套式PCR鉴定精液解脲脲原体培养结果报告

应用套式（Ｎｅｓｔｅｄ）ＰＣＲ鉴定７０例精液解脲脲原体培养结果。显示两种方法的阳性符合率为７８．０４％，其中包括：１．培养结果２４－４８小时阳性，而后转阴性１３例，经套式ＰＣＲ检测６例阳性，阳性率为４６．１％，占阳性经率的１６．２％（６／３７）。２．培养７２小时后才显示阳性结果６例，经套式ＰＣＲ检测均为阳性，占阳性比率的１６．２％（６／３７），说明培养法只能用于初筛。     

解脲脲原体的实验室检测方法的研究现状

解脲脲原体是一种条件致病菌，多与宿主共存，仅在某些条件下引起机会性感染，感染部位常为男女泌尿道，其中更易致病的为U．urealyticum型。近年来检测解脲脲原体的方法主要有液体培养法、固体培养法、免疫学方法和分子生物学方法等等，这些检测方法各有优劣。本文就临床使用较多的液体培养法、固体培养法和分子生物学方法进行重点分析，希望能给临床提供更多的帮助。     

免疫组化法检测解脲脲原体的研究

目的　建立检测解脲脲原体 (UU)的实验方法。方法　应用亲和素 生物素 酶复合物技术 (ABC法 )观察UU感染者 ,并与培养法和PCR法相比较。结果　ABC法对 75例临床标本的检出率为 5 2 % ,与培养法和PCR法比较 ,在统计学上差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　ABC法可作为诊断UU感染的快速检测方法 ,在临床应用中有一定实用价值。     

PCR法解脲脲原体分群和四环素耐药检测

目的 建立解脲脲原体(Ureaplasma urealyxicum，Uu)的分群和四环素耐药PCR检测方法。方法 1．根据Uu的多带抗原(multi—banded antigen，MBA)基因序列自行设计引物(P15′-ATT，TGC，AAT，CTT，TAT，ATG，TT；P25′-TTC，AGC，TGA，TGT，AAG，TGC，AGC，ATT，AAA，T)，并建立分群PCR反应体系。2．根据TetM基因序列自行设计引物(P15′-TTA，TCA，ACG，GTT，TAT，CAG，G；P25′-GCT，ATA，TAT，GCA，AGA，CG)，并建立四环素耐药反应体系。结果 1．MBA基因PCR能将Uul4个血清型正确分为二个生物群，其中生物一群(1、3、6、14等4个血清型)出现404bp的产物带，生物二群(2、4、5、7、8、9、10、11、12、13等10个血清型)出现448bp的产物带。60株Uu临床分离株经MBA基因PCR检测，生物一群53例、生物二群6例、生物一／二群同时存在1例。2.Uu典型株14个血清型，TetM基因PcR扩增的不能出现任何条带；60株Uu临床分离株经TetM基因PCR检测41例出现目的条带。结论 PCR法进行Uu生物分群和四环素耐药检测简单、快速，为相关研究提供了手段。     

解脲脲原体感染对附睾上皮分泌功能影响的研究

目的　探查解脲脲原体感染与男性不育的关系。方法　本文采用DTNB法及Tremblay方法 ,分别对 4 0名患有解脲脲原体感染的男性不育患者 (不育组 )和 4 2名正常生育男性 (对照组 )精浆肉毒碱含量及α 糖苷酶活性测定。结果　解脲脲原体感染的男性不育患者的这两项指标明显低于正常生育男性 ,其中不育组和对照组精浆肉毒碱含量分别为 (94 1 2± 5 7 5 9)和 (2 5 6 4 6± 99 5 8)nmol/ml,两者间差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;α 糖苷酶活性分别为 (2 8 4 2± 2 1 84 )和 (4 2 1 2± 2 1 5 5 ) ,两者间差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　解脲脲原体感染可能破坏附睾上皮 ,影响附睾的分泌功能而导致男性不育     

解脲脲原体生物膜胞外多糖的检测

目的 研究解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)4个型别标准株在体外形成的生物膜之胞外多糖的分布及结构成分.方法 将Uu标准株Parvo群中4、8血清型和T960群中3、14血清型进行体外生物膜培养后,扫描电镜下观察生物膜组成及结构,并在FITC-ConA/PI及ECA/PI双荧光染色后进行激光共聚焦显微镜观察及测定平均荧光强度.秩和检验及t检验分别比较两种荧光标记物、两生物群的总体平均荧光强度的差异.结果 4个型别Uu标准株均可在体外形成生物膜,生物膜结构主要呈网格状,胞外物质占大部分比例.在激光共聚焦显微镜下,Uu生物膜胞外多糖均可被FITC-ConA和ECA染色,FTTC-ConA呈网格状分布,ECA小片状聚集分布.FITC-ConA的总体平均荧光强度较ECA高,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 Uu体外培养生物膜主要呈网格状结构,胞外多糖中含有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、N-乙酰葡聚糖残基,并以葡萄糖、甘露糖残基为主.     

输卵管妊娠患者宫颈拭子解脲脲原体套式PCR检测

近年来，有关解脲脲原体（ＵＵ）感染与盆腔炎症性疾病（ＰＩＤ）的关系报道较多。但生殖道ＵＵ感染与输卵管妊娠的关系研究报道甚少。为此，我们应用更为灵敏、特异的套式ＰＣＲ技术检测了１７例输卵管妊娠患者的宫颈拭子ＵＵ－ＤＮＡ，并以同期５３６例非输卵管妊娠妇科住院病人宫颈拭子为对照组。     

妇科疾病中的解脲脲原体、沙眼衣原体Nesed-PCR检测

目的探讨UU、CT在本地区妇科疾病中的发病率及其致病作用,方法收集535例妇科阴道炎、不孕症、宫颈炎、附件炎等疾病患者的阴道分泌物,应用nested PCR(nPCR)技术检测解脲脲原体(UU)及沙眼衣原体(CT)核酸.结果393人检测解脲脲原体(UU),UU-DNA阳性192例(48.8%);142人检测沙眼衣原体(CT),CT-DNA阳性32例(22.5%).结论解脲脲原体(UU-DNA)、沙眼衣原体(CT-DNA)与妇科疾病的发生关系密切,特别是阴道炎的妇科患者.     

解脲脲原体套式（Nested）PCR检测研究

本文报告解脲脲原体（ＵＵ）的套式（ＮＥＳＴＥＤ）ＰＣＲ检测方法。经方法学考核表明，本法的特异性、灵敏度以及试剂的稳定性和对临检标本的顺应性均较好。９３份各种生殖道炎症患者之宫颈拭子标本套式ＰＣＲ检出２１份阳性（阳性率２２．６％），而市售ＰＣＲ试剂盒仅检出１份阳性（阳性率１．１％）。前者阳性检出率明显高于后者（Ｐ＜０．０１）。     

100例不育症患者解脲支原体和沙眼衣原体定量分析

目的为了分析不育症和非淋茵性尿道炎患者感染解脲支原体和沙眼衣原体定量检测结果的差异.方法荧光定量多聚酶链式反应(FQ-PCR)技术连续对100例(有97例作了UU检测,84例作了CT检测)本院生殖中心不育症患者及同时时662例(有470例作了UU检测,540例作了CT检测)普通性病和妇科门诊非淋患者CTDNA和UUDNA进行了定量检测.结果不育组UU阳性率=57/97(58.76%),UU拷贝对数值6.016±1.044;CT阳性率=7/84(8.33%),CT拷贝对数值4.968±2.190.普通非淋组UU阳性率=209/470(46.60%),UU拷贝对数值6.131±1.385;CT阳性率=62/540(11.48%),CT拷贝对数值5.894±1.943.结论UU是引起非淋和不育症的主要病原体.UU相对于CT对人类生育的危害更为严重.不育组和普通非淋组UU的定量结果没有统计学差异,而普通非淋组的CT的拷贝数则高于不育组,P＜0.05.     

Characterization of the macrophage-stimulating activity from Ureaplasma urealyticum

PROBLEM: Intra-amniotic infection is the most common cause of preterm labor. Infections are thought to cause preterm labor by increasing the production of proinflammatory cytokines at the maternal-fetal interface. Experiments with cell culture and animal models have indicated that bacterial lipopolysaccharide (LPS) increases the production of proinflammatory cytokines in reproductive tissues. The majority of intrauterine infections, however, are associated with Ureaplasma urealyticum, which does not contain LPS. Therefore, we performed a series of experiments to understand better the bacterial factor(s) that are responsible for the proinflammatory effects of U. urealyticum. METHOD OF STUDY: U. urealyticum was cultivated in 3-4 L 10B broth, harvested by centrifugation, washed with saline and frozen at -85 degrees C until use. Cells were then extracted with Triton X-114 and the macrophage-stimulating activity (MSA) of the preparations was studied by evaluating their ability to stimulate tumor necrosis factor-alpha production by a monocytic cell line (THP-1 cells). Additional studies involved testing the sensitivity of the detergent extracts to heating, alkaline hydrolysis and proteinase K digestion. Interaction of Triton X-114 extracts with Toll-like receptor (TLR)-2 and TLR-4 was evaluated using cell lines transfected with one of these receptors, CD14 and a reporter gene. RESULTS: Extraction of U. urealyticum with Triton X-114 demonstrated that the MSA preferentially partitioned to the detergent phase. The MSA of the detergent extracts was abrogated by proteinase K digestion or alkaline hydrolysis but only partially inhibited by heating. Further studies suggested that the detergent extracts could activate both TLR-2 and TLR-4. CONCLUSION: These experiments suggest that the MSA of U. urealyticum is lipophilic, sensitive to alkaline hydrolysis and proteinase K digestion, partially sensitive to heating. These properties are consistent with the activity being due to a lipoprotein. Unlike other Mycoplasma species, the MSA of U. urealyticum appears to interact with both TLR-2 and TLR-4. Purification of the molecule(s) that regulate this activity may provide good therapeutic targets for anti-inflammatory strategies to prevent preterm labor caused by intrauterine infection with U. urealyticum.     

荧光定量PCR以及培养法检测男性不育症患者液解脲支原体结果的比较分析

目的 研究解脲支原体(UU)感染在男性不育症患者中的意义以及对其培养法和荧光定量PCR两种方法检测结果进行比较分析.方法对342例男性不育症患者和198例对照组同时进行UU培养和荧光定量PCR检测,培养法同步伴有药物敏感试验的结果.结果在不育症患者中培养法和荧光定量PCR检测UU的阳性率分别为43.0%和55.8%,在对照组中则分别为25.3%和29.8%,经x<'2>检验在男性不育症患者中两种方法检测UU的阳性率均显著高于对照组,P<0.005;荧光定量PCR的阳性率显著高于培养法,P<0.005;药物敏感试验结果显示UU培养法阳性者对克拉霉素敏感性最高,敏感率为97.4%,对环丙沙星耐药性最高,耐药率为62.1%.结论UU检测可对男性不育症患者的病因诊断和临库治疗提供实验依据.荧光定量PCR检测UU的敏感性要高于培养法,但是培养法的药敏试验可及时准确的指导临床选择用药.     

女性NGU与单纯解脲脲原体感染的分群分型初步研究

目的探讨女性非淋菌性尿道炎或宫颈炎（NGU）与解脲脲原体（Uu）分群和分型的关系。方法采用液体培养,A7固体分离,液体纯化的方法获得Uu纯菌株,分别对114例女性单纯Uu感染的NGU和113例单纯Uu感染的女性携带者的Uu做PCR分群和生长抑制试验分型。结果NGU组1群56例（49.12%）,2群58例（50.88%）。正常组1群51例（45.13%）,2群62例（54.87%）;NGU组Uu分型阳性率最高依次为2型、7型、6型,正常人组最高依次为7型、2型、14型。结论Uu感染所致NGU与Uu分群关系不大。     

解脲支原体的PCR快速检测技术在临床上的应用

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增解脲支原体４２９ｂｐＤＮＡ片段靶基因，检测２０９６例临床疑为非淋菌感染，阴道炎病人宫颈分泌物，检出阳性７８４例，阳性率为３７．４０％。     

解脲脲原体Parvo和T960生物群msr基因的检测

目的 检测解脲脲原体(Uu)是否携带介导对红霉素耐药的msr基因,并分析其在Uu两生物群间分布的差异.方法 采用微量肉汤稀释法测定72株Uu临床株对红霉素的体外耐性,PCR检测msrA、msrB、msrG、msrD基因,并对Uu进行PCR分群.结果 72株Uu的最低抑菌浓度(MIC)范围是≤0.125 μg/ml≥128 μg/ml,MIC_(50)为32 μg/ml,MIC_(90)≥128μg/ml.分群结果示Parvo生物群51株,占70.83%,T960生物群21株,占29.17%.共检测到msrD基因的Uu24株,msrB基因12株,msrA基因1株,没有发现Uu菌株携带msrC基因.5株Uu同时检测到msrB和msrD基因,1株Uu同时检测到msrA、msrB和msrD基因.以MIC≥8μg/ml为耐药判定值时,两生物群对红霉素耐药性无显著差异,msrB基因主要分布在T960生物群.结论 Uu临床菌株携带对大环内酯类耐药的msr基因(包括msrA、msrB、msrP),msrB基因主要分布在T960生物群.     

解脲支原体感染与早产儿呼吸系统疾病的相关性

目的探讨解脲支原体定植在早产儿肺部疾病中的作用。方法对胎齢小于32w的行机械通气的早产儿的气道吸引物进行培养,查找分离解脲支原体,并对阳性组和阴性组进行对照分析。结果143个病例中有39例(27%)分离培养阳性。阳性者呼吸窘迫综合征发生率明显低于阴性者(P=0.002)。多元回归分析显示,在单胎儿中,只有解脲支原体定植是呼吸窘迫症(RDS)的独立预测因子(OR=0.38;P=0.02),胎龄(OR=0.47;P=0.006)和解脲支原体阳性(OR=3.1;P=0.05)都是慢性肺部疾病(CLD)的独立预测因子,这里的CLD是按新法定义的:纠正胎龄达到36周仍需要氧疗。结论解脲支原体气道内定植能预防早产儿发生RDS,但却使早产儿CLD的发病率增加。