瑞芬太尼通过激活PI3K/Akt/eNOS通路减轻肾缺血/再灌注损伤

目的 探讨术中应用瑞芬太尼对肾缺血/再灌注损伤的作用及机制。方法 取雄性C57/BL小鼠50只,随机分为5组：假手术组、缺血/再灌注损伤组（I/R组）、缺血/再灌注损伤+磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂LY294002处理组（I/R+LY294002组）、缺血/再灌注损伤+瑞芬太尼处理组（I/R+RF组）、缺血/再灌注损伤+LY294002处理+瑞芬太尼处理组（I/R+RF+LY294002组）,每组10只。各组大鼠分别于手术结束6 h后取静脉血或肾脏组织,采用全自动生化分析仪测定静脉血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）水平,采用蛋白质印迹法检测肾脏组织PI3K/蛋白激酶B（Akt）/内皮型一氧化氮合酶（eNOS）通路相关蛋白的表达,H-E染色观察肾脏组织炎症细胞聚集情况,酶联免疫吸附试验测定肾脏组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-10等炎性因子的表达,实时定量PCR测定肾脏组织中抗凋亡因子Bcl2和凋亡因子半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的mRNA表达。结果 与假手术组相比,I/R组小鼠静脉血BUN、SCr水平均升高,肾脏组织中PI3K表达及磷酸化Akt（p-Akt）/Akt、磷酸化eNOS（p-eNOS）/eNOS均降低,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10释放均增加,Bcl2 mRNA表达下降而Caspase-3 mRNA表达增高,差异均有统计学意义（P均<0.05）,并且肾脏组织中炎症细胞聚集增多。给予瑞芬太尼处理后,I/R+RF组BUN、SCr水平较I/R组降低,肾脏组织中PI3K表达及p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS均增高,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10释放均减少,Bcl2 mRNA表达上调、Caspase-3 mRNA表达下调,与I/R组相比差异均有统计学意义（P均<0.05）,炎症细胞募集也减轻。而使用PI3K抑制剂LY294002处理后,I/R+RF+LY294002组BUN、SCr水平升高,肾脏组织中p-eNOS/eNOS降低,IL-1β、L-6释放增加,Caspase-3 mRNA表达上调,与I/R+RF组相比差异均有统计学意义（P均<0.05）,炎症细胞募集也增加。结论 肾缺血/再灌注损伤时,瑞芬太尼通过激活PI3K/Akt/eNOS通路减轻肾脏组织炎症反应和细胞凋亡发挥肾脏保护作用。     

穿心莲内酯靶向Akt信号干预HIV感染T细胞的效率研究

目的 探讨穿心莲内酯靶向Akt信号干预人类免疫缺陷病毒（HIV）感染T细胞的效率。方法 培养Jurkat T细胞,用WST-1试剂检测穿心莲内酯干预对Jurkat T细胞活性的影响。将Jurkat T细胞分为空白对照组、穿心莲内酯组、LY294002组（PI3K抑制剂）及穿心莲内酯联合LY294002组。各组药物分别干预24 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞PI3K、Akt mRNA相对表达量,采用Western blotting检测各组细胞p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量。制备HIV假病毒,用假病毒感染各组细胞,萤光素酶系统检测假病毒感染Jurkat T细胞的效率。结果 WST-1试剂检测结果显示,随着穿心莲内酯浓度增加,Jurkat T细胞活力降低（P <0.05）。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,穿心莲内酯降低Jurkat T细胞PI3K及其下游Akt mRNA相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量（P <0.05）。HIV假病毒感染实验结果显示,穿心莲内酯降低HIV假病毒感染Jurkat T细胞的效率,联合组比单独组的抑制效果更好（P <0.05）。结论 穿心莲内酯可能通过PI3K降低其下游Akt的活化,从而减少HIV假病毒在Jurkat T细胞间的传播及进入细胞的机会,降低其感染Jurkat T细胞的概率。     

LY294002增强5-氟尿嘧啶抑制裸鼠大肠癌移植瘤生长及转移的实验研究

目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002在裸鼠体内对5氟尿嘧啶(5-Fu)抑制大肠癌移植瘤生长及肝转移的影响。方法:采用细胞接种法建立裸鼠异位及原位移植瘤模型,观察LY294002、5-Fu及LY294002联合5-Fu对异位裸鼠移植瘤生长的抑制作用,用流式细胞仪检测异位裸鼠移植瘤细胞凋亡,用免疫共沉淀法检测Akt和Akt-ser473蛋白表达;观察LY294002、5-Fu及LY294002联合5-Fu对原位裸鼠移植瘤肝脏转移的影响情况,用免疫共沉淀法检测原位裸鼠移植瘤Akt、Akt-ser473的表达,用免疫组化法检测β-catenin及MMP-7蛋白表达。结果:与对照组比较,5-Fu、LY294002抑制异位移植瘤的生长,促进肿瘤细胞凋亡,LY294002显著促进5-Fu诱导的肿瘤生长抑制、细胞凋亡;与对照组比较肿瘤细胞的Akt表达无改变,Akt-ser473蛋白表达下降。与对照组比较,5-Fu、LY294002抑制原位移植瘤的肝脏转移,LY294002显著增强5-Fu抑制原位移植瘤的肝脏转移;与对照组比较原位移植肿瘤细胞的Akt表达无改变,Akt-ser473、β-catenin及MMP-7蛋白表达下降。结论:LY294002可增强5-Fu抑制裸鼠移植大肠癌生长及肝脏转移的作用。     

AktGSK-3β通路介导调控莱菔硫烷减轻心脏移植缺血再灌注损伤的研究

摘要：目的  探讨蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）信号通路对莱菔硫烷（SFN）预处理减轻大鼠心肌冷缺血再灌注损伤（IRI）的作用机制。方法  64例健康雄性SD大鼠随机分为4组：IRI组、SFN组、阻滞剂LY294002+IRI（LY+IRI）组、阻滞剂LY294002+SFN预处理（LY+SFN）组,将冷藏于心肌保护液（组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液）9 h的供体心脏移植到受体大鼠的腹腔,复制同种大鼠异体异位心脏移植模型,术后24 h取供体心脏心肌组织,采用免疫组织化学法（IHC）和Western blot检测Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、GSK- 3β、磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白的表达。结果  IHC法和Western bolt检测各种蛋白结果显示,与IRI组比较,SFN组p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达升高（P <0.05）。应用阻滞剂LY294002后,SFN+LY组与LY+IRI组的p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论  SFN能通过Akt/GSK-3β信号通路减轻心脏移植心肌冷缺血再灌注损伤。

     

PI3K/AKT信号通路在SK-N-SH细胞中对增殖和分化的影响

目的：探讨磷脂酰肌醇3 激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/蛋白激酶 B（protein kinase B,AKT）信号通路在人神经母细胞瘤SK-N-SH（human neuroblastoma,SK-N-SH）细胞增殖和分化中的作用。方法：体外培养SK-N-SH细胞,取对数生长期细胞接种于96孔培养板,将培养板中的细胞分为A组抑制剂LY294002组、B组激动剂类胰岛素生长因子-1（insulin-like growth factors-1,IGF-1）组、C组二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）组（LY294002阴性对照组）、D组ddH2O组（IGF-1阴性对照组）和空白组E、F组（培养基组）,24 h后A组加入不同浓度的抑制剂LY294002,终浓度为20、40、50、60、100 ?滋mol/L,B组换用无血清DMEM继续培养12 h后加入不同浓度激动剂IGF-1,终浓度为25、50、100、150、200 ng/ml,阴性对照组分别加入与LY294002和IGF-1相同浓度的DMSO和ddH2O,空白组为100 ?滋l/孔 培养基,置于37 ℃,5%CO2的孵箱中培养,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）法检测PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002和激动剂IGF-1对SK-N-SH细胞增殖影响,倒置相差显微镜下观察细胞形态学分化改变,荧光定量聚合酶链反应（fluorescence quantitative polymerase chain reaction ,FQ-PCR）检测SK-N-SH细胞TrkA mRNA的表达与变化。结果：①MTT检测结果显示,LY294002明显抑制SK-N-SH细胞生长,LY294002组（0.39±0.17）细胞增值能力较阴性对照DMSO组（0.78±0.21）减弱,差异有统计学意义（P=0.018）。IGF-1促进SK-N-SH生长,IGF-1组（0.72±0.14）细胞增值能力较阴性对照组（ddH2O组,0.43±0.08）增值能力更强,差异有统计学意义（P=0.004）。②显微镜下观察LY294002组和IGF-1组细胞无明显分化形态学改变。③FQ-PCR结果显示,LY294002组（0.78±0.05）酪氨酸蛋白激酶A（tyrosine kinase receptor A,TrkA）信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）的表达与阴性对照组（1.56±0.02）、空白组（1.66±0.15）比较,组间差异有统计学意义（F=81.89,P=0.000）。IGF-1组、ddH2O阴性对照组和空白组3组间的TrkA mRNA的表达水平无统计学差异（F=0.27,P=0.770）。结论：PI3K/AKT信号通路可能参与了SK-N-SH增殖和分化过程,该通路关键基因有望成为临床治疗神经母细胞瘤的分子靶点。     

基于 PI3K／A kt信号转导通路探讨电针足三里、曲池对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：观察电针干预对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,应用磷脂酰肌醇‐3激酶／丝氨酸‐苏氨酸蛋白激酶（PI3K／Akt）信号转导通路抑制剂LY294002,深入探讨电针的神经保护作用与 PI3K／Akt信号转导通路的关系。方法本研究采用Zealonga线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血再灌注模型。将60只SD大鼠随机分为5组：假手术（SC）组、模型（IC）组、电针（EA）组、电针＋溶剂（DMSO）组,电针＋抑制剂（LY294002）组,每组各12只。术后24 h开始电针治疗30 min ,1次／天,治疗3 d。采用Zealonga 5分评价方法观察神经功能缺损恢复程度;氯化三苯四唑（TTC）法脑组织染色计算脑梗死体积;TUNEL法观察皮质区缺血周围神经细胞凋亡的情况;应用Western blot检测脑组织中PI3K、Akt、p‐Akt、bad、p‐bad蛋白表达水平。结果神经功能评分、TTC染色显示EA组与DMSO组的神经功能恢复及脑缺血改善明显优于IC组和LY294002组（P＜0．05）;EA组与DMSO组凋亡阳性细胞数少于IC组和LY294002组,差异有统计学意义（P＜0．01）;与 IC组及 LY294002组比较,EA组与DMSO组提高了PI3K、p‐Akt及p‐bad的蛋白表达（P＜0．05）。结论 PI3K／Akt信号转导通路参与了电针足三里穴、曲池穴对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。     

PTEN和PI3K/Akt在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义

目的：通过检测卵巢浆液性肿瘤（OST）PTEN、PI3K以及Akt磷酸化,探讨OST的发生机制。方法：应用免疫组织化学法,检测5例卵巢正常上皮（NOT）、10例浆液性囊腺瘤（OSA）、18例浆液性交界性肿瘤（OSBT）、38例浆液性癌（OSC）石蜡包埋组织中PTEN、PI3Kp110α和p-AktSer473蛋白的表达,并结合OSC周围组织浸润、淋巴结转移情况进行统计分析。结果：（1）PTEN蛋白在OSC中的阴性率高于OSBT、OSA和NOT,差异有统计学意义（P〈0.05）;（2）PTEN蛋白与OSC浸润及淋巴结转移的关系均无统计学意义（P〉0.05）;（3）PI3Kp110α蛋白表达的阳性率在OSC和OSBT中高于OSA和NOT,差异有统计学意义（P〈0.01）,p-AktSer473蛋白表达的阳性率在OSC和OSBT中高于OSA和NOT,差异具有统计学意义（P〈0.05）;（4）PI3Kp110α和p-AktSer473蛋白与OSC浸润及淋巴结转移的关系均无统计学意义（P〉0.05）;（5）在OSC中,PTEN和PI3Kp110α、PTEN和p-AktSer473蛋白表达间均为负相关（P〈0.05）,而PI3Kp110α与p-AktSer473蛋白表达间为正相关（P〈0.05）。结论：PTEN蛋白表达的缺失伴随PI3K/Akt信号通路过度激活,可能共同参与OST的发生、发展。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路阻断地塞米松降尿蛋白的作用

目的通过活体阿霉素（ADR）大鼠肾病模型探讨受地塞米松及LY294002影响的PI3K/Akt信号通路以及下游分子Bad的 表达、尿蛋白变化相关性及其意义。方法应用随机数表法将SD大鼠分为正常对照组（NC组）,阿霉素肾病组（ADR组）,阿霉 素+地塞米松治疗组（DEX组）,阿霉素+地塞米松+LY294002干预组（LY294002组）。分别于第7、14、28天进行24 h尿蛋白定 量检测;Western Blot检测肾皮质p-Akt、Akt和Bad蛋白表达水平,Q-PCR检测肾皮质Bad mRNA表达水平。结果ADR组蛋白 尿持续增加,p-AKT/AKT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad-mRNA表达增加,较正常NC组有统计学差异（P<0.05）;DEX组 尿蛋白明显减少,p-AKT/AKT 比值升高和Bad 蛋白表达下调、Bad mRNA 表达减少,与NC 组无统计学差异（P>0.05）; LY294002组的尿蛋白无减少,p-AKT/AkT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad mRNA表达增加,与DEX组有显著性统计学差 异（P<0.05）。结论地塞米松通过激活PI3K/Akt信号通路,下调其下游分子Bad的表达,减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白;LY294002 干预后可抑制该信号通路,阻断地塞米松减少尿蛋白的作用。这些结果表明PI3K/Akt信号通路是激素减少尿蛋白的信号传导 机制之一。     

LY294002增强5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞侵袭和转移的抑制作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大肠癌细胞转移和侵袭的影响.方法:LY294002及5-Fu体外作用于大肠癌细胞株SW480,Western blot检测总Akt和Akt-ser473蛋白表达,细胞黏附实验观察细胞与基质的黏附力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法观察细胞侵袭能力,免疫细胞化学法测定β-catenin及MMP-7蛋白表达.结果:经LY294002及5-Fu处理的SW480细胞总Akt表达无改变,Akt-ser473蛋白表达下降.LY294002及5-Fu分别、并协同使细胞与基质的黏附力、细胞迁移能力及侵袭能力减弱,β-catenin及MMP-7蛋白表达水平降低.结论:LY294002可增强5-Fu对大肠癌细胞侵袭和转移的抑制作用.     

瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响。方法 培养原代心肌微血管内皮细胞,取1代细胞分为四组：低糖组（5.6 mmol/L葡萄糖）、高糖组（33.3 mmol/L葡萄糖）、瑞舒伐他汀组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀）和LY294002组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀+10 μmol/L LY294002）,其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）的抑制剂。采用Matrigel、Transwell和MTT法分别观察四组微血管内皮细胞的管腔形成、迁移及增殖能力。采用Western blotting技术检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（Ser473）（p-Akt）、内皮一氧化氮合酶（eNOS）和磷酸化eNOS（Ser1117）（p-eNOS）蛋白的表达。结果 与低糖组相比,高糖组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显降低（P<0.05）;瑞舒伐他汀组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显高于高糖组及LY294002组,但仍低于低糖组,差异均有统计学意义（P<0.05）。瑞舒伐他汀组p-Akt和p-eNOS蛋白的相对表达量均明显高于高糖组和LY294002组（P<0.05）,并基本恢复至低糖组水平（P>0.05）。结论 瑞舒伐他汀可明显改善高糖导致的内皮细胞的血管形成障碍,其机制可能与激活PI3K/Akt/eNOS通路相关。     

PI3K特异性抑制剂LY294002增强rsTRAIL蛋白对A549细胞的杀伤作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）参与非小细胞肺癌A549细胞株抵抗重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rsTRAIL)蛋白诱导凋亡的机制,寻找增强rsTRAIL蛋白杀伤非小细胞肺癌细胞的新方法。方法：选取对数生长期A549细胞,随机分为rsTRAIL蛋白组和PI3K特异性抑制剂LY294002联合rsTRAIL蛋白（LY294002+rsTRAIL蛋白）组。MTT法检测2组A549细胞生长抑制率,流式细胞技术检测2组A549细胞周期和细胞凋亡的变化,蛋白质印迹法检测2组A549细胞中p-Akt(Ser473)、c-FLIPL、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：与rsTRAIL蛋白组(5.16%±0.32%)比较,LY294002+rsTRAIL蛋白组A549细胞生长抑制率(74.6%±2.63%)明显升高(P<0.05)。与rsTRAIL蛋白组比较,LY294002+rsTRAIL蛋白组处理2 h后G0/G1期A549细胞百分比增加(P<0.05),S期细胞百分比降低（P<0.05）。LY294002+rsTRAIL蛋白组A549细胞凋亡率为(61.50±3.02)%,显著高于rsTRAIL蛋白组(3.21％±0.96％)（P<0.05）。蛋白质印迹检测,与rsTRAIL蛋白组比较,LY294002+rsTRAIL蛋白组A549细胞中p-Akt、c-FLIPL和Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）,Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05）。结论：LY294002能够抑制PI3K活性,增强rsTRAIL蛋白对A549细胞的杀伤作用。     

脂多糖调控PI3K/Akt通路增强中性粒细胞吞噬功能

目的: 探讨脂多糖对中性粒细胞细菌吞噬功能的影响及可能机制。方法: 取健康人静脉血中性粒细胞,重悬分为对照组、脂多糖10 min、20 min、30 min组,按1 ∶50加入大肠埃希菌GFP(25922GFP),孵育30 min,荧光显微镜和流式细胞术检测中性粒细胞的吞噬功能;另取中性粒细胞重悬分为对照组、脂多糖组、LY294002(PI3K抑制剂)组、LY294002+脂多糖组,一部分细胞行丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)荧光染料染色,流式细胞术观察与分析细胞中F actin,荧光显微镜观察中性粒细形态;另一部分细胞按1 ∶50加入25922GFP,孵育30 min,荧光显微镜和流式细胞术检测中性粒细胞的吞噬功能。免疫印迹法检测各组细胞蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和磷酸化磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)的表达。结果： 与对照组比较,脂多糖10 min、20 min、30 min组中性粒细胞25922GFP荧光表达逐渐增强,p-PI3K和p-Akt表达逐渐增加;脂多糖组荧光强度和p-PI3K和Akt表达明显高于对照组(P均＜0.05)。与对照组比较,脂多糖组F-actin表达增加,细胞形态改变,LY294002组和LY294002+脂多糖组细胞形态无明显改变,LY294002+脂多糖组F-actin表达明显低于脂多糖组(P＜0.05);对照组、LY294002组和LY294002+脂多糖组p-Akt表达明显低于脂多糖组。结论： 经脂多糖刺激后中性粒细胞吞噬功能增强,其机制可能与脂多糖促进PI3K/Akt通路磷酸化有关。     

鞘内注射LY294002对保留性脊神经损伤大鼠脊髓中PI3K和pERK信号的影响

目的：观察保留性脊神经损伤（SNI）大鼠鞘内注射LY294002能否通过抑制脊髓中磷脂酰肌醇‐3‐激酶PI3K ,进而影响pERK信号而缓解神经病理性疼痛。方法24只雄性 SD大鼠随机分为4组,即假手术（Sham）组、SNI组、SNI＋二甲基亚砜（DMSO）组及 SNI＋ LY294002（PI3K 抑制剂）组,每组6只,其中 SNI＋LY294002组和SNI＋DMSO组分别于SNI后第5天经鞘内注射LY294002和等体积DMSO ,每天1次,直到SNI后第14天。SNI前和SNI后1,3,5,7,10,14 d ,测定大鼠机械刺激缩足反应阈值（PWM T ）和热辐射刺激缩足反应潜伏期（PWTL）。SNI后第14天,大鼠麻醉后取腰段脊髓行Western‐blot检测PI3K和pERK的表达。结果与Sham组比较,SNI后各时点SNI组大鼠的 PWMT 和PWTL 均下降,脊髓中PI3K和 pERK表达则显著增强（P＜0．05）。与SNI组和SNI＋DMSO组比较,SNI后各时点SNI＋LY294002组大鼠的PWMT和PWTL均显著增高（P＜0．05）,PI3K和pERK的表达则下降（P＜0．05）。结论经鞘内注射LY294002可抑制脊髓中PI3K ,进而影响pERK信号而缓解SNI大鼠神经病理性疼痛。     

肝癌细胞PI3K/Akt信号通路在干扰素2α上调ISG15表达中的作用

目的 探讨肝癌细胞中干扰素2o(IFN-2α)通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路上调ISG15表达的机制.方法 向培养的肝癌细胞HepG2细胞系中加入IFN-2α和/或PI3K抑制剂(LY294002).采用蛋白免疫印迹检测各组Akt、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)和干扰素刺激基因15(...     

CTGF诱导的人胚肺成纤维细胞转分化中PI3K/Akt与p38MAPK磷酸化的关系

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-I)转分化中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路的活动状态以及相关性的研究.方法 将体外培养的HFL-I分成4组:(1)CTGF处理组(20 ng/ml);(2) LY294002(10 μmol/L)预处理60min,再行CTGF刺激(20 ng/ml):(3)SB203580 (10 μmol/L)预处理60 min,再行CTGF刺激(20 ng/ml); (4)LY294002(10 μmol/L)和SB203580(10 μmol/L)联合作用60 min,再加入CTGF(20 ng/ml).选取不同时相点,Western blot测定平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、p-Akt和Akt的蛋白表达:RT-PCR检测PI3K和p38MAPKmRNA表达.结果 与对照组相比,CTGF诱导15 min后p-Akt水平升高,30 min时达至顶峰(P＜0.01).CTGF诱导24h后α-SMA表达显著升高(P＜0.01),可被LY294002阻断.LY294002和SB203580单独或联合预处理后,显著抑制CTGF诱导的p-Akt活化(P＜0.01).结论 CTGF诱导的成纤维细胞-肌成纤维细胞转分化中有PI3K/Akt通路的激活,PI3K和p38MAPK均可以调节Akt的活性,其特异性抑制剂均可阻断Akt的磷酸化.     

熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响

 目的  观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6 (hepatic stellate cell T6,HSC-T6) NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase/Akt,PI3K/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1 (tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metal matrix proteinase -1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法  取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50 μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20 μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10 μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10 μmol/L+瘦素)。采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP 1、MMP 1蛋白表达。结果  UA能显著抑制瘦素诱导的gp91phox、 p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达(P均<0.01),但UA对gp91phox、p67phox蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002。UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均<0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义。UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均<0.01)。结论  UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC T6细胞NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。     

Inhibiting PI3K/Akt pathway increases DNA damage of cervical carcinoma HeLa cells by drug radiosensitization

This study examined the role of PI3K/Akt pathway in radiosensitization of DNA damage of cervical carcinoma cells.The 50% inhibition concentration(IC50) of cisplatin and docetaxel in HeLa cells was detected by Mono-nuclear cell direct cytotoxicity assay(MTT) in vitro.HeLa cells were treated by cisplatin/docetaxel of 10 percent of IC20 alone or combined with LY294002 for 24 h,and then radiated by different doses of X-ray.The cell survival ratio was obtained by means of clone formation.One-hit multi-target mod...     

Ghrelin对脂肪间充质干细胞神经分化的影响

目的：探讨Ghrelin联合LY294002对脂肪间充质干细胞(ADSCs)神经分化的影响,并阐明其作用机制。方法：倒置相差显微镜下观察ADSCs形态表现,流式细胞术鉴定ADSCs表面抗体阳性表达率,将第4代ADSCs分为对照组(不进行干预)、LY294002组[给予40μmol·L^-1磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)通路特异抑制剂LY294002]、Ghrelin组(给予0.1μmol·L^-1Ghrelin)、Ghrelin+LY294002组(给予40μmol·L^-1LY294002+0.1μmol·L^-1Ghrelin)。倒置相差显微镜下观察各组ADSCs神经分化后的形态表现,免疫荧光染色法检测各组ADSCs中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞百分率,Western blotting法检测各组ADSCs中PI3K/Akt通路蛋白表达水平,并计算磷酸化PI3K (p-PI3K)/PI3K和磷酸化Akt (p-Akt)/...