性的3倍,男性肝癌患者死亡率每年升高2.8%,女性每年升高3.4%~([2]).美国国家癌症研究所和SEER2016年报告肝癌每年发病人数为39 230人,死亡人数为27 170人.转化生长因子β(TGF-β)是诱导侵袭转移的因子,它在肿瘤不同时     

TGF-β1对人肝癌细胞株HepG2的FGFR4表达的影响及意义

目的 通过观察转化生长因子β1（TGF-β1）对肝癌细胞株HepG2的成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）表达的影响,探讨其抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法 采用Western blot方法检测不同诱导时间（0、0.5、2、6、12、16、24h）、不同TGF-β1浓度（0、0.01、0.1、1、5ng/ml）对HepG2的FGFR4表达的影响.同时观察TGF-β1与不同FGFs联合应用对肝癌细胞增殖的影响.结果 在相同TGF-β1浓度下,FGFR4的表达随时间的延长而增强（P＜0.01）,HepG2细胞数随时间的延长而减少（P＜0.01）.在相同诱导时间下,FGFR4的表达随TGF-β1浓度的增大而增强（P＜0.01）,HepG2细胞数随TGF-β1浓度增加而减少（P＜0.01）.TGF-β1对FGF1、FGF2、FGF7效应均有显著增强作用,可使相应HepG2细胞数显著增加（P＜0.01）;对FGF21效应具有显著抑制作用,可使相应HepG2细胞数显著减少（P＜0.01）.结论 TGF-β1可诱导肝癌细胞株HepG2的FGFR4表达,与FGFs合用可影响肝癌细胞的增殖.     

天然牛磺酸对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

[目的]探讨天然牛磺酸对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响.[方法]Wistar大鼠随机分成对照组、模型组、天然牛磺酸治疗组,采用CCL4诱导肝纤维化模型.酶联免疫吸附法(EuSA)测定血清TGF-β1含量;免疫组织化学法检测肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达;RT-PCR检测肝组织TGF-β1、TβRⅠ和TβRⅡmRNA表达;分别用HE染色和Masson染色.肝组织观察病理组织变化.[结果]治疗组血清TGF-β1含量为(1.65±0.32)μg/L,显著低于模型组(3.93±0.32)μg/L,P＜0.01;治疗组肝组织TGF-β1,Smad3蛋白表达分别为(4.5±0.6)%、(2.5±0.8)%,显著低于模型组(7.5±1.2)%、(3.9±0.8)%,P＜0.05,Smad7为(6.2±1.3)%,显著高于模型组(1.3±0.2)%,P＜0.01;治疗组肝组织TGF-β1,TβRⅠ和TβRⅡmRNA表达分别为0.83±0.21、0.45±0.16、0.63±0.15,显著低于模型组1.62±0.45、0.93±0.24、1.25±0.45,P＜0.01;治疗组肝纤维化分期积分为2.07±0.31,显著低于模型组3.18±0.42,P＜0.01.[结论]天然牛磺酸能抑制TGF-β1及其受体和Smad3的表达,上调Smad7的表达,具有抑制肝纤维化的作用.     

慢病毒介导的TSPY1对肝癌SMMC7721和Huh7细胞系增殖的影响

目的：观察转染睾丸特异性蛋白1（ TSPY1）慢病毒表达载体对肝癌细胞SMMC7721和Huh7细胞系增殖能力的影响。方法构建特异性的TSPY1慢病毒过表达载体稳定转染至SMMC7721和Huh7肝癌细胞系,采用荧光定量PCR和蛋白印迹技术检测TSPY1 mRNA和蛋白的表达情况,Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验检测转染后细胞的增殖情况。结果在转染过表达TSPY1慢病毒的SMMC7721和 Huh7细胞中, TSPY1 mRNA和蛋白的表达均明显上调（ P＜0.01）。 CCK-8细胞增殖实验发现,过表达TSPY1组SMMC7721和Huh7细胞的增殖能力比对照组增强。结论 TSPY1慢病毒表达载体可明显上调TSPY1 mRNA和蛋白表达,并能够促进肝癌SMMC7721和Huh7细胞的增殖。     

内毒素所致肺损伤纤维化时转化生长因子-β1/Smad2信号通路的变化

目的 观察内毒素所致肺损伤早期纤维化大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad2信号通路的变化.方法 24只SD大鼠随机等分为对照组(C组)、内毒素组(LPS组).采用气管内联合腹腔注射内毒素法复制肺损伤早期纤维化模型.实验结束前留取标本测定肺血管通透性(EB值)及肺湿/干重量比(W/D);HE染色观察肺组织病理学改变;Van Gieson染色检测肺组织胶原纤维表达;用免疫组化法和RT-PCR法测定肺组织TGF-β1蛋白及mRNA表达,用免疫印迹法测定肺组织Smad2蛋白的表达.结果 与C组比较,LPS组EB值及W/D值明显升高(P<0.01);LPS组肺组织中胶原纤维及TGF-β1蛋白呈阳性表达,TGF-β1 mRNA和Smad2蛋白表达均较C组明显上调(P<0.01).结论 内毒素所致肺损伤早期纤维化大鼠TGF-β1/Smad2信号被激活,与肺毛细血管通透性、肺损伤纤维化的严重程度密切相关,可能是内毒素所致肺损伤早期纤维化的重要机制之一.     

实验性大鼠肝脏癌变过程中转化生长因子-β1/Smads信号通路系列变化的研究

目的 本研究通过大鼠肝癌模型的建立,观察正常肝脏发展成肝癌过程中转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路变化,对肝癌形成的机制进行一定的探索.方法 用二乙基亚硝胺溶液(DENA)诱导大鼠肝癌模型,免疫组化的方法检测不同时期TGF-β1、磷酸化Smad2、Smad4和Smad7蛋白的表达,半定量RT-PCR检测Smad4 mRNA的表达.结果 正常细胞时TGF-β1和Smad4很少表达,随着肝硬化的发展,两者的表达均明显增强,但DENA处理22周后的肝组织中Smad4表达明显下降,肝癌降低更显著;正常细胞可有较多磷酸化Smad2的表达,DENA处理8周时表达明显减少,后逐渐增多,DENA处理16周、22周时磷酸化Smad2的表达接近正常水平,但肿瘤内表达明显减少,并显著低于DENA处理8周时;正常肝细胞可见Smad7的表达,随着肝硬化的发展而加重,DENA处理22周时的肝组织达到最高,肝癌的表达仅略低于22周时的肝组织.结论 肝癌的发生机制非常复杂,大鼠肝硬化晚期Smad4表达的减少、甚至消失,TGF-β1和Smad7的过高表达,磷酸化Smad2的减少,在大鼠肝癌的发生、发展中都起着非常重要的作用.     

凝血酶对人肝癌细胞株HepG_2增殖影响及诱导凋亡作用研究

目的 观察凝血酶对人肝癌细胞株HepG_2增殖的影响及其诱导凋亡的作用.方法 体外培养人肝癌细胞HepG_2,MTT法观测不同浓度凝血酶在不同时间点对肝癌细胞增殖的影响,TUENL法检测其诱导凋亡作用.结果 高浓度凝血酶对肝癌细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05),当浓度大于100 U/ml作用时间在48 h后,其抑制率最高可达到(39.08±2.32)%,且不随浓度的提高和时间的延长而增加;高浓度凝血酶能够诱导肝癌细胞凋亡,当浓度大于100 U/ml且作用时间大于48 h后,各组凋亡指数无显著性差异(P>0.05).结论 高浓度凝血酶能够明显抑制体外生长的人肝癌细胞株HepG_2并诱导肝癌细胞凋亡,且存在一定时间(48 h内)及浓度(<100 U/m1)依赖性.     

姜黄素诱导人肝癌细胞系Huh7自噬和凋亡

目的 探讨姜黄素诱导人肝癌细胞Huh7自噬和凋亡的作用,以及抑制自噬对姜黄素诱导凋亡的影响。方法 将姜黄素（5、10、20、40 μmol/L）加入人肝癌细胞系Huh7的培养液中,用CCK-8检测细胞增殖水平变化。Huh7细胞用5~40 μmol/L姜黄素培养48 h,通过蛋白质印迹法检测自噬微管相关蛋白1轻链3（LC3）-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值,免疫荧光法检测自噬小体的形成,评估Huh7细胞自噬水平的变化。通过流式细胞术检测Huh7细胞凋亡情况。加入5 mmol/L自噬抑制剂3-甲基嘌呤（3-MA）和20 μmol/L姜黄素培养Huh7细胞,检测Huh7细胞凋亡水平和自噬水平的变化。结果 CCK-8检测显示姜黄素能抑制Huh7细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）,且细胞凋亡率随着姜黄素浓度的升高而上升;蛋白质印迹检测显示加入姜黄素后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值上升（P<0.05,P<0.01）,免疫荧光检测显示加入20 μmol/L姜黄素后自噬小体增多。与单独使用20 μmol/L姜黄素培养的Huh7细胞相比,姜黄素联用3-MA培养的Huh7细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值下降（P<0.01）,自噬小体减少。流式细胞术检测发现5~40 μmol/L姜黄素促进了Huh7细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,而联用3-MA后与单独使用20 μmol/L姜黄素培养相比引起的Huh7细胞凋亡减少（P<0.05）。结论 姜黄素能诱导Huh7细胞凋亡、抑制细胞增殖并促进细胞自噬,抑制自噬能减弱姜黄素对Huh7细胞的诱导凋亡效应。     

脂多糖诱导成骨细胞增殖的Notch信号通路研究

目的:探讨脂多糖(LPS)对成骨细胞增殖的Notch信号通路的诱导激活作用.方法:以MC3T3-E1细胞为模型,设计正常对照组、LPS浓度梯度组(5、10μg组)、DAPT组(先加入DAPT,随后加入10μg LPS)和DMSO组(先加入DMSO,随后加入10μg LPS).分别于OBDM培养基中诱导分化5d和15d时加入不同浓度的脂多糖、DAPT和DMSO,培养3d后进行MTT实验,随后采用PCR检测各组细胞中HES1mRNA表达量.结果:与对照组相比,加入脂多糖5μg组第5天,脂多糖10 μg组第5、6、7天时细胞吸光度显著降低(P＜0.01);与正常对照组相比,5μg组和10 μg组脂多糖均能够使MC3T3-E1细胞和成骨细胞前体细胞增殖能力降低(P＜0.01),而仅5μg组LPS能够使成骨细胞增殖分化能力降低(P＜0.01);不同浓度LPS均能够诱导HES1mRNA的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);随着LPS浓度增加,HES1mRNA表达量显著增加(P＜0.01);与对照组相比,DM-SO组HES1mRNA量显著较高,差异具有统计学差异(P＜0.05).结论:脂多糖抑制骨头发育和愈合,可能是通过激活经典的Notch信号通路,诱导HES1mRNA的表达,抑制成骨细胞及其前体细胞的增殖分化造成.     

益生菌调控mTORC1信号通路干预骨质疏松的相关研究进展

骨质疏松症是一个世界性难题，已成为一种常见的慢性骨骼疾病，全世界>2亿患者受其影响。其主要特征是骨密度和骨质量的进行性下降，以及骨微结构的破坏。目前，益生菌在治疗骨质疏松方面表现出光明的前景，基本无副作用，具有价格低廉、易普及、效果显著的优点，未来有可能成为治疗骨质疏松的特殊选择。但是，关于益生菌治疗骨质疏松的具体机制尚不十分明确。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）普遍存在于人体细胞中，控制着许多细胞的生长过程。mTORC1与骨质疏松关系密切，成为调节成骨细胞和破骨细胞生长与繁殖的主要效应物。益生菌可通过调节体内多种信号因子水平来调控mTORC1信号通路，从而发挥抗骨质疏松的重要作用，了解益生菌干预骨质疏松的相关信号通路将有助于关注未来的研究方向，帮助制订有效的治疗策略。     

Hedgehog通路阻滞剂GANT61对胰腺癌细胞株的抑制作用

目的：探讨Hedgehog信号通路特异性阻滞剂GANT61抑制本通路在胰腺癌细胞株中的表达,观察胰腺癌细胞株增殖、迁移等能力的改变,为胰腺癌的治疗提供基础实验数据。方法：采用多株胰腺癌细胞,半定量RT-PCR法从中检测出Hedgehog通路表达相对活跃的细胞株,采用不同浓度的GANT61处理细胞株后,MTT法检测细胞株增殖活力改变,细胞划痕实验检测细胞迁移能力改变。结果：采用GANT61处理后,随着浓度的增加,胰腺癌细胞株增殖活力下降,迁移能力降低。结论：GANT61可通过抑制Hedgehog信号通路的表达,有效抑制胰腺癌细胞株的增殖、迁移等,为GNAT61药物在临床治疗胰腺癌提供扎实的理论基础。     

抑制TNFR/RIPK信号通路对神经细胞凋亡的影响及机制研究

【摘要】 目的 研究抑制TNFR/RIPK信号通路对急性脊髓损伤（ASCI）大鼠神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法 160只雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组、模型组、Nec 1组,每组又根据时间点分为12h、24h、3d、7d四个亚组。采用动脉夹钳夹法制作ASCI模型,空白对照组不做任何处理,假手术组仅暴露脊髓,不损伤脊髓,模型组和Nec 1组用动脉瘤夹脊髓全横截面1min,缝合伤口。空白对照组、假手术组和模型组注射给予生理盐水,Nec 1组注射坏死性凋亡抑制剂Necrostain 1（Nec 1）溶液1μl/kg,1次/d,分别给药12h、24h、3d、7d。给药后以BBB评分对各组大鼠后肢神经功能恢复情况进行评分,完成评分后,取10只给药7d的大鼠脊髓,进行HE染色、Nissl染色、碘化丙啶（PI）染色、Tunel染色;另取10只给药7d的大鼠,取脊髓,用Western Blot检测RIP1、RIP3、Bcl 2蛋白表达情况。结果 模型组和Nec 1组各时间点的BBB评分均显著低于空白对照组和假手术组（P＜005）,Nec 1组各时间点的BBB评分显著高于模型组（P＜005）。造模7d后,模型组脊髓出现坏死、空洞现象,大量炎性细胞浸润,坏死区域面积显著高于假手术组（P＜005）;尼氏体呈细颗粒状,神经元数量减少、染色浅、排列无序,坏死性凋亡细胞较多;PI红染细胞、Tunel阳性细胞数、凋亡小体数量,以及RIPK1、RIPK3、Bcl 2蛋白表达水平显著多于假手术组（P＜005）。给予Nec 1治疗7d后,Nec 1组脊髓坏死组织较模型组少,空洞现象得到改善,炎性细胞浸润现象好转,Nec 1组坏死区域面积显著低于空白对照组和假手术组（P＜005）;尼氏体着色的神经元细胞染色较深,颗粒变粗,存活神经元数量显著高于模型组（P＜005）;PI红染细胞数、凋亡小体数,以及RIPK1、RIPK3蛋白表达水平显著少于模型组（P＜005）,Bcl 2蛋白表达水平显著高于模型组（P＜005）。结论 坏死性凋亡抑制剂Nec 1能通过抑制TNFR/RIPK信号通路,下调RIPK1、RIPK3、上调Bcl 2的表达来缩小ASCI损伤面积,缓解炎症浸润,减少损伤周围神经元数量,改善神经元功能,提高损伤神经元及胶质细胞存活率,改善大鼠BBB评分,抑制坏死性凋亡。     

小细胞肺癌中Notch1信号通路、ASCL1与EMT关系研究进展

小细胞肺癌(SCLC)是人类常见恶性肿瘤之一,其具有转移率和复发率高、对初始化疗敏感、易获得化学耐药等特征.上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肿瘤细胞发生侵袭、转移前重要的细胞表象,EMT的发生与多种细胞因子、信号传导通路及转录因子有关.尽管Notch途径激活在非小细胞肺癌(NSCLC)中起着致癌的作用,但在神经内分泌肿瘤(neuroendocrine tumors,NET)中,Notch通路激活抑制肿瘤生长.在SCLC中,Notch1通路激活可以诱导产生E-钙黏蛋白(E-Cadherin),增强细胞的粘附,诱导间质-上皮转化,从而抑制EMT过程.ASCL1(achaete-scute complex homologue 1)是SCLC一种系特异性基因,其编码的转录因子同样具有促进神经内分泌分化、EMT的功能.Notch1信号通路可以抑制ASCL1的转录,同时也可对ASCL1进行转录后调节.因此,可通过激活Notch1信号通路、抑制ASCL1表达从而抑制SCLC的发生、侵袭和转移.     

转染LKB1基因乳腺癌细胞与胚胎发育信号通路及cAMP/PKA通路的关系

 目的 探讨抑癌基因LKB1与胚胎发育(Sonic Hedgehog,SHH)信号通路、cAMP/PKA信号通路之间的相互关系。方法 抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA MB 231,分MDA MB 231组(231组)和转染LKB1基因的MDA MB 231(LKB1组)两组,每组分别采用0、 5×10-6、1×10-5、2×10-5mol/L等4种浓度的SHH信号通路抑制剂环靶明(cyclopamine)作用于细胞,各小组细胞分别用RT PCR法和Western blot法检测SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA表达水平和蛋白表达水平,用cAMP、PKA试剂盒检测cAMP、PKA数值水平。 结果 LKB1组的细胞通过不同剂量环靶明抑制后,SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA和蛋白表达水平相应较231组明显抑制,且与环靶明剂量呈正相关,抑制效果在环靶明浓度为10×10-6mol/L时最明显,继续增加环靶明浓度到20×10-6mol/L,抑制效果保持不变。231组和LKB1组中细胞的PKA和cAMP数值均随环靶明浓度增加而增高,至10×10-6mol/L时达到最高,继续增加环靶明浓度到20×10-6mol/L,两组中的PKA和cAMP数值保持不变。在相同环靶明浓度下,LKB1组中PKA和cAMP数值高于231组中相应数值。结论 抑癌基因LKB1协同环靶明抑制乳腺癌MDA MB 231细胞的SHH信号通路的同时亦协同增加cAMP/PKA信号通路的表达,且在环靶明浓度为10×10-6mol/L时效果最明显;推测存在LKB1 SHH cAMP/PKA通路。     

PD-1/PD-L1信号通路及其在肿瘤中的应用

程序性死亡受体（PD）-1/PD-L1信号通路作为T细胞免疫反应的协同刺激信号通路,在适应性免疫中发挥着重要的作用。 PD-1是一种主要表达在T细胞上的共受体,与其配体（PD-L1,PD-L2）结合能够抑制T细胞的活化,使机体免受自身免疫系统的攻击。除了调节并维持自身免疫耐受,在肿瘤细胞中PD-L1的表达上调,而在被病毒感染的T细胞中PD-1的表达也会上调,PD-1/PD-L1参与了肿瘤细胞及传染性病原体的免疫逃逸,因此阻断PD-1/PD-L1信号通路已成为肿瘤和慢性传染病研究的热点。目前,已经有多个抗PD-1、PD-L1单克隆抗体被FDA批准进入临床试验,用于癌症的治疗,疗效显著。     

紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖抑制作用及其机制

目的:研究紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖抑制作用,探讨药物作用过程中与MAPK通路?Bcl-2基因家族关系及相关机制?方法:采用CCK-8试剂盒检测不同浓度紫杉醇?顺铂单独或联合作用MCF-7细胞48 h后对细胞增殖的50%抑制浓度(IC50),以及紫杉醇?顺铂分别联合ERK通路阻断剂(U0126)?JNK通路阻断剂(sp600125)对细胞增殖的抑制率;采用流式细胞仪检测紫杉醇?顺铂作用细胞48 h后的细胞周期分布情况;应用Western blot分别检测紫杉醇?顺铂及两药联合作用MCF-7细胞48 h后MAPK通路蛋白及Bcl-2?Bax蛋白表达?结果:紫杉醇(0.025~0.400 μmol/L)?顺铂(1~16 μmol/L)联合作用细胞时呈协同作用(CI < 0.95)?sp600125对MCF-7细胞增殖具有明显的抑制作用,sp600125联合紫杉醇?顺铂的抑制作用强于紫杉醇?顺铂单独作用细胞时的抑制作用?两药联合时处于G2期的细胞较紫杉醇单独作用时减少,较顺铂单独作用增加?紫杉醇?顺铂联合作用细胞48 h后p-ERK?Bcl-2蛋白表达较两药单独作用时降低,p-JNK/SAPK?p-p38蛋白表达较对照组明显增加?结论:紫杉醇联合顺铂作用MCF-7细胞时具有协同作用,两药与JNK通路阻断剂联用时对细胞的抑制作用强于单独用药时?紫杉醇联合顺铂时可以减少细胞在G2/M期的积聚,同时可以激活JNK?p38通路,抑制ERK通路的激活?