TNF-α通过NF-κB信号通路调控宣威肺癌恶性生物学行为

摘 要：［目的］ 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）通过影响核因子-κB（NF-κB）信号通路对宣威肺癌恶性生物学行为的调控。［方法］ ELISA检测临床收集宣威肺癌、非宣威肺癌及正常人血清样本中TNF-α水平。RT-qPCR、Western blot检测人支气管上皮样细胞16HBE、人肺腺癌细胞A549及宣威肺癌细胞XWLC-05中TNF-α;CCK-8检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测NF-κB经典及非经典信号通路相关蛋白水平。［结果］ TNF-α在宣威肺癌患者血清及细胞中显著性高表达,差异均有统计学意义（P<0.05）。沉默TNF-α不仅阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,并促进凋亡（P<0.05）;也抑制NF-κB经典信号通路。XWLC-05被外源性TNF-α促进的恶性生物学行为可被NF-κB信号通路抑制剂扭转（P<0.05）。［结论］ TNF-α通过激活NF-κB经典信号通路促进宣威肺癌细胞恶性生物学行为。     

P2X7R激动剂BzATP对非小细胞肺癌A549细胞生长和凋亡的影响

目的 研究配体门控离子通道P2X7受体(P2X7R)在非小细胞肺癌A549细胞中的表达,观察P2X7R激动剂2'-3'-O-(4-苯甲酰-苯甲酰)腺苷三磷酸三乙烷胺盐(BzATP)对A549细胞生长及凋亡的影响,并探究相关作用机制.方法 采用免疫荧光法检测P2X7R在A549细胞中的表达.用不同浓度的BzATP(150、300、600 μmol/L)处理,未用BzATP干预的细胞作为对照组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)和Hoest33342染色法分别检测细胞存活率与凋亡情况,酶联免疫吸附试验检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,Western blotting检测核转录因子-κB(NF-κB) p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)及磷酸化NF-κB抑制因子α(phospho-IκBα)蛋白的表达.结果 P2X7R在A549细胞膜上表达.在300、600 μmol/L BzATP作用下A549细胞存活率分别为(67.87±8.98)％、(44.73±6.92)％,较对照组(98.60±1.44)％明显下降,差异均具有统计学意义(=4.481,P=0.027;t =3.920,P=0.038).BzATP可促进细胞凋亡,并且300、600 μmol/L BzATP可上调细胞培养上清中TNF-α浓度,分别为(57.35±6.41)pg/ml、(78.63±11.33) pg/ml,与对照组(42.56±0.37) pg/ml比较差异具有统计学意义(t=6.410,P=0.035;t=11.330,P=0.005).此外,BzATP可下调NF-κB p65的表达,上调IκBα的表达,对phospho-IκBα的表达无明显作用.结论 P2X7R表达于A549细胞膜,BzATP能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与促进细胞中TNF-α的释放,抑制NF-κB通路有关.     

石斛酚通过NF-κB/PRL-3 通路抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭

[摘要] 目的: 探讨石斛酚对人成骨肉瘤U20S 细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用及其分子机制。方法：用不同质量浓度（10、25、50、75、100、150 μmol/L）的石斛酚处理U20S 细胞24、48 h 后,用CCK-8 法检测石斛酚对U20S 细胞增殖能力的影响。Transwell 实验检测25、50 μmol/L的石斛酚对U20S 细胞迁移、侵袭能力的影响,在脂多糖（LPS）诱导U20S 细胞炎症反应的基础上,再以石斛酚处理,qPCR、WB法分别检测U20S细胞中NF-κB（p65）、TNF-α、IL-6、PRL-3 mRNA和蛋白的表达水平。结果：不同质量浓度的石斛酚作用不同时间对肉瘤细胞U20S 增殖均具有抑制作用（P<0.05 或P<0.01）;25、50 μmol/L的石斛酚能够明显抑制骨肉瘤U20S细胞的迁移及侵袭能力（均P<0.01）,同时能够抑制细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3 等蛋白的表达（P<0.05 或P<0.01）;LPS诱导后,U20S 细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高（均P<0.01）,25、50 μmol/L的石斛酚处理后均能够降低U20S细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3 mRNA和蛋白的表达水平（P<0.05 或P<0.01）。结论：石斛酚对骨肉瘤U20S细胞增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,其作用机制可能与调控NF-κB/PRL-3 信号通路有关。     

Gambogic Acid通过影响NF-κB信号通路诱导A549细胞凋亡

目的:研究Gambogic Acid（GA）对人非小细胞肺癌A549细胞系中NF-κB信号通路的影响及其对细胞凋亡的促进作用。方法:Western blot法和共聚焦显微镜成像技术检测GA对NF-κB的信号通路的影响,MTT及流式细胞（FCM）术检测GA对A549细胞的促凋亡作用。结果:Western blot发现GA能显著抵抗TNF-α诱导导致的IκB磷酸化水平上升及IκB的降解;共聚焦显微镜成像进一步发现GA有效阻止了NF-κB入核;MTT结果显示GA能显著抑制A549细胞的增殖,当药物浓度为5.0μmol/L时抑制率可达到（93.5±6.5）％（P<0.05),IC50值为1.2±0.4 μmol/L;凋亡检测结果显示A549细胞在0.0、0.5、1.0、2.0、3.0及5.0 μmol/L药物处理下细胞凋亡率分别是（6.0±0.7）%、（15.5±2.3）%、（35.0±3.6）%、（43.5±2.7）%、（43.0±3.8）%及（53.7±2.6）%（P<0.05);结论:实验表明,GA能有效地抑制A549细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能是通过影响NF-κB信号通路而发生作用。     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,不同处理因素按指定时间作用后,RT-PCR检测NF-κBp65mRNA的表达,免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果静息状态下,在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平,TNF-α诱导Hela细胞NF-κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关,NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng/mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化,抑制率为49.69%,并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用,凋亡增加率为57.52%。结论TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

粉防己碱通过NF-κB通路抑制肿瘤相关成纤维细胞分泌IL-8阻断肺腺癌细胞的侵袭转移

摘 要：［目的］ 研究粉防己碱（tetrandrine,Tet）通过调控肿瘤相关成纤维细胞（CAF）旁分泌因子的表达抑制肺腺癌细胞侵袭转移的作用效应,探讨NF-κB通路在Tet抑制CAF分泌IL-8促进肺腺癌细胞侵袭转移中的重要作用。［方法］ 采用条件培养基（CM）刺激胚肺成纤维细胞MRC5建立CAF模型,Western blot实验分析Tet作用前后NF-κB通路蛋白IKK、IκB和p65表达和磷酸化水平,ELISA实验检测Tet作用前后CAF分泌IL-8情况,以及Tet对CAF诱导肺腺癌细胞H1975侵袭转移的影响。抗体封闭培养基中游离的IL-8,分析CAF诱导H1975细胞侵袭转移能力的变化,验证IL-8是否Tet调控CAF旁分泌因子的表达抑制H1975细胞侵袭转移的关键因子。［结果］ Tet作用24h,CAF中NF-κB通路蛋白IKK、IκB和p65蛋白的磷酸化水平显著性下降;Tet组培养基上清液中IL-8含量为（151.7±24.8）pg/ml,显著性低于模型组的（384.7±39.5）pg/ml（P<0.001）;模型组诱导H1975细胞迁移的数量为141.7±21.5,Tet组为41.3±11.9（P<0.01）;模型组诱导H1975细胞侵袭的数量为129.7±25.1,Tet组为56.7±14.5（P<0.05）。模型组诱导H1975细胞迁移的数量为152.3±25.5,IL-8封闭（aIL-8）组为61.7±15.5（P<0.01）;模型组诱导H1975细胞侵袭的数量为136.3±14.5,aIL-8组为73.3±12.7（P<0.01）。［结论］ Tet具有抑制CAF诱导肺腺癌细胞侵袭转移的作用效应,其机制与抑制NF-κB通路的活性和CAF分泌IL-8有关。     

高迁移率族蛋白B1激活NF-κB/αvβ3而增加A549细胞迁移与侵袭能力

背景与目的:高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)在多种肿瘤中高表达,在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用。本研究旨在探讨HMGB1促进肺癌A549细胞侵袭的分子机制。方法:肺癌A549细胞经HMGB1,NF-κB抑制剂6-amino-4-quinazoline(QNZ)或Bortezomib(Bort)处理后,划痕实验和Transwell小室体外侵袭实验检测肿瘤细胞的迁移及侵袭能力;NF-κB荧光素酶报告基因实验检测NF-κB活性;Real-time RT-PCR和Western blot检测A549细胞NF-κB和整合素αvβ3表达。结果:HMGB1能增强A549细胞迁移和侵袭能力,增加NF-κBp65蛋白的表达,同时增强A549细胞NF-κB活性,Real-time RT-PCR和Western blot检测结果发现HMGB1上调肿瘤细胞αvβ3表达。NF-κB抑制剂QNZ或Bort消除HMGB1促进A549细胞迁移及侵袭,增强NF-κB表达和活性以及αvβ3表达的效应。结论:HMGB1通过激活A549细胞NF-κB上调αvβ3表达促进A549细胞迁移与侵袭行为。     

EGCG对因子Ⅶa促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对因子Ⅶa促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用及机制。方法用EGCG、因子Ⅶa等处理SW620细胞,应用流式细胞术、Transwell法分别检测细胞增殖周期及迁移能力;Western blotting检测细胞NF-κB抑制蛋白(IκB-α)、核NF-κB(p65/RelA)的蛋白水平变化。结果 EGCG(100 mg/L)能干预因子Ⅶa对SW620细胞增殖与迁移的促进作用;EGCG能抑制因子Ⅶa对IκB-α表达的下调作用及对核NF-κB(p65/RelA)表达的促进作用。结论 EGCG可能通过干预信号分子IκB-α和NF-κB(p65/RelA)的表达和调节作用,抑制因子Ⅶa对SW620细胞增殖与迁移的促进作用。     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的：探讨核因子-κB(nuclear factorkappa B，NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法：培养宫颈癌Hela细胞。不同处理因素按指定时间作用后，RT一PCR检测NF-κB p65 mRNA的表达。免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：静息状态下。在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平。TNF-α诱导Hela细胞NF—κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关，NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng／mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化，抑制率为49．69％，并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用，凋亡增加率为57．52％。结论：TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

肺腺癌穿膜蛋白 125 通过高甲基化介导 NF-κB 信号通路的激活降低对 地西他滨的敏感性

目的：探讨穿膜蛋白125（transmembrane protein125,TMEM125）在肺腺癌组织与A549细胞中的表达,以及影响细胞的增殖和侵袭能力的分子机制。方法：从癌症基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库收集肺腺癌数据包,下载临床信息及基因表达谱数据。分析 TMEM125在肺腺癌组织中的表达及其与患者总生存期的相关性。构建 TMEM125过表达 A549细胞株,以CCK-8法、细胞划痕实验检测TMEM125过表达对肿瘤细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TMEM125过表达对A549细胞的细胞周期和凋亡的影响。WB检测TMEM125过表达对下游NF-κB信号通路、凋亡蛋白的影响;免疫共沉淀法（co-immunoprecipitation,Co-IP）检 测 TMEM125 与 NF- κB 抑 制 因 子 结 合 Ras 样 2（NF- κB inhibitor interacting Ras-like 2,NKIRAS2）的相互作用。利用TNFα（10 ng/ml）处理TMEM125过表达A549细胞,CKK-8、流式细胞术及WB检测其对细胞增殖、凋亡以及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。去甲基化试剂地西他滨处理A549细胞,qPCR和WB检测TMEM125基因和蛋白的表达。结果：TMEM125 mRNA在肺腺癌组织中表达水平显著低于正常组织（P<0.001）,启动子甲基化水平显著高于正常组织（P<0.001）,并且低、中表达患者总生存期显著低于高表达患者（P<0.001）。过表达TMEM125抑制了A549细胞的增殖和迁移（P<0.01）,增加细胞 G2/M 期,促进细胞凋亡（P<0.01）;过表达 TMEM125 与 NKIRAS2 相互作用,显著抑制 NF-κB 的活性（P<0.01）;地西他滨处理 A549 细胞可促进 TMEM125 表达并且抑制细胞增殖（P<0.01）。结论：启动子高甲基化水平降低了TMEM125基因表达,导致其抑制NF-κB活性功能和抑制细胞增殖的作用下降,并且降低了细胞对地西他滨的敏感性。     

PDTC对胃癌细胞MKN-45 p53异构体表达的影响及其生物学意义

摘 要：［目的］ 探讨核因子-κB(NF-κB) 抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对胃癌细胞MKN-45 p53异构体表达的影响及其生物学意义。 ［方法］ 不同浓度的PDTC（25、50、75μmol/L）单独及联合顺铂(4μg/ml)作用于胃癌细胞MKN-45,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞增殖抑制率;实时荧光定量多聚酶链反应(RT-PCR)检测p53β、Δ133p53及NF-κB p65在mRNA水平的表达情况。［结果］ CCK-8结果显示,PDTC(25、50、75μmol/L)单独作用时能抑制MKN-45细胞生长,抑制率分别为4.95%、12.20%、21.28%,差异有统计学意义（P＜0.0001）;当与顺铂（4μg/ml）联合时,MKN-45细胞增殖抑制率随PDTC浓度的增加而增加,且高于单独顺铂组,差异有统计学意义（P＜0.001）。RT-PCR结果显示,当用不同浓度PDTC (25、50、75μmol/L) 预处理2h后再加入顺铂（4μg/ml）,MKN-45细胞中p53β mRNA的表达差异无统计学意义（P=0.04）,而Δ133p53和p65 mRNA的表达随PDTC浓度的增加而降低,且低于顺铂单独组,差异有统计学意义（P＜0.0001）。Pearson相关性分析显示,p65与p53β mRNA表达无相关性（r=0.072,P=0.798）,p65与Δ133p53 mRNA表达呈正相关（r=0.814,P＜0.0001）。 ［结论］ NF-κB 抑制剂PDTC可以抑制MKN-45细胞的生长,也可以增强顺铂对该细胞的生长抑制效应,Δ133p53异构体可能是NF-κB-p53对话的关键分子。     

倍半萜烯内酯对鼻咽癌细胞内核因子-кB活化的影响

背景与目的:探讨倍半萜烯内酯化合物对人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞内核因子-κB(NF-κB)信号转导活化的影响。材料与方法:采用小白菊内酯(parthenolide,PN)作为受试物,以对PN诱导转归敏感的CNE1细胞给予TNF-α预诱导建立模型,PN处理后提取胞质和胞核蛋白,分别检测IκBα降解、NF-κB p65亚单位活化后核内迁移,电泳迁移率改变试验(EMSA)检测核内活化NF-κB的DNA结合活性。进行PN剂量和作用时间依赖关系分析。结果:阴性对照组IκBα蛋白存在于胞质中,PN处理组使TNF-α诱导的胞质IκBα蛋白降解被抑制、胞核内蛋白含量减少;相应地,阴性对照组p65亚单位在胞质中含量高于胞核内,PN处理组抑制TNF-α诱导的胞质p65核转位;同步进行的EMSA可见,PN处理组NF-κB核结合活性比TNF-α诱导组明显降低。随PN处理时间(0.5~4h)和剂量(5~25μmol/L)增加,胞质中IκBα蛋白降解的抑制作用增强(其蛋白含量增加),胞核内p65亚单位蛋白减少,EMSA结合活性降低,呈明显的剂量和时间依赖性(P均<0.05)。结论:PN可影响NPC细胞内NF-κB因子的活化,提示PN对TNF-α诱导NF-κB信号的抑制作用可能是PN诱导NPC细胞凋亡敏感性的分子机制之一。     

RNA干扰NF-κBp65基因表达对胃癌细胞株SGC-790增殖、凋亡的影响

摘 要：［目的］探讨RNA干扰NF-κBp65基因表达对胃癌细胞株SGC-790增殖、凋亡的影响。［方法］ 培养SGC-790胃癌细胞株,分为阴性对照组、siRNA-NC组、NF-κBp65-siRNA转染组。检测不同组细胞增殖抑制率及凋亡率,采用Western blot检测STAT3信号通路相关蛋白表达水平。［结果］ （1）MTT检测发现,在48h及72h时,NF-κBp65-siRNA组的细胞抑制率显著高于空白组与siRNA-NC组（P均<0.05）。（2）流式细胞术检测发现,48h时,空白组、siRNA-NC组、NF-κBp65-siRNA组的细胞凋亡率分别为5.85%±0.25%、6.13%±0.39%、16.05%±0.14%,NF-κBp65-siRNA组的细胞凋亡率显著增加（P<0.001）。（3）Transwell检测结果显示,空白组、siRNA-NC组、NF-κBp65-siRNA组穿过Transwell小室的细胞数量分别为379.62±10.51、386.86±11.42、89.62±5.73,NF-κBp65-siRNA组的穿膜细胞数量显著少于空白组与siRNA-NC组（P均<0.001）。（4）Western-blot检测显示,与空白组相比,NF-κBp65-siRNA组中p-STAT3、PCNA、MMP-2蛋白的表达量均显著下降（P均<0.05）。［结论］在SGC-790胃癌细胞株中,抑制NF-κBp65表达水平可能通过降低STAT3信号通路活性,抑制细胞增殖并促进凋亡。     

EGCG影响TNF-α诱导的NF-κB/p65入核及促凋亡效应

背景与目的:研究表明,表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)抗肿瘤作用机制尚不十分清楚,本研究旨在观察EGCG调节TNF-α诱导的胃癌SGC-7901细胞核转录因子κB/p65(NF-κB/p65)的入核并发挥诱导凋亡的作用.方法:Hoechst染色法检测EGCG处理SGC-7901细胞前后凋亡的形态学改变;Western blot方法观察EGCG作用前后NF-κB/p65蛋白在胞质内及核内的变化;流式细胞术检测EGCG调节NF-κB/p65入核前后细胞凋亡的变化;DNA ladder方法观察EGCG诱导细胞DNA断裂情况.结果:Hoechst染色法显示EGCG处理后细胞形态改变:核致密浓染或呈碎块状、苍白色.Western blot方法检测发现,10 ng/ml的TNF-α作为NF-κB/p65入核的诱导剂分别作用细胞30、60、90和120 min后,核内NF-κB/p65明显增多并在60 min达高峰;60 μg/ml的EGCG预处理细胞不同时间(0、12、24、36和48 h)后,再以 TNF-α处理60 min,检测发现核内NF-κB/p65明显下降并在24 h达低谷; 不同浓度EGCG(40、60、80和100 μg/ml) 预处理细胞24 h后,再加TNF-α处理60 min,核内NF-κB/p65呈时间依赖性下降.流式细胞术显示,10 ng/ml的TNF-α处理细胞60 min后,细胞凋亡率为3.7%,60 μg/ml EGCG处理细胞24 h后再以TNF-α处理细胞,凋亡率为16.6%;NF-κB通路阻断剂吡咯啉烷二甲基硫脲 (PDTC) 100 μmol/L预处理30 min后再以TNF-α处理细胞60 min,细胞凋亡率为21.4%.EGCG 60 μg/ml处理细胞24 h、PDTC处理细胞30 min后再以TNF-α处理细胞60 min,DNA凝胶电泳出现明显梯形条带.结论:EGCG能够抑制TNF-α诱导的NF-κB/p65入核,并可能通过此机制发挥诱导细胞凋亡的作用.     

靶向 siRNA 沉默 NF -κB/p65对肺腺癌细胞株 A549增殖与凋亡的影响

目的：研究运用 RNA 干扰（RNA interference,RNAi）技术抑制 NF -κB/ p65基因的表达对人肺腺癌细胞株 A5492细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨 NF -κB/ p65基因在肺腺癌发生发展中的作用。方法：利用阳离子脂质体 LipofectamineTM2000将人 NF -κB/ p65的小干扰 RNA 转染入肺腺癌细胞株 A549中。运用 real time - PCR 和 Western blot 技术检测 A549细胞内 NF -κB/ p65、增殖相关基因 Cyclin D1和凋亡相关基因 Bcl-2、Bax 的 mRNA 的转录水平和蛋白的表达情况,MTT 法检测细胞的增殖活力,显微镜下观察细胞的生长情况。结果：NF -κB/ p65 siRNA 能有效地抑制 A549细胞中 NF -κB / p65基因在 mRNA 水平上的表达（P﹤0.001）,同时下调 Cyclin D1和 Bcl -2的表达（均 P ﹤0.01）。上调 Bax 表达（P ﹤0.001）;蛋白表达也具同样趋势。MTT 实验证明 p65 siRNA 转染组中细胞增殖减慢;显微镜镜下观察显示,细胞生长减慢,凋亡形态改变明显。结论：体外实验初步证明 NF -κB/ p65基因在肺腺癌细胞株 A549增殖分化与凋亡方面扮演重要角色,通过沉默其表达可抑制肺腺癌细胞株 A549增殖并诱导其凋亡。进一步证实 NF -κB/ p65对 Cyclin D1、Bcl -2、Bax 具有调控作用,他们共同参与了肺腺癌的发生发展过程。     

热休克蛋白70抑制剂PES对人胃癌BGC细胞NF-κB通路的影响

目的:探讨热休克蛋70(heat shock protein 70,Hsp70)抑制剂PES(2-phenylethynesulfonamide)对人胃癌BGC细胞活性、细胞迁移以及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的影响。方法 :采用Hsp70抑制剂PES处理人胃癌BGC细胞后,应用CCK-8(cell counting kit-8)法检测BGC细胞的活性,细胞划痕实验检测BGC细胞的迁移能力,蛋白质印迹法检测NF-κB信号通路成员及其下游血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,免疫荧光法观察BGC细胞质中p65的表达。结果 :与未经PES处理的BGC细胞(对照组)比较,5、10和20μmol/L的PES处理BGC细胞72 h后,BGC细胞活性和细胞迁移率被明显抑制(P值均<0.05)。20μmol/L的PES处理后,BGC细胞NF-κB信号通路中磷酸化p65(phospho-p65,p-p65)、p65、NF-κB抑制蛋白激酶α(inhibitory protein of NF-κB kinaseα,IKKα)、p-IKKα、p-IKKβ、IKKβ、p-Akt和Akt以及下游VEGF蛋白的表达水平均明显低于对照组(P值均<0.05),且细胞质中p65蛋白的荧光明显减弱。结论 :Hsp70抑制剂PES可抑制胃癌BGC细胞的活性和迁移,下调BGC细胞NF-κB信号通路活性以及下游VEGF蛋白的表达水平,降低BGC细胞质中p65的表达。     

大黄素对人肺腺癌A549细胞体外增殖凋亡及VEGF和TNF-α分泌的影响

目的为大黄素抗肺腺癌的临床应用提供理论依据。方法MTT实验检测大黄素不同浓度梯度（5 μmol/L,10 μmol/L,20 μmol/L,40 μmol/L,80μmol/L）和时间梯度（12,24,48和72 h）处理后A549细胞的增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术和Hoechst 33258染色法检测大黄素作用A549细胞后引起的细胞凋亡程度;应用酶联免疫吸附分析（ELISA）实验检测大黄素各处理组培养上清液中所含的VEGF、TNF-α的浓度。结果大黄素体外可浓度和时间依赖性地抑制人肺腺癌A549细胞的增殖活力及促进细胞凋亡,抑制A549细胞VEGF的表达和分泌,促进TNF-α的表达和分泌。结论大黄素具有抗增殖、促凋亡、抗血管生成等多种潜能,具有良好的抗人非小细胞肺癌特别是肺腺癌的临床应用前景。     

MLN4924促进人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究

  目的  观察MLN4924对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,探讨MLN4924促进凋亡的作用机制。  方法  不同浓度的MLN4924作用细胞不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、NF-κB p65及CDT1相对表达量。  结果  MLN4924能够明显抑制A549细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示药物作用后,细胞被阻滞在S期。Western blot结果显示药物作用后细胞内Caspase-3、CDT1蛋白的表达量增加,而NF-κB p65的表达量减少。  结论  MLN4924能够明显抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可阻滞细胞于S期,增加Caspase-3蛋白表达,抑制NF-κB通路的激活。      

转染NF-κB抑制物基因对食管癌细胞系生物活性的影响

目的:将NF-κB抑制物基因pcDNA3/mI κBα S32A/S36A转染食管癌细胞株EC1,观察对NF-κB因子活性及对细胞生长的影响.方法:采用脂质体转染法将pcDNA3/mI κBα S32A/S36A质粒转染入EC1细胞进行瞬时表达,检测其对EC1细胞的影响,用Western blot和RT-PCR方法检测转染前后NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA表达水平的变化.结果:与转染pcDNA3.0质粒和未转染质粒组比较,转染pcDNA3.0/mI κBα S32A/S36A质粒EC1细胞的生长速度受到明显抑制,P＜0.05.转染pcDNA3/mI κBα S32A/S36A质粒的EC1细胞,在0、24、48、96小时未见NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA表达,而转染pcDNA3.0质粒EC1细胞可见核内NF-κB p65和NF-κB p50蛋白表达.结论:转染NF-κB抑制物基因IκBα后可抑制EC1细胞的生长,并抑制细胞NF-κB p65、NF-κBp50基因的表达,该结果提示调节NF-κB的表达可能是食管癌基因治疗的靶点.     

低氧条件下SIRT3调控NF-κB通路抑制肺癌细胞转移和炎症反应

目的:探讨低氧条件下肺癌细胞中沉默信息调节因子3(SIRT3)过表达调控核因子κB(NF-κB)通路对细胞炎症反应、迁移和侵袭的影响。方法:基于A549肺癌细胞,根据SIRT3的序列构建过表达和空载慢病毒转染肺癌细胞,未转染的细胞为对照,暴露于常氧(21%O₂)和低氧(5%～8%O₂)条件下培养,验证实验可行。根据处理方法将细胞分为常氧组、低氧组、JSH-23(NF-κB转录活性抑制剂)组、SIRT3过表达组、JSH-23+SIRT3过表达组。MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭,细胞划痕法检测细胞迁移,Western-blot检测蛋白MMP-2、ICAM-1、SIRT3和p-NF-κB p65的表达水平,qPCR检测细胞中SIRT3、p-NF-κB p65的mRNA表达,ELISA检测细胞中IL-1β、TNF-α和IL-6含量。结果:与常氧组相比,低氧组中细胞增殖能力增强(P<0.05),侵袭和迁移能力上升(P<0.05),MMP-2、ICAM-1和p-NF-κB p65蛋白表达上调(P<0.05),p-...