人肝癌PLC/PRF-5细胞中干细胞样细胞的分离及其特异性miRNAs的筛选

目的:分选及鉴定人肝癌PLC/PRF-5细胞中的肝癌干细胞样细胞,研究其microRNAs(miRNAs)表达谱。方法:以ABCG2为表面标志,免疫磁珠法分选、流式细胞术检测ABCG2+和ABCG2-PLC/PRF-5细胞,观察ABCG2+与ABCG2-PLC/PRF-5细胞的琼脂克隆形成能力和接种NOD/SCID小鼠的成瘤能力。应用miRNA芯片筛选ABCG2+和ABCG2-PLC/PRF-5细胞差异表达的miRNAs,real-time PCR验证部分差异表达的miRNAs。结果:免疫磁珠分选的ABCG2+PLC/PRF-5细胞纯度可达(84.20±4.52)%。ABCG2+PLC/PRF-5细胞比ABCG2-PLC/PRF-5细胞形成更多、更大的克隆集落(47.17±10.50 vs23.33±7.31,P<0.05);NOD/SCID小鼠接种1×104个ABCG2+PLC/PRF-5细胞即可成瘤,而ABCG2-PLC/PRF-5细胞至少需要5×105个才可成瘤;5×105个细胞时,ABCG2+PLC/PRF-5细胞组的肿瘤体积显著大于ABCG2-PLC/PRF-5细胞组[(3.73±1.19)cm3 vs(0.72±0.57)cm3,P<0.01]。ABCG2+PLC/PRF-5细胞和ABCG2-PLC/PRF-5细胞差异表达的miRNAs有20个:上调的13个,下调的7个;real-time PCR验证其中的hsa-miR-30a和hsa-miR-630的差异表达,其结果与miRNA芯片结果基本一致。结论:人肝癌细胞系PLC/PRF-5中ABCG2+细胞具有肿瘤干细胞的特性;ABCG2+和ABCG2-PLC/PRF-5细胞差异表达的miRNAs有20个,它们在肝癌发病中可能起重要的调控作用。     

肺癌干细胞的球体形成与致瘤性分析

目的：从人肺腺癌细胞株SPC—A1中诱导球体形成，对其中的肺癌干细胞进行鉴定并评估其致瘤能力。方法：无血清条件下培养肺癌细胞，采用表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）、重组人胰岛素样生长因子-1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）和重组人成纤维细胞生长因子-10（fibroblast growth factor—10，FGF-10）等细胞生长因子诱导球体形成，球体细胞采用RT—PCR及免疫荧光技术检测干细胞相关标志的表达，并通过NOD—SCID小鼠移植评估其致瘤性。结果：SPC—A1肺腺癌细胞经培养5—10d后，即可形成悬浮生长的细胞球体（肺球体）。RT—PCR检测显示肺球体细胞表达肺癌干细胞表面标志CD24和CD221．细支气管肺泡干细胞标志Clara细胞分泌蛋白和肺泡活性蛋白C，胚胎干细胞主干基因OCT4、Nanog和Bmi-1，以及肺干细咆主干基因甲状腺转录因子-1。采用免疫荧光检测其中3个标志的蛋白表达，证实80％以上的肺球体细胞呈Clara细胞分泌蛋白、肺泡活性蛋白C和OCT4染色阳性。肺球体细胞具有高致瘤性，在NOD—SCID小鼠中移植5103个细胞即可形成肿瘤。结论：肺球体细胞中肺癌干细胞高度富集并具有致瘤性。     

人恶性肿瘤细胞的克隆培养

在双层软琼服上用食管癌、乳腺癌、卵巢癌等60例肿瘤标本作细胞克隆培养,其中73%形成≥5克隆/50万接种细胞。而≥30克隆/50万接种细胞的阳性率为58%。对克隆形成观察时间的比较研究表明,培养12～14天判定结果比较合适。此外,比较了单层软琼脂与双属软琼脂的克隆培养效果。初步结果表明,单层软琼脂在所用的营养条件下克隆形成率几乎与双层软琼脂的效果相当。     

无血清培养法分离并鉴定胰腺癌细胞系BxPC-3中肿瘤干细胞

[目的]从人胰腺癌细胞系BxPC-3中分离并鉴定胰腺癌干细胞。[方法]用无血清培养基培养人胰腺癌BxPC-3得到肿瘤细胞球。将肿瘤细胞球传代扩增,观察各传代后细胞成球能力;并用含血清培养基诱导促使其分化;蛋白印迹法测定肿瘤干细胞特异性转录因子OCT-4蛋白表达情况,并将肿瘤细胞球细胞植入NOD/SCID小鼠皮下,观察移植瘤的形成。[结果]在无血清培养基中,BxPC-3细胞能形成少量肿瘤细胞球,具有很强的自我更新能力,成球能力随着球体细胞传代次数的增加而增加。在含血清环境中,球体细胞逐渐分化而呈贴壁生长。肿瘤细胞球OCT-4蛋白表达明显高于BxPC-3贴壁细胞。1×104个球体细胞即能在NOD/SCID小鼠皮下成瘤。[结论]无血清培养能够有效的分离和扩增人胰腺癌细胞系BxPC-3的肿瘤干细胞。     

卵巢癌特异性免疫细胞治疗的体内外实验研究

背景与目的:卵巢癌抗独特型微抗体(6B11mini)是部分人源化的抗独特型卵巢癌疫苗,体内外实验研究证明,它可以诱导出特异的抗卵巢癌体液免疫和细胞免疫.本研究评价将6B11mini作为抗原,采用免疫细胞的方法处理卵巢癌时的安全性和有效性.方法:用纯化的6B11mini负载树突细胞(dendritic cell,DC),与外周血单个核细胞(peripheral blood mononucleocyte,PBMNC)混合培养,在多种细胞因子共同作用下获得效应细胞6B11-OCIK.通过软琼脂克隆形成实验及接种裸鼠皮下瘤实验,观察6B11-OCIK在体内和体外的成瘤能力;将6B11-OCIK静脉注射BALB/c小鼠,观察急性毒性反应:体外51Cr释放实验检测6B11-OCIK对靶细胞的杀伤作用.用人卵巢癌细胞株SKOV3构建严重联合免疫缺陷(severe combined immune deficieney,SCID)小鼠卵巢癌移植瘤模型,注射6B11-OCIK,并以CIK、PBMNC细胞以及生理盐水作为对照组,分别观察各组肿瘤生长情况.结果:软琼脂培养14 d,卵巢癌SKOV3细胞克隆形成良好,克隆形成率50%:皮下接种裸鼠后14 d,阳性对照的宫颈癌HeLa细胞组全部成瘤,6B11-OCIK、CIK、WI-38组和新鲜PBMNC组持续观察13周没有成瘤.6B11-OCIK静脉注射BALB/c小鼠,30 min内各剂量实验组和生理盐水对照组动物都无任何明显的不良反应:输注后第13天处死小鼠,解剖小鼠观察其各主要脏器无明显异常.在体外杀伤实验中6B11-OCIK对抗原阳性的肿瘤细胞具有特异性杀伤作用,并且与MHC限制性相关;在荷瘤SCID小鼠中6B11-OCIK治疗组肿瘤重量与生理盐水对照组相比差异有统计学意义(P=0.023),与CIK组、新鲜单采组相比差异无统计学意义(P=0.540,P=0.285).结论:6B11-OCIK在动物体内应用时符合安全性指标,并对卵巢癌的生长有一定的抑制作用.     

基底样乳腺癌和管腔A 乳腺癌干祖细胞的生物学行为比较*

目的:从人基底样和管腔A 乳腺癌分离肿瘤干/祖细胞,并比较其增殖、自我更新和分化能力等生物学特点。方法:应用乳腺微球无血清悬浮培养法富集乳腺癌干/祖细胞,并通过细胞生长曲线测定和连续克隆形成实验检测了干/祖细胞在体外的增殖能力和自我更新能力,建立裸鼠移植瘤检测在体内的成瘤情况,流式细胞术检测CD44和CD24的表达水平。结果:基底样和管腔A 乳腺癌均能在无血清培养基中形成乳腺微球,基底样癌的肿瘤干细胞含量较高,并形成细胞数量多、直径大的微球,球内细胞在体内、外有更强的扩增能力。基底样癌传代过程中,细胞容易贴壁分化,传代多不超过15代;而管腔A 癌,虽然丧失克隆形成能力的悬浮单细胞明显增多,但均可传代20次以上;两者CD44和CD24的表达也有明显差异。结论:基底样乳腺癌和管腔A 乳腺癌的干/祖细胞表现出差别明显的生物学行为,乳腺癌的肿瘤干细胞可能是异质性的。      

卵巢癌组织及腹腔积液中肿瘤干细胞的分离与培养

目的:从人卵巢癌组织和腹腔积液中分离培养肿瘤干细胞,分析细胞表型和化疗药物敏感性。方法:取卵巢浆腺癌患者的原发肿瘤组织及腹腔积液,通过无血清培养形成悬浮生长的球体。采用FCM及免疫荧光法检测干细胞标志物的表达。体外药敏实验检测获得的球体细胞和分化细胞对紫杉醇和卡铂的药物敏感性。结果:卵巢癌组织及腹腔积液中的卵巢癌细胞经无血清悬浮培养可以形成球体,后者具有CD44+CD24-表型并表达Oct4、Nanog及Sox2等干细胞标志物;腹腔积液及组织来源的球体细胞经血清培养液培养3周后发生分化,CD44+CD24-细胞比例分别下降至47%和3%;分化细胞对紫杉醇和卡铂的敏感性均显著高于球体细胞(P<0.01)。结论:卵巢癌的肿瘤干细胞属于CD44+CD24-细胞,后者表达Oct4等干细胞标志并具有显著耐药性。     

shRNA沉默IDO基因的表达对裸鼠卵巢癌腹水瘤生长的影响

目的:IDO(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)是色氨酸代谢途径中的催化酶,其与肿瘤免疫抑制关系密切。本研究通过shRNA沉默IDO基因表达,研究抑制IDO表达在裸鼠体内对人卵巢癌移植瘤的治疗作用。方法:shRNA沉默IDO基因表达质粒和空白质粒分别稳定转染至人卵巢癌细胞SKOV-3,应用Westernblot检测IDO在SKOV-3,SKOV-3/Mock和SKOV-3/shIDO细胞中的表达情况,用MTT试剂盒检测3组肿瘤细胞体外生长速度。种植3组肿瘤细胞于裸鼠腹腔内,建立裸鼠卵巢癌腹水瘤模型,用Kaplan-Meier方法比较SKOV-3/Mock和SKOV-3/shIDO细胞接种所形成的腹水瘤裸鼠的累积生存率的差异。结果:IDO蛋白在SKOV-3/shIDO细胞中表达被抑制,在SKOV-3和SKOV-3/Mock细胞中有表达。3组肿瘤细胞体外生长曲线无统计学差异(P>0.05)。腹腔内接种SKOV-3/Mock细胞的裸鼠,均产生腹腔内转移伴腹水形成,于50天内相继死亡,而接种SKOV-3/shIDO细胞的裸鼠生存期均大于77天,此差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:本研究应用shRNA沉默IDO基因表达质粒稳定转染卵巢癌细胞SKOV-3,获得IDO无表达卵巢癌细胞SKOV-3/shIDO,抑制IDO表达对卵巢癌细胞体外生长速度无影响,但能抑制卵巢癌细胞腹腔内转移和腹水形成,提高累积生存率,改善预后。因此,IDO可以作为卵巢癌基因治疗的新靶点,shRNA沉默IDO基因表达可以作为卵巢癌治疗的新方法。     

人永生化食管上皮细胞恶性转化的验证

目的 检查永生化人胚食管上皮细胞系（SHEE）的恶性表型、成瘤性和侵袭力,证实此细胞系传至85代（SHEE85）已完全恶性转化。方法 培养的SHEE85细胞用光镜和电镜观察细胞形态;以流式细胞仪检查细胞周期;行细胞软琼脂培养;以裸小鼠和SCID小鼠接种检测其成瘤性;以细胞培养于羊膜的体外方法和移植至SCID小鼠腹腔的体内方法测定其侵袭力。结果 SHEE85在光镜下细胞生长拥挤,大小不一;电镜下见细胞呈增殖状态。DNA组方图统计细胞增殖指数为47％,高倍体细胞12％。软琼脂培养多细胞大集落形成率4％。接种的4只裸小鼠和4只SCID小鼠皆成瘤。结论 SHEE85已完全恶性转化,并且有较强侵袭力。此细胞系可作为研究食管癌癌变细胞和分子机制可靠的模型。     

CD24+CD44+胰腺癌细胞的获取及其干细胞特性的初步鉴定

背景与目的:近年研究发现,肿瘤内存在极小一部分细胞,决定肿瘤的恶性表型及生物学特性,被称为"肿瘤干细胞".本研究拟从人原发胰腺癌组织中找到具有干细胞特性的胰腺癌细胞,为今后靶向干预胰腺癌干细胞,解决胰腺癌治疗的临床难题提供研究基础.方法:将人原发胰腺癌组织种植于NOD/SCID小鼠成瘤,对移植瘤细胞进行流式细胞分选;将流式细胞仪分选获得的细胞用无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养,观察细胞的生长、传代及体外干细胞球形成能力;将细胞接种于非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷型(Nonobese diabetic/severe combined immunodeficiency,NOD/SCID)小鼠,观察、比较成瘤率,免疫组化法检测干细胞移植瘤肿瘤分化相关抗原Ki67、CK7及甲基化调控因子MBD1的表达;免疫荧光检测细胞Hedgehog、BMI-1的表达.结果:人原发胰腺癌组织种植于NOD/SCID小鼠可部分成瘤,对移植瘤细胞进行流式细胞分选,获得CD24+CD44+细胞(获得率0.6%～1.8%);将CD24+CD44+细胞用无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养,细胞呈悬浮球状生长,可连续传代并能再次形成干细胞球;将102个CD24+CD44+细胞接种于NOD/SCID小鼠,成瘤率12.5%(1/8小鼠成瘤),将103个CD24+CD44+细胞接种于NOD/SCID小鼠,4周后100%成瘤,而同样数量的CD24 CD44胰腺癌细胞则无法成瘤(P＜0.05),免疫组化法检测干细胞移植瘤中部分细胞表达Ki67、CK7及MBD1阳性;免疫荧光检测证实CD24+CD44+细胞阳性表达Hedgehog、BMI-1,表达量分别高于CD24-CD44-细胞9.95倍和2.74倍(P＜0.05).结论:所获得的CD24+CD44+细胞具有胰腺癌干细胞特性,可作为今后胰腺癌干细胞研究的实验基础.     

人卵巢癌组织肿瘤干细胞的分离和鉴定

目的 从人卵巢癌组织中分离并鉴定卵巢癌干细胞.方法 取新鲜卵巢癌组织,以胶原酶和透明质酸酶充分消化,获得单细胞悬液,经红细胞裂解液处理,CD133磁珠孵育进行磁性细胞分选,流式细胞仪验证分选效率.将阳性细胞置于含人表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、牛血清白蛋白和人胰岛素的无血清培养基中,待细胞成球状生长后进行免疫荧光、分化实验和成瘤实验,鉴定其干细胞特性.结果 从人卵巢癌组织中成功分离出肿瘤干细胞,流式细胞仪检测其CD133的表达率为82.5％.该细胞在无血清培养基中呈悬浮球状生长,具有自我更新能力、分化潜能和更强的致瘤能力,具备干细胞特性.结论 人卵巢癌组织中存在卵巢癌干细胞,利用CD133磁珠分选得到的肿瘤干细胞具备干细胞的相关特性,可用于后续卵巢癌干细胞生物学特性的研究.     

膀胱癌细胞系T24侧群细胞的分离及初步鉴定

目的:检测和分选人类膀胱癌细胞系T24中的侧群（side population,SP）细胞,并初步鉴定其癌干细胞特性,为癌干细胞的分离纯化奠定基础。方法:采用荧光激活细胞分选（FACS）技术,分选得到T24细胞中的侧群细胞,并检测其比例。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测侧群细胞中ABCG2的表达情况;继而将侧群细胞培养于无血清培养基中,观察形成悬浮肿瘤细胞球的能力。结果:流式细胞分选结果显示:T24细胞中侧群细胞的比例约为3.6%。和对应的母系T24细胞相比,T24侧群细胞的ABCG2表达增高。培养于无血清培养基中的侧群细胞成簇生长,并形成肿瘤细胞球。结论:人类膀胱癌细胞系T24中存在具有癌干细胞特性的侧群细胞。     

人前列腺癌细胞系DU 145中肿瘤干细胞样侧群细胞的分离

目的:分离人前列腺癌细胞系DU 145中的侧群(side population,SP)细胞,并初步分析其生物学特性。方法:采用荧光激活细胞分类(fluorescence activated cell sorting,FACS)技术,从DU 145细胞中分离出侧群细胞,并检测其比例;继而培养于无血清培养基中,观察其生长特性。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测侧群细胞中ABCG2的表达水平。结果:DU 1 4 5细胞中存在含量极少的侧群细胞,比例约1.1%;培养于无血清培养基中成簇生长。和对应的母系DU 145细胞相比,DU 145侧群细胞的ABCG2表达增高。结论:人前列腺癌细胞系DU 145中存在具有肿瘤干细胞特性的侧群细胞。     

Ovarian cancer stem cells: Working towards the root of stemness

Despite medical advances made over the past decade, ovarian cancer remains one of the more lethal gynecologic cancers in the United States. While current therapeutic strategies are relatively effective, there is a high incidence of recurrent chemoresistant disease. This has been attributed, in part, to a regenerative tumor cell sub-population that has acquired stem cell properties which allows these cells to escape standard chemotherapeutics and drive recurrent disease. To date, a number of laboratories have identified these cancer stem cell (CSC) sub-populations in ovarian cancer cell lines, tumors or ascites and the collective findings suggest ovarian CSCs are likely to be as heterogeneous as the disease itself. Moreover, the multiple ovarian histophenotypes and possible sites of disease origin together with the potential for differential hierarchal contributions of multiple CSCs populations represent significant challenges to the identification, functional characterization and therapeutic targeting of ovarian CSC. This review will highlight the markers and methodology currently used to identify and isolate these cells. We will discuss some of the underlying ovarian CSC biology, the signaling pathways implicated in their survival, replication and differentiation and potential therapeutic targeting strategies.     

SOX2 is required to maintain cancer stem cells in ovarian cancer

Ovarian cancer cells can form spheroids under serum‐free suspension culture conditions. The spheroids, which are enriched in cancer stem cells, can result in tumor dissemination and relapse. To identify new targetable molecules in ovarian cancer spheroids, we investigated the differential expression of genes in spheroids compared with that under monolayer culture conditions by qPCR microarray. We identified that SOX2 is overexpressed in spheroids. We then proved that SOX2 expression was increased in successive spheroid generations. Besides, knockdown of SOX2 expression in SKOV3 or HO8910 ovarian cancer spheroid cells decreased spheroid formation, cell proliferation, cell migration, resistance to Cisplatin treatment, tumorigenicity, and the expression of stemness‐related genes and epithelial to mesenchymal transition‐related genes, whereas overexpression of SOX2 in SKOV3 or HO8910 ovarian cancer cells showed the opposite effects. In addition, we found that SOX2 expression was closely associated with chemo‐resistance and poor prognosis in EOC patients. These results strongly suggest that SOX2 is required to maintain cancer stem cells in ovarian cancer. Targeting SOX2 in ovarian cancer may be therapeutically beneficial.     

长程无血清培养人乳腺癌细胞球的生物学特性

目的:从人乳腺癌原代细胞中分离培养乳腺癌干/祖细胞,并通过体外连续传代培养,研究其体外增殖、分化等生物学特性.方法:应用非黏附性乳腺球(mammosphere,MS)悬浮培养法富集乳腺癌干/祖细胞后,通过连续的单克隆实验检测乳腺球细胞(mammosphere-derived cells,MSDC)的克隆形成和自我更新能力,并经血清诱导后观察其分化能力.FCM法检测CD44~+/CD24~(-/low)细胞的含量.结果: 接种于含生长因子无血清培养液的原发乳腺癌标本细胞均有MS生成,内含具有干细胞特征的肿瘤细胞.随着培养中传代次数的增加,贴壁分化的细胞增多,形成的MS减少,球体变小,且更易贴壁分化.CD44~+/CD24~(-/low)细胞仅存在于基底样乳腺癌标本.来自不同标本的MS的生物学特性表现出一定差异.结论:具有自我更新、无限增殖和多向分化等干细胞样特性的肿瘤细胞在人乳腺癌组织中广泛存在,其生物学行为可能因标本来源不同有所差异,也会因环境因素的作用而改变.     

宫颈癌细胞系中干细胞球样细胞的筛选与鉴定研究

目的探讨从人宫颈癌细胞系Ca Ski中分离培养宫颈癌干细胞球样细胞的可行性,并观察其体外生物学特性。方法采用肿瘤干细胞无血清悬浮培养法富集Ca Ski细胞系球样细胞,通过体外传代培养、添加血清诱导分化等技术鉴定其干性,利用流式细胞技术检测细胞周期,并应用蛋白印记法及细胞免疫荧光等方法从分子水平检测相关因子的表达。结果从Ca Ski细胞系中分离到的干细胞球样细胞可以在无血清培养基中悬浮生长成细胞球,并可在体外稳定传代,具有自我更新能力和分化潜能;肿瘤干细胞球样细胞多处于G0/G1期。与其他分子标志物相比,干细胞球样细胞的CD44明显高表达;与亲本细胞相比,干细胞球样细胞的干性相关因子SOX2、OCT4、β-catenin表达较高。结论利用肿瘤干细胞无血清悬浮培养法可以从Ca Ski细胞系中分离富集到具有稳定肿瘤干细胞性质的细胞群。     

ALDH+乳腺癌干细胞的原代分离培养及生物学特性分析

目的 证实乳腺癌组织中存在ALDH+乳腺癌干细胞,并研究ALDH+乳腺癌干细胞体外增殖、侵袭能力等生物学特性.方法 应用流式细胞法从人乳腺癌组织细胞中分离并培养ALDH+乳腺癌干/祖细胞,通过克隆形成实验,生长曲线测定,以及transwell法等实验方法检测ALDH+乳腺癌干细胞的生物学特性.结果 在乳腺癌组织内,我们检测到ALDH+ CD24-/lowCD44+约占总细胞量的16％,无血清培养72 h后逐渐出现细胞球,2～3周时细胞球数量达到高峰.Transwell法检测ALDH+乳腺癌干细胞侵袭性较ALDH-乳腺癌干细胞侵袭性强.结论 乳腺癌组织中存在ALDH+ CD24-/low CD44+乳腺癌干细胞,ALDH可以作为鉴定乳腺癌干细胞的分子标志之一.     

干细胞标志物在卵巢癌SKOV3细胞侧群细胞中的表达

目的：检测干细胞相关标志物在卵巢癌SKOV3细胞系侧群（side population,SP）细胞和非侧群（Non-SP）细胞中的表达差异,确定卵巢癌干细胞特异性标志物。 方法： Hoechst 33342染色检测SKOV3细胞中SP细胞的比例,流式细胞术检测SKOV3细胞的SP和Non-SP细胞中干细胞标志物CD133、CD117、CD44、ABCG2、ALDH1 的表达情况,荧光定量PCR检测SP和Non-SP细胞中 ABCG2、ALDH2、NANOG、OCT4、SOX2、CD133、CD117 mRNA的表达水平。 结果： SKOV3细胞中SP细胞比例为(1.56±0.35)%。 ALDH1、ABCG2在SP细胞中表达率分别为（87.3±5.76）%、（29.48±4.43）%,在Non-SP的表达率分别为（5.32±0.47）%、（3.01±1.69）%,差异有统计学意义（ P <0.01）;CD44在这两种细胞亚群中的表达率均高于99%（ P >005）;CD133、CD117在这两种细胞亚群中均不表达。 ALDH1、ABCG2、 NANOG、OCT4和SOX2 mRNA在SP细胞中的表达分别是Non-SP细胞的21.03倍（ P =0.001）、3.14倍（ P =0.001）、23.94倍（ P =0.001）、10.73倍（ P =0.009）和21.46倍( P =0001), CD133、CD117 mRNA在两种细胞亚群中均不表达。 结论： 人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞亚群, ALDH1、ABCG2和NANOG、OCT4、SOX2 mRNA可能是卵巢癌干细胞标志物,为诊断及治疗卵巢癌提供了潜在的靶点。