Pin1在皮肤组织中的表达以及可诱导转基因小鼠模型的建立

目的 观察Pin1在皮肤中的表达情况,构建Pin1在皮肤中可诱导表达的转基因小鼠模型。方法 将小鼠Pin1基因克隆到改造过的可与Myc标签蛋白融合的pTRE2载体中,并将线性化的DNA通过显微注射的方式构建TRE-Pin1小鼠。结果 我们成功获得TRE-Pin1转基因首建鼠,该小鼠与上皮特异的K14-rtTA转基因小鼠配繁,获得Pin1在皮肤上皮特异性的可诱导表达的双转基因小鼠;我们通过将多西霉素（又名强力霉素, Doxycycline）加入饮水的方式诱导Pin1基因的表达,并通过Western blot,免疫组织化学等方式证明了Pin1蛋白在皮肤上皮中能特异性地过表达。我们还发现内源的Pin1在皮肤中主要表达于上皮细胞。结论 我们成功地构建Pin1在皮肤中可诱导表达的转基因小鼠模型,为后续研究Pin1在皮肤中的功能奠定基础。     

乳腺上皮细胞特异性敲除Scrib基因杂合子小鼠的制作与鉴定

目的：利用Cre-LoxP重组酶系统构建乳腺上皮细胞特异性敲除Scrib基因杂合子小鼠,并进行鉴定,为进一步在动物整体水平研究Scrib基因在乳腺癌中的作用提供研究平台。方法：将Scrib条件敲除杂合子小鼠（Scrib /fl小鼠）进行繁殖并鉴定,然后将鉴定结果为阳性的子代Scrib /fl小鼠与乳腺上皮细胞特异性表达Cre重组酶的MMTV-Cre纯合子小鼠进行杂交,鉴定其子代小鼠的基因型。结果：成功繁育Scrib条件敲除小鼠和MMTV-Cre小鼠,并通过鉴定得到Scrib /fl小鼠,与MMTV-Cre小鼠杂交并繁殖,获得基因型为Scrib /fl;MMTV-Cre /-小鼠5只。结论：本研究利用Cre-LoxP重组酶系统成功构建了乳腺上皮细胞特异性敲除Scrib基因杂合子小鼠,为进一步研究极性蛋白Scrib表达下调在乳腺癌发生中的作用提供了良好的动物模型。     

SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠自发肺部肿瘤模型的建立

目的 构建一种利用Cre重组酶体内低表达诱导K-ras G12D在小鼠肺部活化的慢性自发性肺部肿瘤模型.方法 首先构建一种肺脏特异性低表达Cre重组酶的SPC-CRE转基因小鼠,利用SPC-CRE转基因小鼠与LSL K-ras G12D 转基因小鼠杂交,获得SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠.对4月龄,5月龄,7月龄,9月龄SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠肺部进行取材,固定并进行常规石蜡切片及HE染色,镜下观察小鼠肺部病理特征.使用micro-CT对7月龄,9月龄SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠肺部肿瘤结节进行检测.结果 获得了SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠,该小鼠在肺组织特异性低表达Cre重组酶,并诱导K-ras G12D在肺组织的表达,由K-ras G12D引起肺组织肿瘤的发生.SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠4月龄肺部出现轻度炎症反应,5月龄开始肺部可见散在腺瘤样的结节,成瘤率为100%（雌6/6,雄6/6）,随着月龄增加,小鼠肺腺瘤结节呈增大趋势,病理变化呈进展状态,9月龄时通过micro-CT可以检测到肺部少量散在孤立的肿瘤结节.结论 利用肺组织特异性低表达Cre重组酶的方式,建立了一种从肺部炎症反应到肺腺瘤进展时程较长的慢性自发肺部肿瘤小鼠模型,为肺癌发生的研究提供了更长的窗口期.     

有无上皮细胞共培养条件下前列腺增生间质细胞的基因差异表达

目的 研究前列腺增生间质细胞在有无上皮细胞共培养条件下的基因差异表达.方法 利用前列腺间质与上皮细胞共培养模型及DDRT-PCR技术,对单独培养的前列腺增生间质细胞和与上皮细胞共培养的前列腺增生间质细胞的mRNA进行差异表达分析,获得差异表达片段(ESTs);并对这些ESTs进行斑点杂交印迹分析及克隆测序,将所测阳性克隆的cDNA序列与网上公用核苷酸数据库中的已知序列进行同源性比较.结果 得到差异表达片段44个;经同源性分析,有29个ESTs与已知基因有较高同源性,15个ESTs为新的cDNA片段.结论 前列腺增生间质细胞在有无上皮细胞共培养条件下,存在差异表达基因,这些基因可能在前列腺间质细胞与上皮细胞的相互调控中发挥作用.     

转染人pIgR的小鼠鼻咽上皮细胞在EBV感染前后基因表达谱差异

目的应用cDNA阵列技术研究转染人多聚免疫球蛋白受体(hpIgR)的二亚硝基哌嗪(n, n'-dinitrosoperazine, DNP)转化的小鼠鼻咽上皮(TMNE)细胞系在EBV感染前后基因表达谱差异,探索EBV在鼻咽癌发病过程中的作用及鼻咽癌的发病机制。方法提取转染hpIgR 的TMNE细胞在EBV感染前后的总RNA,逆转录成α-32P-dATP标记的cDNA探针,与AtlasTM mouse cancer array 1.2 阵列膜进行杂交。利用AtlasImageTM 软件分析基因表达差异。结果共有25个基因表达水平发生了改变,有23个基因表达上调,2个基因表达下调。结论EBV感染可使转染细胞的多个基因表达发生改变,这些基因可能与鼻咽癌的发生、发展有关。     

转染人pIgR的小鼠鼻咽上皮细胞在EBV感染前后基因表达谱差异

目的 应用cDNA阵列技术研究转染人多聚免疫球蛋白受体(hpIgR)的二亚硝基哌嗪(n，n′-dinitrosoperazine，DNP)转化的小鼠鼻咽上皮(TMNE)细胞系在：EBV感染前后基因表达谱差异，探索EBV在鼻咽癌发病过程中的作用及鼻咽癌的发病机制。方法提取转染hpIgR的TMNE细胞在EBV感染前后的总：RNA，逆转录成α-^32p-dATP标记的cDNA探针，与Atlas^TM mouse cancer array 1．2阵列膜进行杂交。利用AtlaslmageTM软件分析基因表达差异。结果 共有25个基因表达水平发生了改变．有23个基因表达上调，2个基因表达下调。结论 EBV感染可使转染细胞的多个基因表达发生改变，这些基因可能与鼻咽癌的发生、发展有关。     

小鼠T细胞活化衔接因子基因真核表达载体的构建

目的 构建小鼠T细胞活化衔接因子(LAT)基因的真核表达载体.方法 以小鼠单个核细胞的cDNA为模板,采用PCR扩增LAT基因编码区的全部序列,克隆入真核细胞表达载体pCMV-HA中;测序鉴定目的基因并转染哮喘小鼠脾脏淋巴细胞.结果 PCR扩增的特异性片段长度为729 bp,并以此构建重组质粒pCMV-HA-LAT.质粒测序结果与GenBank中的小鼠LAT基因cDNA序列一致;转染哮喘小鼠淋巴细胞后可检测到LAT蛋白的表达.结论 成功构建了pCMV-HA-LAT重组真核表达载体.     

小鼠T细胞活化衔接因子基因真核表达载体的构建

目的构建小鼠T细胞活化衔接因子(LAT)基因的真核表达载体。方法以小鼠单个核细胞的cDNA为模板,采用PCR扩增LAT基因编码区的全部序列,克隆入真核细胞表达载体pCMV-HA中;测序鉴定目的基因并转染哮喘小鼠脾脏淋巴细胞。结果PCR扩增的特异性片段长度为729 bp,并以此构建重组质粒pCMV-HA-LAT。质粒测序结果与GenBank中的小鼠LAT基因cDNA序列一致;转染哮喘小鼠淋巴细胞后可检测到LAT蛋白的表达。结论成功构建了pCMV-HA-LAT重组真核表达载体。     

乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠的初步建立

HBx基因为HBV基因组上的一个开放读框,可编码具有转录反式激活作用的蛋白(HBxAg).已证实在体外HBxAg可使哺乳细胞株发生恶性转化[1].为了探索在体内HBxAg转化细胞的作用,国外数个实验室已相继建立了HBx转基因鼠模型[2,3].为研究HBx基因在肝细胞癌变过程中的确切作用提供有效的动物模型,我们初步建立了携带乙型肝炎病毒X基因的转基因小鼠,现报道如下.     

子宫内膜腺上皮细胞中增殖与凋亡相关基因表达初探

目的:探讨不同类型子宫内膜腺上皮细胞的增殖和凋亡情况。方法:采用免疫组化和TUNEL方法检测不同类型子宫内膜组织中增殖细胞核抗原(PCNA)与细胞凋亡表达。结果:(1)从正常子宫内膜直至子宫内膜样癌的PCNA表达逐渐增加。在子宫内膜样腺癌中随着癌细胞分化程度的降低、肌层浸润深度的增加和手术病理分期的升高,PCNA表达逐渐增加,且各组之间PCNA表达均有显著性差异(P<0.05)(。2)从正常子宫内膜、子宫内膜增殖症到子宫内膜样腺癌细胞凋亡的表达逐渐增加。子宫内膜样腺癌中不同分化程度的癌细胞、不同手术病理分期之间凋亡表达均有显著差异(皆P<0.01);而不同肌层浸润深度之间凋亡表达无显著差异(P>0.05)。(3)PCNA表达与细胞凋亡在不典型增生、子宫内膜样癌中均呈负相关(分别r=-0.943,P<0.01;r=-0.976,P<0.01)。结论:PCNA是内膜细胞癌变过程中一项重要的指标,其在内膜癌的发生和发展中起重要作用,可作为估计患者预后的一个重要参数。细胞凋亡情况在一定程度上可以反映肿瘤的生物学行为。内膜细胞增殖与凋亡相互作用共同促进内膜细胞过度增殖,从而导致肿瘤的形成和进展。     

过氧化氢对肠上皮细胞线粒体编码基因mRNA的影响

目的：观察过氧化氢处理对体外培养肠上皮细胞株SW－480线粒体编码基因mRNA的影响。方法：以400μmol/L和4mmol/L的过氧化氢处理人肠上皮细胞细胞株（SW－480)3h后，分离RNA,应用RT－PCR检测ATPase6、ATPase8、COI、COII及COIII mRNA的变化。结果：过氧化氢对肠上皮细胞线粒体编码基因mRNA的表达具有明显影响，但是这种改变不与过氧化氢的剂量呈现出一种一致的变化。结论：过氧化氢引起肠上皮细胞线粒体编码基因mRNA的明显改变。     

Interleukin 1 beta gene expression by mouse glomerular mesangial cells]

Interleukin 1 beta (IL-1 beta) plasmid DNA was isolated and purified with alkaline lysis method and equilibrium centrifugation in cesium chloride. IL-1 beta plasmid RNA was cut by restriction endonucleases EcoRI and XbaI, and after that it was 1 loaded in 0.75% low-melting-temperature agarose and underwent electrophoresis. 1.2 Kb DNA fragments were extracted from gel and for further purification it was used as IL-1 beta cDNA probe. RNA from mouse glomerular mesangial cells, tubular epithelial cells and P388D, cells was cut with EcoRI separately and then hybridized in dot blots with alpha 32P labeled IL-1 cDNA probe. The dot blot autoradiograph showed expression of the IL-1 beta gene in mesangial cell and P388D1 cell but showed no expression in epithelium. These results not only identified the specificity of IL-1 beta probe but also suggested that the local production of IL-1 beta may be important in the pathogenesis of glomerulonephritis.     

磷脂酸磷酸酶2域1A基因在乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中的表达

目的探讨磷脂酸磷酸酶2域1A(PPAPDC1A)基因在正常乳腺上皮细胞和不同转移能力的乳腺癌细胞中表达的差异。方法以正常乳腺上皮HBL-100细胞、低转移乳腺癌MCF-7细胞、高转移乳腺癌MDA-MB-435s细胞和高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,通过实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)和Western blot法分别检测PPAPDC1A基因mRNA和蛋白在上述细胞中的表达。结果与正常乳腺上皮HBL-100细胞比较,3种不同转移能力的乳腺癌细胞中的PPAPDC1A mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.01),且高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞和高转移乳腺癌MDA-MB-435s细胞中PPAPDC1A mRNA和蛋白表达水平均高于低转移乳腺癌MCF-7细胞(P<0.01),高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞中PPAPDC1A mRNA和蛋白水平的表达高于高转移乳腺癌MDA-MB-435s细胞(P<0.01)。PPAPDC1A在4种细胞中表达的顺序为HBL-100细胞相似文献   

乙型肝炎病毒核心基因转基因小鼠的建立

目的：建立乙型肝炎病毒核心基因转基因小鼠。方法：构建乙型肝炎病毒核心基因真核表达载体pcDNA3-HBc;采用显微注射法将线性化的表达载体注射至小鼠受精卵的雄性原核巾,然后将注射存活的受精卵植入假孕母鼠的输卵管;取其产10d龄子代鼠进行鉴定。结果与结论：表达载体内切酶酶切及序列分析结果与预期一致;PCR鉴定转基因阳性小鼠比例为25％(6／24)。可表达核心蛋白基因的转基因小鼠成功建立。     

外源bax基因表达对人视网膜色素上皮细胞bcl-2表达的影响

０引言视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞是视网膜重要的功能细胞之一，其异常增生或退行性变，都会引起感光细胞结构或功能障碍而致盲，详细机制尚不清楚［１，２］．我们的前期实验证实，ｂａｘ表达增强、或ｂｃｌ－２／...     

人胆囊上皮细胞优化培养及其炎症模型建立

本研究结合国内外文献报道,进行胆囊上皮细胞(human gallbladder epithelial cells,HGBEC)的优化培养并建立其炎症模型. 1材料与方法 1.1材料 正常胆囊2枚,DMEM培养基(Gibco),Ⅳ型胶原酶(Sigma),包被液(Ⅳ型胶原酶配成200g/L),200 ml/L小牛血清(成都哈里生物公司),人内皮细胞生长因子(hEGF)(Sigma),CK19抗体(DAKO),人白介素1β(hIL-1β)(Roche公司),TNF-α、IL-6放免测定药盒(北京放射免疫研究所).     

肾小球性蛋白尿诱导肾上皮细胞内的血红蛋白氧合酶-1基因表达

为阐明血红蛋白氧合酶-1(H O-1)在人类肾脏内的合成方式,作者研究了不同肾脏疾病的H O-1m R-N A的表达,将H O-1蛋白的表达方式进行对比,并比较上述资料的临床特征。作者检测了患者血尿及蛋白尿的程度,尿液中N-乙酰-1-β-D-氨基葡糖苷酶(N A G)、β2-微球蛋白(β2-m g)和肌酐的浓度。应用原位杂交和免疫组化研究确定H O-1的表达水平。在肾小管、肾小球、Bowm an s上皮细胞和局部浸润的巨噬细胞内检测到H O-1m RN A。在近端肾小管,H O-1蛋白表达与m RN A表达之间存在相关性,但是从蛋白的表达水平来看,m R NA表达远比预期值为低。…     

质粒表达型siRNA对人近端肾小管上皮细胞cubilin表达的抑制作用

目的 观察cubilin siRNA真核表达载体对人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell line,HKC)cubilin基因的特异性抑制作用.方法 针对人cubilin基因设计并构建siRNA真核表达载体pSUPER EGFP-C1和pSUPER EGFP-C2,转染HKC,经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测cubilin mRNA的表达、不同浓度的人血清白蛋白(HSA)刺激正常HKC及转染重组质粒的HKC 24 h后cubilin mRNA的表达,并通过激光共聚焦扫描荧光显微镜观察HKC对白蛋白摄取情况的变化.结果 FQ-PCR显示HSA刺激正常HKC后cubilin mRNA表达具有剂量依赖性.与正常对照组相比,两个重组质粒均可部分抑制HKC cubilin表达,抑制效率分别为66%和37%,HSA刺激转染pSUPER EGFP-C1、pSU-PER EGFP-C2的HKC后cubiin mRNA水平较正常对照组比较分别下降50%、34%,转染了重组质粒的HKC对白蛋白的摄取明显减少.结论 成功地构建了针对人cubilin基因的RNA干扰真核表达载体,表达型siRNA可抑制肾小管上皮细胞cubilin基因的表达及对白蛋白的摄取.     

小鼠胚胎干细胞克隆形成和传代的影响因素

目的:探讨昆明小鼠胚胎干细胞(ESC)分离后克隆形成和细胞传代的几种影响因素,对其特性作初步鉴定.方法:对比超排卵和自然受孕2种囊胚获取方法、囊胚培养液和高糖DMEM培养液2种培养液对其克隆形成和细胞传代的影响.对贴壁后形成的原代ESC克隆进行评分.稳定传代的一株ESC进行鉴定.结果:超排卵组、自然受孕组的内细胞团形成率(64.9% vs 68.2%)和原代ECS克隆形成率(10.1% vs 14.5%)比较,差异均无统计学意义(χ2=0.345和1.385,P=0.557和0.239).囊胚培养液组24 h囊胚孵出率明显高于DMEM培养液组(56.8% vs 17.1%)(χ2=33.026,P=0.001),原代ESC克隆形成率明显低于DMEM培养液组(35.2% vs 15.9%)(χ2=9.021,P=0.002).ICM的评分与ESC克隆传代能力相关(r=0.531,P＜0.001),直径70～100 μm、周边规则、隆起明显的ICM,ESC克隆传代持久.结论:高糖DMEM培养液对克隆的分离和传代有利.对ICM贴壁后形成的ESC克隆进行评分有助于确定挑选克隆传代的时机.     

乙型肝炎病毒转基因模型小鼠的研究进展

It is vital to build an ideal animal model in studying diseases. This is also true of the case of hepatitis B. It is not only for the study of the infection or pathogenic mechanism of hepatitis B, but for the screening of anti - HBV agents. Transgenic mouse has been featured as the most idealistic model organisms. This literature review focuses on the methods of establishing transgenic mice model of hepatitis B virus in human and compares their characteristics.